一种液基细胞和微生物处理保存试剂及其制备方法与流程

本发明属于医学检测
技术领域：
，具体为一种固定生物样本的固定剂，尤其涉及一种液基细胞和微生物处理保存试剂及其制备方法。
背景技术：
：各种类型样本，尤其是对体液样本中的细胞与微生物等有形成分的检测都需要进行一定的前期处理过程，这种前期处理能提高阳性检出率，降低样本中杂质对有形成分的最终检测，严重者导致检测无效或无法开展检测，可见，要对体液样本中的细胞和微生物等有形成分检测进行正确的前期处理对于检测结果的准确性与可靠性等具有重要意义。一般来说，为了能有效检测细胞或微生物，需要对样本进行保存、运输、裂解、提取、分离、沉淀、固定、制片、染色等处理环节。而寄生虫感染在人类和动物中引起疾病的历史悠久，通常通过染色和显微镜鉴定粪便样品中的蠕虫卵和幼虫或原生动物滋养体和/或囊肿来证实肠寄生虫的诊断，但无论使用何种方法，诊断寄生虫感染的一个问题是收集和检查样本之间的延迟，如果没有合适的固定剂，则会使样本因自身含有的一些特殊的酶或因样本所存在的环境中滋生细菌及微生物而导致样本快速降解，且如果没有及时进行处理，则会影响肠寄生虫的准确诊断，而准确诊断取决于在收集时获得样本的最佳固定，因此，固定溶液通常用于处理样本以进行寄生虫的诊断。目前，用于保存粪便标本的固定剂通常含有汞、甲醛或福尔马林，其具有许多限制其使用的缺点。例如，基于汞的固定剂及含有氯化汞碱的schaudinn固定剂虽然能够提供良好的定义，但由于成本过高和愿意处理汞废物的处置公司的稀缺性而存在处置问题，并且固定剂中含有甲醛或福尔马林的防腐剂能够引起类似的环境和健康问题。因此，如何开发一种不含汞或甲醛且具有生物相容性、安全有效的液基细胞和微生物处理保存试剂是本领域技术人员亟需解决的问题。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种适用于固定生物样本的液基细胞和微生物处理保存试剂，并公开了上述液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种液基细胞和微生物处理保存试剂，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：优选的，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：优选的，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：通过上述原料的协同配合而混合制备出一种液基细胞和微生物处理保存试剂，该试剂为用于固定生物样本的固定剂，且该试剂不含汞和甲醛，能够与不同的寄生阶段(如孢囊、卵、幼虫和滋养体)相容，在没有添加聚乙烯醇或添加醛(如乙二醛、戊二醛)的情况下是有效的。优选的，所述卤代氰基乙酰胺包括2,2-二溴-2-氰基乙酰胺、2,2-二溴-3-氰基丙酰胺中的一种或多种组合。需要说明的是，本发明优选卤代氰基乙酰胺为2,2-二溴-2-氰基乙酰胺，而2,2-二溴-2-氰基乙酰胺是一种广谱高效的杀菌剂，能迅速穿透微生物的细胞膜，并作用于一定的蛋白集团，使细胞的正常氧化还原中止，从而引起细胞死亡。同时，它的分支还可以选择性的溴化或氧化微生物的特殊酶代谢物，最终导致微生物死亡。优选的，所述ph缓冲剂为乙酸-乙酸钠缓冲体系、磷酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系，且所述保湿剂为丙三醇、乙二醇或山梨醇。本发明优选ph缓冲剂为柠檬酸缓冲体系，并限定所述柠檬酸缓冲体系的ph范围为3～6。优选的，所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠、吐温-80或co-40；且所述抗氧化剂为茶多酚、丁基羟基茴香醚或4,4-亚甲基双(2,6-二叔丁基苯酚)。本发明优选抗氧化剂为茶多酚，且茶多酚除具有抗氧化作用外，还具有抑菌作用，如对葡萄球菌、大肠杆菌及枯草杆菌等有抑制作用。优选的，所述渗透压调节剂为氯化钠、氯化钾或葡萄糖；且所述色素为孔雀石绿、固绿中的一种或多种组合。本发明公开利用孔雀石绿和固绿组成的混合物作为色素，其能够在水溶液中形成一种深绿色，该深绿色可延迟2，2-二溴-2-氰基乙酰胺在有光照的条件下产生的分解，延长本保存液的使用周期，且该色素混合体系所形成的深绿色还可改善人粪便在溶液中的视觉感官。