优化的结合gp41的分子及其用途的制作方法

相关申请的交叉引用本申请要求美国专利申请系列号62/673,462(于2019年5月18日提交；未决的)的优先权，该申请通过引用以其整体并入本文。序列表的引用按照37c.f.r.1.821以及下面条款，本申请包括一个或多个序列表，其以计算机可读介质(文件名：1301_0155pct_st25.txt，创建于2019年5月11日，并且大小为158,835个字节)公开，该文件以其整体并入本文。本发明涉及具有降低的免疫原性的优化的结合hiv-1gp41的分子。更具体地，本发明涉及包括结合gp41的可变轻链(vl)结构域和/或结合gp41的可变重链(vh)结构域的优化的结合gp41的分子，其已经被优化以在施用至接受受试者时降低这种结构域的免疫原性。本发明特别地涉及作为多特异性的结合gp41的分子(包括双特异性双抗体(包括双抗体)、双特异性抗体、三价结合分子(包括tridenttm分子)等)的结合gp41的分子，其包括：(i)这种优化的结合gp41的可变结构域和(ii)能够结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的结构域。本发明还涉及包括任何这种结合gp41的分子的药物组合物，以及涉及任何这种结合gp41的分子在治疗hiv-1感染中的用途的方法。
背景技术：
：：高活性抗逆转录病毒疗法(haart)已经有效减轻病毒载荷和改善感染的个体中hiv1型(hiv-1)感染的效果。然而，haart不能根除hiv-1感染，并且其不能加速感染细胞的消除。在感染的个体中，作为静息的记忆cd4+t细胞中整合的原病毒，hiv-1以潜伏的状态持续，使haart无法容易接近。因此，尽管施用这种疗法，但是hiv-1病毒持续在已经逃避治疗的hiv-1感染的细胞潜伏库内的个体中。cd8+t细胞具有有限的能力以消除这种潜伏的感染的细胞中的hiv-1。因此，需要用于治疗hiv-1感染的个体的治疗剂，特别是这样的试剂，其靶向病毒感染的细胞并且具有减少hiv-1感染的细胞的潜伏库的潜力，以及适于重复施用。hiv-1病毒的包膜糖蛋白(“env”)对于病毒感染性(经其结合cd4受体的能力)和用于驱动膜融合是至关重要的。hiv-1env基因产物由两个亚单位gp120和gp41的三聚复合物组成。合成env蛋白质作为糖基化gp160前体蛋白质，其被折叠成三聚体并且蛋白水解地切割以产生成熟的gp120和gp41蛋白质。切割的env与其他病毒组分一起装配，用于病毒粒子从细胞表面出芽并且存在于感染的细胞的表面上(miranda，l.，等，2002“cellsurfaceexpressionofthehiv-1envelopeglycoproteinsisdirectedfromintracellularctla-4-containingregulatedsecretorygranules.”procnatlacadsciusa.99(12)：8031-8036)。因此，hivenv，和特别是其gp41亚单位，为经抗体介导的细胞杀伤用于治疗性消除持续的hiv感染库的高度特异性病毒靶(sloane，d.，等，2015，“targetinghivreservoirininfectedcd4tcellsbydual-affinityre-targetingmolecules(darts)thatbindhivenvelopeandrecruitcytotoxictcells”plospathogens|doi:10.1371/journal.ppat.1005233。然而，尽管所有先前的进展，但是仍需要具有增强的抗hiv活性和/或降低的免疫原性的优化的结合gp41的分子。本发明满足了这种需求以及对于用于hiv-1治疗和预防的改善的疗法的需求。技术实现要素：本发明涉及具有降低的免疫原性的优化的结合hiv-1gp41的分子。更具体地，本发明涉及包括结合gp41的可变轻链(vl)结构域和/或结合gp41的可变重链(vh)结构域的优化的结合gp41的分子，其已经被优化以在施用至接受受试者时降低这种结构域的免疫原性。本发明特别地涉及作为多特异性结合gp41的分子(包括双特异性双抗体(包括双抗体)、双特异性抗体、三价结合分子(包括tridenttm分子)等)的结合gp41的分子，其包括：(i)这种优化的结合gp41的可变结构域和(ii)能够结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的结构域。本发明还涉及包括任何这种结合gp41的分子的药物组合物，和涉及任何这种结合gp41的分子在治疗hiv-1感染中的用途的方法。详细地，本发明提供了结合gp41的分子，其包括可变轻链(vl)结构域和可变重链(vh)结构域，其中vl结构域包括seqidno:57的氨基酸序列和/或vh结构域包括seqidno:58的氨基酸序列。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中结合gp41的分子包括：(a)包括seqidno:57的氨基酸序列的vl结构域；和(b)包括seqidno:58的氨基酸序列的vh结构域。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为抗体或包括其结合gp41表位的部分。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为：(a)双特异性抗体；或(b)双抗体，双抗体为包括两条、三条、四条或五条多肽链的共价结合的复合物；或(c)三价结合分子，三价结合分子为包括三条、四条、五条或大于五条多肽链的共价结合的复合物。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为双抗体并且包括结合白蛋白的结构域(abd)。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子包括fc区。