一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法与流程

本发明涉及中药及天然产物分离纯化技术领域，具体是一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法。

背景技术：

中药猪苓为多孔菌科polyporaceae多孔菌属polyporus药用真菌猪苓polyporus(pers.)干燥菌核体，其在我国大部均有分布，主产于甘肃、陕西、山西、河南、四川、湖南、云南、吉林及黑龙江等地，其中以陕西产最为道地。猪苓初载于《神农本草经》，列为中品。《名医别录》、《证类本草》及《本草纲目》等均有较为详细记载。祖国传统医学认为其具有“利水渗湿之功效”，“主肿胀满腹急痛，治渴除湿，解伤寒温疫大热，泻膀胱”。猪苓药用历史悠久且组方广泛，为传统常用中药之一，中医临床常用方剂有猪苓汤、猪苓丸、猪苓散、五苓散、茵陈五苓散、分消汤等。

药用真菌是天然药物的重要组成部分，近年来为寻找药源及发现先导化合物，猪苓的药用价值备受医药科研者的重视并取得了可喜的进展，大量化学和药学研究报道为猪苓的作用物质基础和现代药用开发提供了实验基础。已报道的猪苓化学成分主要有多糖类、甾体类、五环三萜类、蒽醌类、嘧啶类、嘌呤类、脂肪酸类、氨基酸类、维生素类及微量无机元素等。药理研究表明猪苓具有利尿、调节免疫功能、保肝、抗肿瘤、抗菌、抗炎及抗病毒等作用。梳理文献研究表明猪苓中确切生物活性物质为甾醇、甾酮及多糖类成分，肯定的是猪苓中化合物的种类及结构多样，其药用潜力巨大。

1964年yosioka等人从猪苓中分离得到从猪苓中分离到的化合物麦角甾醇(ergosterol)，luw于1985从猪苓中得到星鱼甾醇(stellasterol)。麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)两种甾醇类化合物的结构式如下：

针对猪苓的利尿作用及作用物质基础研究，赵英永等认为猪苓中利尿的有效成分主要为麦角甾醇，并申请了麦角甾醇在制备利尿药物中的应用专利(专利号cn101596201a)。海顿.p.普理查德证实麦角甾醇与星鱼甾醇等能降低体内胆固醇酯转移蛋白介导的胆固醇酯在高密度脂蛋白(hdl)和低密度脂蛋白(ldl)之间转移(专利号：pct/ca2002/001457；cn1558766a)，为该类结构甾醇在制备调血脂药物提供了依据。李发荣等证明麦角甾醇可以有效促进sgcr7901/adr细胞细胞内罗丹明123的蓄积，在无毒剂量下与化疗药物阿霉素联用，可以促进化疗药物在细胞内的积累而逆转肿瘤细胞的耐药性(专利号：cn102552284a)。孔继烈等发现了新的星鱼甾醇磺化物arenicolsterola，采用细胞毒模型的评价，证实其具有良好的抗肿瘤生物活性，可将其制成药物，为癌症的预防和治疗提供一种新的途径(专利号：cn1660885a)。是由于麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)具有较为广阔的研究空间和药物应用前景，因此制备其各对照品具有现实应用价值和市场需求必要性。

针对目前尚无文献报道同时制备麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)对照品方法，本发明从猪苓药材中分离两种甾醇单体的方法主要运用凝胶柱层析、结晶及半制备获得，且得到麦角甾醇和星鱼甾醇较为快速经济。例从中药灵芝孢子粉中提取分离纯化得到麦角甾醇衍生物(专利号：cn102070695a)，酵母生产麦角甾醇的制备方法(专利号：cn1765916)。文献报道的方法都要利用多种有机溶剂萃取及多种填料进行柱层析进行分离纯化，操作较为复杂，步骤冗长、繁琐、整个过程耗时较长，且获得样品纯度较低，此外，星鱼甾醇未见文献参考其对照品制备方法。同时快速获得大量高纯度结构相似两个对照品，其纯化制备条件要较为苛刻，主要是两者结构相似、性质差异小和分离难度大。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，以猪苓药材醇提物为原料，经石油醚除杂，二氯甲烷萃取、柱层析分离、重结晶及反相高效色谱制备可获得纯度大于98％对照品，具体步骤为：

