本发明实施例涉及一种提取方法，尤其涉及一种甜菊糖苷的提取方法。
背景技术：
甜叶菊别名甜菊、糖草，属菊科是原产于南美巴拉圭高原的常绿小灌木，现已被世界各地引种。甜叶菊含有14种微量元素、32种营养成分，在体内不代谢、不蓄积、不致癌、无毒性，其安全性已经得到国际FAO和WHO 以及美国FAD等组织的认可，因此它既是极好的糖源，又是良好的营养来源。
甜菊糖苷是甜叶菊中的有效成分，属于天然低热量的高倍甜味剂。它含有 多种不同成分的四环二萜单体，这些单体都有相同的苷元—甜菊醇(Steviol)， 可根据C13和C19位链接不同的苷元分为甜菊苷(Stevioside)、甜菊苷A (RebaudiosideA)、B(RebaudiosideB)、C(RebaudiosideC)、D(Rebaudioside D)、E(RebaudiosideE)、杜尔可苷(DulcosideA)、斯替维伯苷(Steviolbioside) 和悬钩子苷(Rubusoside)。在这些单体中，含量最高的为甜菊苷(Stevioside)、甜菊苷A (RebaudiosideA)分别占叶片干重的5％～9.5％、 2％～4.5％甜度分别为蔗糖的300、450倍。研究表明，甜菊糖苷具有高甜度，低热量，无明显毒副作用的特点，它可抑制高血糖、高血压，并有消炎，抗肿瘤，止泻利尿以及协助免疫调节的作用。
甜叶菊糖苷在工业提取中，在使用树脂进行有效物质吸附和精致前，通常要对提取液进行絮凝操作，通常使用无机盐进行溶液进行絮凝操作，例如，加入硫酸亚铁溶液和氧化钙溶液进行絮凝操作，其中的硫酸亚铁固体质量与提取液的质量比为0.7:100，加入的氧化钙溶液中的氧化钙固体质量与提取液的质量比为0.2:100；此时，提取液中的有效成分会随絮凝操作二损失，通常损失率在16%以上，甚至高于20%，这样对提取效率有较大影响，因此急切需要一种良好的絮凝剂物质配比及方法，以降低絮凝操作中对有效物质的损失。
技术实现要素：
本发明提供了一种甜菊糖苷的提取方法，能够对甜菊叶多次提取，降低了絮凝过程中的损失率，极大提高了甜菊糖苷的提取效率。
本发明涉及的甜菊糖苷的提取方法具体如下：
一种甜菊糖苷的提取方法，其特征在于，包括：步骤S10、将甜菊叶与提取剂放入提取罐中进行提取，得到甜菊糖苷一级提取液；步骤S20、将一级提取液进行絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；步骤S30、将甜菊糖苷过滤液洗脱操作，得到甜菊糖苷二级提取液；步骤S40、使用精制柱对甜菊糖苷二级提取液进行精制操作，得到甜菊糖苷精制液；步骤S50、使用双效浓缩器对甜菊糖苷精制液进行浓缩；然后进行除菌、喷雾干燥，得到甜菊糖苷干品；其中，步骤20中的絮凝步骤可采用无机絮凝剂絮凝、凹凸棒石吸附絮凝及乙醇沉淀絮凝三种絮凝方式的至少一种。
其中多次提取具体为：使用自来水对甜菊叶原料提取2.5小时，收集第一产液；使用自来水继续对甜菊叶原料提取1小时，收集第二产液；将第一产液和第二产液混合得到混合液，作为甜菊糖苷一级提取液；使用自来水继续对甜菊叶原料分别进行第三次提取和第四次提取，每次1小时，将第三产液和第四产液混合，作为下次对新甜菊叶原料进行首次提取的提取液；其中提取温度为50-60摄氏度。
采用无机絮凝剂絮凝的絮凝过滤步骤具体为：向一级提取液中加入氯化铁溶液，搅拌半小时，再加入的氧化钙，搅拌半小时，进行絮凝沉淀并过滤，向滤液中加入碳酸溶液，搅拌半小时，得到沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液。
加入的氯化铁溶液中的氯化铁固体质量与提取液的质量比为0.5:100，加入的氧化钙溶液中的氧化钙固体质量与提取液的质量比为0.1:100，加入搅拌温度为60-70摄氏度，絮凝沉淀温度为5-20摄氏度；
加入碳酸和提取液的体积比为0.5:100，碳酸浓度为1%，加入搅拌温度为10-20摄氏度。
采用无机絮凝剂絮凝包括：25%-35%壳聚糖，20%-30%硫酸铁，15%-25%硫酸镁，10%-20%硅酸铁，5%-10%爱尔兰海藻，5%-10%沸石粉。向一级提取液中加入上述配比无机絮凝剂，温度调整为65-85摄氏度搅拌40分钟，然后调节温度到5-10摄氏度得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；其中一级提取液与无机絮凝剂质量比为300:1。
