4‑羟基环孢素的制备方法与流程

本发明涉及有机合成领域，特别是涉及一种4-羟基环孢素的制备方法。

背景技术：

4-羟基环孢素((γ-hydroxylmethylleucine⁴)-cyclosporina)最早是由山德士(sandoz)制药公司在1991年开发的一种aids抑制活性的环孢素免疫活性抑制衍生物。4-羟基环孢素是由环孢素的4位亮氨酸侧链γ位氧化获得的，结构式为(化合物1)。

4-羟基环孢素为中间体在抗病毒分子的研发中得到广泛应用。如，scynexis公司研制的抗hcv临床药物分子scy-635正是在(γ-hydroxylmethylleucine⁴)-cyclosporina的基础上再经过3位修饰得到的。此外，(γ-hydroxylmethylleucine⁴)-cyclosporina本身还具有良好的生发作用。

目前已有的4-羟基环孢素的制备方法收率低，需要多步柱层析，纯化困难，很难进行产业化生产。因此急需找到一种可以大量制备4-羟基环孢素的制备方法，以便进行更深入的衍生化研究。

技术实现要素：

基于此，有必要提供一种4-羟基环孢素的制备方法，用于大量制备4-羟基环孢素。

一种4-羟基环孢素的制备方法，包括如下步骤：

步骤一、-20℃～35℃下将化合物2和第一反应物溶于第一有机溶剂中，接着在-15℃～30℃下加入3-氯-2-甲基丙烯，接着加热至58℃～82℃并充分反应，接着加入水并用酸性调节剂调节ph为7，充分反应后纯化得到化合物3，其中，所述第一反应物选自nah、kh、k2co和cs2co3中的至少一种，所述酸性调节剂为盐酸、柠檬酸、硫酸或氟硼酸，所述化合物2以及所述化合物3的结构式如下，

化合物2：化合物3：

步骤二、将所述化合物3溶解于乙醇中，接着加入naoh溶液或koh溶液并在回流条件下充分反应，接着除去乙醇并用所述酸性调节剂调节ph至7，回流条件下充分反应，之后再用浓盐酸调节ph至3，纯化后得到化合物4，其中，所述化合物4的结构式如下，

化合物4：

步骤三、将所述化合物4溶解于ph为8的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶液中，接着加热至30℃～55℃并加入酰化氨基酸水解酶，充分反应后加入吸附剂并过滤，保留滤液并加入等体积的thf、二氧六环或乙腈，接着降温至-5℃～10℃并加入二碳酸二叔丁酯，用碳酸氢钠调节ph为7.5～8.5后控制反应温度为-5℃～30℃并充分反应，然后除去thf，并用浓盐酸调节ph为3，接着纯化得到化合物5，其中，所述化合物5的结构式如下，

化合物5：

步骤四、将所述化合物5、碘甲烷和nah在干燥的第二有机溶剂中混合并充分反应，接着冷却至-10℃～5℃后纯化，接着加入水合肼并在室温下充分反应，再次纯化得到化合物6，其中，所述化合物6的结构式如下，

化合物6：

步骤五、-8℃～4℃下将所述化合物6溶解于第三有机溶剂中并降温至-15℃～-8℃，接着加入第二反应物或第三反应物，控制反应温度为-15℃～-8℃并充分反应，纯化后得到化合物7，其中，所述第二反应物为氯化氢的乙醚溶液和亚硝酸叔丁酯，所述第三反应物为乙酸和亚硝酸钠，所述化合物7的结构式如下，

化合物7：

步骤六、将环孢霉素a、吡啶和4-二甲氨基吡啶溶于乙酸酐中，室温下充分反应，接着纯化得到化合物8，其中，环孢霉素a和所述化合物8的结构式如下，

环孢霉素a：

化合物8：

步骤七、将所述化合物8和三甲基氧四氟硼酸盐溶于第四有机溶剂中并充分反应，接着加入乙腈和水并充分反应，纯化得到化合物9，其中，三甲基氧四氟硼酸盐和所述化合物9的结构式如下，

