贝利司他的多晶型及其制备方法与流程

本发明涉及贝利司他(belinostat)的多晶型及其制备方法。本发明进一步描述了包含贝利司他的多晶型的药物组合物及其在制备用于治疗患者癌症的药物中的用途。

发明背景

贝利司他，化学上称为(2e)-n-羟基-3-(3-苯基氨磺酰基苯基)丙烯酰胺，由式i表示。

贝利司他是药物的有效成分，并且预期用于静脉给药。它是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，适用于治疗具有复发或顽固性外周t细胞淋巴瘤(ptcl)的患者。

式i表示的贝利司他描述于wo2002/030879中。该pct申请的实施例7描述了贝利司他的制备，其中在用乙腈和乙醚洗涤后分离产物，且该产物具有172℃的熔点。

国际专利申请wo2009/040517描述了一种合成贝利司他的方法，其中将产物从乙醇：水中重结晶，并且据称产生了贝利司他的不规则形状的双折射晶体的聚集物。然而，该申请没有提供任何关于光谱表征数据的明确信息，并且也没有具体鉴定贝利司他的多晶型。

合成贝利司他的方法也描述于wang等人j.med.chem.2011,54,4694–4720中，其中通过使用甲醇和二氯甲烷的柱色谱法纯化贝利司他。柱色谱是耗时的方法，且因此对于api的商业生产并不理想。

化合物的特定多晶型可具有不同于任何其他结晶形式或无定形形式的物理性质，并且这些性质可显著影响化合物的化学和药学加工，特别是当以商业规模制备或使用化合物时。例如，化合物的每种晶型可以显示出物理性质的差异，例如晶体尺寸和形状，熔点，密度，吸湿性和稳定性。化合物的不同晶型可具有不同的热力学稳定性。通常，更稳定的形式，例如更稳定的晶型，通常是商业规模的配制和加工的更适合的物理形式。

因此，对具有所期望加工性能(例如易于纯化和储存稳定)的贝利司他的固体形式存在需求。同时，对有助于转化成其他多晶型的中间晶型存在需求。药学上有用的化合物或其盐的新多晶型和溶剂合物也可提供改善api的性能特征的机会。提供在纯度和收率方面具有更好质量的最终api的产品，可以提供优势。

现在已经发现，在某些条件下，可以制备贝利司他的溶剂化以及非溶剂化多晶型。因此，本发明涉及具有有利特性的贝利司他的新多晶型。这些有利的性质可以是例如高化学纯度，低含量残留溶剂和持久的储存稳定性等。类似期望的是有利的形态/晶体习性、对热和机械应激的稳定性以及对多晶型转化的抗性。

发明概述

本发明涉及贝利司他的多晶型及其制备方法。本发明进一步涉及包含该贝利司他的多晶型的药物组合物及其在治疗有此需要的患者中的用途。

在第一方面，本发明涉及贝利司他的丙酮溶剂合物。

在第二方面，本发明涉及贝利司他的结晶丙酮溶剂合物。

在第三方面，本发明涉及用于制备贝利司他的丙酮溶剂合物的方法，它包括下列步骤：

a.使贝利司他接触丙酮；以及

b.分离贝利司他的丙酮溶剂合物。

在第四方面，本发明涉及贝利司他的晶型i，其特征在于x射线粉末衍射(xrpd)图案包含在约14.7、20.8、21.2和26.4±0.2度2-θ的峰。

在第五方面，本发明涉及用于制备贝利司他的晶型i的方法，它包括下列步骤：

a.将贝利司他的丙酮溶剂合物溶于极性质子溶剂；

b.向步骤a)的溶液中加入适合的抗溶剂；以及

c.分离贝利司他的晶型i。

在第六方面，本发明涉及贝利司他的晶型i，其中贝利司他的晶型i可通过包含下列步骤的方法得到：

a.将贝利司他的丙酮溶剂合物溶于极性质子溶剂；

b.向步骤a)的溶液中加入适合的抗溶剂；以及

c.分离贝利司他的晶型i。

在第七方面，本发明涉及用于制备贝利司他的晶型i的方法，它包括下列步骤：

a.使贝利司他的丙酮溶剂合物接触水；以及

b.分离贝利司他的晶型i。

在第八方面，本发明涉及贝利司他的晶型i，其中贝利司他的晶型i可通过包含下列步骤的方法得到：

a.使贝利司他的丙酮溶剂合物接触水；以及

b.分离贝利司他的晶型i。

在第九方面，本发明涉及药物组合物，其包含贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。

在第十方面，本发明涉及治疗癌症的方法，它包括施用治疗有效量的贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物。

