本发明属于中药化学领域，涉及crenatoside的提取制备工艺，主要是一种应用中压柱层析法从弯管列当粗提物中制备高纯度crenatoside的方法。
背景技术：
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crenatoside，别名：oraposide；orobanchoside，化学名：β-d-glucopyranose,3-o-(6-deoxy-α-l-mannopyranosyl)-1,2-o-[(2s)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-1,2-ethanediyl]-,4-[(2e)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoate]，分子式：c29h34o15，分子量：622.57，成分分类：苯乙醇苷类，结构式如下：
物理性质：淡黄色晶体(甲醇)，uv365下显蓝色荧光，1％三氯化铁乙醇溶液反应呈蓝黑色，具有良好的水溶性和吸湿性，易溶于甲醇，可溶于丙酮。药理性质：具有显著抗氧化活性，仅次于维生素c，同时药理实验表明其还具有降血脂、降血糖、抗炎、杀菌等作用。
目前没有制备高纯度crenatoside的系统方法的报道。因此有必要寻求一种简便、安全、经济、高效的提取、分离和纯化crenatoside的方法，从而促进对弯管列当的深度开发和利用。
技术实现要素：
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本发明目的在于开发一种工艺简单，高效、快速，提纯制备高纯度crenatoside的方法。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种从弯管列当中提取制备crenatoside的方法，包括以下步骤：
1)超声提取：将弯管列当药材粉碎，用乙醇作为提取溶媒进行超声提取，旋转蒸发浓缩得到浸膏；
2)萃取：将上述浸膏通过乙酸乙酯-水双相分散萃取，取乙酸乙酯层，减压回收乙酸乙酯，剩余萃取浓缩物；
3)中压硅胶层析：将上述所得萃取浓缩物经中压硅胶柱层析进行分离纯化，根据tlc检识合并目标流份，得到crenatoside洗脱液；
4)重结晶：将上述组分减压浓缩后用溶剂溶解，敞口静置析出crenatoside结晶，过滤；重复本步骤2-4次，阴干，即得crenatoside。
优选地，所述步骤1)中粉碎为80-100目；超声时间每次为40-60min，超声提取3-5次后合并提取液。
优选地，所述步骤1)中乙醇用量为弯管列当粉体积的8-10倍，乙醇浓度为95％。
优选地，所述步骤2)中乙酸乙酯和水的体积比为1:1；乙酸乙酯与步骤1)中弯管列当粉体积比为2:1。
优选地，所述步骤3)中中压硅胶柱层析色谱溶剂系统为二氯甲烷:甲醇:水体积比为(18-12):1:0.1；恒梯度洗脱，按每份50ml收集，tlc检识(聚酰胺板，青岛海洋化工厂产品；展开剂，二氯甲烷：甲醇：水(10:3:0.1)；显色剂，1％三氯化铁乙醇溶液)，取比移值(rf)＝0.4的单点流份合并，得到crenatoside洗脱液。
优选地，所述步骤3)分离纯化的洗脱流速为10-20ml/min，柱压为2.5mpa。
优选地，所述步骤4)结晶步骤溶剂为甲醇。
优选地，所述步骤4)结晶步骤溶剂甲醇用量为步骤1)每1000ml弯管列当药材粉末(相当于药材粉末质量260g)用甲醇5-20ml，溶解温度为40-50℃。
有益效果：
本发明提供了一种工艺简单，高效、快速，提纯制备高纯度crenatoside的方法，较传统方法，本方法提取得到的crenatoside纯度更高，且本方法更加高效快速，且制备量大。
具体实施方式：
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例1：
将弯管列当药材粉碎为80目，取粉末1000ml(相当于药材粉末质量260g)，加入8倍体积量的95％乙醇超声提取5次，每次40min，过滤，合并提取液，减压浓缩得到红褐色浸膏，用乙酸乙酯和水各2000ml(体积比1:1)双相萃取，取上层乙酸乙酯有机相，减压浓缩成浸膏，得到萃取浓缩物。将上述所得萃取浓缩物经六通阀泵入预处理过的中压硅胶柱(压力为2.5mpa)中，用二氯甲烷:甲醇：水(体积比18:1:0.1)恒梯度洗脱，洗脱流速为20ml/min，按每份50ml收集，tlc检识(聚酰胺板，青岛海洋化工厂产品；展开剂，二氯甲烷：甲醇：水(10:3:0.1)；显色剂，1％三氯化铁乙醇溶液)，取比移值(rf)＝0.4的单点流份合并，将上述合并流份减压浓缩之后用15ml甲醇在40℃热熔，敞口静置，析出crenatoside结晶，过滤出crenatoside结晶，重复结晶2次，阴干，即得纯度为98.25％的crenatoside。
实施例2：
将弯管列当药材粉碎为100目，取粉末1000ml(相当于药材粉末质量260g)，加入9倍体积量的95％乙醇超声提取4次，每次50min，过滤，合并提取液，减压浓缩得到红褐色浸膏，将上述所得萃取浓缩物经六通阀泵入预处理过的中压硅胶柱(压力为2.5mpa)中，用二氯甲烷:甲醇：水(体积比18:1:0.1)恒梯度洗脱，洗脱流速为20ml/min，按每份50ml收集，tlc检识(聚酰胺板，青岛海洋化工厂产品；展开剂，二氯甲烷：甲醇：水(10:3:0.1)；显色剂，1％三氯化铁乙醇溶液)，取比移值(rf)＝0.4的单点流份合并，将上述合并流份减压浓缩之后用10ml的甲醇在45℃热熔，敞口静置，析出crenatoside结晶，过滤出crenatoside结晶，重复结晶2次，阴干，即得纯度为98.31％的crenatoside。
实施例3：
将弯管列当药材粉碎为90目，取粉末1000ml(相当于药材粉末质量260g)，加入10倍体积量的95％乙醇超声提取3次，每次60min，过滤，合并提取液，减压浓缩得到红褐色浸膏，将上述所得萃取浓缩物经六通阀泵入预处理过的中压硅胶柱(压力为2.5mpa)中，用二氯甲烷:甲醇：水(体积比18:1:0.1)恒梯度洗脱，洗脱流速为20ml/min，按每份50ml收集，tlc检识(聚酰胺板，青岛海洋化工厂产品；展开剂，二氯甲烷：甲醇：水(10:3:0.1)；显色剂，1％三氯化铁乙醇溶液)，取比移值(rf)＝0.4的单点流份合并，将上述合并流份减压浓缩之后用10ml的甲醇在50℃热熔，敞口静置，析出crenatoside结晶，过滤出crenatoside结晶，重复结晶3次，阴干，即得纯度为98.57％的crenatoside。
实施例4：
将弯管列当药材粉碎为80目，取粉末1000ml(相当于药材粉末质量260g)，加入10倍体积量的95％乙醇超声提取5次，每次60min，过滤，合并提取液，减压浓缩得到红褐色浸膏，将上述所得萃取浓缩物经六通阀泵入预处理过的中压硅胶柱(压力为2.5mpa)中，用二氯甲烷:甲醇：水(体积比18:1:0.1)恒梯度洗脱，洗脱流速为20ml/min，按每份50ml收集，tlc检识(聚酰胺板，青岛海洋化工厂产品；展开剂，二氯甲烷：甲醇：水(10:3:0.1)；显色剂，1％三氯化铁乙醇溶液)，取比移值(rf)＝0.4的单点流份合并，将上述合并流份减压浓缩之后用15ml的甲醇在50℃热熔，敞口静置，析出crenatoside结晶，过滤出crenatoside结晶，重复结晶4次，阴干，即得纯度为98.22％的crenatoside。