一种从西红花中富集西红花苷的方法与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从西红花中富集西红花苷的方法。

背景技术：

西红花苷（crocin）是一类水溶性天然色素，主要为西红花苷ⅰ和西红花苷ⅱ，是传统中药材栀子（gardeniajasminoidesellis）和西红花（crocussativusl.）中的主要的药效成分之一。药理学研究表明：西红花苷具有抗肿瘤作用，能够显著抑制癌细胞增殖、促进癌细胞凋亡；可以提高认知能力、增强神经元活性、抗氧化应激、抑制淀粉样蛋白低聚物的聚集、缠结，从而具有治疗帕金森病、阿尔兹海默症、血管性老年痴呆等神经退行性疾病的作用；能从抗血小板聚集与凋亡、抗氧化应激、抗心血管细胞凋亡几个方面作用于心血管疾病，以达到治疗循环系统疾病的目的。因此西红花苷具有广泛的药效作用和开发潜力。

西红花苷属于二萜类成分，由西红花酸和糖链构成，由于分子结构中含有多个共轭双键，导致其稳定性差，受热和光照都可造成其在溶液中快速分解。西红花苷结构不稳定的性质导致其在工业化的提取、浓缩、纯化和干燥的过程中转移率很低，大大限制了其富集工艺的开发。目前现有的技术对提高西红花苷稳定性的手段较少，只能在工艺过程中尽量避免受热和光照。

我们在对西红花苷稳定性研究过程中意外发现一部分金属离子如na⁺、k⁺、ca²⁺、al³⁺等对西红花苷的降解有较强的抑制作用，这种抑制作用可能与提高了西红花苷溶液的电解质强度有关。因此设计了一套以金属盐溶液为介质对西红花药材进行渗漉提取，再对含金属离子的渗漉液进行大孔树脂柱层析纯化，浓缩，干燥制得西红花苷提取物的方法，很大程度上改善了传统工艺过程中西红花苷大量降解，转移率低的弊端。

针对目前西红花苷在工艺工程中易降解、稳定性差的问题，本发明提供了一种简便易行，成本低，转移率高，环境友好、适用范围广的富集西红花苷的方法。

技术实现要素：

本发明的目的是克服西红花苷在工艺过程中易降解、稳定性差的问题，提供一种简便易行、成本低廉、转移率高、环境友好、适用范围广的富集西红花苷的方法。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案如下：