在第十一方面，本发明涉及治疗复发或顽固性外周t-细胞淋巴瘤(ptcl)或恶性胸腺瘤的方法，它包括施用治疗有效量的贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物。

在第十二方面，本发明提供制备药物组合物的方法，它包括下列步骤：将贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合。

定义

如本申请中所用，术语“环境温度”是指从约15℃至35℃范围的温度，优选环境温度是指约20℃至30℃的温度，更优选25℃的温度。

如本申请中所用，术语“抗溶剂”是指当与贝利司他的溶液组合时降低贝利司他在溶液中的溶解度、在某些情况下自发地且在其他情况下用额外步骤例如播晶种、冷却、刮擦和/或浓缩引起结晶或沉淀的液体。

如本申请中所用，术语“溶剂合物”是指含有化学计量或非化学计量的结合在晶体结构中的溶剂的结晶固体加合物。

如本申请中所用，术语“接触”包括混合、添加、浆化、搅拌或其组合。

如本申请中所用，术语“约”应解释为修饰术语或值，使得其不是绝对的。这类属于将根据具体情况确定。这最至少包括用于测量值的给定技术的预期实验误差、技术误差和仪器误差的程度。

如本申请中所用，术语“烷基”是指直链、支链或环状烃基，包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，正己基和环己基。

涉及分析表征如x射线粉末衍射(xrpd)峰位置或tga热谱图吸热/放热峰位置的术语“基本上相同”意味着考虑典型的峰位置和强度变化。例如，本领域技术人员将理解，峰位(2θ)将显示一些仪器间变异性，典型地大到0.2°。此外，本领域技术人员将理解，相对峰强度将显示仪器间变异性以及由于结晶度、优选取向、所制备的样品表面和本领域技术人员已知的其他因素引起的变异性，并且应当仅视为定性测量。

缩写

xrpdx射线粉末衍射

tga热重分析

¹³c-nmr碳-13核磁共振

ir红外光谱法

hplc高效液相色谱法

附图简要说明

图1；表示本发明贝利司他的结晶丙酮溶剂合物的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

图2；表示本发明贝利司他的结晶丙酮溶剂合物的热重(tga)分析。

图3；表示本发明贝利司他的晶型i的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

图4；表示本发明贝利司他的晶型i的热重分析(tga)。

发明详述

已经进行了关于贝利司他的研究以开发具有有益性质的多晶型形式。研究了广泛的不同极性的重结晶溶剂。一种溶剂合物被鉴定为目标物，它是贝利司他的丙酮溶剂合物。从这些溶剂的大多数中，获得了贝利司他的单一非溶剂化晶型，在下文将其称为“贝利司他的晶型i”。

可以使用各种技术表征根据本发明的贝利司他的多晶型。表征方法的实例包括但不限于单晶x射线衍射，x射线粉末衍射(xrpd)，模拟粉末x射线图案，固态¹³c-nmr，拉曼光谱法，红外光谱法(ir)，水分吸附等温线，热重分析(tga)，差示扫描量热法(dsc)和热台技术。

通过x射线粉末衍射(xrpd)和热重分析(tga)表征了贝利司他的丙酮溶剂合物和晶型i。

在第一方面，本发明涉及贝利司他的丙酮溶剂合物。本发明涉及贝利司他的丙酮溶剂合物，其中贝利司他与丙酮溶剂的摩尔比约为1：0.75-0.95。贝利司他的丙酮溶剂合物含有约8.5±1％重量的丙酮。

