IL-11Ra抗体的制作方法

本发明涉及与白细胞介素11受体α(il-11rα)结合的抗体。

背景技术：

许多致命的和无法治愈的疾病是由于过度和适应不良的纤维化引起的器官衰竭造成的(rockey等，2015journalofinfectiousdiseases214，jiw176)。纤维变性疾病包括罕见的遗传驱动疾病，例如硬皮病、特发性肺纤维化和肥厚性心肌病、扩张型心肌病(dcm)，以及常见疾病，例如心房颤动、心室颤动、非酒精性脂肪肝病和糖尿病肾病。由于对世界范围的发病率和死亡率的显著影响，需要开发抑制纤维化反应的疗法(nanthakumar等，2015natrevdrugdiscov14，693-720)。

纤维化的主要标志是驻留成纤维细胞的病理性活化，这驱使它们从静止状态转变为增殖的、分泌的和收缩的肌成纤维细胞(hinz等，2010amjpathology170，1807-1816)。诸如机械应力和促纤维化细胞因子等刺激可以激活成纤维细胞。tgfβ1途径被认为对纤维化反应至关重要(leask和abraham，2004thefasebjournal18，816-827)，并且其抑制作用是一种正在研究的治疗策略(gourdie等，2016naturereviewsdrugdiscovery15，620-638)。然而，直接抑制多功能tgfβ1与严重的副作用(如炎症和癌症易感性)相关。

发明概述

在一个方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合il-11rα的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制il-11反式信号传导。

在另一方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合il-11rα的抗体或抗原结合片段，其包含氨基酸序列i)至vi)：

i)lc-cdr1：qx1x2x3x4x5(seqidno：69)；

qslx6x7x8snx9x10x11y(seqidno：70)；

envgty(seqidno：22)；或

esveysgttl(seqidno：28)；

ii)lc-cdr2：x12as(seqidno：71)；

x13x14s(seqidno：72)；或

ata(seqidno：26)；

iii)lc-cdr3：x15qx16x17x18x19px20t(seqidno：73)；

iv)hc-cdr1：gytftx21yw(seqidno：74)；

gftfx22x23x24x25(seqidno：75)；

gyx26x27x28x29dyy(seqidno：76)；或

gfsltsfs(seqidno：66)；

v)hc-cdr2：ix30x31x32x33gx34t(seqidno：77)；

ifpgx35x36x37t(seqidno：78)；

isydssn(seqidno：55)；

igpsdskt(seqidno：61)；或

iwtgggt(seqidno：67)

vi)hc-cdr3：argx38x39x40x41x42x43x44x45x46fx47y(seqidno：79)；

asvgyyyvsdwyfdv(seqidno：56)；

arhway(seqidno：50)；

ahgllfah(seqidno：53)；

rsdgtyegyfdy(seqidno：44)；

arnsnypsgfay(seqidno：68)；或

arrsttirfgamdn(seqidno：65)；

或其变体，其中序列i)至vi)中的一个或多个中的一个或两个或三个氨基酸被另一种氨基酸取代；

其中，x1＝n、s、e或d，x2＝i或v，x3＝g或s，x4＝s、n或a，x5＝n、y或s，x6＝无或l，x7＝v或y，x8＝h或g，x9＝g或q，x10＝n或k，x11＝t或n，x12＝g、w、y或s，x13＝s或k，x14＝t或v，x15＝q、s、g或l，x16＝y、s、g或r，x17＝y、a、t、n或r，x18＝s、h或k，x19＝v、y、s或w，x20＝l、y、r或p，x21＝s、n或d，x22＝s或t，x23＝t或n，x24＝s、y或n，x25＝y、a或w，x26＝s或n，x27＝i或f，x28＝t或n，x29＝无或s，x30＝h、k或y，x31＝p、s或a，x32＝n或g，x33＝s、g或t，x34＝s、i或y，x35＝r或g，x36＝i或d，x37＝i或y，x38＝无、d或g，x39＝无或y，x40＝v或d，x41＝g或l，x42＝无、e或s，x43＝无或y，x44＝无或g，x45＝无或p，x46＝无或w，x47＝d、t或a。

在一些实施方式中，hc-cdr1是gftftnnw(seqidno：42)、gynfndyy(seqidno：45)、gftfstsy(seqidno：48)、gftfstya(seqidno：51)、gysitsdyy(seqidno：54)、gytftsyw(seqidno：57)、gytftnyw(seqidno：60)、gytftdyw(seqidno：63)或gfsltsfs(seqidno：66)之一。

在一些实施方式中，hc-cdr2是ihpnsgit(seqidno：43)、ifpgriit(seqidno：46)、iyagtgst(seqidno：49)、iksnggst(seqidno：52)、isydssn(seqidno：55)、ihpnsgyt(seqidno：58)、igpsdskt(seqidno：61)、ifpggdyt(seqidno：64)或iwtgggt(seqidno：67)之一。

在一些实施方式中，hc-cdr3是rsdgtyegyfdy(seqidno：44)、argvgegfdy(seqidno：47)、arhway(seqidno：50)、ahgllfah(seqidno：53)、asvgyyyvsdwyfdv(seqidno：56)、arggydgsygpwfay(seqidno：59)、argdyvlfty(seqidno：62)、arrsttirfgamdn(seqidno：65)或arnsnypsgfay(seqidno：68)之一。

在一些实施方式中，lc-cdr1是qslvhsngnty(seqidno：19)、envgty(seqidno：22)、qdigss(seqidno：25)、esveysgttl(seqidno：28)、qsllygsnqkny(seqidno：30)、qsisnn(seqidno：33)、qeisay(seqidno：36)或qnvgsn(seqidno：39)之一。

在一些实施方式中，lc-cdr2是kvs(seqidno：20)、gas(seqidno：23)、ata(seqidno：26)、was(seqidno：31)、yas(seqidno：34)、sts(seqidno：37)或sas(seqidno：40)之一。

在一些实施方式中，lc-cdr3是sqsthvplt(seqidno：21)、gqgysypyt(seqidno：24)、qqyassppt(seqidno：27)、qqsrkvpyt(seqidno：29)、qqyysyprt(seqidno：32)、qqryswplt(seqidno：35)、lqyassplt(seqidno：38)或qqynsyplt(seqidno：41)之一。

在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段具有至少一个包含以下cdr的重链可变区：

hc-cdr1：gftftnnw(seqidno：42)

hc-cdr2：ihpnsgit(seqidno：43)

hc-cdr3：rsdgtyegyfdy(seqidno：44)；

或

hc-cdr1：gynfndyy(seqidno：45)

hc-cdr2：ifpgriit(seqidno：46)

hc-cdr3：argvgegfdy(seqidno：47)；

或

hc-cdr1：gftfstsy(seqidno：48)

hc-cdr2：iyagtgst(seqidno：49)

hc-cdr3：arhway(seqidno：50)；

或

hc-cdr1：gftfstya(seqidno：51)

hc-cdr2：iksnggst(seqidno：52)

hc-cdr3：ahgllfah(seqidno：53)；

或

hc-cdr1：gysitsdyy(seqidno：54)

hc-cdr2：isydssn(seqidno：55)

hc-cdr3：asvgyyyvsdwyfdv(seqidno：56)；

或

hc-cdr1：gytftsyw(seqidno：57)

hc-cdr2：ihpnsgyt(seqidno：58)

hc-cdr3：arggydgsygpwfay(seqidno：59)；

或

hc-cdr1：gytftnyw(seqidno：60)

hc-cdr2：igpsdskt(seqidno：61)

hc-cdr3：argdyvlfty(seqidno：62)；

或

hc-cdr1：gytftdyw(seqidno：63)

hc-cdr2：ifpggdyt(seqidno：64)

hc-cdr3：arrsttirfgamdn(seqidno：65)；

或

hc-cdr1：gfsltsfs(seqidno：66)

hc-cdr2：iwtgggt(seqidno：67)

hc-cdr3：arnsnypsgfay(seqidno：68)。

在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段具有至少一个包含以下cdr的轻链可变区：

lc-cdr1：qslvhsngnty(seqidno：19)

lc-cdr2：kvs(seqidno：20)

lc-cdr3：sqsthvplt(seqidno：21)；

或

lc-cdr1：envgty(seqidno：22)

lc-cdr2：gas(seqidno：23)

lc-cdr3：gqgysypyt(seqidno：24)；

或

lc-cdr1：qdigss(seqidno：25)

lc-cdr2：ata(seqidno：26)

lc-cdr3：qqyassppt(seqidno：27)；

或

lc-cdr1：esveysgttl(seqidno：28)

lc-cdr2：gas(seqidno：23)

lc-cdr3：qqsrkvpyt(seqidno：29)；

或

lc-cdr1：qsllygsnqkny(seqidno：30)

lc-cdr2：was(seqidno：31)

lc-cdr3：qqyysyprt(seqidno：32)；

或

lc-cdr1：qslvhsngnty(seqidno：19)

lc-cdr2：kvs(seqidno：20)

lc-cdr3：sqsthvplt(seqidno：21)；

或

lc-cdr1：qsisnn(seqidno：33)

lc-cdr2：yas(seqidno：34)

lc-cdr3：qqryswplt(seqidno：35)；

或

lc-cdr1：qeisay(seqidno：36)

lc-cdr2：sts(seqidno：37)

lc-cdr3：lqyassplt(seqidno：38)；

或

lc-cdr1：qnvgsn(seqidno：39)

lc-cdr2：sas(seqidno：40)

lc-cdr3：qqynsyplt(seqidno：41)。

在另一方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合il-11rα的抗体或抗原结合片段，其包含轻链和重链可变区序列，其中：

所述轻链包含lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3，与以下lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3具有至少85％的总体序列同一性，lc-cdr1：qx1x2x3x4x5(seqidno：69)、qslx6x7x8snx9x10x11y(seqidno：70)、envgty(seqidno：22)或esveysgttl(seqidno：28)之一；lc-cdr2：x12as(seqidno：71)、x13x14s(seqidno：72)或ata(seqidno：26)之一；lc-cdr3：x15qx16x17x18x19px20t(seqidno：73)；和

所述重链包含hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3，与以下hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3具有至少85％的总体序列同一性，hc-cdr1：gytftx21yw(seqidno：74)、gftfx22x23x24x25(seqidno：75)、gyx26x27x28x29dyy(seqidno：76)或gfsltsfs(seqidno：66)之一；hc-cdr2：ix30x31x32x33gx34t(seqidno：77)、ifpgx35x36x37t(seqidno：78)、isydssn(seqidno：55)、igpsdskt(seqidno：61)或iwtgggt(seqidno：67)之一；hc-cdr3：argx38x39x40x41x42x43x44x45x46fx47y(seqidno：79)、asvgyyyvsdwyfdv(seqidno：56)、arhway(seqidno：50)、ahgllfah(seqidno：53)、rsdgtyegyfdy(seqidno：44)、arnsnypsgfay(seqidno：68)或arrsttirfgamdn(seqidno：65)之一；

其中，x1＝n、s、e或d，x2＝i或v，x3＝g或s，x4＝s、n或a，x5＝n、y或s，x6＝无或l，x7＝v或y，x8＝h或g，x9＝g或q，x10＝n或k，x11＝t或n，x12＝g、w、y或s，x13＝s或k，x14＝t或v，x15＝q、s、g或l，x16＝y、s、g或r，x17＝y、a、t、n或r，x18＝s、h或k，x19＝v、y、s或w，x20＝l、y、r或p，x21＝s、n或d，x22＝s或t，x23＝t或n，x24＝s、y或n，x25＝y、a或w，x26＝s或n，x27＝i或f，x28＝t或n，x29＝无或s，x30＝h、k或y，x31＝p、s或a，x32＝n或g，x33＝s、g或t，x34＝s、i或y，x35＝r或g，x36＝i或d，x37＝i或y，x38＝无、d或g，x39＝无或y，x40＝v或d，x41＝g或l，x42＝无、e或s，x43＝无或y，x44＝无或g，x45＝无或p，x46＝无或w，x47＝d、t或a。

在另一方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合il-11rα的抗体或抗原结合片段，其包含轻链和重链可变区序列，其中：

所述轻链序列与seqidno：1至9之一的轻链序列具有至少85％的序列同一性；和

所述重链序列与seqidno：10至18之一的重链序列具有至少85％的序列同一性。

在根据本发明的各个方面的一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段能够抑制il-11反式信号传导。

在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段与药物部分或可检测部分缀合。

在另一方面，本发明提供了一种任选体外的和/或任选分离的复合物，其包含本发明所述的与il-11rα结合的抗体或抗原结合片段。

在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包含本发明所述的抗体或抗原结合片段，和至少一种药学上可接受的载体。

在另一方面，本发明提供了一种分离的编码本发明所述的抗体或抗原结合片段的核酸。

在另一方面，本发明提供了一种包含本发明所述的核酸的载体。

在另一方面，本发明提供了一种包含本发明所述的载体的宿主细胞。

在另一方面，本发明提供了一种制备本发明所述抗体或抗原结合片段的方法，包括在适于表达抗体或抗原结合片段的条件下培养本发明所述的宿主细胞，并回收所述抗体或抗原结合片段。

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物，其用于治疗或医学治疗方法。

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物，其用于治疗或预防纤维化，或以纤维化为特征的疾病/病症。

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物，其用于治疗癌症。

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物在制备用于治疗或预防纤维化或以纤维化为特征的疾病/病症的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供了一种治疗纤维化的方法，包括将本发明的抗体、抗原结合片段或组合物施用于患有纤维化或以纤维化为特征的疾病/病症的对象。

在另一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，包括将本发明的抗体、抗原结合片段或组合物施用于患有癌症的对象。

在另一方面，本发明提供了一种抗体或抗原结合片段，其用于治疗病理学特性中涉及il-11/il-11r信号传导的疾病的方法，其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制il-11反式信号传导。

在另一方面，本发明提供了一种抗体或抗原结合片段，其用于制备用于治疗病理学特性中涉及il-11/il-11r信号传导的疾病的药物，其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制il-11反式信号传导。

另一方面，本发明提供了一种治疗病理学特性中涉及il-11/il-11r信号传导的疾病的方法，包括向患有所述疾病的受对象施用抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制il-11反式信号传导。

在另一方面，本发明提供了一种方法，包括使含有或疑似含有il-11rα的样品与本发明所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测所述抗体或抗原结合片段与il-11rα的复合物的形成。

在另一方面，本发明提供了一种诊断对象的疾病或病症的方法，所述方法包括在体外使来自受试者的样品与本发明所述的抗体或抗原结合片段接触并检测所述抗体或抗原结合片段与il-11rα的复合物的形成。

在另一方面，本发明提供了一种为il-11rα靶向剂治疗选择或分类受试者的方法，所述方法包括在体外使来自受试者的样品和本发明所述的抗体或抗原结合片段接触并检测所述抗体或抗原结合片段与il-11rα的复合物的形成。

在另一方面，本发明提供了本发明所述的抗体或抗原结合片段用于体外或体内检测il-11rα的用途。

在另一方面，本发明提供了本发明所述的抗体或抗原结合片段作为体外或体内诊断或预后试剂的用途。

描述

本发明涉及对白细胞介素-11受体α(il-11rα)具有特异性的抗体。本公开描述了将il-11/il-11r信号传导鉴定为纤维化的关键介质，以及抗il-11rα抗体的产生和功能表征。本公开还描述了所述抗体的治疗和诊断用途。

il-11和il-11/il-11r介导的信号传导

本发明的抗体和片段与白细胞介素11受体α(il-11rα)结合。

白细胞介素11(il-11)，也称为脂肪生成抑制因子，是一种多效细胞因子，是il-6细胞因子家族的成员，所述il-6细胞因子家族包括il-6、il-11、il-27、il-31、制瘤素m(osm)、白血病抑制因子(lif)、心肌营养素-1(ct-1)、心肌营养素样细胞因子(clc)、睫状神经营养因子(cntf)和神经蛋白(np-1)。

il-11用经典信号肽转录，确保细胞有效分泌。未成熟形式的人il-11是199个氨基酸的多肽，而成熟形式的il-11编码178个氨基酸残基的蛋白(garbers和scheller，biol.chem.2013；394(9)：1145-1161)。人il-11氨基酸序列可在uniprot获得，登录号p20809(p20809.1gi：124294)。重组人il-11(奥普瑞白介素(oprelvekin))也是可商业获得的。来自其他物种的il-11，包括小鼠、大鼠、猪、牛、几种硬骨鱼和灵长类动物，也已被克隆和测序。

在本说明书中，“il-11”是指来自任何物种的il-11，包括来自任何物种的il-11的同种型、片段、变体或同源物。类似地，在本说明书中，“il-11rα”是指来自任何物种的il-11rα，并且包括来自任何物种的il-11rα的同种型、片段、变体或同源物。

il-11通过遍在表达的β-受体糖蛋白130(gp130；也称为糖蛋白130、il-6st、il-6-β或cd130)的同型二聚体发出信号。gp130是跨膜蛋白，其与il-6受体家族形成i型细胞因子受体的一个亚基。特异性是通过单独的il-11α受体(il-11rα)获得的，其不直接参与信号转导，尽管α-受体的最初与细胞因子结合事件导致了最终与β-受体的复合物的形成。il-11激活下游信号传导途径，其主要是促分裂原活化蛋白激酶(mapk)-级联和janus激酶/信号转导因子和转录激活因子(jak/stat)途径(garbers和scheller，同上)。

人il-11rα是422个氨基酸的多肽(genbank登录号np_001136256.1gi：218505839；uniprotq14626)，与小鼠il-11rα具有～85％的核苷酸和氨基酸序列同一性(du和williams，blood，第89卷，第11号，1997年6月1日)。已经报道了il-11rα的两种同种型，其在细胞质结构域中不同(du和williams，同上)。在如本文所述的一些实施方式中，il-11rα可以是il-11rα同种型1或il-11rα同种型2。

il-11受体α链(il-11rα)与il-6受体α链(il-6rα)具有许多结构和功能相似性。细胞外结构域显示24％的氨基酸同一性，包括特征性保守的trp-ser-x-trp-ser(wsxws)基序。短的细胞质结构域(34个氨基酸)缺乏激活jak/stat信号传导途径所需的box1和2区域。

il-11rα以低亲和力(kd～10nmol/l)结合其配体，并且单独不足以转导生物信号。能够进行信号转导的高亲和力受体(kd～400至800pmol/l)的产生需要il-11rα和gp130的共表达(curtis等，blood1997年12月1日；90(11)：4403-12；hilton等，emboj13：4765，1994；nandurkar等，oncogene12：585,1996)。如上所述，il-11与细胞表面il-11rα的结合诱导异二聚化、酪氨酸磷酸化、gp130和mapk的活化和/或jak/stat信号传导。

已经绘制了鼠il-11上的受体结合位点，并鉴定了三个位点-位点i、ii和iii。通过位点ii区域的取代和位点iii区域的取代减少与gp130的结合。位点iii突变体显示无可检测的激动剂活性并具有il-11rα拮抗剂活性(“细胞因子抑制剂”第8章；gennarociliberto和roccosavino编辑，marceldekker公司，2001)。

原则上，可溶性il-11rα还可以与il-11形成具有生物活性的可溶性复合物(pflanz等，1999febslett，450,117-122)，在某些情况下，提高了类似于il-6、il-11的在结合细胞表面gp130之前结合可溶性il-11rα可能性。(garbers和scheller，同上)。curtis等(blood1997年12月1日；90(11)：4403-12)描述了可溶性鼠il-11受体α链(sil-11rα)的表达，并检测了表达gp130的细胞中的信号传导。在存在gp130但不存在跨膜il-11r的情况下，sil-11r介导il-11依赖的m1白血病细胞分化和ba/f3细胞增殖以及早期细胞内事件，包括gp130、stat3和shp2的磷酸化，类似于通过跨膜il-11r的信号传导。

如本文所用，‘il-11/il-11r信号传导’是指由il-11和/或il-11rα、il-11和/或il-11rα的片段和包含il-11、il-11rα和/或其片段的多肽复合物介导的信号传导。il-11/il-11r信号传导涉及il-11和/或il-11rα与gp130的结合，并因此通过gp130激活信号传导。

最近已经证实了通过与可溶性il-11rα结合的il-11通过结合于细胞膜的gp130可激活信号传导(lokau等，2016cellreports14，1761-1773)。这种所谓的il-11反式信号传导可能是il-11/il-11r信号传导的一个非常重要的组成部分，甚至可能是il-11/il-11r信号传导的最常见形式，因为il-11rα的表达限于相对较少的细胞亚型，而gp130在多种细胞类型上表达。