(1)将猪苓破碎并过药筛，加入5～10倍量体积浓度不低于95％的甲醇或乙醇溶液，采用渗漉或加热回流法提取，回收溶剂得浸膏；将所得浸膏用蒸馏水分散，再依次用石油醚、二氯甲烷或萃取，回收并浓缩二氯甲烷萃取液至稠膏；

(2)将所得稠膏用3～5倍体积的蒸馏水洗脱除去杂质，将滤渣用sephadexlh-20柱层析，再用二氯甲烷或氯仿：甲醇(1:1)等度洗脱，收集颜色较浅流分，回收洗脱液，得甾醇物质粗品；

(3)将甾醇粗品用无水甲醇或乙醇溶解，过滤；取滤液样本加热、超声条件下使之完全溶解，达饱和状态后，放冷至析出白色针状结晶即为麦角甾醇和星鱼甾醇混合样品；

(4)将步骤(3)所得混合样品溶解于色谱甲醇或色谱乙腈，然后用反相高效液相色谱法进行纯化；合理收集吸收主峰所对应的保留时间内的制备液，减压浓缩回收后，冻干即得相应的麦角甾醇和星鱼甾醇对照品。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(3)取滤液样本加热温度为50～60℃；且达饱和状态后，在室温或4℃条件下放冷。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(4)所得混合样品溶解于浓度为0.2～0.5g/ml的色谱甲醇或色谱乙腈中。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(4)中反相高效液相色谱法的色谱条件为，色谱柱为kromasilc18,250×30mm,5μm，或者为ymcc18,250×20mm,5μm，uv检测器的波长为283nm，流速5～20ml/min，柱温25～30℃，流动相为甲醇-水或酸水、乙腈-水或酸水。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1)麦角甾醇和星鱼甾醇化合物结构相似、性质差异小和分离难度大，本发明可通过一次提取和制备过程，同时得到高纯度的麦角甾醇和星鱼甾醇两个对照品；所获得对照品规模为克级至十克级，无论小规模的实验室制备或大规模的工业化推广都极具可行性。

2)麦角甾醇和星鱼甾醇具有利尿、抗肿瘤、调血脂及医药合成前体物质等作用和用途，其开发利用前景大。本发明可以快速制备得到克级的麦角甾醇和星鱼甾醇，以用于生物活性研究、化学结构改造及研制新药；

3)麦角甾醇和星鱼甾醇均为猪苓所含脂溶性物质主要成分，但目前尚无文献报道两个化合物的对照品同时制备方法；本发明可为中药猪苓的药材的质量控制提供含量测定用的对照品，有助于建立猪苓药材的质量控制方法；

4)本发明所选用的有机溶剂均可以回收重复使用，对环境的污染小，且在提取和结晶时均采用95％乙醇或甲醇，溶剂价格便宜；本发明所采用结晶或制备方法缩短了样品分离纯化时间，降低了人力和物力的花费，提高了经济效应；