此外，发明人发现贝利司他的丙酮溶剂合物具有结晶物理形式，其易于分离并且也非常稳定。此外，该溶剂合物可以容易地以高纯度和高收率在商业规模上制备。

在第二方面，本发明涉及贝利司他的结晶丙酮溶剂合物。

贝利司他的结晶丙酮溶剂合物的特征在于如下至少一个：

a.x射线粉末衍射(xrpd)图案，其包含在约16.3、18.2、21.0和22.3±0.2度2-θ的峰；

b.基本上与图1中所示相同的x射线粉末衍射(xrpd)图案；

c.通过热重分析(tga)测定，约8.5±1％的重量减轻；以及

d.基本上与图2中所示相同的热重分析热分析图。

贝利司他的结晶丙酮溶剂合物可进一步通过x射线粉末衍射(xrpd)图案进行表征，其包含在约4.1、8.2、15.8和21.3±0.2度2-θ的峰。

可以根据本领域中已知的方法，例如wo2002/030879、wo2009/040517、j.med.chem.2011,54,4694–4720中所述的方法或本申请中所述的方法，制备本发明中用作原料的贝利司他。本发明的原料贝利司他可被制备如下：使式ii的化合物与羟胺盐酸盐在碱存在下反应得到贝利司他，

其中r是烷基。

该反应中使用的碱可以选自由碱金属氢氧化物和碱金属醇盐组成的组，优选碱可以选自氢氧化钠，氢氧化钾，醇钠或醇钾；更优选甲醇钠或叔丁醇钠。反应可在适合的溶剂中进行。合适的溶剂是醇，优选甲醇或乙醇。式ii的化合物与羟胺盐酸盐在碱存在下的反应可在0-60℃的温度下进行，优选在0℃至环境温度下进行，然后搅拌30分钟至10小时期限。优选地，反应在1至4小时内完成，得到贝利司他。可以通过诸如提取，沉淀，冷却，过滤，离心或其组合的方法从反应混合物中分离贝利司他；优选通过过滤或提取分离贝利司他。

在第三方面，本发明涉及用于制备贝利司他的丙酮溶剂合物的方法，它包括下列步骤：

a.使贝利司他接触丙酮；以及

b.分离贝利司他的丙酮溶剂合物。

步骤a)可以在10-70℃进行10分钟至12小时，以便将贝利司他转化成其丙酮溶剂合物，优选反应在15至60℃进行20分钟至4小时。

可通过诸如沉淀，冷却，过滤，离心或其组合等方法分离贝利司他的丙酮溶剂合物。可以通过将所得到的反应混合物冷却至0-10℃，然后过滤，分离丙酮溶剂合物。

可以任选地用丙酮洗涤贝利司他的丙酮溶剂合物。

任选地通过诸如真空干燥，加热干燥，喷雾干燥，冷冻干燥，超临界干燥或自然空气干燥等方法干燥由此获得的贝利司他的丙酮溶剂合物。也可以组合使用上述任何方法以确保除去未结合的溶剂。优选通过真空干燥方法干燥贝利司他的丙酮溶剂合物。如将被认识到的，干燥时间将尤其取决于待干燥的材料的量，以及所使用的特定干燥方法。通常，20分钟至20小时，优选1至12小时的干燥时间是充分的。便利地，在真空下并且任选地在惰性气氛下进行干燥，例如通过使温热的惰性气体(例如氮气)流流过或穿过材料。

上述方法可以变化，例如根据所处理的起始物贝利司他的量，丙酮的体积，处理的温度，冷却期和/或干燥条件。

在第四方面，本发明涉及贝利司他的晶型i。

贝利司他的晶型i的特征在于如下至少一个：

a.x射线粉末衍射(xrpd)图案，其包含在约14.7、20.8、21.2和26.4±0.2度2-θ的峰；

b.基本上与图3中所示相同的x射线粉末衍射(xrpd)图案；

c.通过热重分析(tga)测定，约小于1％的重量减轻；以及

d.基本上与图4中所示相同的热重分析热分析图。

贝利司他的晶型i可以通过x射线粉末衍射(xrpd)图案进行表征，其还包含在约11.2、13.7和16.7±0.2度2-θ的峰。

在第五方面，本发明涉及用于制备贝利司他的晶型i的方法，它包括下列步骤：

a.将贝利司他的丙酮溶剂合物溶于极性质子溶剂中；

b.向步骤a)的溶液中加入适合的抗溶剂；以及

c.分离贝利司他的晶型i。

步骤a)中使用的极性质子溶剂选自c1-4醇，优选甲醇或乙醇。

可以将贝利司他的丙酮溶剂合物和极性质子溶剂的混合物在环境温度下搅拌或加热至回流直至发生溶解。或者，例如，可以将该混合物加热至低于溶剂的回流温度的温度，条件是大约所有固体材料的溶解已发生。应当理解，可通过过滤混合物除去少量不溶性物质。