如本文所用，‘il-11反式信号传导’用于指通过结合于il-11rα的il-11与gp130的结合而触发的信号传导。il-11可以与il-11rα结合而形成非共价复合物。gp130是膜结合的并且由细胞表达，其中在il-11：il-11rα复合物与gp130结合后发生信号传导。在一些实施方式中，il-11rα可以是可溶性il-11rα。在一些实施方式中，可溶性il-11rα是il-11rα的可溶性(分泌的)同种型(例如缺乏跨膜结构域)。在一些实施方式中，可溶性il-11rα是结合于细胞膜的il-11rα的胞外域的蛋白水解切割的释放产物。在一些实施方式中，il-11rα可以是细胞膜结合的，并且通过gp130的信号传导可以通过结合与细胞膜结合的il-11rα结合的il-11来触发。

在本说明书中，il-11受体(il-11r)是指能够结合il-11并在表达gp130的细胞中诱导信号转导的多肽。il-11受体可以来自任何物种，并且包括来自任何物种的il-11受体的同种型、片段、变体或同源物。在优选的实施方式中，所述物种是人(智人(homosapiens))。在一些实施方式中，il-11受体可以是il-11rα。il-11rα的同种型、片段、变体或同源物可任选地表征为与给定物种(例如人)的il-11rα的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。可任选地通过结合il-11(优选来自相同物种)并刺激表达il-11rα和gp130的细胞中的信号转导的能力来表征il-11rα的同种型、片段、变体或同源物(例如描述于curtis等，blood，1997,90(11)或karpovich等，mol.hum.reprod.20039(2)：75-80)。il-11受体的片段可具有任何长度(氨基酸数)，尽管可任选地具有成熟il-11rα长度的至少25％，并且具有的最大长度是成熟il-11rα长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。il-11受体片段的片段的最小长度可以是10个氨基酸，并且最大长度可以是15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150，160、170、180、190、200、250、300、400或415个氨基酸。

在一些实施方式中，il-11rα可以包含il-11rα的胞外域或由其组成，所述il-11rα的胞外域对应于uniprotq14626的氨基酸序列的氨基酸24至370。在一些实施方式中，il-11rα可任选地表征为与给定物种的il-11rα的胞外域的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。

在一些实施方式中，il-11是哺乳动物il-11(例如食蟹猴、人和/或啮齿动物(例如大鼠和/或鼠)il-11)。il-11的同种型、片段、变体或同源物可任选地表征为与给定物种(例如人)的非成熟或成熟il-11的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。可任选通过结合il-11(优选来自相同物种)并刺激表达il-11rα和gp130的细胞中的信号转导的能力来表征il-11的同种型、片段、变体或同源物(例如描述于curtis等，blood，1997,90(11)；或karpovich等，mol.hum.reprod.20039(2)：75-80)。il-11的片段可具有任何长度(氨基酸数)，尽管可任选地具有成熟il-11长度的至少25％，并且具有的最大长度可以是成熟il-11长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。il-11的片段的最小长度可以是10个氨基酸，并且最大长度可以是15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150，160、170、180、190或195个氨基酸

已经提出il-11主要作为血小板生成因子起作用，其支持使用重组il-11(纽美加(neumega)(奥普瑞芬(oprelvekin)))作为增加血小板数量的治疗剂。已显示tgfβ1在成纤维细胞中诱导il-11表达(elias等，1994j.immunol.152，2421-2429)。

il-11/il-11r信号传导在纤维化中的作用尚不清楚。大多数研究表明心脏(obana等，2010circulation121，684-691；obana等，2012heartandcirculatoryphysiology303，h569-77)和肾(ham等，2013anesthesiology119，1389-1401；stangou等，2011j.nephrol.24，106-111)中的il-11/il-11r信号传导具有抗纤维化功能。kurahara等，j.smoothmuscleres.2016；52：78-92描述了作为抗纤维化细胞因子的il-11，并且表明il-11/il-11r信号传导抑制αsma表达。

il-11也被认为是几种组织和慢性炎性疾病中的抗炎因子(trepicchio和dorner，1998expertopininvestigdrugs7，1501-1504；zhu等，2015plosone10，e0126296)。这些研究表明观察到响应于tgfβ1的il-11分泌是一种保护机制。

另一方面，有人提出il-11/il-11r信号传导可能参与肺部疾病的病理学过程。在结核病模型中通过抗体或突变的重组il-11抑制il-11/il-11r信号传导引起了体内的正反馈环并减少了肺的组织病理学症状(kapina等，2011plosone6，e21878；shepelkova等，2016journalofinfectiousdiseases214，jiw176)，小鼠气管的纤维化与il-11表达有关(tang等，1996thejournalofclinicalinvestigation98，2845-2853)。当在il-11ra-/-小鼠中研究il-13在肺组织中的促纤维化功能时，il-11/il-11r信号传导涉及该机制(chen等，2005j.immunol.174：2305-2313)。

il-11也被发现在严重哮喘患者的气管中增加(minshall等，2000respiratoryresearch14，1-14)，在ipf患者的肺部过度表达(lindahl等，2013respiratoryresearch14，1-14)并且在特应性皮炎患者的皮肤病变中增加(toda等，2003jallergyclinimmun111，875-881)。不确定这些关联是否是由于il-11基因/蛋白表达增加作为对疾病过程的反应，或il-11是否是疾病过程的效应物。

抗体和抗原结合片段

本发明所述的抗体和抗原结合片段与il-11rα(白细胞介素11受体α)结合。在一些实施方式中，所述抗体/片段结合人il-11rα。在一些实施方式中，所述抗体/片段结合非人灵长类动物il-11rα。在一些实施方式中，所述抗体/片段结合鼠il-11rα。

“抗体”包括其片段和衍生物，或合成抗体或合成抗体片段。如本文所用，抗体是能够与相关靶分子(即抗体对其具有特异性的抗原)特异性结合的多肽。本发明所述的抗体可以以分离的形式提供。

根据与单克隆抗体技术相关的现代技术，可以针对大多数抗原制备抗体。抗原结合部分可以是抗体的一部分(例如fab片段)或合成的抗体片段(例如单链fv片段[scfv])。可以通过已知技术制备用来选择抗原的合适的单克隆抗体，例如在“单克隆抗体：技术手册”，hzola(crc出版社，1988)和“单克隆杂交瘤抗体：技术与应用”，jgrhurrell(crc出版社，1982年)中公开的那些。neuberger等人(1988，第8届国际生物技术研讨会第2部分，792-799)讨论了嵌合抗体。

单克隆抗体(mab)可用于本发明的方法，并且是特异性靶向抗原上的单个表位的同源抗体群。

也可以使用/提供抗体的抗原结合片段，例如fab和fab2片段，因为它们可以是基因工程抗体和抗体片段。抗体的可变重(vh)结构域和可变轻(vl)结构域参与抗原识别，这是在早期蛋白酶消化实验中首先被认识到的事实。通过啮齿动物抗体的“人源化”对此进一步的进行了确认。啮齿动物来源的可变结构域可以与人源恒定结构域融合，使得所得抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(morrison等(1984)proc.natl.acad.sd.美国81,6851-6855)。

在一些实施方式中，所述抗体/片段是完全人抗体/片段。完全人抗体/片段由人核酸序列编码。完全人抗体/片段缺乏非人氨基酸序列。

用于产生完全人抗体的两种最常用的技术是(i)噬菌体展示，其中人抗体基因在噬菌体展示文库中表达，和(ii)在工程化以具有人抗体基因的转基因小鼠中产生抗体(描述于park和smolen，advancesinproteinchemistry(2001)56：369-421)。简而言之，在人抗体基因-噬菌体展示技术中，编码vh和vl链的基因通过pcr扩增和从“幼稚”人淋巴细胞克隆产生，并组装成文库，从中可以表达为二硫键连接的fab片段或作为单链fv(scfv)片段。编码fab或scfv的基因与丝状噬菌体的表面外壳蛋白融合，然后可以通过用抗原筛选文库来鉴定能够结合靶标的fab或scfv。可以使用分子进化或亲和力成熟步骤来增强fab/scfv片段的亲和力。在转基因小鼠技术中，用抗原免疫其中内源性鼠ig基因座已被其人同源物同源重组取代的小鼠，并通过常规杂交瘤技术制备单克隆抗体，以产生完全人单克隆抗体。

可以使用人初始抗体基因文库通过噬菌体展示制备抗体/片段。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段是鼠抗体/片段。在一些实施方式中，所述抗体/片段是小鼠/人嵌合抗体/片段(例如，包含鼠可变区和人恒定区的抗体/抗原结合片段)。在一些实施方式中，所述抗体/片段是人源化抗体/片段(例如，包含鼠cdr和人框架和恒定区的抗体/抗原结合片段)。

小鼠/人嵌合抗体/抗原结合片段可以通过嵌合步骤从小鼠单克隆抗体制备，例如，如“人单克隆抗体：方法和步骤”，michaelsteinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南数据库(springerprotocols)，胡马纳出版社(2014)，其第8章，特别是第8章的第3节所述。

人源化抗体/抗原结合片段可以通过嵌合步骤从小鼠抗体制备，例如，如“人单克隆抗体：方法和步骤”，michaelsteinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南数据库(springerprotocols)，胡马纳出版社(2014)，其第7章，特别是标题为‘抗体人源化’的第7章第3.1节所述。

抗原特异性是由可变结构域赋予的并且与恒定结构域无关，这一点从涉及抗体片段的细菌表达的实验中得知，所述抗体片段均含有一个或多个可变结构域。这些分子包括fab样分子(better等(1988)science240,1041)；fv分子(skerra等(1988)science240,1038)；单链fv(scfv)分子，其中vh和vl配偶结构域通过柔性寡肽连接(bird等(1988)science242,423；huston等(1988)proc.natl.acad.sd.美国85,5879)和包含分离的v结构域的单结构域抗体(dab)(ward等(1989)nature341,544)。在winter&milstein(1991)nature349,293-299中可以找到保留其特异性结合位点的抗体片段合成中涉及的技术的综述。

“scfv分子”是指其中vh和vl配偶结构域共价连接的分子，例如，通过灵活的寡肽链接。

fab、fv、scfv和dab抗体片段都可以在大肠杆菌中表达和分泌，因此可以容易地产生大量的所述片段。

全抗体和f(ab')2片段是“二价的”。“二价”是指所述抗体和f(ab')2片段具有两个抗原结合位点。相反，fab、fv、scfv和dab片段是单价的，仅具有一个抗原结合位点。

本发明提供了一种能够结合il-11rα的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段可以是分离的。

本发明所述的抗原结合片段可以是能够结合抗原的多肽的任何片段。

在一些实施方式中，抗原结合片段包含至少三个轻链cdr(即lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3；在本文中也称为lc-cdr1-3)和三个重链cdr(即hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3；在本文中也称为hc-cdr1-3)，其一起限定抗体或抗原结合片段的抗原结合区。在一些实施方式中，抗原结合片段可包含抗体或抗原结合片段的轻链可变结构域和重链可变结构域。在一些实施方式中，抗原结合片段可包含抗体或抗原结合片段的轻链多肽和重链多肽。

本发明还提供了一种能够结合il-11rα的嵌合抗原受体(car)，其包含一种或多种本发明所述的抗原结合片段或多肽。嵌合抗原受体(car)是提供抗原结合和t细胞活化功能的重组受体。例如，在dotti等，immunolrev(2014)257(1)中综述了car结构和工程改造，该文献通过引用整体并入本文。本文提供了本发明所述的抗原结合片段作为嵌合抗原受体(car)的抗原结合结构域。在一些实施方式中，所述car包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽的任何实施方式的vl结构域和vh结构域。car可与共刺激配体、嵌合共刺激受体或细胞因子组合以进一步增强t细胞效力、特异性和安全性(sadelain等，嵌合抗原受体(car)设计的基本原理.cancerdiscov.2013年4月；3(4)：388–398.doi:10.1158/2159-8290.cd-12-0548，特别地通过引用并入本文)。本发明还提供了一种包含本发明所述的car的细胞。本发明所述的car可用于产生t细胞。将car转化为t细胞可以在培养期间、体外进行，用于转导和扩增，例如在用于过继性t细胞疗法的t细胞扩增期间发生。

本发明还提供了包含本发明抗体或抗原结合片段的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段。双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可包含(i)本发明所述的抗体或抗原结合片段，和(ii)il-11rα以外的靶标的特异性抗体或抗原结合片段。

双特异性抗体/片段可以以任何合适的形式提供，例如kontermannmabs2012,4(2)：182-197所述的，其全部内容通过引用并入本文。例如，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可以是双特异性抗体缀合物(例如igg2、f(ab’)2或covx-body)、双特异性igg或igg样分子(例如igg、scfv4-ig、igg-scfv、scfv-igg、dvd-ig、igg-svd、svd-igg、2合1-igg、mab²或tandemab常规lc)、不对称双特异性igg或igg样分子(例如kihigg、kih常规lc、crossmab、kihigg-scfab、mab-fv、电荷对或seed体)、小双特异性抗体分子(例如双抗体(db)、dsdb、dart、scdb、tandabs、串联scfv(tafv)、串联dab/vhh、三体、三头、fab-scfv或f(ab’)2-scfv2)、双特异性fc和ch3融合蛋白(例如tafv-fc、di-双抗体，scdb-ch3、scfv-fc-scfv、hcab-vhh、scfv-kih-fc或scfv-kih-ch3)，或双特异性融合蛋白(例如scfv2-白蛋白、scdb-白蛋白、tafv-毒素、dnl-fab3、dnl-fab4-igg、dnl-fab4-igg-细胞因子2)。特别参见kontermannmabs2012,4(2)：182-19中的图2。

产生双特异性抗体的方法包括抗体或抗体片段的化学交联，例如，可还原的二硫化物或不可还原的硫醚键，例如描述于segal和bast，2001.双特异性抗体的产生，《最新免疫学方案》(currentprotocolsinimmunology).14：iv：2.13：2.13.1-2.13.16的，其全部内容通过引用并入本文。例如，3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯(spdp)可用于化学交联，例如，fab片段通过铰链区sh-基团，产生二硫键连接的双特异性f(ab)2异二聚体。其他方法包括融合产生抗体的杂交瘤，例如：用聚乙二醇制备能够分泌双特异性抗体的四倍体细胞，例如描述于d.m.和bast，b.j.2001.双特异性抗体的产生，《最新免疫学方案》14：iv：2.13：2.13.1-2.13.16的。双特异性抗体和双特异性抗原结合片段也可以通过重组产生，通过表达例如编码抗原结合分子多肽的核酸构建体，例如描述于抗体工程：方法和步骤，第二版(胡马纳出版社，2012年)，第40章：双特异性抗体的产生：二抗体和串联scfv(hornig和-schwarz)，或french，如何制备双特异性抗体，methodsmol.med.2000；40：333-339，两者的全部内容在此引入作为参考。

抗体可以通过亲和力成熟过程产生，其中产生修饰的抗体，其与未修饰的亲本抗体相比，抗体对抗原的亲和力改善。亲和力成熟的抗体可以通过本领域已知的方法产生，例如marks等，rio/technology10：779-783(1992)；barbas等，procnat.acad.sci.美国91：3809-3813(1994)；schier等，gene169：147-155(1995)；yelton等，j.immunol.155：1994-2004(1995)；jackson等，j.immunol.154(7)：3310-159(1995)；和hawkins等，j.mol.biol.226：889-896(1992)。

本发明提供了如本文所述的抗体，其进一步经历了链改组的过程，例如，轻链改组和/或重链改组。用于改善抗体亲和力的链改组被描述于marks，通过链改组成熟化抗体亲和力，《抗体工程改造方法和方案》(antibodyengineeringmethodsandprotocols)，胡马纳出版社(2004)第248卷，第327-343页，特别地，在其第3.1和3.2节中详细描述了轻链改组，其全部内容通过引用并入本文。在轻链改组中，抗体的重链可变区与轻链可变区配偶体的组合物组合以鉴定对靶蛋白具有高亲和力的新vl/vh组合。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的vh和/或vl结构域的cdr(即cdr1-3)，或其变体。在一些实施方式中，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的hc-cdr1-3，或其变体。在一些实施方式中，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的lc-cdr1-3，或其变体。

本发明的抗体克隆的hc-cdr1-3和lc-cdr1-3根据vbase2定义，其描述于retter等，nucl.acidsres.(2005)33(补充1)：d671-d674，其全部内容通过引用并入本文。

如本文所用，cdr的变体可以在cdr氨基酸序列中包含，例如1或2或3个取代。如本文所用，vl或vh结构域的变体可以在所述结构域的氨基酸序列中包含，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的hc-cdr1-3或其变体，以及如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的lc-cdr1-3或其变体。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的vh和/或vl结构域的cdr，或其变体。在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的vh和/或vl结构域，或其变体。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含克隆的vh和/或vl结构域的cdr，或其变体，所述克隆选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；例如选自bso-2c1、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；例如选自bso-5e5和bso-13b10；例如选自bso-2c1和bso-9a7。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含克隆的vh和/或vl结构域，或其变体，所述克隆选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；例如选自bso-2c1、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；例如选自bso-5e5和bso-13b10；例如选自bso-2c1和bso-9a7。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的vh结构域的hc-cdr1-3，或其变体。在一些方面，本发明的抗体/片段包含克隆的vh结构域，或其变体。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的il-11rα结合抗体克隆的vl结构域的lc-cdr1-3，或其变体。在一些方面，本发明的抗体/片段包含克隆的vl结构域，或其变体。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含il-11rα结合抗体克隆的vh结构域的hc-cdr1-3或vh结构域，所述il-11rα结合抗体克隆选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；或选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；或选自bso-2c1、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；或选自bso-5e5和bso-13b10；或选自bso-2c1和bso-9a7。在一些实施方式中，所述抗体/片段包含vl结构域，其在轻链改组后获得。

在一些方面，本发明的抗体/片段包含il-11rα结合抗体克隆的vl结构域的lc-cdr1-3或vl结构域，所述il-11rα结合抗体克隆选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；例如选自bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10；或选自bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；或选自bso-2c1、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10；或选自bso-5e5和bso-13b10；或选自bso-2c1和bso-9a7。在一些实施方式中，所述抗体/片段包含vh结构域，其在重链改组后获得。

采用vbase2定义(描述于retter等，nucl.acidsres.(2005)33(补充1)：d671-d674)，抗人il-11rα结合抗体克隆bso-1e3_1、bso-1e3_2、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10的vl结构域的氨基酸序列显示于图16中，lc-cdr1-3也是如此。采用vbase2定义，这些抗人il-11rα结合抗体克隆的vh结构域的氨基酸序列显示于图17中，hc-cdr1-3也是如此。

本发明所述的抗体可包含vl和/或vh链，其包含与如本文所述的一个或多个vl和/或vh氨基酸序列具有高百分比序列同一性的氨基酸序列。例如，本发明所述的抗体包括与il-11rα结合并具有vl链的抗体，所述vl链包含的氨基酸序列与seqidno：1至9之一所示的vl链氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％的序列同一性。本发明所述的抗体包括与il-11rα结合并具有vh链的抗体，所述vh链包含的氨基酸序列与seqidno：10至18之一所示的vh链氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％的序列同一性。

本发明所述的抗体可包含由核酸序列编码的vl和/或vh链，所述核酸序列与如本文所述的一种或多种vl和/或vh核酸序列或根据密码子简并性编码相同氨基酸序列的核酸序列具有高百分比序列同一性。例如，本发明所述的抗体包括与il-11rα结合并具有由核酸序列编码的vl链的抗体，所述核酸序列与seqidno：80至88之一所示的vl链核酸序列，或根据密码子简并性编码seqidno：80至88之一所示的相同氨基酸序列的核酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％的序列同一性。本发明所述的抗体包括与il-11rα结合并具有由核酸序列编码的vh链的抗体，所述核酸序列与seqidno：89至97之一所示的vh链核酸序列，或根据密码子简并性编码seqidno：89至97之一所示的相同氨基酸序列的核酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％的序列同一性。

如本文所公开的轻链和重链cdr在与许多不同的框架区的结合中也可以特别有用。因此，具有lc-cdr1-3或hc-cdr1-3的轻链和/或重链可具有替代的框架区。合适的框架区是本领域熟知的，并且描述于例如m.lefranc和g.le:franc(2001)“免疫球蛋白事实手册”，学术出版社，通过引用并入本文。

本发明所述的抗体可以被可检测地标记或至少能够被检测。例如，所述抗体可以用放射性原子或有色分子或荧光分子或可以以任何其他方式容易地检测的分子标记。合适的可检测分子包括荧光蛋白、荧光素酶、酶底物、放射性标记和结合部分。标记可以是通过与抗体/片段缀合的。抗原结合分子可以用可检测标记直接标记，或者可以间接标记。在一些实施方式中，标记可以选自：放射性核苷酸、正电子发射放射性核素(例如用于正电子发射断层扫描(pet))、mri造影剂或荧光标记。