5)本发明为快速分离纯化技术，所采用的为常规技术和手段，方法、步骤简单，易于普及、便于操作，且专属性好、重复性高、稳定性佳。

附图说明

图1为实施例1中麦角甾醇纯度检测hplc图谱。

图2为实施例1中麦角甾醇uv吸收图谱。

图3为实施例1中星鱼甾醇纯度检测hplc图谱。

图4为实施例1中星鱼甾醇uv吸收图谱。

图5为实施例1中麦角甾醇hr-esi-tof-ms图谱。

图6为实施例1中星鱼甾醇hr-esi-tof-ms图谱。

图7为实施例1中麦角甾醇核磁¹hnmr图谱。

图8为实施例1中麦角甾醇核磁¹³cnmr图谱。

图9为实施例1中星鱼甾醇核磁¹hnmrr图谱。

图10为实施例1中星鱼甾醇核磁¹³cnmr图谱。

图11为猪苓药材指纹图谱(a)。

图12为两种化学对照品峰(b)对应图谱位置。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

请参阅图1-12，一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，包括以下步骤：

一、分离麦角甾醇和星鱼甾醇，具体步骤为：

(1)称取猪苓干燥药材500g，粉碎过四号药筛，用10倍量的95％乙醇(5l)渗漉提取；回收乙醇，得到猪苓浸膏20.3g，加入100ml的蒸馏水制成分散溶液；将所得物先用石油醚等体积萃取三次，每次使用石油醚100ml，再用二氯甲烷萃取3次，每次使用二氯甲烷100ml；最后浓缩二氯甲烷萃取液至浸膏；

(2)将上步所得浸膏用50ml体积的蒸馏水洗脱3次，过滤除去较大杂质，收集滤渣，滤渣经sephadexlh-20柱层析(500g填料柱体积)后，用v(二氯甲烷)：v(甲醇)＝1：1为流动相等度洗脱，每50ml收集一次流份，经tlc分析将第fr.5～fr.16的流份合并，合并流份进行减压浓缩回收；然后在合并流份中加入乙醇溶解，加热(50～60℃)、超声条件下使之成饱和溶液，室温条件下放置8-12h，析出针样结晶7.6g；

(3)取上步所得结晶物用色谱甲醇溶解成浓度为0.3g/ml的溶液，然后用0.45μm微孔滤膜对溶液进行过滤，再通过反相高效液相色谱制备分离纯化；色谱条件：色谱柱为ymcc18，250×20mm，5μm；检测波长283nm；流速20ml/min；柱温30℃；流动相为v(甲醇)：v(水)＝95：5；进样量为0.5ml；化合物a的保留时间为30.3min，收集29.3～32.2min内的制备液；化合物b的保留时间为35.3min，收集34.8～35.9min内的制备液，回收后得到单体化合物a3.55g和b1.74g；

二、化合物a和b的hplc纯度分析，具体步骤为：

分别精密称取所得化合物a和b，用色谱甲醇完全溶解，使其制备成浓度为1mg/ml的储备液，用进样器精密吸取10μl通过hplc进行纯度检测；

色谱条件：色谱柱为(kromasilc18，250×4.6mm，5μm)；pda检测器，283nm波长监测；柱温30℃；流速1.0ml/min；流动相为v(甲醇)：v(水)＝95：5；应用峰面积归一化法计算两个化合物的纯度，结果显示化合物a、b的hplc纯度均达到98％，化合物a、b纯度检测结果分别见图1-2和图3-4；

三、化合物a和b的质谱分析，具体步骤为：

将化合物a、b分别制备成100ng/ml待测溶液，采用高分辨电喷雾飞行时间质谱(hr-esi-tof-ms)分析，化合物am/z：397.3456[h]^-；提示化合物bm/z：443.3522[hcoo]⁺；

四、化合物a和b的核磁共振解析：

化合物a：白色不定型粉末，¹hnmr及¹³cnmr谱给出6个甲基、6个双键碳δc136.9，133.4，121.0，117.7，142.8，131.2和1个接氧碳δc71.8信号；结合质谱数据分析，推测该化合物中含有28碳，确定该化合物分子式为c28h44o。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δh5.57(1h，m，7-h)，5.39(1h，m，6-h)，5.21(1h，dd，j＝15.2，8.2hz，22-h)，5.17(1h，dd，j＝15.2，8.0hz，h-23)，3.63(1h，m，h-3)，1.04(3h，d，j＝6.6hz，h-21)，0.95(3h，s，h-19)，0.92(3h，d，j＝6.8hz，h-28)，0.84(3h，d，j＝6.4hz，h-27)，0.82(3h，d，j＝6.4hz，h-26)，0.63(3h，s，h-18)。¹³cnmr(101mhz，cdcl3)δ142.8(c-8)，141.2(c-5)，136.9(c-22)，133.4(c-23)，121.0(c-6)，117.7(c-7)，71.8(c-3)，57.1(c-17)，55.9(c-14)，47.6(c-9)，44.2(c-13)，42.2(c-24)，41.8(c-4)，40.5(c-20)，39.8(c-12)，38.4(c-1)，34.5(c-10)，33.4(c-25)，31.1(c-2)，29.7(c-16)，24.4(c-15)，22.5(c-11，21)，21.3(c-26)，21.0(c-27)，19.0(c-28)，17.7(c-19)，13.4(c-18)；

