本发明涉及一种从发酵液中提取胞嘧啶核苷的方法。
背景技术：
胞嘧啶核苷（cytosineriboside）又名胞苷（cytidine）。核苷产品使用专业性强，是生物医学研究中不可缺少的原料，同时是制备生物药品的基本元素。胞苷主要用于生产抗肿瘤、抗病毒药物的中间体，美国近年来在抗病毒、抗肿瘤、治疗艾滋病药物阿糖胞苷（ara-cr）、环胞苷（cycloc）、三磷酸胞苷（ctp）、胞二磷胆碱（cdp-choline）等核酸类药品的主要原料方面显示了不可替代的作用。随着这类药物研制的深入，嘧啶核苷的需求量加大，人们期望得到廉价的、能大规模生产胞苷的工艺方法。
目前，胞嘧啶核苷大多采用化学合成的方式进行，从发酵液中分离提取胞嘧啶核苷尚未在文献中报道过。。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供一种从发酵液中提取胞嘧啶核苷的方法，该方法能高效的分离出成品并提高纯度和收率。
本发明为实现以上目的，采用以下技术方案：一种从发酵液中提取胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液；
步骤二：将纳滤清液用大孔吸附树脂进行色素吸附，得到脱色液；
步骤三：脱色液加热60-80℃浓缩至胞嘧啶核苷浓度30-50%，降温至室温之后加,加入浓缩液体积1-3倍的工业乙醇进行搅拌结晶2-6h，过滤后得到胞嘧啶核苷的粗品；
步骤四：将粗品溶解后，加热至60-80℃浓缩至胞嘧啶核苷浓度30-50%，降温至室温之后加,加入浓缩液体积1-3倍的工业乙醇进行搅拌结晶2-6h，过滤烘干后得到胞嘧啶核苷的成品。
优选的，所述步骤二中的大孔吸附树脂为大孔阳离子树脂。
优选的，所述大孔阳离子树脂为hd-1型大孔吸附树脂。
优选的，所述步骤二中树脂的上柱流速为1-1.5bv/h。
优选的，所述步骤三和步骤四中浓缩温度为70℃，浓缩浓度为40%，工业乙醇加量为2倍浓缩液体积，搅拌时间为4h。
本发明的有益效果是主要体现在：
①本发明与传统化学合成工艺相比，本发明提取工艺简单且安全高效，过程中不采用有毒有害试剂，减少了对环境的污染，也减少了杂质对成品的影响。
②针对传统化学合成工艺步骤繁琐导致收率低的问题，本发明通过添加脱色树脂后大大减少了多次浓缩结晶带来的收率损失，且工业乙醇的用量大大减少，胞嘧啶核苷的收率大于75%。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
一种从发酵液中提取胞嘧啶核苷的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将1l发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液；
步骤二：得到滤液过分子量600-800da的纳滤膜，得到纳滤清液以1.7ml/min的速度过100ml的hd-1型大孔吸附树脂进行脱色得到脱色液；
步骤三：得到脱色液后得到的脱色液再过0.22um微孔滤膜后在70℃真空浓缩至胞嘧啶核苷浓度30%，降温至室温，加入浓缩液体积1倍的工业乙醇进行搅拌结晶2h，过滤得到粗品38.6g；
步骤四：将粗品溶解后，加热至60℃浓缩至胞嘧啶核苷浓度30%，降温至室温之后加,加入倍浓缩液体积1倍的工业乙醇进行搅拌结晶2h，过滤得到湿品28.6g，于50℃烘干后得到胞嘧啶核苷的成品25.4g,色谱纯度99.8%，收率75.0%。
实施例2:
步骤一：将1l发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：得到滤液过分子量600-800da的纳滤膜，得到纳滤清液以1.7ml/min的速度过100ml的hd-1型大孔吸附树脂进行脱色得到脱色液。
步骤三：得到脱色液后得到的脱色液再过0.22um微孔滤膜后在70℃真空浓缩至胞嘧啶核苷浓度40%，降温至室温，加入浓缩液体积两倍的工业乙醇进行搅拌结晶4h，过滤得到粗品39.3g。
步骤四：将粗品溶解后，加热至70℃浓缩至胞嘧啶核苷浓度40%，降温至室温之后加,加入倍浓缩液体积2倍的工业乙醇进行搅拌结晶4h，过滤得到湿品29.5g，于50℃烘干后得到胞嘧啶核苷的成品26.0g,色谱纯度100.3%，收率76.8%。
实施例3:
步骤一：将1l发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：得到滤液过分子量600-800da的纳滤膜，得到纳滤清液以1.7ml/min的速度过100ml的hd-1型大孔吸附树脂进行脱色得到脱色液。
步骤三：得到脱色液后得到的脱色液再过0.22um微孔滤膜后在70℃真空浓缩至胞嘧啶核苷浓度50%，降温至室温，加入浓缩液体积3倍的工业乙醇进行搅拌结晶6h，过滤得到粗品38.5g。
步骤四：将粗品溶解后，加热至80℃浓缩至胞嘧啶核苷浓度50%，降温至室温之后加,加入倍浓缩液体积3倍的工业乙醇进行搅拌结晶6h，过滤得到湿品28.8g，于50℃烘干后得到胞嘧啶核苷的成品25.5g,色谱纯度99.7%，收率75.5%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。