三甲基氧四氟硼酸盐：

化合物9：

步骤八、将所述化合物9、n,n-二异丙基乙胺和硫代异氰酸苯酯溶于第五有机溶剂中并充分反应，接着加入n,n-二甲基乙二胺并充分反应，接着加入甲醇和质量分数为40％～60％的氟硼酸水溶液并充分反应，之后纯化得到化合物10，其中，所述化合物10的结构式如下：

化合物10：

步骤九、在温度为-8℃～-12℃的条件下将所述化合物10、所述化合物7和n,n-二异丙基乙胺溶于第六有机溶剂中，接着升温至室温并充分反应，接着纯化得到化合物11，其中，所述化合物11的结构式如下，

化合物11：

步骤十、在温度为-20℃～8℃的条件下将所述化合物11和第四反应物溶解在四氢呋喃和水的混合溶液中，充分反应后纯化并在温度为-20℃～8℃的条件下加入二氯甲烷和三氟乙酸，充分反应后再次纯化，并在温度为-20℃～8℃的条件下加入n,n-二异丙基乙胺和bopcl，升温至室温并充分反应，第三次纯化后得到化合物12，其中，所述第四反应物为lioh、naoh或koh，bopcl和所述化合物12的结构式如下，

bopcl：

化合物12：

步骤十一、将所述化合物12、甲基磺酸和醋酸溶于第七有机溶剂中，控制温度为30℃～50℃并充分反应，纯化后得到化合物13，其中，所述化合物13的结构式如下，

化合物13：以及

步骤十二、将所述化合物13和甲醇钠溶于第八有机溶剂中并充分反应，纯化后得到化合物1，所述化合物1即为4-羟基环孢素，其中，所述化合物1的结构式如下，

化合物1：

在一个实施例中，步骤一中，所述第一有机溶剂为二甲基甲酰胺、氮甲基吡烙烷酮或thf。

在一个实施例中，步骤三中，所述纯化得到化合物5的操作为：萃取后保留有机相并洗涤，接着浓缩所述有机相并加入乙醚、甲基叔丁基醚或异丙醚，去除析出的化合物4’得到所述化合物5的乙醚溶液，其中，所述化合物4’的结构式如下，

化合物4’：

在一个实施例中，步骤四中，所述第二有机溶剂为四氢呋喃、二甲基甲酰胺或体积比为2：1的四氢呋喃和二甲基甲酰胺的混合溶液。

在一个实施例中，步骤五中，所述第三有机溶剂为四氢呋喃、二氧六环或dmf。

在一个实施例中，步骤七中，所述第四有机溶剂为二氯甲烷、二氯乙烷或氯仿。

在一个实施例中，步骤八中，所述第五有机溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯。

在一个实施例中，步骤九中，所述第六有机溶剂为氯仿、甲苯或二氯甲烷。

在一个实施例中，步骤十一中，所述第七有机溶剂为二氯甲烷、甲苯或二氯乙烷。

在一个实施例中，步骤十二中，所述第八有机溶剂为甲醇。

这种4-羟基环孢素的制备方法在制备4-羟基环孢素时，化学合成的速度快、成本低，操作简便，制得的4-羟基环孢素纯度较高，可以实现4-羟基环孢素的大量制备。

附图说明

图1为实施例1制得的化合物1与标准4-羟基环孢素的比对测试图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

本发明公开了一实施方式的4-羟基环孢素的制备方法，其中，4-羟基环孢素((γ-hydroxylmethylleucine⁴)-cyclosporina)的结构式如下：

(本发明中命名为化合物1)。

具体的，4-羟基环孢素的制备方法包括如下步骤：

步骤一、-20℃～35℃(优选为冰浴)下将化合物2和第一反应物溶于第一有机溶剂中，接着在-15℃～30℃(优选为冰浴)下加入3-氯-2-甲基丙烯，接着加热至58℃～62℃(优选为60℃)并充分反应(反应时间优选为2h)，接着加入水并用酸性调节剂调节ph为7，充分反应后纯化得到化合物3。

第一反应物选自nah、kh、k2co和cs2co3中的至少一种.