步骤a)后得到的溶液可任选地在升高的温度下用活性炭处理；优选35-55℃，然后冷却至环境温度。可以通过诸如通过hyflow过滤等方法除去活性炭。

将步骤a)之后所得到的溶液(用或不用活性炭处理)与适合的抗溶剂混合，以使产物从溶液中沉淀。适合的抗溶剂是水。可以在适合的温度，优选环境温度，将混合物搅拌30分钟至12小时，优选1至3小时的期间，以制备贝利司他的晶型i。

可以通过诸如沉淀，冷却，过滤，离心或其组合等方法从所得到的混合物中分离贝利司他的晶型i。优选通过真空过滤分离贝利司他的晶型i。

可以任选地用适合的抗溶剂洗涤贝利司他的晶型i。

任选地通过诸如真空干燥，加热干燥，喷雾干燥，冷冻干燥，超临界干燥或自然空气干燥等方法干燥所获得的材料。也可以组合使用上述任何方法以确保完全除去溶剂和抗溶剂。优选地，通过加热和/或真空干燥方法干燥贝利司他的晶型i。适合的干燥温度为例如35至100℃，特别是45至65℃。如将被认识到的，干燥时间将尤其取决于待干燥的材料的量，以及所使用的特定干燥方法。通常，20分钟至25小时，优选5至22小时的干燥时间是充分的。便利地，通过在真空和任选地在惰性气氛下加热来进行干燥，例如通过使温热的惰性气体(例如氮气)流流过或穿过材料。

上述方法可以变化，例如根据所处理的贝利司他的丙酮溶剂合物的量，溶剂或抗溶剂的体积，处理的温度，冷却期和/或干燥条件。

在第六方面，本发明涉及贝利司他的晶型i，其中贝利司他的晶型i可通过如上所述的方法得到。

在第七方面，本发明涉及用于制备贝利司他的晶型i的方法，它包括下列步骤：

a.使贝利司他的丙酮溶剂合物接触水；以及

b.分离贝利司他的晶型i。

步骤a)可以在环境温度，优选在20-30℃进行并且持续30分钟至12小时，以便将贝利司他的丙酮溶剂合物转化成晶型i，优选持续1-3小时。

可通过诸如沉淀，冷却，过滤，离心或其组合等方法分离贝利司他的晶型i；优选通过真空过滤分离贝利司他的晶型i。

可以任选地用水洗涤贝利司他的晶型i。

任选地通过诸如真空干燥，加热干燥，喷雾干燥，冷冻干燥，超临界干燥或自然空气干燥等方法干燥所获得的材料。也可以组合使用上述任何方法以确保完全除去水并转化成所需贝利司他的晶型i。优选地，通过加热和/或真空干燥方法干燥贝利司他的晶型i。适合的干燥温度为例如35至100℃，特别是45至65℃。如将被认识到的，干燥时间将尤其取决于待干燥的材料的量，以及所使用的特定干燥方法。一般30分钟到25小时，例如5到20小时的干燥时间是充分的。便利地，通过在真空和任选地在惰性气氛下加热来进行干燥，例如通过使温热的惰性气体(例如氮气)流流过或穿过材料。

上述方法可以变化，例如根据所处理的贝利司他的丙酮溶剂合物的量，水的体积，处理的温度，冷却期和/或干燥条件。

在第八方面，本发明涉及贝利司他的晶型i，其中贝利司他的晶型i可通过如上所述的方法获得。

已经发现，可以通过本发明的方法容易地将贝利司他的丙酮溶剂合物转化为贝利司他的晶型i。总的说来，包含丙酮溶剂合物制备和转回贝利司他的晶型i的步骤在最终活性药物成分(api)贝利司他的收率和纯度方面是有益的。可以重复制备贝利司他的丙酮溶剂合物并进一步转化为未溶剂化的贝利司他，优选贝利司他的晶型i，以提高最终产物的纯度或降低终产物中的杂质水平。