本发明所述的抗体和抗原结合片段可以与药物部分，例如，细胞毒性小分子缀合。这种缀合物可用于靶向杀死表达抗原分子的细胞。

本发明还提供了分离的重链可变区多肽和分离的轻链可变区多肽。

在一些方面，本发明提供了分离的重链可变区多肽，其包含本文所述的任何一种抗il-11rα抗体克隆的hc-cdr1-3。在一些方面，本发明提供了分离的重链可变区多肽，其包含的氨基酸序列与本文所述的任一种抗il-11rα抗体克隆的重链可变区的氨基酸序列具有至少70％，更优选至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

在一些方面，本发明提供了分离的轻链可变区多肽，其包含本文所述的任何一种抗il-11rα抗体克隆的lc-cdr1-3。在一些方面，本发明提供了分离的轻链可变区多肽，其包含的氨基酸序列与本文所述的任一种抗il-11rα抗体克隆的轻链可变区的氨基酸序列具有至少70％，更优选至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

抗体/片段的功能特性

本发明的抗il-11rα抗体和片段可以通过参考某些功能特性来表征。特别地，本发明所述的抗il-11rα抗体或抗原结合片段可具有以下一种或多种特性：

a)与il-11rα(例如人il-11rα和/或小鼠il-11rα)特异性结合；

b)与il-11rα(例如人il-11rα)结合，其结合亲和力为ec50＝小于1000ng/ml，例如通过elisa测定的；

c)抑制il-11rα和il-11之间的相互作用；

d)抑制il-11rα与gp130之间的相互作用；

e)抑制il-11rα：gp130受体复合物与il-11之间的相互作用；

f)抑制il-11：il-11rα复合物与gp130之间的相互作用；

g)抑制il-11/il-11r信号传导；

h)抑制通过il-11与il-11rα：gp130受体复合物的结合介导的信号传导；

i)抑制通过il-11：il-11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导(即il-11反式信号传导)；

j)抑制成纤维细胞增殖；

k)抑制成纤维细胞中肌成纤维细胞的生成；

l)抑制由il-11/il-11r信号传导介导的病理过程；

m)抑制纤维化；

n)抑制成纤维细胞中的选自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2，例如用促纤维化因子刺激后；

o)抑制成纤维细胞产生细胞外基质；

p)抑制癌细胞的增殖和/或存活；

q)抑制肿瘤生长。

在本文中，“抑制”是指相对于对照条件的减少、降低或减弱。例如，抗体/片段对过程的抑制是指在不存在抗体/片段，和/或存在合适的对照抗体/片段的情况下该过程的程度/度的减少、降低或减弱。

抑制在本文中也可称为中和或拮抗作用。也就是说，能够抑制功能或过程的il-11rα结合抗体/片段(例如由il-11rα或含有il-11rα的复合物介导的相互作用、信号传导或其他活性)可以说是涉及相关功能或过程的‘中和’或‘拮抗剂’抗体/片段。例如，能够抑制il-11/il-11r信号传导的抗体/片段可以被称为能够中和il-11/il-11r信号传导的抗体/片段，或者可以被称为il-11/il-11r信号传导的拮抗剂。

本领域技术人员能够鉴定给定测定的适当对照条件。例如，对照抗体/片段可以是针对一靶蛋白的抗体/片段，已知该靶蛋白不具有参与测定中所研究的性质的作用。对照抗体/片段可以与分析的抗-il-11rα抗体/片段具有相同的同种型，并且可以是例如具有相同的恒定区。

特异性结合靶分子的抗体/片段优选地以更高的亲和力结合靶标，和/或以比结合其他非靶标分子更长的持续时间结合靶标。在一些实施方式中，本发明的抗体/片段结合il-11rα的亲和力可以高于结合il-6受体家族的一个或多个成员。在一些实施方式中，本发明的抗体/片段结合il-11rα的亲和力可以高于结合il-6rα、白血病抑制因子受体(lifr)、制瘤素m受体(osmr)和睫状神经营养因子受体α(cntfrα)中的一种或多种。

在一些实施方式中，抗体与非靶标的结合程度小于抗体与靶标结合程度的约10％，例如通过elisa、spr、生物层干涉测量法(bli)、微量热泳动(mst)测定，或通过放射免疫测定法(ria)测定。或者，结合特异性可以反映在结合亲和力方面，其中本发明的抗il-11rα抗体/片段与il-11rα结合的kd至少比与另一非靶标分子的kd高0.1个数量级(即0.1×10n，其中n是表示数量级的整数)。这可以任选地为至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中的一个。

抗体或抗原结合片段对其靶标的结合亲和力通常根据其解离常数(kd)来描述。结合亲和力可以通过本领域已知的方法测定，例如通过elisa、表面等离子体共振(spr；参见例如hearty等，methodsmolbiol(2012)907：411-442；或rich等，analbiochem.2008年2月1日；373(1)：112-20)、生物层干涉测量法(参见例如lad等，(2015)jbiomolscreen20(4)：498-507；或concepcion等，梳状化学高通量筛选.2009年9月；12(8)：791-800)、微量热泳动(mst)分析(参见例如jerabek-willemsen等，assaydrugdevtechnol.2011年8月；9(4)：342-353)，或用抗体和抗原分子的fab形式进行放射性标记的抗原结合试验(ria)。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段与il-11rα结合的kd为5μm或更低，优选为≤1μm、≤500nm、≤100nm、≤75nm、≤50nm、≤40nm、≤30nm、≤20nm、≤15nm、≤12.5nm、≤10nm、≤9nm、≤8nm、≤7nm、≤6nm、≤5nm、≤4nm、≤3nm、≤2nm、≤1nm或≤500pm之一。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段结合il-11rα，其结合亲和力(例如通过elisa测定)ec50＝1000ng/ml或更低，优选≤900ng/ml、≤800ng/ml、≤700ng/ml、≤600ng/ml、≤500ng/ml、≤400ng/ml、≤300ng/ml、≤200ng/ml、≤100ng/ml、≤90ng/ml、≤80ng/ml、≤70ng/ml、≤60ng/ml、≤50ng/ml、≤40ng/ml、≤30ng/ml、≤20ng/ml、≤15ng/ml、≤10ng/ml、≤7.5ng/ml、≤5ng/ml、≤2.5ng/ml，或≤1ng/ml。

可以通过elisa测定体外分析抗体/片段与il-11rα结合的亲和力。合适的测定是本领域熟知的，并且可以由本领域技术人员进行，例如，描述于“抗体工程，第1卷(第2版)，实验室指南数据库(springerprotocols)，斯普林格(2010)，第v部分，第657-665页。例如，可以根据本文在实验实施例中描述的方法分析抗体/片段与il-11rα结合的亲和力。

抗体/片段抑制两种蛋白之间相互作用的能力可以通过例如分析在抗体/片段的存在下，或抗体/片段与其中一种或两种相互作用配偶体温育之后的相互作用来确定。确定给定抗体/片段是否能够抑制两个相互作用配偶体之间相互作用的合适测定方法的实例是竞争性elisa测定法。

与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下的相互作用水平相比，在抗体/片段的存在下，或抗体/片段与其中一种或两种相互作用配偶体温育之后，能够抑制给定相互作用(例如il-11rα和il-11之间，或il-11rα和gp130之间，或il-11rα：gp130和il-11之间，或il-11：il-11rα和gp130之间)的抗体/片段可以通过观察到相互作用配偶体之间的相互作用水平的减弱/降低来确定。合适的分析可以在体外进行，例如，使用重组相互作用配偶体或使用表达相互作用配偶体的细胞。表达相互作用配偶体的细胞可以是内源的，或者可以是引入细胞的核酸引入的。出于这种测定的目的，一种或两种相互作用配偶体和/或抗体/片段可以被标记，或者与可检测实体结合使用，以检测和/或测定相互作用水平。

抗体/片段抑制两个结合配偶体之间相互作用的能力也可以通过分析这种相互作用的下游功能性结果来确定，例如受体信号传导。例如，il-11rα：gp130和il-11之间或il-11：il-11rα和gp130之间相互作用的下游功能性结果可包括成纤维细胞增殖、成纤维细胞产生肌成纤维细胞，或以下一种或多种的基因或蛋白的表达：胶原蛋白、纤维连接蛋白、重组人成骨细胞特异性因子2(periostin)、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2。

根据本公开的成纤维细胞可以衍生自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓。在特定的实施方式中，为了分析抗体/片段，成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。成纤维细胞可以通过以下一种或多种的基因或蛋白的表达来表征：col1a、acta2、脯氨酰-4-羟化酶、mas516和fsp1。

基因表达可以通过本领域技术人员已知的各种方法测定，例如通过定量实时pcr(qrt-pcr)或通过基于报道分子的方法测量mrna的水平。类似地，蛋白表达可以通过本领域熟知的各种方法测定，例如，通过基于抗体的方法，例如通过蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞术、elisa、elispot或基于报道分子的方法。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段可以抑制一种或多种纤维化标志物的蛋白表达，例如，以下一种或多种的蛋白表达：胶原蛋白、纤维连接蛋白、重组人成骨细胞特异性因子2(periostin)、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2。

例如，可以通过用tgfβ1刺激成纤维细胞，在抗体/片段存在下孵育细胞并在一段确定的时间后分析具有αsma阳性表型细胞的细胞比例来分析抗体/片段抑制il-11rα：gp130和il-11之间相互作用的能力。在这样的实例中，il-11rα：gp130和il-11之间的相互作用的抑制可以通过观察到与阳性对照条件相比具有较低比例的αsma阳性表型细胞来鉴定，所述阳性对照条件是指细胞在没有抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)存在的情况下，或在合适的对照抗体/片段存在下，用tgfβ1处理。

此类测定也适用于分析抗体/片段抑制il-11/il-11r信号传导的能力。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα和il-11之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下il-11rα和il-11之间的相互作用水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα和il-11之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下il-11rα和il-11之间的相互作用水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα和gp130之间的相互作用，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下il-11rα和gp130之间的相互作用水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα和gp130之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下il-11rα和gp130之间的相互作用水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα：gp130和il-11之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下il-11rα：gp130和il-11之间的相互作用水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11rα：gp130和il-11之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下il-11rα：gp130和il-11之间的相互作用水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11：il-11rα复合物和gp130之间的相互作用，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下il-11：il-11rα复合物和gp130之间的相互作用水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够抑制il-11：il-11rα复合物和gp130之间的相互作用，使其与不存在所述抗体/片段下il-11：il-11rα复合物和gp130之间的相互作用水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

还可以使用³h-胸苷掺入和/或ba/f3细胞增殖测定来分析il-11/il-11r信号传导的抑制，例如在curtis等，blood，1997,90(11)和karpovich等，mol.hum.reprod.20039(2)：75-80中描述的那些。ba/f3细胞共表达il-11rα和gp130。

如本文所用，il-11/il-11r信号传导和/或由il-11/il-11r信号传导介导的过程包括由il-11或il-11rα片段和包含il-11、il-11rα或其片段的多肽复合物介导的信号传导。il-11/il-11r信号传导可以是由人il-11或il-11rα和/或小鼠il-11或il-11rα介导的信号传导。il-11/il-11r信号传导可以在il-11或含有il-11的复合物与受体结合后发生，所述受体结合il-11或所述复合物。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体和片段能够抑制il-11、il-11rα或含有il-11或il-11rα的复合物的生物学活性。在一些实施方式中，抗体/片段与il-11rα的某区域结合，所述区域在其与il-11或gp130的结合中是重要的，从而破坏与il-11的结合和/或il-11/il-11r信号传导。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段是一种或多种信号传导途径的拮抗剂，所述信号传导途径通过包含il-11rα和/或gp130的受体(例如il-11rα：gp130)的信号转导而活化。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够抑制经由一种或多种包含il-11rα和/或gp130的免疫受体复合物(例如il-11rα：gp130)的信号传导。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制il-11/il-11r信号传导，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下信号传导水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低il-11/il-11r信号传导，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下信号传导水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，il-11/il-11r信号传导可以是由il-11与il-11rα：gp130受体结合介导的信号传导。例如，可以通过用il-11处理表达il-11rα和gp130的细胞，或通过在表达il-11rα和gp130的细胞中刺激il-11产生来分析这种信号传导。

用于抑制il-11/il-11r信号传导的抗体/片段的ic50可以例如通过在人il-11和il-11rα结合剂存在下培养表达il-11rα和gp130的ba/f3细胞，并测量dna中³h-胸苷的掺入量来测定。

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段在这样的测定中可以表现出10μg/ml或更低的ic50，优选≤5μg/ml、≤4μg/ml、≤3.5μg/ml、≤3μg/ml、≤2μg/ml、≤1μg/ml、≤0.9μg/ml、≤0.8μg/ml、≤0.7μg/ml、≤0.6μg/ml，或≤0.5μg/ml。

在一些实施方式中，il-11/il-11r信号传导可以是通过il-11：il-11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导。在一些实施方式中，il-11：il-11rα复合物可以是可溶的，例如，il-11rα的胞外域和il-11的复合物，或可溶性il-11rα同种型/片段和il-11的复合物。在一些实施方式中，可溶性il-11rα是il-11rα的可溶性(分泌的)同种型，或者是蛋白水解切割细胞膜结合il-11rα的胞外域的释放产物。

在一些实施方式中，il-11：il-11rα复合物可以是细胞结合的，例如细胞膜结合的il-11rα和il-11的复合物。通过用il-11：il-11rα复合物处理表达gp130的细胞，可以分析由il-11：il-11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导，所述il-11：il-11rα复合物例如是包含il-11的重组融合蛋白，其通过肽接头与il-11rα的胞外域连接(例如，如本文所述的超il-11)。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制由il-11：il-11rα复合物与gp130的结合介导的信号传导，并且还能够抑制由il-11与il-11rα：gp130受体的结合介导的信号传导。。

在一些实施方式中，所述抗体/片段能够抑制成纤维细胞增殖。成纤维细胞的增殖可以通过在一段时间内分析细胞分裂来确定。可以分析给定成纤维细胞群的细胞分裂，例如，通过体外分析³h-胸苷的掺入或通过cfse稀释试验，例如，如描述于fulcher和wong，immunolcellbiol(1999)77(6)：559-564中的，通过引用整体并入本文。增殖的细胞(例如增殖的成纤维细胞)也可以通过分析通过适当的测定法掺入的5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(edu)来鉴定，例如描述于buck等，biotechniques.2008年6月；44(7)：927-9，和sali和mitchison，pnasusa2008年2月19日；105(7)：2415-2420中的，两者均通过引用整体并入本文。

根据本公开的成纤维细胞可以衍生自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓。在特定的实施方式中，为了分析抗体/片段，成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞增殖，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下成纤维细胞增殖水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低成纤维细胞增殖，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下成纤维细胞增殖水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制由il-11/il-r信号传导介导的病理过程，例如，在促纤维化因子(例如tgfβ1)刺激后。由il-11/il-r信号传导介导的病理过程包括纤维化，并且可以体外或体内评估。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制纤维化。纤维化可以是特定组织的或几种组织的，例如肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑或骨髓。纤维化可通过本领域技术人员熟知的方法测定，例如通过在给定的一种或多种组织中分析一种或多种肌成纤维细胞标志物的基因或蛋白表达和/或一种或多种纤维化标志物的基因或蛋白表达。

肌成纤维细胞标志物可包括αsma、波形蛋白(vimentin)、含钯蛋白(palladin)、丝切蛋白(cofilin)或连接蛋白(desmin)中一种或多种的增加。纤维化标志物包括胶原蛋白、纤维连接蛋白、骨膜素、il-6、il-11、αsma、timp1和mmp2、细胞外基质组分、肌成纤维细胞的数量/比例，和器官重量水平的增高。

可以体外或体内测定纤维化的抑制。例如，抗体/片段是否能够抑制给定组织中的纤维化可以在体外通过用促纤维化刺激物处理来自该组织的成纤维细胞进行分析，然后分析该抗体是否可以减少成纤维细胞中肌成纤维细胞(或者例如纤维化的一些其他标志物)的产生。抗体/片段是否能够抑制纤维化可以在体内分析，例如，通过将抗体/片段施用于对象(例如已暴露于促纤维化刺激物的对象)，并分析组织中的一种或多种纤维化标志物。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制纤维化，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下纤维化水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低纤维化，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下纤维化水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生，例如，在将成纤维细胞暴露于促纤维化因子后。可以通过分析肌成纤维细胞标志物来研究成纤维细胞中肌成纤维细胞的产生。本发明所述的促纤维化因子可以是例如tgfβ1、il-11、il-13、pdgf、et-1、制瘤素m(osm)或ang2(angii)。

在一些实施方式中，抗体/片段能够抑制成纤维细胞或成纤维细胞衍生的细胞(例如肌成纤维细胞)中的选自下组的一种或多种基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2，例如在促纤维化因子刺激后。在一些实施方式中，抗体/片段能够抑制成纤维细胞或成纤维细胞衍生的细胞(例如肌成纤维细胞)中的一种或多种胞外基质组分的基因或蛋白表达，例如在促纤维化因子刺激后。

在本文的实验实施例中，用tgfβ1刺激成纤维细胞后，通过使用operetta高含量成像系统测量αsma蛋白表达水平来分析来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制来自成纤维细胞的肌成纤维细胞产生，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞中的选自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2，例如在促纤维化因子(例如tgfβ1)刺激后。在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制基因或蛋白表达，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下基因或蛋白表达水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低基因或蛋白表达，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下基因或蛋白表达水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞的细胞外基质产量，例如在促纤维化因子(例如tgfβ1)刺激后。例如，可以通过测定细胞外基质组分的水平来评估细胞外基质的产量。本发明所述的细胞外基质组分包括例如蛋白多糖、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸角质素、透明质酸、胶原蛋白、骨膜素、纤维连接蛋白、玻连蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、巢蛋白、明胶和聚集蛋白聚糖。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞的细胞外基质产量，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下成纤维细胞的细胞外基质产量水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低成纤维细胞的细胞外基质产量，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下成纤维细胞的细胞外基质产量水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制癌细胞的增殖和/或存活。本领域技术人员能够确定抗体/片段是否能够抑制癌细胞的增殖和/或存活，例如通过分析抗体/片段对癌细胞的作用。例如，细胞的增殖可以如本文所述测定，例如，通过³h胸苷掺入或cfse稀释测定法。可以通过在用抗体/片段处理后测定细胞的细胞活力/细胞死亡标志物来分析细胞存活。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制癌细胞的增殖和/或存活，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下癌细胞的增殖和/或存活水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低癌细胞的增殖和/或存活，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下癌细胞的增殖和/或存活水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制肿瘤生长，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下肿瘤生长水平相比，小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少。在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低肿瘤生长，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下肿瘤生长水平相比，小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍。

在一些实施方式中，与现有技术的抗il-11rα抗体/片段相比，本发明所述的抗体/片段具有一种或多种改善的性质。在一些实施方式中，与能够抑制il-11/il-11r信号传导的现有技术抗体相比，本发明所述的抗体/片段具有一种或多种改善的性质。在一些实施方式中，现有技术抗体可以是或可以包含单克隆小鼠抗人il-11抗体克隆#22626(目录号mab218(r&d系统，明尼苏达州，美国))的cdr和/或vl和vh序列。

在一些实施方式中，与能够结合il-11rα的现有技术抗体/抗原结合片段相比，本发明的抗体/片段显示出一种或多种以下特性：

(i)相对于il-6rα、lifr、osmr和cntfrα中的一种或多种，以更高的特异性结合il-11rα(即，il-11rα以外的il-6细胞因子受体家族的蛋白质的交叉反应性降低)；

(ii)以更大的亲和力结合il-11rα(例如人il-11rα和/或小鼠il-11rα)(例如通过elisa测定的ec50较低)；

(iii)更大程度地抑制il-11rα和il-11之间的相互作用；

(iv)更大程度地抑制il-11rα和gp130之间的相互作用；

(v)更大程度地抑制il-11rα：gp130受体复合物和il-11之间的相互作用；

(vi)更大程度地抑制il-11：il-11rα复合物与gp130之间的相互作用；

(vii)更大程度地抑制il-11/il-11r信号传导；

(viii)更大程度地抑制由il-11与il-11rα：gp130受体复合物结合介导的信号传导；

(ix)更大程度地抑制由il-11：il-11rα复合物与gp130结合介导的信号传导(即il-11反式信号传导)；

(x)更大程度地抑制成纤维细胞增殖；

(xi)更大程度地抑制从成纤维细胞产生肌成纤维细胞；

(xii)更大程度地抑制由il-11/il-11r信号传导介导的病理过程；

(xiii)更大程度地抑制纤维化；

(xiv)更大程度地抑制成纤维细胞中的选自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、il-6、il-11、αsma、timp1、mmp2，例如用促纤维化因子刺激后；