采用凹凸棒石吸附絮凝过滤具体步骤为：将凹凸棒石粉碎后加入一级提取液，加入凹凸棒石与提取液的质量比为1:100，搅拌一小时，搅拌温度为65-70摄氏度，将温度降低至15-20摄氏度，静置一小时得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液。凹凸棒石的粉碎过程具体为：使用硫酸对凹凸棒石进行酸化，在500摄氏度煅烧3小时，粉碎为凹凸棒石粉。
采用乙醇沉淀絮凝过滤具体步骤为：将95%浓度的乙醇加入一级提取液搅拌一小时；静置一小时后进行减压蒸馏操作去除乙醇，静置半小时后得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；其中加入乙醇与提取液的体积比1:10，去除乙醇后精置温度为5-20摄氏度。
使用板框过滤器进行过滤，板框过滤器采用无纺布过滤，孔径大小为280-320目。
精制柱上的树脂吸附甜菊糖苷二级提取液中的甜菊糖苷饱和后，使用乙醇洗脱吸附在精制柱树脂上的甜菊糖苷，使甜菊糖苷脱离精制柱，得到甜菊糖苷精制液。
从上述介绍可以看出，采用本发明所述方法，对甜菊叶采用多次提取和多种絮凝方式组合，大大降低了甜菊糖苷在絮凝过程中的损失率，同时提高了甜菊糖苷的提取效率和纯度。
【附图说明】
图1为本发明提取甜菊糖苷的流程图。
【具体实施方式】
针对现有技术中存在的问题，本发明的甜菊糖苷的提取方法，能够对甜菊叶多次提取，降低了絮凝过程中的损失率，极大提高了甜菊糖苷的提取效率。
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述。
实施例1
图1为本发明提取甜菊糖苷第一实施方式的流程图，如图1所示，包括以下具体实现方式。
步骤S10、将甜菊叶与提取剂放入提取罐中进行提取，得到甜菊糖苷一级提取液。
该步骤中，一次使用甜菊叶原料1吨，加入常温自来水20吨，作为提取剂，平均放入8个体积为4m³的提取罐。
提取具体为，将提取罐中的水温加热到35-50摄氏度，优选45度，开始第一次提取，持续2.5小时，然后收集提取液；
再次向8个提取罐中加入自来水，加热到35-50摄氏度，优选45度，进行第二次提取操作，持续1小时，然后收集提取液；
将两次提取的提取液混合，作为甜菊糖苷一级提取液，体积为20m³左右。
使用自来水继续对甜菊叶原料分别进行第三次提取和第四次提取，每次1小时，将第三产液和第四产液混合，作为下次对新甜菊叶原料进行首次提取的提取液。其中第三次和第四次提取的时间均为1小时，第三次提取提取温度为40-60摄氏度，优选50摄氏度，第四次提取提取温度为50-60摄氏度，优选55摄氏度。
得到一级提取液后，甜菊叶的废渣可作为生产有机肥料的原料，进行二次生产，最大限度的发挥原料的效能。
步骤S20、将一级提取液进行絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；使用两个容积为10 m³絮凝罐的对一级提取液进行絮凝，可以采用无机絮凝剂絮凝、凹凸棒石吸附絮凝及乙醇沉淀絮凝三种絮凝方式的至少一种。
采用无机絮凝剂时的具体步骤为：
向一级提取液中加入氯化铁溶液，搅拌半小时，再加入的氧化钙，搅拌半小时，进行絮凝沉淀并过滤，向滤液中加入碳酸溶液，搅拌半小时，得到沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液。
加入的氯化铁溶液中的氯化铁固体质量与提取液的质量比为0.5:100，加入的氧化钙溶液中的氧化钙固体质量与提取液的质量比为0.1:100，加入搅拌温度为60-70摄氏度，优选65摄氏度，絮凝沉淀温度为5-20摄氏度，优选10摄氏度；加入碳酸和提取液的体积比为0.5:100，碳酸浓度为1%，加入搅拌温度为10-20摄氏度。
经测定，使用上述无机絮凝剂时，甜菊糖苷的损失率为13%，同时由于最后碳酸的处理，使得提取液中游离的无机离子进行有效沉淀，极大提高了甜菊糖苷的纯度。
另外一种无机絮凝剂配比和步骤如下：