在第九方面，本发明涉及药物组合物，其包含贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。

在第十方面，本发明涉及治疗癌症的方法，它包括施用治疗有效量的贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物。

在第十一方面，本发明涉及治疗复发或顽固性外周t细胞淋巴瘤(ptcl)或恶性胸腺瘤的方法，它包括施用治疗有效量的贝利司他丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物。

在第十二方面，本发明提供制备药物组合物的方法，它包括将贝利司他的丙酮溶剂合物或贝利司他的晶型i或其混合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合的步骤。

可以通过以下实施例举例说明用于制备本发明的贝利司他的多晶型的方法，这些实施例决不应被解释为限制本发明的范围。

实施例

仪器

xrpd

使用brukeraxsd8增强粉末x射线衍射计、cukα射线、波长得到x射线衍射数据。

tga

使用tgaq500v20进行tga测定，温度范围25-300℃和10℃/min。

参比例1：3-甲酰基苯磺酸钠的制备

将苯甲醛(10.0g)缓慢地加到发烟硫酸溶液(25.0ml)中，不超过高于的温度，将反应物质在40-45℃搅拌10小时，然后在环境温度搅拌5-6小时。将该反应物质倾入冰/水，用乙酸乙酯(50ml)萃取。此后，用caco3将水层的ph调节至6-7，过滤反应混合物。用碳酸钠将滤液的ph调整至8-9，再过滤，真空浓缩滤液，得到6.8g的3-甲酰基苯磺酸钠。

参比例2：3-甲酰基苯-1-磺酸的制备

将苯甲醛(100g)加到20％发烟硫酸溶液(500ml)中，将反应物质在70-80℃搅拌12-15小时。此后，将该反应物质冷却至0-10℃，倾入冰/水。向反应物质中加入氢氧化钠(500ml)和甲醇(1500ml)，然后在10-20℃搅拌1小时。通过添加稀硫酸(100ml)将反应混合物的ph调整至2.0-3.0。将该反应混合物在10-20℃搅拌10-15分钟，过滤，用甲醇(2x500ml)洗涤，真空蒸发滤液。向得到的残余物中加入甲苯(500ml)，在50-60℃搅拌10-20分钟，真空蒸发溶剂。此后，向得到的残余物中加入甲醇(1500ml)，搅拌，用活性炭处理，蒸发溶剂。向反应物质中加入二甲基甲酰胺(800ml)，在40-50℃搅拌50-70分钟，通过hyflo床过滤。从反应混合物中部分回收溶剂，然后添加乙酸乙酯(1500ml)。将该反应混合物在20-30℃搅拌1-2小时，过滤，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥，得到155g的3-甲酰基苯-1-磺酸。

参比例3：3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠的制备

方法a：在20-25℃将3-甲酰基苯磺酸钠(7.0g)、碳酸钾(9.2g)、膦酰乙酸三甲酯(6.5ml)和水(17.5ml)搅拌2小时。过滤固体。真空浓缩滤液，得到6.5g的3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠。

方法b：在室温将3-甲酰基苯磺酸钠(30.0g)加入甲醇(120ml)，将该反应物质冷却至0-10℃。在0-10℃向反应物质中加入膦酰乙酸三甲酯(26.2g)和甲醇钠溶液(37.3ml)，搅拌2小时。反应完成后，使反应物质达到室温，然后加入丙酮(60ml)。将反应物质搅拌30-40分钟，过滤固体。在45-50℃真空干燥由此得到的固体，得到26g的3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠。