(xv)更大程度地抑制成纤维细胞产生细胞外基质；

(xvi)更大程度地抑制癌症细胞的增殖和/或存活；或

(xvii)更大程度地抑制肿瘤生长。

在一些实施方式中，本文的“更高特异性”或“更大亲和力”或“更大程度地抑制”分别是特异性、亲和力或抑制水平，其相比于由现有技术的抗体/抗原结合片段在可比较的测定中表现出的特异性或亲和力或抑制水平，大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.06倍、≥1.07倍、≥1.08倍、≥1.09倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥2.1倍、≥2.2倍、≥2.3倍、≥2.4倍、≥2.5倍、≥2.6倍、≥2.7倍、≥2.8倍、≥2.9倍、≥3倍、≥3.5倍、≥4倍、≥4.5倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥15倍、≥20倍、≥25倍、≥30倍、≥35倍、≥40倍、≥45倍、≥50倍、≥60倍、≥70倍、≥80倍、≥90倍、≥100倍、≥200倍、≥300倍、≥400倍、≥500倍、≥600倍、≥700倍、≥800倍、≥900倍、≥1000次。

治疗应用

可以提供本发明所述的抗体和抗原结合片段以及包含这些试剂的组合物以用于医学治疗或预防疾病/病症，或减轻疾病/病症的症状的方法。本发明的抗体/片段可以施用于患有需要治疗的疾病/病症的受试者，和/或施用于具有产生或感染疾病/病症的风险的受试者。

本发明所述的纤维化的治疗、预防或缓解可以是指与il-11和/或il-11rα的上调相关的纤维化，例如，在疾病/病症发生或可能发生的细胞或组织中的il-11上调，或细胞外il-11或il-11rα的上调。在一些实施方式中，il-11或il-11r表达在对象中局部或系统性上调。

治疗或减轻疾病/病症可有效预防疾病/病症的进展，例如防止病情恶化或减缓发展速度。在一些实施方式中，治疗或缓解可以引起疾病/病症的改善，例如，减少疾病/病症的症状，或减少疾病/病症的严重性/活性的一些其他相关因素。

预防疾病/病症可以指预防病症恶化或预防疾病/病症的发展，例如，预防早期疾病/病症发展到后期慢性阶段。

本发明的抗体/片段优选能够结合并抑制il-11rα和含有il-11rα的分子/复合物(例如il-11：il-11rα复合物)的生物活性。因此，本发明的抗体/片段可用于治疗或预防病理学特性与il-11和/或il-11rα有关的疾病和病症。也就是说，本发明的抗体/片段可用于治疗或预防与il-11/il-11r信号传导相关的疾病和病症。

在一些实施方式中，所述疾病/病症可以与il-11、il-11rα和/或gp130基因或蛋白表达的增加相关，例如，与对照(即非患病)状态相比。在一些实施方式中，与对照状态相比，所述疾病/病症可能与il-11/il-11r信号传导水平的升高有关。在一些实施方式中，与对照状态相比，所述疾病/病症可以与通过erk和/或stat3途径的信号传导水平增加相关。在一些实施方式中，可以在疾病/病症的效应细胞(例如对于癌症中的癌细胞)中观察到il-11、il-11rα和/或gp130的表达/活性增加，和/或il-11/il-11r信号传导的水平增加。在一些实施方式中，可以在除了效应细胞之外的细胞中观察到il-11、il-11rα和/或gp130的表达/活性增加，和/或il-11/il-11r信号传导的水平增加。

可以测定通过erk的信号传导，例如使用测定erk磷酸化的方法，例如描述于测量指导手册：磷酸化-erk方法，kime.garbison，beverlya.heinz，marye.lajiness，jeffreyr.weidner和g.sittasittampalam，礼来公司，sittampalamgs，coussensnp，nelsonh等，编辑bethesda(马里兰州)：礼来公司和国家先进转化科学中心；2004中描述的测定。可以测定通过stat3的信号传导，例如使用磷酸化stat3的测定法，例如磷酸化-stat3(tyr705)细胞测定试剂盒(cisbioassays)。

在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症中，il-11/il-11r信号传导的减少是治疗性的。在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症是与过量erk和/或stat3信号传导相关的疾病/病症。在一些实施方式中，所述治疗治疗所针对的疾病/病症与成纤维细胞的过度增殖或过度活化相关，或与过量的肌成纤维细胞相关。

在一些实施方式中，所述治疗可旨在通过减少肌成纤维细胞或αsma阳性成纤维细胞的数量或比例来预防或治疗疾病/病症。

在一些实施方式中，所述疾病/病症可以是纤维化、纤维化病症，或以纤维化为特征的疾病/病症。如本文所用，“纤维化”是指由于细胞外基质组分(例如胶原蛋白)的过量沉积而形成过量的纤维结缔组织。纤维结缔组织的特征在于具有高胶原蛋白含量的细胞外基质(ecm)。胶原蛋白可以以链或纤维形式提供，其可以不规则地排列或对齐排列。纤维结缔组织的ecm还可包括糖胺聚糖。

如本文所用，“过量的纤维结缔组织”是指给定位置(例如给定组织或器官，或给定组织或器官的一部分)的结缔组织的量，其大于在不存在纤维化的情况下(例如在正常、非病理条件下)该位置处所存在的结缔组织的量。如本文所用，“细胞外基质组分的过量沉积”是指一种或多种细胞外基质组分的沉积水平，其大于在不存在纤维化的情况下(例如在正常、非病理条件下)的沉积水平。

纤维化的细胞和分子机制描述于wynn，j.pathol.(2008)214(2)：199-210，和wynn和ramalingam，naturemedicine(2012)18：1028-1040，其全部内容在此引入作为参考。纤维化的主要细胞效应物是肌成纤维细胞，其产生富含胶原蛋白的细胞外基质。

响应于组织损伤，受损细胞和白细胞产生促纤维化因子，例如tgfβ、il-13和pdgf，其将成纤维细胞激活为表达αsma的肌成纤维细胞，并将肌成纤维细胞募集至损伤部位。肌成纤维细胞产生大量细胞外基质，并且是帮助伤口挛缩和闭合的重要介质。然而，在持续感染的情况下或慢性炎症期间，肌成纤维细胞可能被过度活化和募集，从而过度产生细胞外基质成分，导致形成过量的纤维结缔组织。

在一些实施方式中，纤维化可以由病理症状引发，例如，导致产生促纤维化因子(例如tgfβ1)的症状、感染或疾病状态。在一些实施方式中，纤维化可以由物理损伤/刺激、化学损伤/刺激或环境损伤/刺激引起。手术期间(例如医源性原因)可能发生物理损伤/刺激。化学损伤/刺激可包括药物诱导的纤维化，例如，在长期服用药物后，所述药物例如博来霉素、环磷酰胺、胺碘酮、普鲁卡因胺、青霉胺、金和呋喃妥因(daba等，saudimedj20046月；25(6)：700-6)。环境损伤/刺激可能包括接触石棉纤维或二氧化硅。

纤维化可以发生在身体的许多组织中。例如，纤维化可发生在肺、肝(例如肝硬化)、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓中。纤维化也可能同时发生在多个器官中。

在本文的实施方式中，纤维化可以涉及胃肠系统的器官，例如肝脏、小肠、大肠或胰腺。在一些实施方式中，纤维化可涉及呼吸系统的器官，例如肺。在实施方式中，纤维化可涉及心血管系统的器官，例如心脏或血管。在一些实施方式中，纤维化可涉及皮肤。在一些实施方式中，纤维化可以涉及神经系统的器官，例如大脑。在一些实施方式中，纤维化可涉及泌尿系统的器官，例如肾。在一些实施方式中，纤维化可涉及肌肉骨骼系统的器官，例如肌肉组织。

在一些优选的实施方式中，所述纤维化是心脏或心肌纤维化、肝纤维化或肾纤维化。在一些实施方式中，心脏或心肌纤维化与心肌的功能障碍或心脏的电特性或心脏的壁或瓣膜的增厚相关。在一些实施方式中，纤维化是心脏的心房和/或心室的纤维化。治疗或预防心房或心室纤维化可有助于降低心房纤颤、心室颤动或心肌梗塞的风险或发作。

在一些优选的实施方式中，肝纤维化与慢性肝病或肝硬化有关。在一些优选的实施方式中，肾纤维化与慢性肾病相关。

本发明所述的以纤维化为特征的疾病/病症包括但不限于：呼吸疾病，例如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化、进行性大块纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、海-普(hermansky-pudlak)综合征、石棉沉滞症、矽肺病、慢性肺动脉高压、艾滋病相关肺动脉高压、结节病、肺病肿瘤基质、和哮喘慢性肝病、原发性胆汁性肝硬化(pbc)、血吸虫病、肝硬化；心血管疾病，如肥厚性心肌病、扩张型心肌病(dcm)、心房纤维化、心房颤动、心室纤维化、心室颤动、心肌纤维化、布鲁格达(brugada)综合征、心肌炎、心内膜纤维化、心肌梗死、纤维化血管疾病、高血压心脏疾病、致心律失常性右心室心肌病(arvc)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病，例如胶质细胞增生和阿尔茨海默氏病；肌肉萎缩症，如假肥大型肌营养不良症(duchennemusculardystrophy)(dmd)或贝克斯(becker’s)肌营养不良症(bmd)；胃肠疾病，如克罗恩病(chron’sdisease)、显微结肠炎和原发性硬化性胆管炎(psc)；皮肤疾病，如硬皮病、肾源性系统性纤维化和皮肤瘢痕疙瘩；关节纤维化；杜普特伦(dupuytren’s)挛缩；纵隔纤维化；腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼(peyronie’s)病；粘连性囊炎；肾脏疾病(例如，肾纤维化、肾病综合征、阿尔波特(alport’s)综合征、hiv相关肾病、多囊肾病、法布里(fabry’s)病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性红斑狼疮相关的肾炎)；进行性系统性硬化症(pss)；慢性移植物抗宿主病；眼及相关过程的疾病/病症，例如格雷夫斯(grave’s)眼病、视网膜前纤维化(如糖尿病视网膜病变(dr))、青光眼、视网膜下纤维化(如与黄斑变性相关(如湿性年龄相关性黄斑变性)、amd黄斑水肿、玻璃疣形成、术后纤维化(例如白内障手术后后囊，或青光眼小梁切除术后的疱疹)、结膜纤维化、结膜下纤维化；关节炎；纤维化前肿瘤和纤维化肿瘤疾病；以及化学或环境损害诱导的纤维化(例如，癌症化疗、杀虫剂、放射/癌症放射治疗)。

应当理解，上面列出的许多疾病/病症是相互关联的。例如，心室纤维化可在心肌梗塞后发生，并且与dcm、hcm和心肌炎相关。

在特定实施方式中，所述疾病/病症可以选自肺纤维化、心房颤动、心室颤动、肥厚性心肌病(hcm)、扩张型心肌病(dcm)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化、慢性肾病、硬皮病、系统性硬化、瘢痕疙瘩、囊性纤维化、克罗恩(chron’s)病、术后纤维化或视网膜纤维化，例如与湿性年龄相关性黄斑变性(amd)相关。

纤维化可直接或间接导致和/或增加对疾病/病症发展的易感性。例如，超过80％的肝细胞癌(hcc)在纤维化或肝硬化肝脏中产生(affo等，2016，annurevpathol)，表明肝纤维化在肝脏癌前环境(pme)中的重要作用。

因此，本发明的抗体/片段可用于治疗和预防与纤维化相关的疾病/病症，和/或其中纤维化是危险因素的疾病/病症的方法。在一些实施方式中，与纤维化相关的疾病/病症或其纤维化是危险因素的疾病/病症是癌症，例如肝癌(例如肝细胞癌)。

il-11/il-11r信号传导也涉及其他疾病/病症的病理学特性，因此本发明的抗il-11rα抗体和片段可用于治疗、预防和/或缓解这些疾病/病症症状的方法中。

il-11/il-11r信号传导涉及各种癌症的发生和进展。研究表明，il-11/il-11r信号传导对于通过过度激活stat3促进慢性胃炎和相关的胃癌、结肠癌、肝细胞癌和乳腺癌的发生是重要的(ernstm等，jclininvest.(2008)；118：1727-1738)，il-11/il-11r信号传导可通过触发jak-stat细胞内信号通路促进肿瘤发生，也可通过pi3k-akt-mtorc1通路信号传导促进转移(xu等，cancerletters(2016)373(2)：156-163)。通过stat3，il-11促进肿瘤的存活、增殖、侵袭血管生成和转移，il-11/gp130/jak/stat3信号通路可能对胃肠道肿瘤的进展具有限速作用，并且il-11表达升高与乳腺癌患者的不良预后相关(johnstone等，cytokine&growthreviews(2015)26(5)：489-498)。il-11/il-11r信号传导也已显示影响乳腺癌干细胞动力学特性和肿瘤异质性(johnstone等，cytokine&growthreviews(2015)26(5)：489-498)。最近，发现il-11信号传导与肺腺癌的化学耐药有关；癌症相关成纤维细胞上调il-11，并通过激活il-11/il-11r/stat3抗细胞凋亡信号通路赋予肺癌细胞化学抗性(tao等，2016年，scirep.6；6：38408)。il-11信号传导可促进在癌前环境(pme)和肿瘤微环境(tme)中成纤维细胞的成纤维细胞-肌成纤维细胞转变和细胞外基质产生。

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段被提供以用于治疗/预防癌症的方法。在一些实施方式中，所述癌症可以是直接或间接导致炎症和/或纤维化的癌症。

癌症可以是任何不需要的细胞增殖(或任何通过不需要的细胞增殖表现出来的疾病)、赘生物或肿瘤，或者不希望的细胞增殖、赘生物或肿瘤的风险或易感性增加。所述癌症可以是良性或恶性的，可以是原发性的或继发性的(转移性的)。所述肿瘤或癌变可以是细胞的任何异常生长或增殖，并且可以位于任何组织中。

在一些实施方式中，提供本发明的抗体/片段以用于治疗/预防癌症的方法，所述癌症例如上皮细胞癌、乳腺癌、胃肠癌(例如食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、结直肠癌、肛门癌、胃肠道类癌)和肺癌(例如非小细胞肺癌(nsclc)或小细胞肺癌(sclc))。在一些实施方式中，所述癌症是急性和/或慢性炎症是其危险因素的癌症。

在一些实施方式中，所述癌症可与il-11、il-11rα和/或gp130基因或蛋白表达增加相关。例如，与可比较的非癌细胞相比，癌症细胞的il-11、il-11rα和/或gp130表达可能增加，或者在不存在癌症的情况下，与可比较细胞(例如健康对照受试者)中il-11、il-11rα和/或gp130的表达水平相比，可能与其他细胞(例如非癌细胞)中的表达增加相关。在一些实施方式中，与可比较的非癌细胞相比，可以确定癌症细胞经由erk和/或stat3通路的信号传导水平增加。

在一些实施方式中，所述癌症可以与il-11、il-11rα和/或gp130中的突变相关。在一些实施方式中，这种突变可能与基因或蛋白表达水平增加有关，或者可能与il-11/il-11r信号传导水平增加有关，相对于在没有突变时观察到的表达/信号传导水平。

il-11/il-11r信号传导也涉及以炎症为特征的疾病/病症。已经证明关节内注射il-11引起关节炎症(wong等，cytokine(2005)29：72-76)，并且il-11已被证明在il-13介导的组织炎症位点具有促炎性(chen等，jimmunol(2005)174：2305-2313)。还观察到il-11表达在特应性皮炎的慢性皮肤病变中显著增加，并且已知其参与支气管炎症(toda等，jallergyclinimmunol(2003)111：875-881)。il-11/il-11r信号传导涉及炎性肠病(ibd)和哮喘(putoczki和ernst，jleukobiol(2010)88(6)1109-1117)。il-11也被确定为多发性硬化的危险因素；与对照组相比，临床孤立综合征(cis)患者的脑脊液il-11水平升高，并且复发缓解型多发性硬化患者复发时血清il-11水平升高，并且il-11可能促进cd4+t细胞分化为th17表型--th17细胞是多发性硬化发病机制中的重要细胞(zhang等，oncotarget(2015)6(32)：32297-32298)。

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段被提供以用于治疗/预防以炎症为特征的疾病/病症的方法。在一些实施方式中，以炎症为特征的疾病或病症可以是直接或间接导致癌症和/或纤维化的疾病/病症。以炎症为特征的疾病包括例如过敏性炎症(例如过敏性哮喘和支气管炎症、特应性皮炎、过敏性鼻炎和眼部过敏性疾病等)和自身免疫性疾病(例如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、慢性活动性肝炎、1型糖尿病、乳糜泻、格雷夫斯病(grave’sdisease)、葡萄膜炎、天疱疮、牛皮癣、克罗恩病(crohn’sdisease)、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、贫血和自身免疫性甲状腺炎)。

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段被提供以用于治疗/预防与感染相关的疾病/病症的方法，特别是在感染直接或间接导致纤维化、癌症或炎症的情况下。与感染相关的疾病可以是由相关感染因子感染引起或加剧的疾病，或者可以是相关感染因子感染是其危险因素的疾病。

感染可以是任何感染或传染病，例如细菌、病毒、真菌或寄生虫感染。在特定的实施方式中，所述疾病/病症可能与病毒感染有关。在一些实施方式中，可能特别期望治疗慢性/持续性感染，例如，这种感染与炎症、癌症和/或纤维化有关。

所述感染可以是慢性的、持续的、潜伏的或缓慢的，并且可以是细菌、病毒、真菌或寄生虫感染的结果。因此，可以向具有细菌、病毒或真菌感染的患者提供治疗。细菌感染的实例包括感染幽门螺杆菌和非结核分枝杆菌感染。病毒感染的例子包括ebv、hpv、hiv、乙型肝炎或丙型肝炎感染。

治疗可以包括通过抑制il-11rα或含il-11rα的复合物的生物活性来改善、治疗或预防疾病/病症。这些方法可包括施用本发明的抗体/片段/组合物以结合并抑制il-11rα或含il-11rα的复合物的生物活性。在此，抑制il-11rα或含il-11rα的复合物的生物活性可称为“中和”。

治疗方法可任选地包括将生物佐剂(例如，白细胞介素、细胞因子、芽孢杆菌-槲皮素、单磷酰脂质a等)与用于治疗癌症的常规疗法共同施用，所述治疗癌症的常规疗法例如用治疗癌症的药剂治疗(例如化疗)、放射或手术。治疗方法可包括施用本发明所述的组合物作为疫苗，其通过激活免疫系统以预防或破坏癌细胞生长而起作用。医学治疗方法还可以涉及体内、离体和过继性免疫疗法，包括使用自体和/或异源细胞或永生化细胞系的免疫疗法。

所述治疗可以旨在预防与过度活跃/升高的il-11/il-11r介导的信号传导相关的疾病/病症。因此，所述抗体、抗原结合片段和多肽可用于配制药物组合物或药物，并且可以预防性地治疗受试者以防止疾病状态的发展。这可以在疾病状态的症状发作之前进行，和/或可以施用于被认为具有更高的疾病或病症风险的受试者。

治疗可包括与疫苗共同治疗，其可涉及同时、分开或顺序治疗，或将疫苗与本发明的抗体、抗原结合片段或组合物的组合施用。

抗体、抗原结合片段或多肽的施用优选为“治疗有效量”，这足以显示对个体的益处。施用的实际剂量、施用的速率和时间步骤将取决于所治疗疾病的性质和严重程度。治疗的处方(例如关于剂量等的决定)由全科医生和其他医生负责，并且通常考虑待治疗的病症、个体患者的状况、递送的部位、给药方法和从业者已知的其他因素。上述技术和方案的实例可以参见雷明顿的制药科学(remington'spharmaceuticalsciences)，第20版，发表于2000年，lippincott、williams和wilkins。

制备药学上有用的组合物和药物

本发明所述的抗体和抗原结合片段可以配制成临床使用的药物组合物或药物，并且可以包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或佐剂。

所述组合物可以被配制用于局部、肠胃外、全身、腔内、静脉内、动脉内、肌肉内、鞘内、眼内、结膜内、瘤内、皮下、口服或透皮给药途径，其可包括注射或输注。合适的制剂可包含无菌或等渗培养基中的抗体/片段。药物和药物组合物可以配制成流体，包括凝胶形式。可配制流体制剂用于通过注射或通过导管施用于人体或动物体的选定区域。

在本发明中，还提供了制备药学上有用的组合物的方法，这种制备方法可包括选自以下的一个或多个步骤：分离如本文所述的抗体或抗原结合片段；和/或将如本文所述的分离的抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。