通过上述信号特征解析和与文献报道数据对比，化合物a的结构解析为麦角甾醇(ergosterol)，其结构式为：

化合物b：白色不定型粉末，¹hnmr及¹³cnmr谱给出6个甲基、2个双键碳δc139.6，135.8，132.0，117.6和1个接氧碳δc71.8信号；结合质谱数据分析，确定该化合物分子式为c28h46o。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δh5.34(2h，overlapped，h-7，22)，5.18(1h，dd，j＝15.2，8.8hz，h-23)，3.59(1h，m，h-3)，1.02(3h，d，j＝6.6hz，h-21)，0.92(3h，d，j＝6.0hz，h-28)，0.79(9h，overlapped，h-19，26，27)，0.54(3h，s，h-18)。¹³cnmr(101mhz，cdcl3)δc139.6(c-8)，135.8(c-22)，132.0(c-23)，117.6(c-7)，71.2(c-3)，56.1(c-17)，55.2(c-14)49.6(c-9)，43.4(c-13)，42.9(c-24)，40.6(c-5)，40.4(c-20)，39.6(c-12)，38.1(c-4)，37.3(c-1)，34.3(c-10)，33.2(c-25)，31.6(c-2)，29.8(c-6)，28.26(c-16)，23.0(c-15)，21.7(c-11)，21.2(c-21)，20.1(c-26)，19.8(c-27)，17.7(c-28)，13.1(c-19)，12.2(c-18)；

过上述信号特征解析和与文献数据对比，化合物b的结构解析为星鱼甾醇(stellasterol)；

其结构式为：

实施例2

一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，包括以下步骤：

一、分离麦角甾醇和星鱼甾醇

称取猪苓干燥药材300g，粉碎过三号药筛，用5倍量的98％甲醇(1.5l)加热回流提取3次，回收甲醇，得到猪苓提取物15.2g，加入50ml的蒸馏水制成分散溶液；将所得物先用石油醚等体积萃取三次，每次使用石油醚50ml，再用氯仿萃取3次，每次使用氯仿50ml；最后浓缩氯仿萃取液至浸膏；

(2)将上步所得浸膏用30ml体积的蒸馏水洗脱3次，过滤除去较大杂质，收集滤渣，滤渣经sephadexlh-20柱层析(300g填料柱体积)，用v(氯仿)：v(甲醇)＝1：1为流动相等度洗脱，每30ml收集一次流份，经tlc分析将第fr.4～fr.13的流份合并，合并流份进行减压浓缩回收；然后在合并流份中加入甲醇溶解，加热(50～60℃)、超声条件下使之成饱和溶液，4℃条件下放置8-12h，析出针样结晶4.5g；

(3)取上步所得结晶物用色谱乙腈溶解成浓度为0.3g/ml的溶液，然后用0.45μm微孔滤膜过滤，再通过反相高效液相色谱制备分离纯化；色谱条件：色谱柱为kromasilc18，250×20mm，5μm；检测波长283nm；流速15ml/min；柱温30℃；流动相为v(乙腈)：v(0.02％三氟乙酸水)＝95：5；进样量为0.4ml；化合物a的保留时间为32.6min，收集31.9～33.7min内的制备液；化合物b的保留时间为35.7min，收集35.2～36.1min内的制备液，回收后得到单体化合物a2.84g和b1.03g；