该重无机絮凝剂絮凝包括：25%-35%壳聚糖，20%-30%硫酸铁，15%-25%硫酸镁，10%-20%硅酸铁，5%-10%爱尔兰海藻，5%-10%沸石粉。
优选配比为：壳聚糖，硫酸铁，硫酸镁，硅酸铁，爱尔兰海藻，沸石粉的比例为30%，25%，20%，15%，5%，5%；或
壳聚糖，硫酸铁，硫酸镁，硅酸铁，爱尔兰海藻，沸石粉的比例为35%，20%，25%，10%，5%，5%；
其中壳聚糖为物理改性壳聚糖。
向一级提取液中加入上述配比无机絮凝剂，温度调整为65-85摄氏度（优选80摄氏度）搅拌40分钟，然后调节温度到5-10摄氏度得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；其中一级提取液与无机絮凝剂质量比为300:1。
经测定，使用上述无机絮凝剂时，甜菊糖苷的损失率为6.2%，同时由于沸石粉的作用，加速了絮凝速度，同时由于加入爱尔兰海藻，使得提取液蛋白质等有机物更有效沉淀，极大提高了甜菊糖苷的纯度。
采用凹凸棒石吸附絮凝过滤具体步骤为：
使用硫酸对凹凸棒石进行酸化，在500摄氏度煅烧3小时，粉碎为凹凸棒石粉，将凹凸棒石粉加入一级提取液，加入凹凸棒石与提取液的质量比为1:100，搅拌一小时，搅拌温度为65-70摄氏度，将温度降低至15-20摄氏度，优选15摄氏度，静置一小时得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液。凹凸棒石的粉碎过程具体为：
经测定，使用上述凹凸棒石絮凝剂时，甜菊糖苷的损失率为6%。
采用乙醇沉淀絮凝过滤具体步骤为：
将95%浓度的乙醇加入一级提取液搅拌一小时；静置一小时后进行减压蒸馏操作去除乙醇，静置半小时后得到絮凝沉淀并过滤，得到甜菊糖苷过滤液；其中加入乙醇与提取液的体积比1:10，去除乙醇后精置温度为5-20摄氏度。
经测定，使用上述乙醇絮凝剂时，甜菊糖苷的损失率为8%。
对于上述三种絮凝方式，在实际应用中可以根据产品条件及生产成本，选择其中一种或多种进行，以达到良好的絮凝效果；
絮凝完成后，将絮凝完成的一级提取液使用三个板框过滤器将絮凝液过滤，得到甜菊糖苷过滤液，其中每个板框面积为100平方米，过滤器为上海大张过滤设备有限公司生产的XMY100/1000-30U的厢式板框压滤机，过滤部分使用孔径280-320目的无纺布，优选300目。将收集到18m³左右的过滤液送入两个9m³的滤液罐。
步骤S30、将甜菊糖苷过滤液洗脱操作，得到甜菊糖苷二级提取液；；
具体为，将甜菊糖苷过滤液转入LX-T28树脂吸附柱；吸附完成后使用NaOH进行洗杂；使用纯净水进行洗碱至pH8；使用HCl洗杂，再用纯净水洗酸至pH6；使用浓度为60%的乙醇对吸附柱进行解析。
该步骤中产生的过柱废液、水洗废液和酸碱废液，经过废水管道排入废水处理装置，处理达到国家排放标准后，进行排放。
然后将解析后的甜菊糖苷液进行脱盐、脱色、脱醇处理，得到甜菊糖苷二级提取液；
其中，将解析后的甜菊糖苷液一次通过脱盐柱（001X16）、脱色柱（LX-T5，三个，单个1.8 m³）和脱醇装置（纳滤膜过滤并单效浓缩），得到甜菊糖苷二级提取液，体积约3m³。
步骤S40、使用精制柱对甜菊糖苷二级提取液进行精制操作，得到甜菊糖苷精制液；
该步骤中，使用一个体积为1.1 m³的LX-69B精制柱对二级提取液进行精制，得到精制液约3m³。具体为，精制柱上的树脂吸附甜菊糖苷二级提取液中的甜菊糖苷饱和后，使用60%的乙醇洗脱吸附在精制柱树脂上的甜菊糖苷，使甜菊糖苷脱离精制柱，得到甜菊糖苷精制液。
步骤S50、使用双效浓缩器对甜菊糖苷精制液进行浓缩；然后进行除菌、喷雾干燥，得到甜菊糖苷干品；
具体的，浓缩后得到甜菊糖苷浓缩液约300L。
使用0.22μm过滤器对浓缩液进行除菌和过滤，甜菊糖苷终液约300L。
将甜菊糖苷终液在温度为50-70摄氏度进行喷雾干燥，优选65度。该步骤得到甜菊糖苷干品60kg。
由本实施例方法制备的甜菊糖苷干品的总苷含量接近90%，其中RA（甜菊苷A）含量超过65%。可见实施例中的提取方法步骤简单，降低了絮凝过程中的损失率，同时提取效率较高，得到总苷含量和纯度较高的甜菊糖苷干品。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。