例如，本发明的另一方面涉及配制或生产用于医学治疗方法的药物或药物组合物的方法，所述方法包括通过将如本文所述的抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合，以配制药物组合物或药物。

检测方法

本文所述的抗体或抗原结合片段可用于涉及抗体或抗原结合片段与il-11rα结合的方法中。此类方法可涉及检测抗体或抗原结合片段和il-11rα的结合复合物。因此，在一个实施方式中，提供了一种方法，所述方法包括使含有或疑似含有il-11rα的样品与如本文所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段与il-11rα的复合物的形成。

合适的方法形式是本领域熟知的，包括免疫测定，例如夹心测定，elisa。所述方法可以包括用可检测的标记物标记抗体/抗原结合片段或il-11rα或两者，所述可检测的标记物是，例如荧光的、发光的或放射性的标记物。il-11rα的表达可以通过免疫组织化学(ihc)测定，例如通过活组织检查获得的组织样品。在一些实施方式中，标记可以选自：放射性核苷酸、正电子发射放射性核素(例如用于正电子发射断层扫描(pet))、mri造影剂或荧光标记。

由il-11介导的过程的体外或体内分析可涉及通过正电子发射断层扫描(pet)、磁共振成像(mri)或荧光成像(例如通过检测适当标记的物种)进行分析。

这种方法可以提供需要检测和/或定量il-11rα或含il-11rα的复合物来诊断的疾病或病症的方法的基础。这些方法可以在对象样品上体外进行，或者在对对象样品进行处理后进行。一旦收集样品，在体外诊断的方法中就不再需要对象的参与，因此所述方法可以是不在人体或动物体上实施的方法。

此类方法可涉及确定对象样品中存在的il-11rα或含il-11rα的复合物的量。所述方法可以进一步包括将确定的量与标准值或参考值进行比较，作为以达到诊断目的的过程的一部分。其他诊断测试可以与本文描述的那些一起使用，以增强诊断或预后的准确性或确认通过使用本文描述的测试获得的结果。

存在于对象样品中的il-11rα或含il-11rα的复合物的水平可以指示对象可以对抗il-11rα抗体/片段的治疗作出反应，所述抗il-11rα抗体/片段是例如本发明所述的抗il-11rα抗体/片段或组合物。样品中高水平的il-11rα或含il-11rα的复合物的存在可用于为本文所述的抗il-11rα抗体/片段或组合物治疗选择对象。因此，本发明的抗体可用于为抗il-11rα疗法治疗选择对象。

检测样品中的il-11rα或含有il-11rα的复合物可用于诊断对象中的传染病、自身免疫性疾病或癌症，用于诊断传染病易感性、自身免疫性疾病或癌症状况，或用于提供传染病、自身免疫性疾病或癌症状况的预后(预测)。所述诊断或预后可涉及已有的(先前诊断的)传染性、炎性或自身免疫疾病/病症或癌症状况。

样品可以是从任何组织或体液中取得的。所述样品可包含或可源自：一定量的血液；来自个体血液的一定量血清，其可包括去除纤维蛋白凝块和血细胞后获得的血液的流体部分；组织样本或活组织检查样品；胸腔积液；脑脊液(csf)；或从所述个体分离的细胞。在一些实施方式中，所述样品可以获自或来源于受疾病/病症影响的一个或多个组织(例如，表现出疾病症状的一个或多个组织，或涉及疾病/病症的发病机理的一个或多个组织)。

本发明所述的方法可以优选体外进行。术语“体外”旨在包括培养细胞的实验，而术语“体内”旨在包括用完整多细胞生物进行的实验和/或治疗。

联合疗法

本发明所述的抗体、抗原结合片段和组合物可以单独施用或与其他治疗联合施用。取决于待治疗的疾病/病症，这种联合的施用可以是同时的或顺序的。与抗体/片段或组合物的施用联合的其他治疗可以旨在治疗或预防所述疾病/病症。在一些实施方式中，与抗体/片段或组合物的施用联合的其他治疗可以旨在治疗或预防例如感染、炎症和/或癌症。

同时施用是指将抗体、抗原结合片段或多肽和治疗剂一起施用(例如作为含有两种药剂的药物组合物(组合制剂)来施用)，或者在彼此之后立即施用，并且任选地通过相同的途径施用(例如施用于同一动脉、静脉或其他血管)。

依次施用是指在另一种药剂的单独施用之后，在给定的时间间隔后施用抗体、抗原结合片段或多肽或治疗剂中的一种。尽管在一些实施方式中是这种情况，但不要求两种药剂通过相同的途径给药。所述时间间隔可以是任何时间间隔。

在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用用于治疗或预防感染的药剂(例如抗生素、抗病毒、抗真菌或抗寄生虫剂)。在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用用于治疗或预防炎症的药剂(例如一种非甾体类抗炎药(nsaid))。在一些实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用放射疗法(即用电离辐射治疗，例如x射线或γ射线)和/或用于治疗或预防癌症的药剂(例如化学治疗剂)。在一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或组合物可以作为免疫疗法的联合治疗的一部分施用。

治疗可包括施用一种以上的药物。药物可以单独施用或与其它治疗组合施用，根据待治疗的病症同时或依次施用。

给药途径

本发明各方面所述的抗体、抗原结合片段、药物和药物组合物可以被配制以用于通过多种途径给药，包括但不限于肠胃外、静脉内、动脉内、眼内、结膜内、肌肉内、皮下、皮内、肿瘤内注射或输注，以及口服给药。抗体、抗原结合片段、多肽和其他治疗剂可以被配制成流体或固体形式。可配制流体制剂用于通过注射或输注施用于人体或动物体的选定区域。

试剂盒

在本发明的一些方面，提供了一种试剂盒。在一些实施方式中，所述试剂盒可具有至少一个容器，其具有预定量的抗体、片段或组合物。所述试剂盒可以以药物或药物组合物的形式提供抗体/片段，并且可以与施用于对象的说明书一起提供以治疗特定的疾病/病症。可以配制所述抗体、片段或组合物，以便适合注射或输注到肿瘤或血液中。

在一些实施方式中，所述试剂盒可以进一步包含至少一个容器，其具有预定量的另一种治疗剂(例如抗感染剂或化学治疗剂)。在此类实施方案中，所述试剂盒还可包含第二药物或药物组合物，使得两种药物或药物组合物可同时或分开施用，以使它们提供针对特定疾病或病症的组合治疗。还可以配制治疗剂以使其适合注射或输注到肿瘤或血液中。

对象

待治疗的对象可以是任何动物或人。所述对象优选为哺乳动物，更优选为人。所述对象可以是非人哺乳动物，但更优选是人。所述对象可以是男性或女性。所述对象可以是患者。对象可能已被诊断患有需要治疗的疾病或病症，或疑似患有此类疾病或病症。

在一些实施方式中，所述对象可能有产生/接触疾病或病症的风险。

蛋白表达

适于在细胞中产生本发明所述的蛋白(例如抗体/片段)的分子生物学技术是本领域熟知的，例如sambrook等人，分子克隆：实验室手册，纽约：冷泉港出版社，1989中描述的那些。

所述多肽可以从核苷酸序列表达。所述核苷酸序列可以包含在细胞中存在的载体中，或者可以被掺入细胞的基因组中。

如本文所用的“载体”是用作将外源遗传物质转移到细胞中的载体的寡核苷酸分子(dna或rna)。所述载体可以是用于在细胞中表达所述遗传物质的表达载体。此类载体可包括与编码待表达基因序列的核苷酸序列可操作地连接的启动子序列。载体还可包括终止密码子和表达增强子。本领域已知的任何合适的载体、启动子、增强子和终止密码子可用于本发明所述的载体中以表达多肽。合适的载体包括质粒、二元载体、病毒载体和人工染色体(例如酵母人工染色体)。

在本说明书中，术语“可操作地连接”可以包括这样的情况，其中所选择的核苷酸序列和调节核苷酸序列(例如启动子和/或增强子)以下述方式共价连接，即将核苷酸序列的表达置于调节序列的影响或控制下(从而形成表达盒)。因此，如果调节序列能够影响核苷酸序列的转录，则调节序列与所选择的核苷酸序列可操作地连接。在适当的情况下，然后可以将得到的转录物翻译成所需的蛋白或多肽。

适于表达多肽的任何细胞可用于产生本发明的多肽。所述细胞可以是原核生物的或真核生物的。合适的原核细胞包括大肠杆菌。真核细胞的实例包括酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢(cho)细胞)。在一些情况下，所述细胞不是原核细胞，因为一些原核细胞不允许与真核细胞相同的翻译后修饰。此外，在真核生物中可能具有非常高的表达水平，并且使用适当的标签可以更容易地从真核生物中纯化蛋白。还可以使用特定的质粒，其促进蛋白分泌到培养基中。

产生目标多肽的方法可以包括培养或发酵经修饰以表达多肽的细胞。所述培养或发酵可以在生物反应器中进行，所述生物反应器具有适当的营养物供应、空气/氧气和/或生长因子。通过从细胞中分配培养基/发酵液、提取蛋白内含物、分离单个蛋白以分离分泌的多肽，可以收集分泌的蛋白。培养、发酵和分离技术是本领域技术人员所熟知的。

生物反应器包括一个或多个可以培养细胞的容器。生物反应器中的培养可以连续进行，具有连续流入反应器的反应物和连续流出反应器的细胞。或者，所述培养可以分批进行。生物反应器监测和控制环境条件，例如ph、氧气、流入和流出的流速，以及容器内的搅拌，从而为培养的细胞提供最佳条件。

在培养表达目的多肽的细胞后，优选分离该多肽。可以采用用于从细胞培养物中分离多肽的本领域已知的任何合适方法。为了从培养物中分离多肽，可能需要首先将培养的细胞与含有目标多肽的培养基分离。如果目标多肽是从细胞分泌的，则可以通过离心将细胞与含有分泌的多肽的培养基分离。如果目标多肽收集在细胞内，则必须在离心之前破坏细胞，例如使用超声处理、快速冻融或渗透裂解。离心将产生含有培养的细胞或培养的细胞的细胞碎片的沉淀，以及含有培养基和目标多肽的上清液。

然后可能需要从上清液或培养基中分离目标多肽，其可含有其他蛋白和非蛋白组分。从上清液或培养基中分离多肽组分的常用方法是通过沉淀。不同溶解度的多肽/蛋白在不同浓度的沉淀剂如硫酸铵中沉淀。例如，在低浓度的沉淀剂下，提取水溶性蛋白。因此，通过添加增加的浓度的沉淀剂，可以区分不同溶解度的蛋白。随后可以使用透析从分离的蛋白中除去硫酸铵。

用于区分不同多肽/蛋白的其他方法是本领域已知的，例如离子交换色谱法和分子筛色谱法。这些可以用作沉淀的替代方法，或者可以在沉淀之后进行。

一旦从培养物中分离出目的多肽，可能需要浓缩所述蛋白。许多浓缩目的蛋白的方法是本领域已知的，例如超滤或冷冻干燥。

序列同一性

用于确定氨基酸或核苷酸序列同一性百分比的比对可以以本领域技术人员已知的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，例如clustalw1.82、t-coffee或megalign(dnastar)软件。使用此类软件时，优选使用默认参数，例如使用间隙罚分和延伸罚分。clustalw1.82的默认参数是：蛋白质间隙开放罚分＝10.0，蛋白质间隙延伸罚分0.2，蛋白质阵列＝gonnet，蛋白质/dnaendgap＝-1，蛋白质/dnagapdist＝4。

***

本发明包括所述方面和优选特征的组合，除非明显不允许或明确避免这种组合。

这里使用的章节标题仅用于组织目的，不应解释为限制所描述的主题。

现在将参考附图通过示例说明本发明的各个方面和实施方式。其他方面和实施方式对于本领域技术人员而言是显而易见的。本文中提到的所有文献都通过引用并入本文。

在整个说明书中，包括随后的权利要求，除非上下文另有要求，否则词语“包括”和诸如“包含”和“含有”的变体将被理解为暗示包括所述整数或步骤，或整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤，或整数或步骤的组。

必须注意，如说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”，“一个”和“该”包括复数指示物，除非上下文另有明确说明。范围在本文中可以表示为从“约”一个特定值，和/或到“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一个实施方式包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，将理解该特定值形成另一个实施方式。

附图简要说明

现在将参考附图讨论说明本发明原理的实施方式和实验，其中：

图1.显示了来自160个具有和不具有tgfβ1刺激的个体的人心房成纤维细胞的全转录组测序的读取深度的图。

图2.显示了通过对原始组织(人心房组织样品，n＝8)和原代、未刺激的成纤维细胞培养物的rna-seq测定的内皮、心肌细胞和成纤维细胞标志物基因的表达的图。(a)pecam1，(b)myh6，(c)tnnt2，(d)col1a2和(e)acta2。

图3.显示了响应tgfβ1刺激的成纤维细胞中il-11表达的上调的图。(a和b)显示了纤维化中基因表达的倍数变化；il-11是响应tgfβ1治疗的上调程度最大基因。(c)显示了响应tgfβ1刺激的成纤维细胞的il-11分泌。(d)在有或没有tgfβ1刺激的情况下，健康个体组织和心房成纤维细胞组织中il-11基因表达的比较。(e)通过rna-seq与qpcr测定的il-11表达倍数变化的对应关系。

图4.显示了通过elisa测定的各种促纤维化细胞因子对原代成纤维细胞中il-11分泌的诱导的图。(a)tgfβ1、et-1、angii、pdgf、osm和il-13诱导il-11分泌，并且il-11也在正反馈环中诱导il-11表达。(b)显示了elisa仅检测到从细胞分泌的天然il-11，并且未检测到用于il-11刺激条件的重组il-11。(c)和(d)细胞用重组il-11刺激，测定il-11rna，并在指定的时间点通过elisa测量细胞培养上清液中的天然il-11蛋白的水平。

图5.显示了响应于tgfβ1或il-11的刺激，心房成纤维细胞产生肌成纤维细胞，并产生ecm和细胞因子的表达的图表和图像。(a)通过染色α-sma、胶原蛋白或骨膜素后，荧光显微镜测定的tgfβ1或il-11刺激后，原代心房成纤维细胞产生的肌原纤维细胞和ecm。(b)通过天狼星红染色测定的细胞培养上清液的胶原蛋白含量。通过elisa测定的纤维化标志物(c)il-6，(d)timp1和(e)mmp2的分泌。(f)通过用人或小鼠重组il-11刺激激活鼠成纤维细胞。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001[平均值±sd，dunnett]。

图6.显示了il-11的促纤维化作用的图。(a)来自不同组织的小鼠成纤维细胞可以被il-11激活并显示出ecm产量增加。[平均值±sd，dunnett]。用重组il-11或angii注射小鼠引起(b)器官重量的增加[平均值±sem]，和(c)胶原蛋白含量的增加(通过hpa测定确定)。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001[平均值±sd，dunnett]。

图7.显示了tgfβ1对成纤维细胞的促纤维化作用中需要il-11的图表和图像。(a)在存在/不存在中和抗il-11抗体或同种型对照igg的情况下，有或没有tgfβ1刺激的原代心房成纤维细胞的肌成纤维细胞产量和ecm产量，其通过(a)α-sma，(b)edu或(c)骨膜素染色后的荧光显微镜测量。(d至f)通过elisa分析纤维化标志物(d)il-6，(e)timp1和(f)mmp2的分泌。在没有刺激的情况下将荧光标准化为对照组。[平均值±sd，dunnett]*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001或****p<0.0001。

图8.显示了il-11中和对tgfβ1触发的胶原蛋白产生的影响的图表和图像。通过(a)operetta测定或(b)天狼星红染色测定，在存在/不存在中和抗il-11抗体或同种型对照igg的情况下，用或不用tgfβ1刺激的心脏成纤维细胞的胶原蛋白产量。[平均值±sd，dunnett]*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001或****p<0.0001。

图9.显示了各种il-11和il-11rα拮抗剂抑制纤维化的能力的图。人心房成纤维细胞用针对il-11的中和抗体、针对il-11rα的中和抗体、与il-11结合的诱饵il-11受体分子、下调il-11表达的sirna或下调il-11ra表达的sirna进行处理，并且体外分析对成纤维细胞中tgfβ1驱动的促纤维化反应的影响。[平均值±sd，dunnett]*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001或****p<0.0001。

图10.显示了il-11ra敲除小鼠的成纤维细胞对促纤维化处理的反应的条形图。将衍生自il-11rawt(+/+)、杂合(+/-)和纯合(-/-)小鼠的成纤维细胞与tgfβ1、il-11或angii(5ng/ml)一起温育24小时。(a)通过分析αsma含量测定的肌成纤维细胞的百分比，(b)通过edu染色测定的增殖细胞百分比，(c)胶原蛋白含量和(d)通过检测骨膜素测定的ecm产量[平均值±sd]。

图11.显示了il-11中和对响应于各种促纤维化刺激的纤维化的影响的图。在存在/不存在各种不同的促纤维化因子的情况下，并且在存在/不存在中和抗il-11抗体或泛抗tgfβ抗体的情况下，体外培养成纤维细胞，通过分析αsma表达确定(a)胶原蛋白的产量和(b)肌成纤维细胞的产量。[平均值±sd，dunnett]*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001或****p<0.0001。

图12.显示了用angii处理后wt和il-11ra(-/-)动物的心房和心脏中纤维化标志物的表达条形图。(a)胶原蛋白的含量，其通过羟脯氨酸测定法测量。(b)胶原蛋白(col1a2)的表达。(c)αsma(acta2)的表达。(d)纤连蛋白(fn1)的表达。

图13.与il-11ra+/+小鼠相比，用于分析il-11ra-/-小鼠的(a)肺，(b)皮肤和(c)眼中纤维化的实验程序的示意图。

图14.显示了基因表达的倍数变化的散点图。(a)用tgfβ1、il-11或tgfβ1和il-11刺激后，成纤维细胞中基因表达的倍数变化。(b)用tgfβ1刺激后从il-11ra+/+和il-11ra-/-小鼠获得的成纤维细胞中基因表达的倍数变化。

图15.显示了通过测定肾组织中的胶原蛋白含量所测定的il-11ra敲除对叶酸诱导的肾纤维化的影响的图表。

图16.抗il-11rα抗体克隆的轻链可变结构域序列。cdr加下划线并单独显示。

图17.抗il-11rα抗体克隆的重链可变结构域序列。cdr加下划线并单独显示。

图18.显示了抗il-11rα抗体克隆的轻链cdr序列的表。

图19.显示了抗il-11rα抗体克隆的重链cdr序列的表。

图20.显示了抗il-11rα抗体克隆的轻链cdr序列和共有序列的表，(a)lc-cdr1，(b)lc-cdr2和(c)lc-cdr3。

图21.显示了抗il-11rα抗体克隆的重链cdr序列和共有序列的表，(a)hc-cdr1，(b)hc-cdr2和(c)hc-cdr3。

图22.抗il-11rα抗体克隆的核苷酸序列。(a)编码vl区的核苷酸序列。(b)编码vh区的核苷酸序列。

图23.总结了17种抗人il-11抗体克隆的表。

图24.显示了抗il-11rα抗体在体外对人心房成纤维细胞中il-11介导的信号传导的抑制作用的柱状图，其是在抗il-11rα抗体存在下，用tgfβ1刺激后，通过与对照(未刺激的)成纤维细胞相比αsma阳性细胞百分比的倍数变化来确定的。

图25.显示了抗il-11rα抗体在体外对小鼠心房成纤维细胞中il-11介导的信号传导的抑制作用的柱状图，其是在抗il-11rα抗体存在下，用tgfβ1刺激后，通过与对照(未刺激的)成纤维细胞相比αsma阳性细胞百分比的倍数变化来确定的。

图26.显示了抗il-11rα抗体在体外对人心房成纤维细胞中超il-11介导的il-11反式信号传导的抑制作用的柱状图，其是在抗il-11rα抗体存在下，用过量的il-11刺激后，通过与对照(未刺激的)成纤维细胞相比，细胞培养上清液中的mmp2含量的倍数变化来确定的。

图27.总结了抗il-11rα抗体的图24至26的倍数变化数据的图。编号为1至17的抗体候选物对应的克隆名称，如图23所示。工业标准是单克隆小鼠抗il-11igg2a；克隆#22626；目录号mab218；r&d系统，明尼苏达州，美国。

图28.显示了小梁切除术(滤过手术)后，il-11ra敲除对眼伤口愈合和纤维化的影响的照片。(a)滤过手术后7天，il-11ra+/+(wt)和il-11ra-/-(ko)动物的眼切片。(b)通过天狼星红/偏振光技术评估胶原蛋白纤维的成熟(等，1984，actamorpholhung32,47-55)；在wt小鼠中观察到比ko小鼠更多的纤维化。