本发明还有一个目的，就是提供一种操作简便，对设备要求不高，适于工业化生产的液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法。一种液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，具体包括如下步骤：(1)按照上述配比分别称取原料，将ph缓冲剂和抗氧化剂加入到去离子水中，机械搅拌使其溶解并将混合液加热到30℃～35℃；随后加入卤代氰基乙酰胺，机械搅拌使其溶解；然后依次加入保湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂及色素、香精，机械搅拌使所有组分溶解并混合均匀，得到混合物i；需要说明的是，由于卤代氰基乙酰胺微溶于水，且其水溶液在碱性条件下易分解，在酸性条件下稳定。先加入ph缓冲剂及抗氧化剂以提供一个稳定环境，然后再加入卤代氰基乙酰胺。(2)将步骤(1)得到的混合物i中加氢氧化钠调ph值为5.5～6.5，即可得到本发明公开的一种液基细胞和微生物处理保存试剂。经由上述技术方案可知，与现有技术相比，本发明提供了一种液基细胞和微生物处理保存试剂及其制备方法，具有如下优异效果：首先，本发明公开的原料中不含有汞或甲醛，既拓宽了应用范围，又实现在没有添加聚乙烯醇或醛(乙二醛或戊二醛)的情况下仍然有效的目的；然后，本发明优选卤代氰基乙酰胺为2,2-二溴-2-氰基乙酰胺，而2,2-二溴-2-氰基乙酰胺是一种广谱高效的杀菌剂，能迅速穿透微生物的细胞膜，并作用于一定的蛋白集团，使细胞的正常氧化还原中止，从而引起细胞死亡。同时，它的分支还可以选择性的溴化或氧化微生物的特殊酶代谢物，最终导致微生物死亡；最后，本发明公开的制备方法简单，对设备要求不高，适合于工业化生产。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为本发明鞭虫卵的显微镜图。图2为本发明蛔虫受精卵的显微镜图。具体实施方式下面将结合本发明实施例对本发明公开的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明实施例公开了一种不含汞或甲醛且具有生物相容性、安全有效的液基细胞和微生物处理保存试剂，并具体公开该液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，不仅操作简单，还对设备要求不高，适于工业化生产。为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述
发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。本发明公开了一种所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：为了进一步优化上述技术方案，卤代氰基乙酰胺包括2,2-二溴-2-氰基乙酰胺、2,2-二溴-3-氰基丙酰胺中的一种或多种组合。为了进一步优化上述技术方案，ph缓冲剂为柠檬酸缓冲体系、磷酸缓冲体系或乙酸-乙酸钠缓冲体系，且所述保湿剂为丙三醇、乙二醇或山梨醇。为了进一步优化上述技术方案，表面活性剂为十二烷基磺酸钠、吐温-80或co-40；且所述抗氧化剂为茶多酚、丁基羟基茴香醚或4,4-亚甲基双(2,6-二叔丁基苯酚)。为了进一步优化上述技术方案，渗透压调节剂为氯化钠、氯化钾或葡萄糖；且所述色素为孔雀石绿、固绿中的一种或多种组合。本发明还公开了一种液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，具体包括如下步骤：(1)按照上述配比分别称取原料，将ph缓冲剂和抗氧化剂加入到去离子水中，机械搅拌使其溶解并将混合液加热到30℃～35℃；随后加入卤代氰基乙酰胺，机械搅拌使其溶解；然后依次加入保湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂及色素、香精，机械搅拌使所有组分溶解并混合均匀，得到混合物i；(2)将步骤(1)得到的混合物i中加氢氧化钠调ph值为5.5～6.5，即可得到本发明公开的一种液基细胞和微生物处理保存试剂。下面将结合具体实施例对本发明公开的技术方案作进一步的说明。