二、化合物a和b的纯度检测，具体步骤为：

分别精密称取一定量的上述化合物a和b，用色谱甲醇制备成浓度为0.8mg/ml的储备液，精密吸取20μl通过高效液相色谱仪在与实例1相同的色谱条件下检测，检测结果显示化合物a和b的hplc纯度均大于98％。

三、化合物a和b的结构鉴定，具体步骤为：

采用与实例1相同的方法将上述两个化合物通过紫外全波长扫描、hr-esi-tof-ms及核磁共振波谱验证，结果显示化合物a和b分别为麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)。

实施例3

一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，包括以下步骤：

一、分离麦角甾醇和星鱼甾醇，具体步骤为：

称取猪苓干燥药材300g，粉碎过三号药筛，用8倍量的95％乙醇(2.4l)加热回流提取3次；回收甲醇，得到猪苓提取物14.7g，加入50ml的蒸馏水制成分散溶液；将所得物先用石油醚等体积萃取三次，每次使用石油醚50ml，再用二氯甲烷萃取3次，每次使用二氯甲烷50ml，最后浓缩氯仿萃取液至浸膏；

(2)将上步所得浸膏用40ml体积的蒸馏水洗脱3次，过滤除去较大杂质，收集滤渣，滤渣经sephadexlh-20柱层析(300g填料柱体积)，用v(二氯甲烷)：v(甲醇)＝1：1为流动相等度洗脱，每25ml收集一次流份，经tlc分析将第fr.8～fr.21的流份合并，合并流份进行减压浓缩回收；然后在合并流份中加入无水乙醇加热(50～60℃)、超声条件下溶解，使之成饱和溶液，条件下放置8-12h，析出针样结晶5.1g；

(3)取上步所得结晶物用色谱甲醇溶解成浓度为0.2g/ml的溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤，再通过反相高效液相色谱制备分离纯化；色谱条件：色谱柱为kromasilc18，250×20mm，5μm；检测波长283nm；流速12ml/min；柱温25℃；流动相为v(甲醇)：v(0.02％三氟乙酸水)＝96：5；进样量为0.3ml。化合物a的保留时间为39.7min，收集37.4～41.7min内的制备液；化合物b的保留时间为45.5min，收集44.6～46.8min内的制备液，回收后得到单体化合物a3.11g和b1.27g；

二、化合物a和b的纯度检测，具体步骤为：

分别精密称取一定量的上述化合物a和b，用色谱甲醇制备成浓度为2.0mg/ml的储备液，进样器精密吸取10μl，通过高效液相色谱仪在与实例1相同的色谱条件下检测，检测结果显示化合物a和b的hplc纯度均大于98％；

三、化合物a和b的结构鉴定，具体步骤为：

采用与实例1相同的方法将上述两个化合物通过紫外全波长扫描、hr-esi-ms及核磁共振波谱验证，结果显示化合物a和b分别为麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)。

实施例4

一种从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法，包括以下步骤：

一、分离麦角甾醇和星鱼甾醇，具体步骤为：

称取猪苓干燥药材5000g，粉碎过二号药筛，用3倍量的98％甲醇(15l)冷浸提取3次；回收甲醇，得到猪苓提取物101.7g，加入1000ml的蒸馏水制成分散溶液；将所得物先用石油醚等体积萃取三次，每次使用石油醚1000ml，再用二氯甲烷萃取3次，每次使用二氯甲烷1000ml；最后浓缩氯仿萃取液至浸膏；

(2)将上步所得浸膏用500ml体积的蒸馏水洗脱3次，过滤除去较大杂质，收集滤渣，滤渣经sephadexlh-20柱层析(1500g填料柱体积)，用v(二氯甲烷)：v(甲醇)＝1：1为流动相等度洗脱，每100ml收集一次流份，经tlc分析将第fr.7～fr.30的流份合并，合并流份进行减压浓缩回收；合并流份中加入甲醇，在加热(50～60℃)、超声条件下溶解，使之成饱和溶液，室温条件下放置8-12h，析出针样结晶37.9g；