图29.显示了il-11是tgfβ1在肝成纤维细胞中的促纤维化作用所必需的图。存在/不存在中和抗il-11抗体或同种型对照igg下，在有或没有tgfβ1刺激的情况下，以及通过分析(a)α-sma阳性细胞和(b)edu阳性细胞，(c)胶原蛋白阳性细胞和(d)骨膜素阳性细胞的比例，来测定与未刺激的细胞(基线)相比，原代人肝成纤维细胞的活化和增殖。[平均值±sd，dunnett]*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001或****p<0.0001。

图30.显示了il-11是tgfβ1在皮肤成纤维细胞中的促纤维化作用所必需的柱状图。在有或没有tgfβ1刺激的情况下，在存在/不存在中和抗il-11抗体的情况下，通过分析α-sma阳性细胞(活化的成纤维细胞)的百分比，测定小鼠皮肤成纤维细胞的活化。

图31.显示了有和没有il-11信号传导的肺成纤维细胞迁移的条形图。在没有刺激，或在tgfβ1或il-11存在下，在体外划痕试验中分析来自il-11ra+/+(wt)和il-11ra-/-(ko)动物的肺成纤维细胞的迁移。

图32.显示了响应于超il-11的成纤维细胞活化的图。用指定量(以ng/ml计)的超il-11或重组il-11刺激细胞，并通过分析α-sma阳性细胞的百分比来测定成纤维细胞活化。(a)和(b)显示了两个不同实验的结果。

图33.显示了原代成纤维细胞中超il-11诱导il-11的分泌的图。用超il-11刺激细胞，并在指定的时间点通过elisa在细胞培养上清液中测定il-11rna和天然il-11蛋白水平。

图34.显示了通过ique分析测定的小鼠抗il-11rα抗体与人il-11rα的结合的表和条形图。(a)总结了实验结果的表。(b)显示了相对于阳性对照抗flag抗体(100％)的结合强度的条形图；数字对应于图23中所示的克隆。

图35a和35b.显示了在肾纤维化小鼠模型中接受不同处理的小鼠肾切片的组织学分析结果的图像和图表。通过在载体(0.3mnahco3)小鼠中腹膜内(ip)注射叶酸(fa，180mg/kg)诱导肾纤维化；对照小鼠仅施用载体。从叶酸损伤后第1天开始，并且在实验中持续给小鼠施用同种型对照igg2(20mg/kg，每周3次，腹膜内)、抗il-11ra抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)。在叶酸诱导的肾损伤后28天处死动物并使用马森三色染色(masson'strichromestain)分析其组织纤维化。(35a)马森三色染色肾脏切片的图像。与看起来较亮的健康区域相比，含有胶原蛋白的纤维区域看起来更暗。(35b)显示了胶原蛋白面积占总肾面积的百分比(％)的半定量分析的图。与fa+igg，anova相比***，p<0.001。

图36.显示了在肾纤维化小鼠模型中接受不同处理的小鼠中的尿白蛋白/肌酸比率的图。通过在载体(0.3mnahco3)小鼠中腹膜内(ip)注射叶酸(fa，180mg/kg)诱导肾纤维化；对照小鼠仅施用载体。从叶酸损伤后第1天开始，并且在实验中持续给fa处理的小鼠施用同种型对照igg2(20mg/kg，每周3次，腹膜内)或抗il11ra抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)。将小鼠置于代谢笼中，并根据制造商的说明书使用商业测定法(abcam)测量尿肌酐和白蛋白。与fa+igg，anova相比***，p<0.001。

图37a和37b.显示了在急性肾损伤小鼠模型中接受不同处理的小鼠肾切片的组织学分析结果的图像和图表。(36a)通过假手术或输尿管输尿管治疗小鼠。小鼠接受igg、抗il-11ra抗体(在手术日的-1天、1天、3天、5天，20mg/kg)，并且在手术后第7天收获受损肾(uuoigg，il-11ra)或对侧(con)未受损肾(conigg，il-11)。(37b)在未知实验条件的情况下，通过管型、管萎缩或管状扩张的组织学分析进行管损伤的半定量评估(管损伤评分：0，无；1，最小；2，温和；3，中等；4，严重)。与uuoigg，anova相比，*p<0.05。

图38.显示了人肝脏样品的il-11的elisa蛋白质印迹结果的图。从接受肝脏手术的患者获得的肝脏样品用于蛋白质印迹分析。gapdh的印迹用作上样对照。来自正常人肝脏(nhl)的样品具有低水平的il-11蛋白，而来自患有纤维化肝病(包括酒精性肝病(ald)、原发性硬化性胆管炎(psc)、原发性胆汁性肝硬化(pbc)或非酒精性肝病脂肪性肝炎(nash))的患者的样品的il-11水平较高。

图39.显示了接受不同处理的人pcls分泌的il-11的elisa分析结果的条形图。

图40a和40b.显示了在心脏纤维化小鼠模型中接受不同处理的小鼠心脏纤维化的组织学分析结果的图像和柱状图。对小鼠(c57b16，雄性，8-12周龄)进行纤维化诱导的横向主动脉缩窄(tac)或假手术。tac处理的动物接受对照抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)或中和抗il-11ra抗体(20mg/kg，每周3次，腹膜内)。两周后获取心脏并使用马森三色染色(40a)评估纤维化程度。(40b)显示了使用quickzyme总胶原蛋白测定试剂盒(quickzyme生物科学)通过比色检测羟脯氨酸测定的心脏中总胶原蛋白的量。**，p<0.01；ns，相对sham(假手术)不显著。#，p<0.05，tac+igg对照对比tac+抗il11ra。ab，抗体。

实施例

在以下实施例中，发明人鉴定了il-11/il-11r信号传导在多种组织中的纤维化中的作用，并描述了抗人il-11rα抗体的产生，以及所述抗体的体外和体内的功能性特征。

实施例1：il-11/il-11r信号传导在纤维化中的作用

1.1il-11在纤维化中上调

为了解成纤维细胞向活化的肌成纤维细胞转变的分子过程，从新加坡国家心脏中心接受心脏搭桥手术的200多名患者中获得了心房组织。将细胞在体外低传代(传代<4)培养，并且不用tgfβ1刺激或用tgfβ1刺激24小时。我们随后对未受刺激的成纤维细胞和用原代促纤维化刺激tgfβ1刺激的细胞进行了高通量rna测序(rna-seq)分析，分析了160个个体；平均读取深度为每个样品约70m读数(配对末端100bp；图1)。

为了确保心房成纤维细胞培养物的纯度，我们在rna-seq数据集中分析了来自心房的内皮细胞、心肌细胞和成纤维细胞类型标记基因的表达(hsu等，2012circulationcardiovascgenetics5,327-335)。

结果显示在图2a至2e中，并证实了心房成纤维细胞培养物的纯度。

对原始组织(人心房组织样品，n＝8)和原代、未刺激的成纤维细胞培养物通过rna-seq测定基因的表达。在成纤维细胞培养物样品中检测到内皮细胞标记物pecam1(图2a)和心肌细胞标记物myh6(图2b)和tnnt2(图2c)的无表达/非常低表达。与原始组织相比，成纤维细胞col1a2(图2d)和acta2(图2e)的标记物高度表达。

接下来，分析rna-seq数据以鉴定在用tgfβ1刺激后其表达增加或减少的基因，并且该信息与gtex项目提供的35+人组织中的大rna-seq数据集整合(gtex联盟，2015science348,648-660)。这使得能够鉴定对成纤维细胞-肌成纤维细胞转变特异的基因表达特征。

结果显示在图3a至3e中。在成纤维细胞中表达的10000多个基因中，il-11是响应tgfβ1刺激的最强烈上调的基因，并且在160个个体的平均上调超过10倍(图3b)。

通过elisa分析证实了tgfβ1刺激后的成纤维细胞的细胞培养上清液中的il-11的表达上调(图3c)。与健康个体的其他组织中il-11的表达水平相比，观察到该反应对活化的成纤维细胞高度特异(图3d)。通过qpcr分析也证实了il-11rna表达的各种倍数变化(图3e)。

接下来，体外培养成纤维细胞，并用其他几种已知的促纤维化因子刺激：et-1、angii、pdgf、osm和il-13，以及人重组il-11。为了分析响应于il-11刺激产生的il-11的上调，确认了elisa仅能检测出从细胞分泌的天然il-11，并且不检测用于刺激的重组il-11(图4b)。

结果如图4a所示。发现每种因子显著诱导成纤维细胞分泌il-11。结果显示il-11在成纤维细胞的自分泌环中起作用，其可在72小时后引起il-11蛋白的上调多达100倍(图4d)。

有趣的是，il-11的这种自分泌环类似于il-6的自分泌产生。il-6来自相同的细胞因子家族，并且也通过gp130受体发出信号(garbers和scheller，2013biolchem394，1145-1161)，其被提出用于确保肺癌和乳腺癌细胞的持续存活和生长(grivennikov和karin，2008cancercell13，7-9)。

未检测到响应于il-11刺激的il-11rna水平的增加(图4d)。tgfβ1在rna和蛋白水平均增加il-11表达，而il-11与tgfβ1不同，il-11似乎仅在转录后水平上调il-11表达。

1.2il-11在心脏组织纤维化中具有促纤维化作用

为了研究il-11的自分泌产生是促纤维化还是抗纤维化的，用重组il-11体外培养成纤维细胞，并分析肌成纤维细胞(αsma-阳性细胞)的部分和细胞外基质产量。

用operetta高内涵成像系统以自动化、高通量方式监测αsma、胶原蛋白和骨膜素的表达。同时，通过elisa测定分析纤维化标记蛋白如mmp2、timp1和il-6的分泌，并通过天狼猩红分析确认细胞培养上清液的胶原蛋白水平。

简而言之，将来自3个个体的心房成纤维细胞分别在不刺激、用tgfβ1(5ng/ml)刺激或用il-11(5ng/ml)刺激的条件下，在2个孔中孵育24小时。孵育后，将细胞染色以分析α-sma含量以估测肌成纤维细胞的比例，并评估胶原蛋白和骨膜素以估测ecm的产量。每孔取7个视野测定荧光。还通过天狼星红染色评估每个个体的2个孔的上清液的胶原蛋白含量。将没有刺激的情况下的信号归一化作为对照组。通过elisa分析纤维化标志物il-6、timp1和mmp2的分泌。

结果显示在图5a至5f中。tgfβ1激活成纤维细胞并增加ecm产量(图5a)。出乎意料的是，与科学文献中所描述的心脏组织中il-11的抗纤维化作用相反，重组il-11引起成纤维细胞培养物中肌成纤维细胞比例的增加，并以tgfβ1相同的程度促进细胞外基质蛋白胶原蛋白和骨膜素的产生(图5a)。il-11和tgfβ1细胞因子也显著增加促纤维化标志物il-6、timp1和mmp2的分泌(图5b至5e)，并且达到相似水平。

本发明人推断，目前所发现的il-11在心脏组织中是促纤维化的，这与文献中描述的抗纤维化作用之间的矛盾可能与之前研究中在啮齿动物中的人il-11的使用有关(obana等，2010，2012；stangou等，2011；trepicchio和dorner，1998)。

为了研究该推断，进行人和小鼠il-11的连续稀释，并监测人心房成纤维细胞的活化(图5f)。在低浓度的人il-11对小鼠细胞的处理中未观察到成纤维细胞的活化，表明先前对il-11功能的结论可能部分归因于il-11的非特异性表现。

1.3il-11/il-11r信号传导在多种组织的纤维化中具有促纤维化作用

为了测试il-11/il-11r信号传导的促纤维化作用是否对心房成纤维细胞具有特异性，体外培养了来自几种不同组织(心脏、肺、皮肤、肾和肝)的人成纤维细胞，用人il-11刺激，如上所述分析成纤维细胞的活化和ecm的产量。与源自所分析的每种组织的成纤维细胞的未经刺激的培养物相比，观察到成纤维细胞的活化和ecm的产量增加。

1.3.1肝纤维化

为了测试il-11信号传导在肝纤维化中的重要性，将人原代肝成纤维细胞中(cellbiologics，cat#：h-6019)以较少传代数的细胞在96孔板的孔中培养，分别不刺激、用tgfβ1(5ng/ml，24h)刺激、用il-11(5ng/ml，24h)刺激，或与tgfβ1孵育(5ng/ml)和中和il-11抗体(2μg/ml)共同孵育，或与tgfβ1(5ng/ml)和同种型对照抗体共同孵育。使用operetta平台分析成纤维细胞活化(αsma阳性细胞)、细胞增殖(edu阳性细胞)和ecm产量(骨膜素和胶原蛋白)。

原代人肝成纤维细胞的实验结果显示在图29a至29d中。发现il-11激活肝成纤维细胞，并且发现il-11信号传导对于肝成纤维细胞中tgfβ1的促纤维化作用是必需的。通过中和抗il-11抗体抑制成纤维细胞的活化和增殖。

1.3.2皮肤纤维化

为了测试il-11信号传导在皮肤纤维化中是否重要，将原代小鼠皮肤成纤维细胞以较少传代数的细胞在96孔板的孔中培养，分别不刺激、用tgfβ1(5ng/ml，24h)刺激，或与tgfβ1(5ng/ml)和中和il-11抗体(2μg/ml)两者一起孵育24小时。然后使用operetta平台分析成纤维细胞活化(αsma阳性细胞)。

结果如图30所示。通过中和抗il-11抗体抑制tgfβ1介导的皮肤成纤维细胞活化。

1.3.3多器官纤维化

接下来，将小鼠重组il-11(100μg/kg，3天/周，28天)注射到小鼠中以测试il-11是否可以在体内引起全身组织纤维化。

结果如图6所示。与注射angii(导致血压升高和心脏肥大的细胞因子)相比，il-11不仅增加了心脏重量，但也增加了体重指数中的肾、肺和肝重量(图6b)。通过羟脯氨酸测定评估的这些过程中的胶原蛋白的含量揭示了这些组织中胶原蛋白产量的上调，表明纤维化是器官重量增加的可能原因(图6c)。从这些动物的心脏、肾、肺和肝组织中分离的rna中，通过qpcr分析也检测出纤维化标志物基因acta2(＝αsma)、col1a1、col3a1、fn1、mmp2和timp1的表达。

实施例2：il-11/il-11r拮抗作用的治疗潜力

2.1使用il-11/il-11r的中和拮抗剂抑制纤维化反应

接下来，研究了tgfβ1对成纤维细胞的促纤维化作用是否需要il-11分泌的自分泌环。

使用市售的中和抗体(单克隆鼠igg2a；clone#22626；目录号mab218；r&d系统，明尼苏达州，美国)抑制il-11/il-11r信号传导。在存在或不存在抗体的情况下用tgfβ1处理成纤维细胞，并测定成纤维细胞活化、增殖细胞的比例和ecm产量的比例以及纤维化反应的标志物。

简而言之，将来自3个个体的心房成纤维细胞与tgfβ1(5ng/ml)孵育24小时，或在中和抗il-11抗体或同种型对照抗体的存在下与tgfβ1孵育24小时。孵育后，对细胞进行αsma染色以确定肌成纤维细胞的比例，通过分析细胞的edu掺入来确定增殖细胞的比例，并测量骨膜素以确定ecm产量。使用operetta平台测量每个个体的2个孔中的14个视野的荧光。还通过elisa分析纤维化标志物il-6、timp1和mmp2的分泌。在没有刺激的情况下将荧光标准化为对照组。

结果显示在图7a至7f中。发现il-11抑制改善tgfβ1诱导的纤维化，并且结果显示il-11/il-11r信号传导对tgfβ1的促纤维化作用是必需的。发现il-11/il-11r信号传导的抑制在蛋白水平上“拯救”tgfβ1表型。

还分析了胶原蛋白的产生。将来自3个个体的心脏成纤维细胞与tgfβ1(5ng/ml)共同孵育24小时或与tgfβ1和中和抗il-11抗体共同孵育24小时。孵育后，使用operetta测定法对细胞进行胶原蛋白染色，并如上所述定量测定荧光。通过天狼星红染色评估细胞培养上清液中分泌的胶原蛋白水平。

结果显示在图8a和8b中，并证实了使用中和抗体抑制il-11/il-11r信号传导的抗纤维化作用。

接下来，使用上文所述的心房成纤维细胞、tgfβ1诱导的肌成纤维细胞转换测定法体外分析几种其他il-11/il-11r拮抗剂抑制纤维化的能力。

简言之，在存在/不存在以下物质的情况下，用tgfβ1(5ng/ml)刺激24小时或不刺激的情况下，体外培养人心房成纤维细胞：(i)中和抗il-11抗体，(ii)il-11ra-gp130融合蛋白，(iii)中和抗il-11rα抗体，(iv)用针对il-11的sirna处理或(v)用针对il-11ra的sirna处理。通过如上所述评估αsma含量来分析活化的成纤维细胞(肌成纤维细胞)的比例。

结果如图9所示。发现il-11/il-11r信号传导的每种拮抗剂都能够消除tgfβ1介导的促纤维化反应。

实施例3：体内确认il-11/il-11r信号传导的促纤维化作用

3.1使用源自il-11ra基因敲除小鼠的细胞的体外研究

将所有小鼠饲养并置于同一房间内，随意提供食物和水。缺乏il-11rα功能性等位基因的小鼠(il-11ra1ko小鼠)处于c57bl/6遗传背景上。小鼠为9-11周龄，动物体重没有显着差异。

为了进一步证实抑制il-11/il-11r信号传导的抗纤维化作用，从il-11ra基因敲除小鼠产生原代成纤维细胞，并与从il-11ra+/+(即野生型)、il-11ra+/-(即杂合敲除)和il-11ra-/-(即纯合敲除)动物收获的原代成纤维细胞，以及tgfβ1、il-11或angii一起孵育。分析成纤维细胞的活化和增殖以及ecm的产量。

将衍生自il-11ra+/+、il-11ra+/-和il-11ra-/-小鼠的成纤维细胞与tgfβ1、il-11或angii(5ng/ml)一起孵育24小时。孵育后，对细胞进行αsma含量染色以估测肌成纤维细胞的比例，edu用于鉴定增殖细胞的比例，以及胶原蛋白和骨膜素用于估计ecm产量。使用operetta平台测量荧光。

结果显示在图10a至10d中。发现il-11ra-/-小鼠对促纤维化刺激没有反应。这些结果表明il-11/il-11r信号传导也是angii诱导的纤维化所必需的。

接下来，研究了其他促纤维化细胞因子是否也是如此。

简而言之，在存在/不存在各种不同的促纤维化因子(ang2、et-1或pdgf)的情况下，在存在/不存在中和抗il-11抗体或泛抗tgfβ的情况下，体外培养成纤维细胞。24小时后，通过使用如上所述的operetta系统进行分析来确定细胞的胶原蛋白产量，并通过如上所述的αsma表达分析来确定肌成纤维细胞的产量。

结果显示在图11a和11b中。发现il-11/il-11r信号传导是各种促纤维化刺激下游纤维化所必需的，因此被鉴定为由各种不同促纤维化因子诱导的纤维化的中枢介质。

在进一步的实验中，使用肺成纤维细胞迁移的体外划痕测定法研究了il-11信号传导在肺纤维化中的作用。响应于促纤维化刺激，成纤维细胞被激活并在体内的纤维化生态位内迁移。细胞的迁移率是细胞-细胞和细胞-基质相互作用的量度，并且是体内伤口愈合的模型(liang等，2007；natprotoc.2(2)：329-33)。

来自野生型(wt)和纯合il-11ra(-/-)敲除小鼠的肺组织的成纤维细胞的较少传代数的细胞在塑料表面上生长，直到它们形成均一的细胞单层。然后在细胞层中产生划痕，并且在没有刺激、或在tgfβ1或il-11的存在下，监测接近划痕的细胞迁移。在紧接着创建划痕之后和创建划痕后24小时的两个时间点处，捕获图像用于确定细胞覆盖的区域，并且比较wt和ko成纤维细胞之间的迁移速率。将细胞迁移(24小时后细胞覆盖的划痕区域)标准化为没有刺激的wt细胞的迁移速率。

结果如图31所示。结果显示源自wt小鼠的肺成纤维细胞在tgfβ1和il-11存在下迁移更快，这表明两种细胞因子在肺成纤维细胞中的促纤维化作用。与wt细胞相比，来自ko小鼠的缺乏il-11信号传导的细胞迁移更慢。它们在tgfβ1存在下也不会更快迁移。划痕分析显示缺乏il-11信号传导的肺成纤维细胞在tgfβ1或il-11存在下和基线时均具有降低的细胞迁移率。因此，il-11信号传导的抑制在肺中是抗纤维化的。