方法c：在20-30℃将在二甲基甲酰胺(750ml)中的3-甲酰基苯-1-磺酸(150g)搅拌10-20分钟，然后添加膦酰乙酸三甲酯(152.5g)和甲醇钠溶液(通过将45.2g甲醇钠溶于225ml甲醇制备)。将该反应混合物在0-10℃搅拌1-2小时，然后添加二异丙基醚(3000ml)。将该反应混合物在20-30℃搅拌1-2小时，过滤，用二异丙基醚(2x300ml)洗涤，在氮气气氛中干燥。向得到的产物中加入甲醇(3750ml)，在35-40℃搅拌20-30分钟，通过hyflo床过滤，用甲醇洗涤。真空下从反应混合物中部分回收溶剂，在50-60℃向得到的物质中加入乙酸乙酯(2250ml)。将该混合物冷却至20-30℃，搅拌2-3小时，过滤，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥，得到104g的3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠。

参比例4：(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯的制备

方法a：在n2气氛中将3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠(5.0g)加入甲苯(25ml)和亚硫酰氯(8.7ml)溶液。将催化量的dmf(0.3ml)加到反应物质中，回流2小时。过滤反应物质，蒸馏滤液。将得到的残余物溶于二氯甲烷(25ml)(溶液-1)。向苯胺(4.3ml)和三乙胺(7.5ml)的混合物中加入二氯甲烷溶液(25ml)(溶液-1)，将该混合物在50℃搅拌2-3小时。蒸馏出反应物质，将残余物加到乙酸乙酯(25ml)和水(25ml)中。分离有机层，用10％hcl和盐水溶液洗涤。通过蒸馏从得到的有机层中除去溶剂，得到1.0g的(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯。

方法b：向3-[(1e)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯磺酸钠(100g)在甲苯(500ml)中的混合物中加入二甲基甲酰胺(10ml)和亚硫酰氯(90g)，将混合物在55-65℃搅拌2-2.5小时。真空蒸馏反应混合物。向得到的残余物中加入甲苯(600ml)，将混合物在20-30℃搅拌10-20分钟，过滤，用甲苯(200ml)洗涤。合并有机层，冷却至0-10℃。向得到的有机层中加入苯胺(42.3g)和二异丙基乙基胺(58.7g)，在20-30℃搅拌2-2.5小时。向该反应混合物中加入乙酸乙酯(1500ml)和水(500ml)，搅拌15-30分钟。分离有机层，用稀hcl和5％碳酸氢钠溶液洗涤。用活性炭处理有机层，通过蒸馏从得到的有机层中除去溶剂。将得到的残余物加到甲苯(300ml)中，在20-30℃搅拌，过滤，干燥。此后，向得到的产物中加入甲醇(2000ml)，在55-60℃搅拌15-30分钟，部分回收溶剂。将该反应混合物冷却至环境温度，搅拌1-1.5小时，过滤，用甲醇洗涤，真空干燥，得到92g的(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯。

参比例5：贝利司他的制备

方法a：在n2气氛中向(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯(40g)和羟胺盐酸盐(52.55g)在无水甲醇(400ml)中的混合物中加入甲醇钠的甲醇溶液(244.8g,25％w/w)，将反应物质在20-30℃搅拌2-3小时。过滤盐，减压浓缩滤液。向得到的残余物中加入dm水，用稀盐酸溶液将ph调整至6-8。用乙酸乙酯萃取得到的混合物(2*520ml)，分离各层。用7％碳酸氢钠(2*400ml)和dm水(400ml)洗涤有机层。减压浓缩得到的有机层，得到36g贝利司他，通过hplc证实纯度为97.59％。

方法b：向(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯(20.0g)、羟胺盐酸盐(26.3g)和甲醇(100ml)的混合物中缓慢地加入叔丁醇钠溶液(54.5g溶于200ml甲醇)，在环境温度搅拌2小时。过滤反应物质，真空蒸馏母液。将残余物与甲醇(100ml)、水(260ml)和乙酸乙酯(260ml)混合，然后用浓盐酸(18ml)中和。分离各层。用碳酸氢钠溶液(2×200ml)、水(200ml)、然后用盐水溶液(200ml)洗涤有机层。减压浓缩得到的有机层，得到18g贝利司他，通过hplc证实纯度为99.08％。