实施例1：一种液基细胞和微生物处理保存试剂，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：实施例2：一种液基细胞和微生物处理保存试剂，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：实施例3：一种液基细胞和微生物处理保存试剂，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：实施例4：一种液基细胞和微生物处理保存试剂，所述处理保存试剂是由以下原料制成，按质量百分比计：实施例5：一种液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，所述方法具体包括如下步骤：(1)按照上述配比分别称取原料，将ph缓冲剂和抗氧化剂加入到去离子水中，机械搅拌使其溶解并将混合液加热到30℃～35℃；随后加入卤代氰基乙酰胺，机械搅拌使其溶解；然后依次加入保湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂及色素、香精，机械搅拌使所有组分溶解并混合均匀，得到混合物i；(2)将步骤(1)得到的混合物i中加氢氧化钠调ph值为5.5，即可得到本发明公开的一种液基细胞和微生物处理保存试剂。实施例6：一种液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，所述方法具体包括如下步骤：(1)按照上述配比分别称取原料，将ph缓冲剂和抗氧化剂加入到去离子水中，机械搅拌使其溶解并将混合液加热到30℃～35℃；随后加入卤代氰基乙酰胺，机械搅拌使其溶解；然后依次加入保湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂及色素、香精，机械搅拌使所有组分溶解并混合均匀，得到混合物i；(2)将步骤(1)得到的混合物i中加氢氧化钠调ph值为6.0，即可得到本发明公开的一种液基细胞和微生物处理保存试剂。实施例7：一种液基细胞和微生物处理保存试剂的制备方法，所述方法具体包括如下步骤：(1)按照上述配比分别称取原料，将ph缓冲剂和抗氧化剂加入到去离子水中，机械搅拌使其溶解并将混合液加热到30℃～35℃；随后加入卤代氰基乙酰胺，机械搅拌使其溶解；然后依次加入保湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂及色素、香精，机械搅拌使所有组分溶解并混合均匀，得到混合物i；(2)将步骤(1)得到的混合物i中加氢氧化钠调ph值为6.5，即可得到本发明公开的一种液基细胞和微生物处理保存试剂。本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。本
发明内容不仅限于上述各实施例的内容，其中一个或几个实施例的组合同样也可以实现本发明目的。为了进一步验证本发明的优异效果，发明人还进行了如下实验：实验一：申请人对不同抗氧化剂添加量的对比试验，具体实验及结果分析如下：对照组123卤代氰基乙酰胺2％2％2％2％保湿剂5％5％5％5％ph缓冲剂0.5％0.5％0.5％0.5％渗透压调节剂0.1％0.1％0.1％0.1％表面活性剂0.015％0.015％0.015％0.015％色素0000香精0000抗氧化剂00.03％0.1％0.5％将以上四组溶液置于25℃的环境中避光储存，对照组在第一周时溶液逐渐由无色溶液变为黄色溶液，实验组1约在第三周的时候开始由无色溶液变为黄色溶液，实验组2约在第五周时开始由无色溶液变为黄色溶液，实验组3放置2个月溶液无明显变化。将以上四组溶液置于25℃的自然环境中储存，对照组在第三天溶液逐渐由由无色溶液变为黄色溶液，实验组1约在第一周的时候开始由无色溶液变为黄色溶液，实验组2约在第二周时开始由无色溶液变为黄色溶液，实验组3约在第四周开始由无色溶液变为黄色溶液。实验二：用取样勺挖取5g5岁小孩的新鲜粪便置于本发明提及的液基细胞和微生物处理保存试剂中，使用改良加藤法收集虫卵，并在显微镜下观察，具体实验结果分析如下：通过图1和图2得知，在显微镜下鞭虫卵和蛔虫受精卵均呈现虫卵结构的完整性，得以说明本发明公开制备的液基细胞和微生物处理保存试剂对虫卵具有良好的保存效果。本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的方法而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。当前第1页12