酸性调节剂为盐酸、柠檬酸、硫酸或氟硼酸。优选的，酸性调节剂为盐酸(浓度为0.5mol/l～12mol/l)。

化合物2、3-氯-2-甲基丙烯以及化合物3的结构式如下，

化合物2：化合物3：

步骤一中，nah和3-氯-2-甲基丙烯相对于化合物2过量加入，以保证化合物2完全反应。

优选的，化合物2、nah和3-氯-2-甲基丙烯的摩尔比为1：1.2：1.2。

第一有机溶剂可以为二甲基甲酰胺(dmf)、氮甲基吡烙烷酮或thf。

充分反应后纯化得到化合物3的操作可以为：充分反应后析出的白色固体经过过滤收集并用蒸馏水洗涤，最后真空干燥得到化合物3。

步骤二、将步骤一得到的化合物3溶解于乙醇中，接着加入naoh溶液(浓度为2mol/l～4mol/l，优选为3mol/l)或koh溶液(浓度为2mol/l～4mol/l，优选为3mol/l)并在回流条件下充分反应(反应时间优选为2h)，接着除去乙醇并用上述酸性调节剂调节ph至7，回流条件下充分反应，之后再用浓盐酸(浓度优选为12mol/l)调节ph至3，纯化后得到化合物4。

化合物4的结构式如下，

化合物4：

步骤二中，其他反应物相对于化合物3过量加入，以保证化合物3完全反应。

纯化后得到化合物4的操作为：过滤后保留白色晶体，并在乙醚中重结晶得到化合物4。

步骤三、将步骤二得到的化合物4溶解于ph为8的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶液(浓度为0.05m～1m)中，接着加热至30℃～55℃(优选为40℃)并加入酰化氨基酸水解酶，充分反应后加入吸附剂并过滤，保留滤液并加入等体积的thf、二氧六环或乙腈，接着降温至-5℃～10℃(优选为5℃)并加入二碳酸二叔丁酯，用碳酸氢钠调节ph为7.5～8.5后控制反应温度为-5℃～30℃(优选为10℃)并充分反应，然后除去thf，并用浓盐酸(浓度优选为12mol/l)调节ph为3，接着纯化得到化合物5。

化合物5的结构式如下，

化合物5：

步骤三中，其他反应物相对于化合物4过量加入，以保证化合物4完全反应。

吸附剂优选为硅藻土。

步骤三中，反应产物为化合物4’和化合物5，因此，为了得到化合物5，需要在纯化操作中除去化合物4’。

纯化得到化合物5的操作为：萃取(萃取剂优选为乙酸乙酯)后保留有机相并洗涤(优选为用10％的氯化钠溶液洗涤)，接着浓缩所述有机相并加入乙醚、甲基叔丁基醚或异丙醚，去除析出的化合物4’得到化合物5的乙醚溶液。

化合物4’的结构式如下，

化合物4’：

步骤四、将步骤三得到的化合物5、碘甲烷和nah在干燥的第二有机溶剂中混合并充分反应(反应时间优选为12h)，接着冷却至-10℃～5℃(优选为0℃)后纯化，接着加入水合肼并在室温下充分反应(反应时间优选为6h)，再次纯化得到化合物6。

化合物6的结构式如下，

化合物6：

步骤四中，其他反应产物均相对于化合物5过量加入，以保证化合物5完全反应。

第二有机溶剂为体积比为2：1的四氢呋喃(thf)和二甲基甲酰胺(dmf)的混合溶液。

冷却至-10℃～5℃后纯化的操作为：冷却至-10℃～5℃后加入柠檬酸，接着萃取(萃取剂优选为乙酸乙酯)并保留有机相，干燥(干燥剂优选为硫酸钠)后浓缩并除去第二有机溶剂。