本发明提供一种从西红花中富集西红花苷的方法，向西红花药材中加入金属盐溶液浸泡后渗漉提取。

本发明的另一种方案是向西红花药材加入金属盐溶液浸泡后，再加入药材重量8-60倍的金属盐溶液进行渗漉提取，收集渗漉液。

进一步地，还可以将渗漉液以0.2-2bv/h的流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液。

进一步地，还可以对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥得西红花苷精制品。

所述金属盐包括但不限于：钠盐、钾盐、钙盐或铝盐中的一种或多种。

所述金属盐溶液浓度为0-0.1mol/l。

优选地，所述金属盐溶液浓度为0.0001-0.1mol/l。

为了进一步清楚描述本发明所述的从西红花中富集西红花苷的方法，提供如下方案：

（1）将西红花药材置于渗漉罐中，加入适量金属盐溶液，将药材完全浸没，然后浸泡1h，再加入药材重量8-60倍金属盐溶液进行渗漉提取，收集渗漉液。

（2）渗漉液以0.2-2bv/h的流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液。

（3）对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品。

上述步骤（1）中本领域技术人员可根据经验和具体操作情况调整浸泡时间，也可以不浸泡，直接进行渗漉提取。

上述步骤（2）所用洗脱溶剂及其浓度本领域技术人员可根据现有技术和经验进行调整。

本发明有益效果为：

1.本发明可大大降低西红花苷在溶液中的降解速率。

2.本发明可应用于西红花苷的提取、浓缩、纯化和干燥过程中，通过提高西红花苷的稳定性，提高工艺过程中西红花苷的转移率。

附图说明

图1西红花苷ⅰ对照品液相色谱图；

图2西红花苷ⅱ对照品液相色谱图；

图3西红花苷精制品液相色谱图；

图4不同金属盐溶液对西红花苷ⅰ稳定性的影响；

图5不同金属盐溶液对西红花苷ⅱ稳定性的影响；

图6不同浓度nacl溶液对西红花苷ⅰ稳定性的影响；

图7不同浓度nacl溶液对西红花苷ⅱ稳定性的影响。

具体实施方案

下述是结合具体实施例进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1：

称取西红花药材500g，加纯化水将药材完全浸没，浸泡1h，再加纯化水20l进行渗漉提取，收集渗漉液，将渗漉液以0.2bv/h流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液，对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品91g，测得西红花苷ⅰ含量为26.2%,西红花苷ⅱ含量为9.3%。

实施例2：

称取西红花药材500g，加0.001mol/lnacl溶液将药材完全浸没，浸泡1h，再加0.001mol/lnacl溶液30l进行渗漉提取，收集渗漉液，将渗漉液以0.5bv/h流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液，对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品101g，测得西红花苷ⅰ含量为36.8%,西红花苷ⅱ含量为13.5%。

实施例3：称取西红花药材500g，加0.01mol/lkcl溶液将药材完全浸没，浸泡1h，再加0.01mol/lkcl溶液4l进行渗漉提取，收集渗漉液，将渗漉液以1bv/h流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液，对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品69g，测得西红花苷ⅰ含量为35.7%,西红花苷ⅱ含量为12.1%。

实施例4：

称取西红花药材500g，加0.1mol/lcacl2溶液将药材完全浸没，浸泡1h，再加0.1mol/lcacl2溶液10l进行渗漉提取，收集渗漉液，将渗漉液以1.5bv/h流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液，对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品77g，测得西红花苷ⅰ含量为32.5%,西红花苷ⅱ含量为11.3%。

实施例5：

称取西红花药材500g，加0.005mol/lalcl3溶液将药材完全浸没，浸泡1h，再加0.005mol/lalcl3溶液25l进行渗漉提取，收集渗漉液，将渗漉液以2bv/h流速通过大孔吸附树脂柱，依次以纯化水、25%乙醇、70%乙醇冲洗树脂柱，弃去水和25%乙醇洗脱液，收集70%乙醇洗脱液，对70%乙醇洗脱液进行减压浓缩，冷冻干燥即得西红花苷精制品97g，测得西红花苷ⅰ含量为28.9%,西红花苷ⅱ含量为9.8%。

实验例1：西红花苷精制品中西红花苷ⅰ和西红花苷ⅱ含量测定方法

（1）色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(45：55)为流动相；检测波长为440nm。

（2）对照品溶液的制备

分别取西红花苷ⅰ和西红花苷ⅱ对照品适量，精密称定，加50%乙醇制成每1ml含39μg西红花苷ⅰ的溶液和每1ml含12μg西红花苷ⅱ的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备

取西红花苷精制品20mg，精密称定，置于25ml容量瓶中，加流动相，置冰浴中超声使溶解，定容，精密吸取1ml，置于10ml容量瓶中，加流动相定容，即得。

（4）测定法

精密吸取西红花苷ⅰ对照品溶液、西红花苷ⅱ对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实验例2：不同金属盐溶液对西红花苷稳定性的影响。

精密称量实施例1所得西红花苷精制品9份，每份150mg于100ml容量瓶，分别加纯化水，0.001mol/lnacl、fecl3、fecl2、cuso4，cacl2、mgso4、alcl3、kcl溶液充分溶解，定容至刻度，室温避光放置，每隔3h取少量溶液，过滤，注入液相色谱，测定溶液中西红花苷ⅰ和西红花苷ⅱ浓度，计算降解率（结果见说明书附图4和5）。

实验例3：不同浓度nacl溶液对西红花苷稳定性的影响。

精密称量实施例1所得西红花苷精制品5份，每份150mg于100ml容量瓶，分别加纯化水，0.1mol/l、0.01mol/l、0.001mol/l、0.0001mol/lnacl溶液充分溶解，定容至刻度，室温避光放置，每隔3h取少量溶液，过滤，注入液相色谱，测定溶液中西红花苷ⅰ和西红花苷ⅱ浓度，计算降解率（结果见说明书附图6和7）。