3.2心脏纤维化

在体内研究了il-11抑制治疗纤维化疾病的功效。通过用angii处理诱导纤维化的心脏纤维化的小鼠模型用于研究il-11ra-/-小鼠是否被保护以免于心脏纤维化。

简而言之，植入泵，用angii(2mg/kg/天)处理野生型(wt)il-11ra(+/+)和敲除(ko)il-11ra(-/-)小鼠28天。在实验结束时，使用基于量热的羟脯氨酸的测定试剂盒评估在小鼠的心房中胶原蛋白的含量，并且通过qpcr分析纤维化标志物col1a2、αsma(acta2)和纤连蛋白(fn1)的rna表达水平。

结果显示在图12a至12d中。发现il-11ra-/-小鼠免受angii的促纤维化作用。

3.3肾纤维化

通过在腹膜内注射溶于载体(0.3mnahco3)中的叶酸(180mg/kg)，在野生型(wt)il-11ra(+/+)和敲除(ko)il-11ra(-/-)小鼠中建立用于肾纤维化的小鼠模型；对照小鼠仅被施用载体。

在注射后28天取出肾脏，称重并固定在10％中性缓冲的福尔马林中，以用于马森三色染色和天狼星染色，或快速冷冻以用于胶原蛋白测定、rna和蛋白质研究。

使用trizol试剂(英杰公司)和凯杰tissuelyzer方法从快速冷冻的肾中提取总rna，然后进行rneasy柱(凯杰公司)纯化。根据制造商的说明书，使用iscripttmcdna合成试剂盒制备cdna，其中每个反应含有1μg总rna。使用steponeplustm(美国应用生物系统公司)在40个循环中使用taqman(美国应用生物系统公司)或快速sybrgreen(凯杰公司)技术对一式三份的样品进行定量rt-pcr基因表达分析。将表达数据标准化为gapdhmrna表达水平，并且我们使用2-δδct方法来计算倍数变化。通过在浓度为50mg/ml(95℃，20小时)的6mhcl中加热使快速冷冻的肾脏进行酸水解。根据制造商的说明书，使用quickzyme全胶原蛋白测定试剂盒(quickzyme生物科技)，基于羟脯氨酸的比色法，定量检测水解产物中总胶原蛋白的量。

分析结果如图15所示。结果显示叶酸诱导的肾纤维化依赖于il-11介导的信号传导。在il-11ra+/+小鼠中观察到肾组织中胶原蛋白含量的显著增加，表明存在肾纤维化。在il-11ra-/-小鼠中未观察到胶原蛋白含量的显著增加。与野生型动物相比，在毒性损伤后，缺乏il-11信号传导的动物肾脏中的胶原蛋白沉积显著减少。

3.4肺纤维化

在使用il-11ra-/-敲除小鼠的进一步体内模型中，il-11被确认为肺、皮肤和眼纤维化的关键介质。实验的示意图显示在图13a至13c中。

为了分析肺纤维化，在第0天通过气管内施用博来霉素来处理il-11ra-/-小鼠和il-11ra+/+小鼠，以在肺中建立纤维化反应(肺纤维化)。在21天发展为肺纤维化，此时处死动物并分析具有和不具有il-11信号传导的动物之间纤维化标志物的差异。与il-11ra+/+小鼠相比，il-11ra-/-小鼠在肺组织中的纤维化反应降低，这可通过纤维化标志物的表达降低来证明。

3.5皮肤纤维化

为了分析皮肤的纤维化，在第0天通过皮下施用博来霉素来处理il-11ra-/-小鼠和il-11ra+/+小鼠，以在皮肤中建立纤维化反应。在28天发展为皮肤纤维化，此时处死动物并分析具有和不具有il-11信号传导的动物之间纤维化标志物的差异。与il-11ra+/+小鼠相比，il-11ra-/-小鼠在皮肤组织中的纤维化反应降低，这可通过纤维化标志物的表达降低来证明。

3.6眼纤维化

为了分析眼的纤维化，在第0天使il-11ra-/-小鼠和il-11ra+/+小鼠接受小梁切除术(滤过手术)以在眼中引发伤口愈合反应。这种青光眼过滤手术小鼠模型已被证明是评估眼内伤口愈合反应的有效模型(khaw等，2001，curropinophthalmol12，143–148；seet等，2011，mol.med.17，557-567)，并且已经成功地显示了体内纤维化调节剂的有益效果(mead等，2003，invest.ophthalmol.vis.sci.44，3394-3401；wong等，2003invest.ophthalmol.vis.sci.44，1097-1103；wong等，2005，invest.ophthalmol.vis.sci.46：2018-2022)。

简而言之，解剖结膜以暴露下面的巩膜，之后使用30号针头通过巩膜切入眼睛的前房。产生的瘘管允许房水进入结膜和结膜下面。然后通过10-0(0.2公制)爱惜良(ethilon)黑色单丝尼龙巩膜缝合线将切开的结膜固定并闭合在角膜缘上。在手术结束时滴注了夫司名(fucithalmic)软膏。在麻醉下进行手术，通过腹膜内注射0.1ml氯胺酮/甲苯噻嗪混合物，并且每眼局部施用一滴1％的利多卡因。手术后滴入夫司名软膏以预防感染。用70％丙醇灭菌的手术剪刀和镊子和无菌针头进行手术。

观察到缝合结膜下面积聚的液体为结膜泡。在手术后第7天对小鼠实施安乐死以进行分析。对于定性免疫组织学分析，通过去核来获得来自小鼠的眼，然后切片。使用天狼星红/偏振光技术评估胶原蛋白纤维的成熟(等，1984，actamorpholhung32,47-55)；橙红色表示成熟胶原蛋白，黄色/绿色表示新形成的未成熟胶原蛋白。

实验结果如图28a和28b所示。与il-11ra+/+小鼠相比，发现il-11ra-/-小鼠在眼组织中的纤维化反应降低。

3.7其他组织

本发明人还在用于其他组织(例如肝、肠)的纤维化的小鼠模型中分析il-11ra敲除对纤维化的影响，并且还在与多器官(即全身)纤维化相关的模型中进行分析。测量纤维化反应并在il-11ra-/-小鼠和il-11ra+/+小鼠之间进行比较。与il-11ra+/+小鼠相比，il-11ra-/-小鼠的纤维化反应降低，这可通过纤维化标志物的表达降低来证明。

实施例4：分析il-11介导的纤维化诱导的分子机制

il-11的经典作用模式被认为是通过stat3介导的转录调节rna表达(zhu等，2015plosone10，e0126296)，并且还通过激活erk。

在用il-11刺激后观察到stat3活化。然而，当成纤维细胞与tgfβ1一起孵育时，仅观察到经典smad途径和erk途径的活化，并且未观察到stat3的活化，尽管il-11响应于tgfβ1而被分泌。只有erk活化在tgfβ1和il-11信号转导中都有。

先前已经描述了tgfβ1和il-6信号传导之间的串扰，其中tgfβ1阻断il-6对stat3的活化(walia等，2003fasebj.17，2130-2132)。鉴于il-6和il-11之间的密切关系，可以观察到il-11介导的信号传导的类似串扰。

本发明人通过rna-seq分析研究了rna丰度的调节是否是对il-11应答的纤维化标志物蛋白表达增加的潜在机制(这表明stat3是il-11介导的促纤维化过程的潜在信号传导途径)。将成纤维细胞在没有刺激的情况下或在tgfβ1、il-11或tgfβ1和il-11的存在下孵育24小时。

结果如图14a所示。tgfβ1在rna水平诱导胶原蛋白、acta2(αsma)和其他纤维化标志物的表达。然而，il-11并未调节这些基因的表达，而是一组不同的基因。

基因本体分析表明成纤维细胞中的促纤维化作用是由il-11调节的rna表达驱动的。tgfβ1和il-11均在rna水平上调节几乎完全不同类的基因。

虽然tgfβ1增加il-11分泌，但当tgfβ1和il-11都存在时，il-11的靶基因不受调节。这表明tgfβ1上调il-11并同时通过stat3阻断经典的il-11驱动的rna表达调控，这类似于已知的tgfβ1和il-6途径的相互作用(walia等，2003fasebj.17,2130-2132)。

通过分析与il-11ra+/+小鼠相比，il-11ra-/-小鼠获得的成纤维细胞中rna表达的变化，我们还分析了tgfβ1诱导的rna表达差异是否依赖于il-11信号传导。当用tgfβ1刺激il-11ra敲除细胞时仍观察到由tgfβ1调节的rna表达，并且在缺乏il-11信号传导(在il-11ra-/-成纤维细胞中)时，αsma、胶原蛋白等的rna水平仍然上调。当体外研究il-11的促纤维化作用和il-11抑制的抗纤维化作用时，仅在蛋白水平观察到纤维化标志物的表达降低，而不是通过定量pcr测定的转录水平中观察到的。

已知非经典途径的激活(例如erk信号转导)对于tgfβ1的促纤维化作用至关重要(guo和wang，2008cellres19，71-88)。对于所有已知的促纤维化细胞因子的信号传导，非经典途径可能是重要的，并且il-11是对纤维化必不可少的转录后调节因子。

实施例5：抗人il-11rα抗体

如下产生针对人il-11rα蛋白的小鼠单克隆抗体。

将编码人il-11rα氨基酸的cdna克隆到表达质粒(阿弗隆公司-aldevrongmbh，弗莱堡，德国)中。

通过使用用于粒子轰击的手持装置(“基因枪”)皮内施用dna包被的金颗粒来免疫小鼠。在一系列免疫后从小鼠收集血清样品，并在流式细胞仪上测试经人il-11rα表达质粒瞬时转染的hek细胞(通过瞬时转染hek细胞在细胞表面表达的人il-11rα用抗体确认，所述抗体识别添加到il-11rα蛋白的n末端的标签)。

按照标准程序，从小鼠分离抗体生成细胞，并与小鼠骨髓瘤细胞(ag8)融合。

通过流式细胞术筛选结合表达il-11rα的hek细胞的能力，以鉴定产生对il-11rα特异性的抗体的杂交瘤。

使用rna保护剂制备阳性杂交瘤细胞的细胞沉淀(rnalater，货号#am7020，赛默飞世尔科技)并进一步处理以测定抗体的可变结构域。

根据制造商的说明书，使用终止子v3.1循环测序试剂盒(life)进行测序。使用3730xldna分析仪系统和统一数据收集软件(life)收集所有数据。使用codoncode校准器(codoncode公司)进行序列组装。通过自动将最普遍的碱基信号分配给混合碱基信号来识别混合碱基信号。普遍性由碱基信号的频率和碱基信号的各自质量决定。

总共产生17种小鼠单克隆抗人il-11rα抗体克隆(图23)；克隆bso-1e3、bso-2c1、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11、bso-13b10、bsw-1d3、bsw-1f6、bsw-4g5、bsw-6h3、bsw-7e9、bsw-7g8、bsw-7h8和bsw-8b7。

通过使用vbase2软件分析确定lc-cdr1-3和hc-cdr1-3，确定抗体克隆bso-1e3、bso-2e5、bso-4g3、bso-5e5、bso-7g9、bso-9a7、bso-10d11和bso-13b10的vl和vh结构域序列，如图16和17所示(http://www.vbase2.org/；retter等，nucl.acidsres.(2005)33(suppl1)：d671-d674)。

获得了bso-1e3(bso-1e3_1和bso-1e3_2)的两个vh和vl序列。

实施例6：抗人il-11rα抗体的功能表征

6.1抑制人il-11/il-11r介导的信号传导的能力

为了研究抗il-11rα抗体中和人il-11/il-11r介导的信号传导的能力，在存在或不存在抗il-11rα抗体的情况下，在tgfβ1(5ng/ml)存在下，在96孔板的孔中培养心房心肌成纤维细胞24小时。这种促纤维化刺激促进il-11的表达，这反过来驱使静息成纤维细胞转变为活化的αsma阳性成纤维细胞。先前已经表明，中和il-11可防止tgfβ1诱导的向活化的αsma阳性成纤维细胞的转变。

将抗il-11rα抗体(2μg/ml)加入用tgfβ1刺激的成纤维细胞培养物中，并且在24小时培养期结束时，测定αsma阳性成纤维细胞的百分比。基于在未用tgfβ1刺激的成纤维细胞培养物中观察到的αsma阳性成纤维细胞的百分比，将次百分比标准化。

用operetta高内涵成像系统以自动化高通量方式分析αsma的表达。

结果显示在图24和27中。在不存在抗il-11rα抗体的情况下，用tgfβ1刺激引起在24小时培养期结束时，αsma阳性、活化的成纤维细胞数量增加1.58倍。

实验包括使用商业化单克隆小鼠抗il-11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；目录号mab218；r&d系统，明尼苏达州，美国)作为对照。发现该抗体能够在未经刺激的培养物中(即在没有用tgfβ1刺激的情况下)将活化的成纤维细胞的百分比降低至其0.89倍。

发现抗il-11rα抗体能够抑制人成纤维细胞中的il-11/il-11r信号传导，并且一些抗体能够比单克隆小鼠抗il-11抗体：bso-1e3、bso-5e5和bso-13b10更大程度抑制il-11/il-11r信号传导。

6.2抑制小鼠il-11介导的信号传导的能力

还按照与上文6.1部分中描述的相同步骤，研究了抗il-11rα抗体抑制小鼠il-11介导的信号传导的能力，但使用小鼠心房成纤维细胞代替人心房成纤维细胞。

结果显示在图25和27中。在不存在抗il-11rα抗体的情况下，用tgfβ1刺激引起在24小时培养期结束时，αsma阳性、活化的成纤维细胞数量增加2.24倍。

实验包括使用商业化单克隆小鼠抗il-11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；目录号mab218；r&d系统，明尼苏达州，美国)作为对照。发现该抗体能够在未经刺激的培养物中(即在没有用tgfβ1刺激的情况下)将活化的成纤维细胞的百分比降低至其1.44倍。

发现抗il-11rα抗体能够抑制小鼠成纤维细胞中的il-11/il-11r信号传导，并且一些抗体能够比单克隆小鼠抗il-11抗体：bso-1e3、bso-2c1、bso-5e5、bso-9a7和bso-13b10更大程度抑制il-11/il-11r信号传导。

6.3il-11与il-11rα的复合物抑制il-11反式信号传导的能力

反式信号传导被认为是il-6信号传导的一个主要方面，其中il-6和可溶性il-6rα的复合物可以激活表达gp130但缺乏il-6受体的细胞(hunter和jones，2015natureimmunology16，448-457)。

最近有人提出，il-11和可溶性il-11ra的复合物的反式信号传导对il-11生物学功能也很重要(lokau等，cellreports(2016)14，1761-1773)。使用il-11和il-11rα的重组融合蛋白(如pflanz等，febslett(1999)450：117-122中所描述)，筛选抗il-11抗体抑制由il-11：il-11rα复合物介导的反式信号传导的能力。

重要的是，能够同时抑制经典il-11介导的信号传导和il-11：il-11rα复合物的il-11反式信号传导的抗体，能够抑制所有已知的il-11/il-11r信号传导模式。

il-11：il-11rα融合蛋白(以下称为超il-11)由与il-11连接的il-11受体α(il-11rα)的细胞外结构域构成。

发现超il-11是比重组il-11蛋白更有效的人成纤维细胞活化剂。简而言之，在两个单独的实验中，在没有刺激的情况下(基线)、在不同量的超il-11(0.008ng/ml、0.04ng/ml、0.2ng/ml、1ng/ml和5ng/ml)存在下、或在从商业来源获得的5ng/ml重组人il-11存在下，培养人成纤维细胞，并通过测定如本文所述的αsma阳性细胞的百分比来分析成纤维细胞的活化。结果显示在(图32a和32b)中。超il-11以剂量依赖性方式激活成纤维细胞，并且是比il-11更有效的激活剂。

il-11：il-11rα融合蛋白如下制备：

·将编码il-11：il-11rα融合蛋白的dna(即seqidno：98)克隆到ptt5载体中，并在无血清freestyletm293表达培养基(赛默飞世尔科技)的培养物中转染到293-6e细胞中。

·将细胞在轨道振荡器(vwr科技)上维持于37℃、5％co2的锥形瓶(corning公司)中。

·在第6天收集细胞培养上清液用于纯化。

·将细胞培养上清液上样到亲和纯化柱上。

·洗涤并用适当的缓冲液洗脱后，合并洗脱的级分并将缓冲液更换为最终的制剂缓冲液。

·通过sds-page、western印迹分析纯化的il-11：il-11rα融合蛋白，以确认分子量和纯度。

编码il-11：il-11rα融合蛋白的dna(seqidno：98)：

gaattcccgccgccaccatgggctggtcctgcatcatcctgtttctggtggccacagccaccggcgtgcactctccacaggcttggggacctccaggcgtgcagtatggccagcctggcagatccgtgaagctgtgctgtcctggcgtgacagctggcgaccctgtgtcctggttcagagatggcgagcccaagctgctgcagggcccagattctggactgggccacgaactggtgctggcccaggccgattctaccgacgagggcacctacatctgccagaccctggatggcgccctgggcggaacagtgacactgcagctgggctaccctcccgccagacctgtggtgtcttgtcaggccgccgactacgagaacttcagctgcacatggtcccccagccagatcagcggcctgcccaccagatacctgaccagctaccggaagaaaaccgtgctgggcgccgacagccagagaagaagcccttctacaggcccctggccctgccctcaggatcctctgggagctgccagatgtgtggtgcacggcgccgagttctggtcccagtaccggatcaacgtgaccgaagtgaaccccctgggcgcctccacaagactgctggatgtgtccctgcagagcatcctgcggcccgatcctccacagggcctgagagtggaaagcgtgcccggctaccccagaaggctgagagccagctggacataccccgcctcttggccttgccagccccacttcctgctgaagtttcggctgcagtaccggccagcccagcaccctgcttggagcacagtggaacctgccggcctggaagaagtgatcacagacgccgtggccggactgcctcatgctgtgcgggtgtccgccagagactttctggatgccggcacctggtctacctggtccccagaagcctggggcacaccttctactggcggacctgctggacagtctggcggaggcggaggaagtggcggaggatcagggggaggatctgtgcctggacctcctccaggaccccctagagtgtccccagatcctagggccgagctggactctaccgtgctgctgaccagatccctgctggccgacacaaggcagctggctgcccagctgagagacaagttccccgccgacggcgaccacaacctggatagcctgcctaccctggccatgtctgctggcgcactgggggctctgcagctgcctggggtgctgactagactgagagccgacctgctgagctacctgcggcatgtgcagtggctgagaagggctggcggcagcagcctgaaaaccctggaacctgagctgggcacactgcaggccagactggacagactgctgcgcagactgcagctgctgatgagcagactggctctgccccagcctcctcctgaccctcctgctcctccactggctcctccaagctctgcttggggcggaattagagccgcccacgccattctgggaggcctgcacctgacactggattgggcagtgcggggcctgctgctgctgaaaaccagactgcaccaccaccatcaccactgataagctt

il-11：il-11rα融合蛋白的氨基酸序列(seqidno：99)：

mgwsciilflvatatgvhspqawgppgvqygqpgrsvklccpgvtagdpvswfrdgepkllqgpdsglghelvlaqadstdegtyicqtldgalggtvtlqlgypparpvvscqaadyenfsctwspsqisglptryltsyrkktvlgadsqrrspstgpwpcpqdplgaarcvvhgaefwsqyrinvtevnplgastrlldvslqsilrpdppqglrvesvpgyprrlraswtypaswpcqphfllkfrlqyrpaqhpawstvepagleevitdavaglphavrvsardfldagtwstwspeawgtpstggpagqsgggggsgggsgggsvpgpppgpprvspdpraeldstvlltrslladtrqlaaqlrdkfpadgdhnldslptlamsagalgalqlpgvltrlradllsylrhvqwlrraggsslktlepelgtlqarldrllrrlqllmsrlalpqpppdppapplappssawggiraahailgglhltldwavrgllllktrlhhhhhh

通过elisa测定，体外培养并用超il-11刺激的成纤维细胞显示上调il-11蛋白表达(图33)。有趣的是，未检测到响应于用超il-11刺激的il-11rna水平的增加。与在rna和蛋白水平上增加il-11表达的tgfb1不同，超il-11似乎仅在转录后在蛋白水平上调il-11表达。

研究了由小鼠抗il-11rα抗体抑制超il-11介导的信号传导的能力。

在存在抗il-11rα抗体(2μg/ml)或同种型对照抗体的情况下，将人心房成纤维细胞与超il-11(0.2ng/ml)一起温育24小时。温育后，分析细胞培养上清液的mmp2。与未刺激的培养物相比，用超il-11刺激引起mmp2分泌的增加。