方法c：向(2e)-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酸甲酯(100g)、羟胺盐酸盐(131.34g)和甲醇(200ml)的混合物中缓慢地加入甲醇钠溶液(170.16g溶于856ml甲醇)，在0-10℃搅拌2-2.5小时。将残余物与水(1200ml)和乙酸乙酯(1800ml)混合，然后用稀盐酸(18ml)将ph调整至5-5.8。分离各层。用乙酸乙酯洗涤水层。合并有机层，用盐水溶液(1000ml)和碳酸氢钠溶液(1000ml)洗涤。从得到的有机层中蒸馏溶剂，然后添加甲醇(500ml)，再蒸馏，得到100g贝利司他。

实施例1：贝利司他的丙酮溶剂合物的制备

将贝利司他(100g)在丙酮(800ml)中的混合物在50-55℃搅拌20-30分钟。将该混合物冷却至0-5℃，过滤，用丙酮(100ml)洗涤，抽吸干燥30分钟。向得到的残余物中加入甲醇(500ml)，在20-30℃搅拌15-20分钟，蒸馏出溶剂。此后，将得到的残余物与丙酮(600ml)混合，在50-55℃搅拌20-30分钟。将该混合物冷却至0-5℃，搅拌2-3小时，过滤，用丙酮(50ml)洗涤，抽吸干燥30分钟，得到70g贝利司他的丙酮溶剂合物。

实施例2：贝利司他的结晶丙酮溶剂合物的制备

在20-30℃将贝利司他(36g)在丙酮(480ml)中的混合物搅拌1-2小时。过滤固体，用丙酮(40ml)洗涤，抽吸干燥30分钟。最终在40℃真空干燥得到的产物10小时。得到20g贝利司他的结晶丙酮溶剂合物，通过hplc证实纯度为99.96％。

xrpd峰：4.072,8.154,15.828,16.265,18.192,20.988,21.339,22.333,22.992,23.395和28.849±0.2度2-θ。

丙酮含量：8.5％w/w

实施例3：贝利司他的晶型i的制备

将贝利司他的丙酮溶剂合物(13g)和甲醇(65ml)的混合物在20-30℃搅拌10分钟，得到澄清溶液。用活性炭(1.3g)处理得到的溶液，在40-45℃搅拌30分钟，冷却至20-30℃，通过hyflow床过滤。用甲醇(65ml)洗涤hyflow床，通过微米滤器进一步过滤滤液。将得到的滤液加到dm水(520ml)中，维持温度在20-30℃，搅拌2小时。过滤得到的混合物，用dm水(26ml)洗涤，在50-55℃真空干燥20小时。得到10.5g贝利司他的晶型i，通过hplc证实纯度为99.94％。

xrpd峰：4.533,9.049,11.196,13.575,13.681,14.722,15.560,16.686,17.028,18.127,20.852,21.204,22.701,26.459,26.544,28.087和30.696±0.2度2-θ。

通过tga，重量减轻：0.034％w/w

实施例4：贝利司他的晶型i的制备

将贝利司他的丙酮溶剂合物(2g)和dm水(40ml)的混合物在20-30℃搅拌1小时。过滤固体，用dm水(4ml)洗涤，然后在50-55℃干燥18小时。得到1.68g贝利司他的晶型i，通过hplc证实纯度为99.97％。

xrpd峰：4.497,8.992,11.162,13.619,14.151,14.679,15.536,16.650,16.979,18.088,19.079,20.816,21.158,21.799,22.164,22.638,24.518,24.862,26.416,26.499,28.055,29.622和30.688±0.2度2-θ。

通过tga，重量减轻：0.22％w/w

实施例5：贝利司他的晶型i的制备

将贝利司他的丙酮溶剂合物(65g)和甲醇(520ml)的混合物在20-30℃搅拌20-30分钟，得到澄清溶液。将得到的反应混合物加到水(1560ml)中，在20-30℃搅拌2小时。过滤得到的混合物，用水(130ml)洗涤，真空干燥。在20-30℃将得到的产物在甲醇(390ml)中搅拌20-30分钟，过滤。将滤液加到水(1170ml)中，在20-30℃搅拌2-3小时，过滤，用水洗涤，真空干燥，得到51g贝利司他的晶型i，通过hplc证实纯度为99.97％。