再次纯化得到化合物6的操作为：用水稀释，接着萃取(萃取剂优选为甲基叔丁基醚)并保留有机相，过滤(优选为采用硅胶过滤)、干燥后得到化合物6。

步骤五、-8℃～4℃(优选为冰浴)下将步骤四得到的化合物6溶解于第三有机溶剂中并降温至-15℃～-8℃(优选为-10℃)，接着加入第二反应物或第三反应物，控制反应温度为-15℃～-8℃(优选为-10℃)并充分反应(反应时间优选为1h)，纯化后得到化合物7。

第二反应物为浓度为0.1mol/l～0.5mol/l的氯化氢的乙醚溶液和亚硝酸叔丁酯(1～10当量，相对于化合物6)，第三反应物为乙酸(2～30当量，相对于化合物6)和亚硝酸钠(1～10当量，相对于化合物6)。

化合物7的结构式如下，

化合物7：

步骤五中，其他反应产物均相对于化合物6过量加入，以保证化合物6完全反应。

第三有机溶剂可以为四氢呋喃、二氧六环或dmf。

纯化后得到化合物7的操作为：旋蒸除去第三有机溶剂，剩余物萃取(萃取剂优选为氯仿)后保留有机相，接着分别用冰水和质量百分数为5％的碳酸氢钠溶液洗涤，最后干燥得到化合物7。

步骤六、将环孢霉素a(csa)、吡啶和4-二甲氨基吡啶溶于乙酸酐中，室温下充分反应(反应时间优选为12h)，接着纯化得到化合物8。

环孢霉素a和化合物8的结构式如下，

环孢霉素a：

化合物8：

步骤六中，其他反应物均相对于环孢霉素a(csa)过量，以保证环孢霉素a(csa)完全反应。

纯化得到化合物8的操作为：用1l乙酸乙酯稀释，接着用食盐水、饱和的氯化铵溶液和15％的碳酸氢钠溶液依次洗涤，有机相干燥(优选为用硫酸钠干燥)、浓缩，最后在2-甲基四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合溶液(5/1～1/5v/v)中重结晶得到的白色固体即为化合物8。

步骤七、将步骤六得到的化合物8和三甲基氧四氟硼酸盐溶于第四有机溶剂中并充分反应(反应时间优选为20h)，接着加入乙腈和水并充分反应(反应时间优选为3h)，纯化得到化合物9。

三甲基氧四氟硼酸盐和化合物9的结构式如下，

三甲基氧四氟硼酸盐：

化合物9：

步骤七中，其他反应物均相对于化合物8过量，以保证化合物8完全反应。

第四有机溶剂可以为二氯甲烷、二氯乙烷或氯仿。

纯化得到化合物9的操作为：待分层后保留有机相，有机相用水洗涤(优选为洗涤3次)，接着真空浓缩、干燥，最后在体积比为2：1的2-甲基四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合溶液中结晶，得到的白色晶状粉末为化合物9。

步骤八、将步骤七得到的化合物9、n,n-二异丙基乙胺和硫代异氰酸苯酯溶于第五有机溶剂中并充分反应(反应时间优选为100min)，接着加入n,n-二甲基乙二胺并充分反应(反应时间优选为1h)，接着加入甲醇和质量分数为40％～60％的氟硼酸水溶液(氟硼酸水溶液的质量分数优选为50％)并充分反应(反应时间优选为1h)，之后纯化得到化合物10。

化合物10的结构式如下：

化合物10：

步骤八中，其他反应物均相对于化合物9过量，以保证化合物9完全反应。

第五有机溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯。

纯化得到化合物10的操作为：加水待分层后保留无机层，无机层用萃取剂(萃取剂优选为二氯甲烷)萃取，保留有机相并浓缩后，最后在体积比为2：1的2-甲基四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合溶液中重结晶，得到的白色泡沫状物质为化合物10。