(3)取上步所得结晶物用色谱甲醇溶解成浓度为0.5g/ml的溶液，然后用0.45μm微孔滤膜过滤，再通过反相高效液相色谱制备分离纯化；色谱条件：色谱柱为ymcc18，250×20mm，5μm；检测波长283nm；流速18ml/min；柱温30℃；流动相为v(甲醇)：v(0.1％磷酸水)＝96：5；进样量为1.0ml；化合物a的保留时间为32.9min，收集31.5～33.8min内的制备液；化合物b的保留时间为35.3min，收集34.6～35.9min内的制备液，回收后得到单体化合物a22.89g和b10.63g；

二、化合物a和b的纯度检测，具体步骤为：

分别精密称取一定量的上述化合物a和b，用色谱甲醇制备成浓度为1.0mg/ml的储备液，进样器精密吸取10μl通过高效液相色谱仪在与实例1相同的色谱条件下检测，检测结果显示化合物a和b的hplc纯度均大于98％。

三、化合物a和b的结构鉴定，具体步骤为：

采用与实例1相同的方法将上述两个化合物通过紫外全波长扫描、hr-esi-ms及核磁共振波谱验证，结果显示化合物a和b分别为麦角甾醇(ergosterol)和星鱼甾醇(stellasterol)。

实施例5所得麦角甾醇和星鱼甾醇作为对照品的应用

以上述实例所得的麦角甾醇和星鱼甾醇化合物为对照品，测定各对照品在猪苓药材中的含量，为建立猪苓药材的质量控制提供实验方法依据。

供试品制备：精密称量1.0g猪苓药材粉末，置于100ml锥形瓶中，加入40ml无水乙醇，密塞称重，超声提取0.5h，放冷称重，乙醇补足重量，0.45μm微孔滤膜过滤，自动进样10μl通过高效液相色谱仪进行含量检测。

色谱条件为：色谱柱watersc18，250×4.6mm，5μm；检测波长283nm；流速0.8ml/min；柱温30℃；流动相梯度为甲醇(a)-(0.1％甲酸)水(b)(0～5min，98％～96％a；5～25min，96～95％a；25～30min395％a)。

高效液相色谱测定猪苓药材指纹图谱见图11，根据测定结果显示对照品可以用来评价猪苓药材中麦角甾醇和星鱼甾醇的含量，可为其药材质量评价提供参考。

该从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法具有以下优点：

1)麦角甾醇和星鱼甾醇化合物结构相似、性质差异小和分离难度大，本发明可通过一次提取和制备过程，同时得到高纯度的麦角甾醇和星鱼甾醇两个对照品；所获得对照品规模为克级至十克级，无论小规模的实验室制备或大规模的工业化推广都极具可行性。

2)麦角甾醇和星鱼甾醇具有利尿、抗肿瘤、调血脂及医药合成前体物质等作用和用途，其开发利用前景大。本发明可以快速制备得到克级的麦角甾醇和星鱼甾醇，以用于生物活性研究、化学结构改造及研制新药；

3)麦角甾醇和星鱼甾醇均为猪苓所含脂溶性物质主要成分，但目前尚无文献报道两个化合物的对照品同时制备方法；本发明可为中药猪苓的药材的质量控制提供含量测定用的对照品，有助于建立猪苓药材的质量控制方法；

4)本发明所选用的有机溶剂均可以回收重复使用，对环境的污染小，且在提取和结晶时均采用95％乙醇或甲醇，溶剂价格便宜；本发明所采用结晶或制备方法缩短了样品分离纯化时间，降低了人力和物力的花费，提高了经济效应；

5)本发明为快速分离纯化技术，所采用的为常规技术和手段，方法、步骤简单，易于普及、便于操作，且专属性好、重复性高、稳定性佳。

在本从中药猪苓中分离麦角甾醇和星鱼甾醇对照品的方法的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“相连”及“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下做出各种变化。