实验结果如图26和27所示。发现抗il-11rα抗体能够中和由超il-11介导的信号传导(即il-11反式信号传导)，并且发现几种抗体能够比商业化单克隆小鼠抗il-11抗体(单克隆小鼠igg2a；克隆#22626；目录号mab218；r&d系统，明尼苏达州，美国)：bso-1e3(ra1)、bso-2e5(ra3)、bso-5e5(ra5)、bso-9a7(ra7)、bso-13b10(ra9和bsw-1f6(ra11)，在更大程度上抑制反式信号传导。

克隆bso-1e3(ra1)、bso-5e5(ra5)、bso-9a7(ra7)、bso-13b10(ra9)被鉴定为可进一步开发的有潜力的候选物(在图27中突出显示)，显示出良好的同时抑制人和小鼠il-11/il-11r信号传导的能力，以及对il-11反式信号传导的良好抑制。

6.4筛选结合il-11rα的能力

亚克隆产生抗人il-11rα抗体的小鼠杂交瘤，并通过“混合测量”ique测定法分析来自亚克隆杂交瘤的细胞培养上清液，以分析(i)与人il-11rα结合的能力，和(ii)il-11rα以外的抗原的交叉反应性。

简言之，标记的对照细胞(在细胞表面不表达il-11rα)和在其表面表达人il-11rα的未标记的靶细胞(用编码带有flag标签的人il-11rα的质粒瞬时转染后)与细胞培养上清液(含有小鼠抗il-11rα抗体)和二级检测抗体(荧光标记的抗小鼠igg抗体)混合。

然后使用htfc筛选系统(ique)分析两种标记(即细胞标记和二抗上的标记)的细胞。在未标记的表达il-11rα的细胞上检测第二抗体的结果表明小鼠抗il-11rα抗体结合il-11rα的能力。在标记的对照细胞上检测第二抗体的结果表明小鼠抗il-11rα抗体对il-11rα以外的靶标的交叉反应性。

作为阳性对照条件，将标记的和未标记的细胞与作为一级抗体的小鼠抗flag标签抗体一起孵育。

结果显示在图34a和34b中。大多数亚克隆的杂交瘤表达能够与人il-11rα结合的抗体，并且以高特异性识别该靶标。发现亚克隆bso-1e3产生的抗体不与人il-11rα结合。

抗体bso-2c1和bso-9a7显示出与il-11rα结合的信号比阳性对照抗标签抗体对标签的的信号更强，这表明这些抗体以非常高的亲和力结合il-11rα。

6.5对人il-11rα的抗体亲和力分析

通过elisa测定分析抗人il-11rα抗体与人il-11rα结合的亲和力。

从金斯瑞生物科技有限公司获得重组人il-11rα，并且从西格玛公司获得辣根过氧化物酶(hrp)缀合的抗人igg(fc特异性)抗体。康宁96孔elisa板获自西格玛公司。pierce3,3'，5,5'-四甲基联苯胺(tmb)elisa底物试剂盒得自life科技公司(0.4g/mltmb溶液，0.02％过氧化氢的柠檬酸缓冲液)。牛血清白蛋白和硫酸从西格玛公司获得。洗涤缓冲液包含0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液(pbs-t)。纯化的igg对照购自生命科技公司。tecaninfinite200pronanoquant用于测量吸光度。

如hornbeck等，(2015)currprotocimmunol110，2.1.1-23中所述进行十字交叉连续稀释分析，以确定包被抗原、一抗和二抗的最佳浓度。

如前所述(unverdorben等，(2016)mabs8，120-128)，进行间接elisa以评估小鼠抗il-11rα抗体在50％有效浓度的结合亲和力(ec50)。将elisa板用1μg/ml重组人il-11rα在4℃下包被过夜，并用2％bsa的pbs封闭其他的结合位点。将抗体在1％bsa的pbs中稀释，滴定以获得800、200、50、12.5、3.125、0.78、0.195和0.049ng/ml的工作浓度，并在室温下一式两份孵育2小时。用15.625ng/mlhrp缀合的抗小鼠igg抗体进行抗原-抗体结合的检测。与检测抗体孵育2小时后，加入100μltmb底物15分钟，并用100μl2m的h2so4终止显色反应。在450nm处测量吸光度读数，参考波长校正为570nm。用graphpadprism软件拟合数据，进行抗体浓度的对数转换，然后使用不对称(五参数)逻辑剂量-反应曲线进行非线性回归分析以测定个体ec50值。

6.6在各种组织中抑制人il-11/il-11r信号传导的能力

研究了从各种不同组织获得的成纤维细胞中，抗体中和il-11/il-11r信号传导和反式信号传导的能力，步骤基本上如第6.1和6.3节所述，除了使用来自肝、肺、肾、眼、皮肤、胰腺、脾、肠、脑和骨髓的人成纤维细胞来代替心房人成纤维细胞，以用于实验。

通过在抗il-11rα抗体存在下的24小时培养期结束时，观察与不存在抗体的培养物相比，αsma阳性成纤维细胞比例的相对减少，抗il-11rα抗体被证明能够中和来自各种不同组织的成纤维细胞中的il-11/il-11r信号传导。

实施例7：嵌合和人源化形式的小鼠抗人il-11抗体

根据标准方法，制备实施例5的小鼠/人嵌合和人源化形式的小鼠单克隆抗人il-11rα抗体。

7.1小鼠/人嵌合抗体

从小鼠单克隆抗人il-11rα抗体制备小鼠/人嵌合抗体，如人单克隆抗体：方法和步骤，michaelsteinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南数据库(springerprotocols)，胡马纳出版社(2014)中的第8章所述。

简言之，测定编码产生小鼠抗人il-11rα抗体的杂交瘤的vh和vl的dna序列，并与编码人免疫球蛋白恒定区的dna序列组合以产生小鼠/人嵌合抗体序列，其中嵌合小鼠/人抗体在哺乳动物细胞中表达。

7.2人源化抗体

从小鼠单克隆抗人il-11rα抗体制备人源化抗体，如人单克隆抗体：方法和步骤”，michaelsteinitz(编辑)，分子生物学方法1060，实验室指南数据库(springerprotocols)，胡马纳出版社(2014)的第7章，特别是标题为‘抗体人源化’的第7章第3.1节所述。

简而言之，测定编码产生小鼠抗人il-11rα抗体的杂交瘤的vh和vl的dna序列，并将其插入编码人抗体可变区框架区和免疫球蛋白恒定区的dna序列中，以产生人源化抗体序列，人源化抗体在哺乳动物细胞中表达。

实施例8：抗il-11rα抗体的进一步生化分析

对上述抗体进行进一步的生化分析。

通过biacore、生物层干涉测定法(bli)和microscale热泳(mst)分析来分析抗体，以确定其结合人il-11rα的亲和力。

通过表面等离子体共振(spr)分析的biacore测定抗体亲和力，如rich等，analbiochem.2008年2月1日；373(1)：112-20。

进行抗体亲和力的生物层干涉测量分析，按照如concepcion等，combchemhighthroughputscreen.2009年9月；12(8)：791-800中所述的方法。

进行microscale抗体亲和力的热泳分析，按照如jerabek-willemsen等，assaydrugdevtechnol.2011年8月；9(4)：342-353中所述的方法。

通过尺寸排阻色谱法(sec)分析抗体的聚集，按照如iacob等，jpharmsci.2013年12月；102(12)：4315-4329中所述的方法。

通过疏水相互作用色谱法(hic)分析抗体的疏水性，按照如haverick等，mabs.2014年7月-8月；6(4)：852-8中所述的方法。

通过差示扫描荧光测定法(dsf)分析抗体的解链温度，按照如menzen和friess，jpharmsci.2013年2月；102(2)：415-28中所述的方法。

实施例9：使用抗il-11rα抗体体内抑制纤维化

在针对各种不同组织的纤维化小鼠模型中，体内证明了抗人il-11rα抗体的治疗效用。实验中使用的小鼠是野生型(即il-11ra+/+)小鼠。

9.1心脏纤维化

植入泵，用angii(2mg/kg/天)处理小鼠28天。

通过静脉内注射，将中和抗il-11rα抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠。在实验结束时，使用基于量热的羟脯氨酸的测定试剂盒评估在小鼠的心房中胶原蛋白的含量，并且通过qpcr分析纤维化标志物col1a2、αsma(acta2)和纤连蛋白(fn1)的rna表达水平。

纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠在心脏组织中的纤维化反应降低。

9.2肾纤维化

通过在腹膜内注射溶于载体(0.3mnahco3)中的叶酸(180mg/kg)诱导纤维化，建立用于肾纤维化的小鼠模型；对照小鼠仅被施用载体。

通过静脉内注射，将中和抗il-11rα抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠。在第28天取出肾脏，称重并固定在10％中性缓冲的福尔马林中，以用于马森三色染色和天狼星染色，或快速冷冻以用于胶原蛋白测定、rna和蛋白质研究。

使用trizol试剂(英杰公司)和凯杰tissuelyzer方法从快速冷冻的肾中提取总rna，然后进行rneasy柱(凯杰公司)纯化。根据制造商的说明书，使用iscripttmcdna合成试剂盒制备cdna，其中每个反应含有1μg总rna。使用steponeplustm(美国应用生物系统公司)在40个循环中使用taqman(美国应用生物系统公司)或快速sybrgreen(凯杰公司)技术对一式三份的样品进行定量rt-pcr基因表达分析。将表达数据标准化为gapdhmrna表达水平，并使用2-δδct方法计算倍数变化。通过在浓度为50mg/ml(95℃，20小时)的6mhcl中加热使快速冷冻的肾脏进行酸水解。根据制造商的说明书，使用quickzyme全胶原蛋白测定试剂盒(quickzyme生物科技)，基于羟脯氨酸的比色法，定量检测水解产物中总胶原蛋白的量。

纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠在肾组织中的纤维化反应降低。

9.3肺纤维化

在第0天通过气管内施用博来霉素来处理小鼠，以在肺中建立纤维化反应(肺纤维化)。

通过静脉内注射，将中和抗il-11rα抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠。在第21天处死小鼠，并分析纤维化标志物的差异。

纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠在肺组织中的纤维化反应降低。

9.4皮肤纤维化

在第0天通过皮下施用博来霉素来处理小鼠，以在皮肤中建立纤维化反应。

通过静脉内注射，将中和抗il-11rα抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠。在第21天处死小鼠，并分析纤维化标志物的差异。

纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠在皮肤组织中的纤维化反应降低。

9.5眼纤维化

将小鼠进行如上文实施例3.6中所述的小梁切除术步骤，以在眼中引发伤口愈合反应。

通过静脉内注射，将中和抗il-11rα抗体或对照抗体施用于不同组的小鼠，并且在眼组织中检测纤维化。

纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠在眼组织中的纤维化反应降低。

9.6其他组织

本发明人还在用于其他组织(例如肝、肾、肠)的纤维化的小鼠模型中分析用中和抗il-11rα抗体的处理对纤维化的影响，并且还在与多器官(即全身)纤维化相关的模型中进行分析。

测量纤维化反应并在用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠和用对照抗体处理的小鼠之间进行比较。纤维化标志物的表达降低证明，与用对照抗体处理的小鼠相比，用中和抗il-11rα抗体处理的小鼠的纤维化反应降低。

实施例10：使用抗il-11rα抗体体内治疗癌症

在癌症的小鼠模型中分析了用中和抗il-11rα抗体治疗对癌症的影响。

在小鼠中建立乳腺癌、肺癌和胃肠癌的模型，通过施用中和抗il-11rα抗体或对照抗体来治疗小鼠，并监测癌症的发展/进展。

与用对照抗体处理的小鼠相比，观察到中和抗il-11rα抗体的抗癌作用，癌症症状的减轻和/或存活率的增加证明了这一点。

实施例11：使用抗il-11rα抗体治疗amd

在湿性年龄相关性黄斑变性(amd)中研究了用中和抗il-11rα抗体治疗的效果。

将中和抗il-11rα抗体施用于患有湿性amd的对象。在一些治疗条件下，对象被施用vegf拮抗剂疗法(例如雷珠单抗、贝伐单抗、哌加他尼钠(pegaptanib)、布洛卢西珠单抗(brolucizumab)或阿柏西普(aflibercept))、pdgf拮抗剂疗法(例如培普拉尼(pegpleranib))，或者除了用抗il-11rα治疗之外还通过激光凝固疗法治疗。

与未用抗il-11rα抗体治疗的对象相比，在用抗il-11rα抗体治疗的对象中观察到湿性amd病理学特征的减少和/或湿性amd症状的改善。

实施例12：使用抗il-11ra抗体抑制肾纤维化

相似体重的10-12周龄同窝小鼠通过在腹膜内(i.p.)注射溶于载体(0.3mnahco3)中的叶酸(180mgkg-1)诱导肾纤维化；对照小鼠被单独施用载体。

在叶酸处理后一天，施用抗il11ra抗体克隆bso-9a7，然后以20mg/kg的剂量每周施用3次。注射后28天对小鼠实施安乐死。

根据制造商的说明，分别使用尿素测定试剂盒(ab83362，abcam)和肌酸酐测定试剂盒(ab65340，abcam)定量检测小鼠血浆的尿素和肌酸酐水平。使用quickzyme全胶原蛋白测定试剂盒(quickzyme生物科技)，基于对羟脯氨酸的比色检测，定量检测肾中总胶原蛋白的量。根据制造商的说明书进行所有的比色测定。

将组织石蜡包埋，并将肾切成3μm切片。对于石蜡切片，将组织在室温下在10％中性缓冲的福尔马林(西格玛奥德里奇公司)中固定24小时，脱水并包埋在石蜡中。对于冷冻切片，将新鲜切割的器官用tissue-tek最佳切割温度化合物(vwr国际公司)包埋。然后将冷冻模具与在液氮中冷却的异戊烷在金属烧杯中冷冻，并将切片储存于-80℃。根据制造商的说明，用马森三色染色试剂盒(ht15，西格玛奥德里奇公司)染色总胶原蛋白。捕获切片的图像，并用imagej软件(版本1.49)半定量地测定蓝染色的纤维化区域。对于免疫组织化学，将组织切片与抗acta2抗体(ab5694，abcam)一起孵育。使用immpresshrp抗兔igg聚合物检测试剂盒(vector实验室)和immpactdab过氧化物酶底物(vector实验室)作为色原体显现一抗染色。然后将切片用mayer's苏木精(默克公司)复染。

图35a和35b显示，用抗il11ra抗体处理的小鼠的胶原蛋白染色显著减少，这表明抗il-11ra抗体处理抑制了肾纤维化。

图36显示了通过用抗il11ra抗体处理显著降低尿白蛋白/肌酸比率，这表明用抗il-11ra抗体处理的小鼠中肾损伤水平降低。

在另一个实验中，通过单侧输尿管阻塞(uuo)诱导急性肾损伤的小鼠模型。简而言之，通过假手术或一侧输尿管的输尿管阻塞来治疗小鼠。小鼠接受igg、抗il-11ra抗体克隆bso-9a7(在手术日的-1天、1天、3天、5天，20mg/kg)，并且受损肾(‘uuo’)或对侧未受损肾(con)在手术后第7天收获。

在未知实验条件的情况下，通过管型、管状萎缩或管状扩张的组织学分析进行管状损伤的半定量评估(管状损伤评分：0，无；1，最小；2，温和；3，中等；4，严重)。

图37a和37b显示用抗il-11ra抗体处理减少了急性肾损伤小鼠模型中的肾小管损伤。

实施例13：il-11和肝纤维化

在人肝的匹配样品中通过蛋白质印迹证实il-11在健康和患病肝脏中的蛋白表达。制备匹配的冷冻肝脏样品用于蛋白质印迹，并使用来自r&d系统的人il-11抗体单克隆小鼠igg2a克隆#22626，目录号mab218测定il11的水平。制作了图像。

结果如图38所示。与正常健康肝相比，在大多数患病组织中检测到il-11的表达增加。

为了确定il-11表达是否随疾病而改变，使用来自r&d系统的人il-11duoset15平板试剂盒，目录号dy218，在来自精切肝片(pcls)的培养基上进行elisa实验。

在24小时适应培养基平板的休息期后，切割人pcls并与培养基处理物一起孵育。用培养基(对照)、含有lps的培养基、诱导tgfβ1的促纤维化刺激的组合，或诱导tgfβ1的促纤维化刺激和tgfβ1抑制剂alk5的组合处理样品。

结果如图39所示。促纤维化刺激诱导il-11蛋白表达的上调，并且发现alk5抑制剂抑制tgfβ1受体信号传导，其将il-11蛋白的表达降低至对照水平。

实施例14：使用抗il-11ra抗体抑制心脏纤维化

在心脏纤维化的小鼠模型中分析抗il-11ra抗体治疗的抗纤维化作用。

简而言之，在雄性小鼠中进行横向主动脉缩窄(tac)，如前所述(tarnavski，o.等，小鼠心脏手术：用于产生人类疾病小鼠模型的综合技术及其在基因组研究中的应用.physiol.genomics16，349-360(2004))。年龄匹配的小鼠在没有tac的情况下进行假手术。经胸二维多普勒超声心动图用于确认增加的压力梯度(>40mmhg)，以表明tac成功。

在tac的2周后对小鼠实施安乐死，以用于组织学和分子评估。抗il-11ra抗体克隆bso-9a7或对照igg抗体以20mg/kg的剂量每周腹膜内施用3次。两周后，收获心脏并使用马森三色染色试剂盒(ht15，西格玛奥德里奇公司)根据制造商的说明评估纤维化程度。使用quickzyme全胶原蛋白测定试剂盒(quickzyme生物科技)，基于对羟脯氨酸的比色检测，定量检测心脏中总胶原蛋白的量。

分析结果显示于图40a和40b中。与用igg对照抗体处理的小鼠相比，发现用中和抗il-11ra抗体处理的小鼠心脏中的胶原蛋白水平降低(图40a)，并且与用igg对照抗体处理的小鼠相比，心外膜、心内膜和血管周围区域的纤维化水平降低(图40b)。

序列表

<110>新加坡保健服务集团有限公司

新加坡国立大学

<120>il-11ra抗体

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<400>77

ilexaaxaaxaaxaaglyxaathr

15

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<212>prt

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ilepheproglyxaaxaaxaathr

15

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alaargglyxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaphexaatyr

151015

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<212>prt

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<400>99

metglytrpsercysileileleupheleuvalalathralathrgly

151015

valhisserproglnalatrpglyproproglyvalglntyrglygln

202530

proglyargservallysleucyscysproglyvalthralaglyasp

354045

provalsertrppheargaspglygluprolysleuleuglnglypro

505560

aspserglyleuglyhisgluleuvalleualaglnalaaspserthr

65707580

aspgluglythrtyrilecysglnthrleuaspglyalaleuglygly

859095

thrvalthrleuglnleuglytyrproproalaargprovalvalser

100105110

cysglnalaalaasptyrgluasnphesercysthrtrpserproser

115120125

glnileserglyleuprothrargtyrleuthrsertyrarglyslys

130135140

thrvalleuglyalaaspserglnargargserproserthrglypro

145150155160

trpprocysproglnaspproleuglyalaalaargcysvalvalhis

165170175

glyalagluphetrpserglntyrargileasnvalthrgluvalasn

180185190

proleuglyalaserthrargleuleuaspvalserleuglnserile

195200205

leuargproaspproproglnglyleuargvalgluservalprogly

210215220

tyrproargargleuargalasertrpthrtyrproalasertrppro

225230235240

cysglnprohispheleuleulyspheargleuglntyrargproala

245250255

glnhisproalatrpserthrvalgluproalaglyleuglugluval

260265270

ilethraspalavalalaglyleuprohisalavalargvalserala

275280285

argasppheleuaspalaglythrtrpserthrtrpserprogluala

290295300

trpglythrproserthrglyglyproalaglyglnserglyglygly

305310315320

glyglyserglyglyglyserglyglyglyservalproglypropro

325330335

proglyproproargvalserproaspproargalagluleuaspser

340345350

thrvalleuleuthrargserleuleualaaspthrargglnleuala

355360365

alaglnleuargasplyspheproalaaspglyasphisasnleuasp

370375380

serleuprothrleualametseralaglyalaleuglyalaleugln

385390395400

leuproglyvalleuthrargleuargalaaspleuleusertyrleu

405410415

arghisvalglntrpleuargargalaglyglyserserleulysthr

420425430

leugluprogluleuglythrleuglnalaargleuaspargleuleu

435440445

argargleuglnleuleumetserargleualaleuproglnpropro

450455460

proaspproproalaproproleualaproproserseralatrpgly

465470475480

glyileargalaalahisalaileleuglyglyleuhisleuthrleu

485490495

asptrpalavalargglyleuleuleuleulysthrargleuhishis

500505510

hishishishis

515