步骤九、在温度为-8℃～-12℃(优选为-10℃)的条件下将步骤八得到的化合物10、步骤五得到的化合物7和n,n-二异丙基乙胺溶于第六有机溶剂中，接着升温至室温并充分反应(反应时间优选为3h)，接着纯化得到化合物11。

化合物11的结构式如下：

化合物11：

步骤九中，其他反应物均相对于化合物10过量，以保证化合物10完全反应。

第六有机溶剂可以为氯仿、甲苯或二氯甲烷。

纯化得到化合物11的操作为：旋蒸除去第六有机溶剂，剩余物溶解在乙酸乙酯中，用稀盐酸(浓度为0.5mol/l～2mol/l，优选为1mol/l)和水洗涤有机相，干燥并浓缩后得到化合物11。

步骤十、在温度为-20℃～8℃的条件下将步骤九得到的化合物11和第四反应物溶解在体积比为10：1～1：3的四氢呋喃和水的混合溶液中，充分反应(反应时间优选为2h)后纯化，并在温度为-20℃～8℃(优选为0℃)的条件下加入体积比为20～5：1(优选为10：1)的二氯甲烷和三氟乙酸，充分反应(反应时间优选为4h)后再次纯化，并在温度为-20℃～8℃的条件下加入n,n-二异丙基乙胺和bopcl，升温至室温并充分反应，第三次纯化后得到化合物12。

第四反应物为lioh、naoh或koh。

bopcl和所述化合物12的结构式如下：

bopcl：

化合物12：

步骤十中，其他反应物均相对于化合物11过量，以保证化合物11完全反应。

充分反应后纯化的操作为：充分反应后用二氯甲烷稀释并保留有机相，接着分别用1n的盐酸、水和食盐水洗涤有机相，最后浓缩有机相。

充分反应后再次纯化的操作为：充分反应后用二氯甲烷稀释并保留有机相，接着分别用碳酸氢钠饱和溶液以及饱和食盐水洗涤有机相，有机相干燥后浓缩。

第三次纯化后得到化合物12的操作为：用二氯甲烷稀释并保留有机相，接着依次用水、1n的氯化氢溶液、水和饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩后在体积比为2：1的2-甲基四氢呋喃和甲基叔丁基醚的混合溶液结晶，得到的白色泡沫状物质为化合物12。

步骤十一、将步骤十得到的化合物12、甲基磺酸和醋酸溶于第七有机溶剂中，控制温度为30℃～50℃(优选为40℃)并充分反应(反应时间优选为8h)，纯化后得到化合物13。

化合物13的结构式如下：

化合物13：

步骤十中，其他反应物均相对于化合物12过量，以保证化合物12完全反应。

第七有机溶剂可以为二氯甲烷、甲苯或二氯乙烷。

纯化后得到化合物13的操作为：用二氯甲烷稀释后保留有机相，接着依次用水、碳酸氢钠溶液、水以及饱和食盐水洗涤有机相，有机相经干燥、浓缩后得到化合物13。

步骤十二、将步骤十一得到的化合物13和甲醇钠溶于第八有机溶剂中并充分反应(反应时间优选为15h)，纯化后得到化合物1，化合物1即为4-羟基环孢素。

化合物1(4-羟基环孢素)结构式如下：

化合物1：

步骤十中，其他反应物均相对于化合物13过量，以保证化合物13完全反应。

第八有机溶剂为甲醇。

纯化后得到化合物1的操作为：用0.5n的盐酸将ph调至6左右，浓缩反应液后得到的浓缩物溶解在乙酸乙酯中，接着依次用碳酸氢钠和食盐水洗涤有机相，有机相浓缩后经色谱柱分离纯化，得到化合物1。

