一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法及应用与流程

文档序号:12697142阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,包括如下进行的步骤:

(1)预处理

取微生物发酵有机肥样品,加入PBS缓冲液、浸泡、离心、收集沉淀,重复上述的操作步骤,至离心后上清液无色,弃上清液,收集沉淀物,记为沉淀物Ⅰ;

(2)提取

在沉淀物Ⅰ中加入蒸馏水,重悬并离心,取上清液,然后向上清液中加入枯草杆菌蛋白酶和SDS溶液的混合液振荡混匀,于45-60℃水浴9-60分钟,离心,弃上清液,记为上清液Ⅰ,收集沉淀物;然后在收集的沉淀物中加裂解液和SDS溶液的混合液,并在温度低于25℃下使DNA复性,再次离心,取上清液,记为上清液Ⅱ,所述上清液Ⅱ中含有总DNA。

2.根据权利要求1所述的一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,第一次加入PBS缓冲液的量相当于所述微生物发酵有机肥样品体积的3-15倍,浸泡不少于5分钟;其后每次在所得沉淀中加入PBS溶液,每200-300mg沉淀添加1-3mL PBS溶液。

3.根据权利要求1所述的一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述枯草杆菌蛋白酶和SDS溶液的混合液中枯草杆菌蛋白酶和SDS溶液的体积比2-5:1-3,所述枯草杆菌蛋白酶的初始浓度为20±2mg/ml,所述SDS溶液的初始浓度为0.1-0.2mol/L。

4.根据权利要求1所述的一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述上清液Ⅰ与加入的枯草杆菌蛋白酶和SDS溶液的混合液体积比为1:10-20。

5.根据权利要求1所述的一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述裂解液与SDS溶液的体积比为20-50:30,所述沉淀物Ⅱ与所述裂解液的体积比为1:10-20。

6.根据权利要求1所述的一种简单快速提取微生物发酵有机肥中总DNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述裂解液为Clelex-100。

7.一种简单快速检测微生物发酵有机肥的方法,其特征在于,以权利要求1-6任一项所得的上清液Ⅱ中总DNA为模板,采用特异性引物进行PCR扩增,所述特异性引物的上游引物16sF如SEQ ID NO:1所示,下游引物16sR如SEQ ID NO:2所示。

8.一种简单快速检测微生物发酵有机肥的试剂盒,其特征在于,至少包括PCR扩增引物,所述PCR扩增引物的上游引物16sF如SEQ ID NO:1所示,下游引物16sR如SEQ ID NO:2所示。

9.根据权利要求8所述的一种简单快速检测微生物发酵有机肥的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括枯草杆菌蛋白酶、细胞裂解液和SDS溶液。

10.根据权利要求9所述的一种简单快速检测微生物发酵有机肥的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PBS缓冲液。

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