这种4-羟基环孢素的制备方法在制备4-羟基环孢素时，化学合成的速度快、成本低，操作简便，制得的4-羟基环孢素纯度较高，可以实现4-羟基环孢素的大量制备。

以下为具体实施例。

具体实施例中用到的药品和仪器均为本领域常规选择。

实施例1

步骤一、将化合物2(乙酰氨基丙二酸二乙酯，217.1g，1.0mol)溶于2.0ldmf中，随后加入nah(60wt％溶在煤油中，48.0g，1.2mol)。然后在冰浴下加入3-氯-2-甲基丙烯(108.7g,117.5ml，1.2mol)，在30min内加完。之后将温度加热到60摄氏度，并保持2小时。随后加入水(2.0l)，再用1.0mol/lhcl将溶液的ph值调至7。在室温下，反应12h，析出的白色固体经过过滤收集并用蒸馏水洗涤(2×1l)，最后用真空干燥箱干燥，得到化合物3(247.0g，91％)。

步骤二、将化合物3(108.6g，0.5mol)溶于0.5l乙醇中，加入0.5l的3.0mnaoh的水溶液，反应回流3h，然后除去乙醇，再用浓盐酸(12mol/l)调至ph值为7，回流2h，之后再用浓盐酸(12mol/l)将溶液的ph值调至3，析出的白色固体经过过滤收集，并在乙醚中重结晶得化合物4(71.0g，83％)。

步骤三、将化合物4(17.1g,100.0mmol)溶于ph8.0、浓度为0.1m的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶液中，将温度调至40℃，加入酰化氨基酸水解酶(l-aminoacylase，0.86g,3units/gsubstrate)，反应5h。加入26g硅藻土，过滤。向滤液中加入等体积的thf，并将温度冷却至5℃。随后加入二碳酸二叔丁酯(boc2o，13.1g，60.0mol)，用碳酸氢钠将ph控制为8。反应温度控制在10℃下搅拌反应4h，然后除去thf。接着用浓盐酸(12mol/l)将水相酸化至ph为3，用乙酸乙酯萃取3次，每次300ml。将乙酸乙酯层的有机相合并，并用10％的氯化钠溶液洗涤，浓缩并加入乙醚，去除析出的化合物4’得到化合物5的乙醚溶液，去除乙醚得到亮黄色的油状产物化合物5(10.8g,47％,>99％ee)。

步骤四、将化合物5(10.8g，4.7mmol)和碘甲烷(1.8ml，28.5mmol)溶于干燥的thf-dmf(2:1,15ml)中，加入氢化钠(60wt％，564mg，14.1mmol)。反应过夜，再将冷至0℃，加入柠檬酸(12ml)，并用乙酸乙酯萃取三次，每次100ml。合并有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩除去四氢呋喃和乙酸乙酯。再加入水合肼(90％，2.6ml，溶于10mldmf)。再将反应在室温下搅拌6小时。用100ml水稀释和甲基叔丁基醚萃取(2×100ml)。合并有机相，经硅胶过滤，干燥，得到化合物6(8.9g，74％)。

步骤五、在冰浴中，将化合物6(0.57g,2.2mmol)溶解在四氢呋喃(5ml)中，温度降到-10℃。加入氯化氢的乙醚溶液(14.0m，0.8ml)和亚硝酸叔丁酯(0.38ml,3.0mmol)。将反应液在零下10℃中搅拌60分钟，直至溶液变澄清。然后，经旋蒸除去溶剂，剩余物用氯仿萃取，接着用冰水和5％的碳酸氢钠溶液，冰水洗涤，最后干燥得到化合物7。

步骤六、将环孢霉素a(csa,24.0g，20.0mmol)溶于80ml乙酸酐中，加入80ml吡啶和4-二甲氨基吡啶(dmpa,4-n,n-dimethylaminopyride,0.8g,6.5mmol)。将反应置于室温并搅拌过夜，接着用1l乙酸乙酯稀释。再用食盐水，饱和的氯化铵溶液和质量分数为15％的碳酸氢钠溶液依次洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，在真空下浓缩。在2-甲基四氢呋喃(100ml)和甲基叔丁基醚(50ml)的混合溶液中重结晶得到的白色固体为化合物8(乙酰基-环孢霉素a，23.2g，93％)。

步骤七、将化合物8(37.4g,30mmol)溶于二氯甲烷(300ml)，加入三甲基氧四氟硼酸盐(13.3g,90mmol)。反应20小时后加入乙腈和水，再反应3小时，分层，有机相用水洗涤3次，每次用100ml。接着，将反应液经真空浓缩、干燥。然后在2-甲基四氢呋喃(100ml)和甲基叔丁基醚(50ml)的混合溶液中结晶得到的白色晶状粉末为化合物9(29.9g,73％)。

步骤八、将化合物9(13.7g,10.0mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(6.6ml,40mmol)和硫代异氰酸苯酯(4.1g,30mmol)，反应搅拌100分钟，加入n,n-二甲基乙二胺(2.3ml,25mmol)，接着搅拌60分钟，然后加入甲醇(60ml)和50％的氟硼酸水溶液(2.3g,13mmol)。反应搅拌1小时。然后，加入水(50ml)，分层，无机层用二氯甲烷萃取2次。合并有机相，浓缩后，在2-甲基四氢呋喃(50ml)和甲基叔丁基醚(25ml)的混合溶液中重结晶，得到的白色泡沫状物质为化合物10(11.2g,91％)。

步骤九、将化合物10(2.47g,2.0mmol)溶解在氯仿(10ml)中。随后在零下10℃加入化合物7和n,n-二异丙基乙胺，再将温度恢复到室温，搅拌3小时。经旋蒸除去溶剂，剩余物溶解在乙酸乙酯中，用稀盐酸(1mol/l)和水洗涤有机相，干燥并浓缩后得到化合物11(2.6g,95％)。

步骤十、将化合物11(2.6g,1.9mmol)溶解在体积比为2：1的四氢呋喃和水的混合溶液中，在0℃中，加入氢氧化锂(385mg,9.5mmol)，反应搅拌2小时。然后用二氯甲烷稀释，分别用1.0n的盐酸、水和食盐水洗涤。有机相浓缩后在0℃下加入20ml二氯甲烷和5ml的三氟乙酸。反应搅拌4小时，用二氯甲烷稀释后，用碳酸氢钠饱和以及饱和食盐水洗涤有机相。有机相干燥后浓缩后在0℃下加入n,n-二异丙基乙胺(4.8ml,9.5mmol)和bopcl(967mg,3.8mmol)。将温度调至室温，反应搅拌5小时，用二氯甲烷稀释，依次用水、1.0n的氯化氢溶液、水和饱和食盐水洗涤。有机相干燥浓缩后在2-甲基四氢呋喃(6.67ml)和甲基叔丁基醚(3.33ml)的混合溶液结晶，得到的白色泡沫状物质为化合物12(1.18g,62％)。

步骤十一、将化合物12(248mg,0.2mmol)溶解在二氯甲烷(2ml)中，加入甲基磺酸(msa,13ul,0.2mmol)和醋酸(114ul,2.0mmol)。反应在40℃搅拌8小时，用二氯甲烷稀释，依次用水、碳酸氢钠溶液、水以及饱和食盐水洗涤有机相。有机相经干燥、浓缩后得到化合物13(244mg,95％)。

步骤十二、将化合物13(128mg,0.1mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入甲醇钠的甲醇溶液(0.5m,0.5ml)。搅拌15小时后用0.5n的盐酸将ph调至6左右，反应液浓缩后，浓缩物溶解在50ml的乙酸乙酯中，用碳酸氢钠和食盐水洗涤。有机相浓缩后经色谱柱分离纯化，得到目的产物(97mg，80％)。

对得到的化合物1与标准4-羟基环孢素比对测试，结果如图1所示。

由图1可以看出，实施例1制得的化合物1即为4-羟基环孢素(γ-hydroxylmethylleucine⁴)-cyclosporina)。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。