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中fc区为变体fc区，其包括：(a)降低变体fc区对fcγr的亲和性的一个或多个氨基酸修饰；和/或(b)增强变体fc区的血清半衰期的一个或多个氨基酸修饰。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中降低变体fc区对fcγr的亲和性的修饰包括l234a；l235a；或l234a和l235a的替换，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中增强变体fc区的血清半衰期的修饰包括m252y；m252y和s254t；m252y和t256e；m252y、s254t和t256e；或k288d和h435k的替换，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为双特异性的并且包括能够免疫特异性结合gp41的表位的一个结合表位的位点和能够免疫特异性结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的一个结合表位的位点。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为双特异性的并且包括能够免疫特异性结合gp41的表位的两个结合表位的位点和能够免疫特异性结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的两个结合表位的位点。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为三特异性的并且包括：(a)能够免疫特异性结合gp41的表位的一个结合表位的位点；(b)能够免疫特异性结合存在于效应细胞的表面上的第一分子的表位的一个结合表位的位点；和(c)能够免疫特异性结合存在于效应细胞的表面上的第二分子的表位的一个结合表位的位点。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中存在于效应细胞的表面上的第一分子为cd3并且存在于效应细胞的表面上的第二分子为cd8。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子为三特异性的并且包括：(a)能够免疫特异性结合gp41的第一表位的一个结合表位的位点；(b)能够免疫特异性结合gp41的第二表位或不同的hiv-1蛋白质的表位的一个结合表位的位点；和(c)能够免疫特异性结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的一个结合表位的位点；其中gp41的第一表位和第二表位为不同的。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子能够同时结合gp41和存在于效应细胞的表面上的分子。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中存在于效应细胞的表面上的分子为cd2、cd3、cd8、cd16、tcr、nkp46或nkg2d。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中效应细胞为细胞毒性t细胞或天然杀伤(nk)细胞。本发明进一步涉及以上指示的结合gp41的分子的实施方式，其中分子介导表达gp41的细胞和细胞毒性t细胞的协调的结合。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中分子包括第一多肽链、第二多肽链和第三多肽链，并且其中：i)(a)第一多肽链包括seqidno:113；b)第二多肽链包括seqidno:114；并且(c)第三多肽链包括seqidno:112；或ii)(a)第一多肽链包括seqidno:115；(b)第二多肽链包括seqidno:116；并且(c)第三多肽链包括seqidno:112。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中分子包括第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链并且其中：(a)第一多肽链包括seqidno:113；(b)第二多肽链包括seqidno:114；(c)第三多肽链包括seqidno:117；并且(d)第四多肽链包括seqidno:118。本发明进一步涉及这种结合gp41的分子的实施方式，其中分子包括第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链并且其中：i)(a)第一多肽链包括seqidno:113；(b)第二多肽链包括seqidno:114；(c)第三多肽链包括seqidno:119；并且(d)第四多肽链包括seqidno:120；或ii)(a)第一多肽链包括seqidno:115；(b)第二多肽链包括seqidno:116；(c)第三多肽链包括seqidno:119；并且(d)第四多肽链包括seqidno:120。本发明进一步涉及药物组合物，其包括有效量的权利要求1-22中任一项的结合gp41的分子和药学上可接受的载体。本发明进一步涉及在需要其的受试者中治疗或预防hiv-1感染的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的包括以上指示的结合gp41的分子的任一项的组合物或以上指示的药物组合物。本发明进一步涉及治疗或预防hiv-1感染的这种方法的实施方式，其进一步包括施用潜伏期激活剂(比如伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、双硫仑、jq1、苔藓抑素、pma、伊诺霉素或其任何组合)。附图简述图1a-1b提供了具有由两条多肽链组成的两个表位结合结构域的代表性共价结合的双抗体示意图，每条多肽链具有e-螺旋或k-螺旋异源二聚体促进结构域(下面提供交替的异源二聚体促进结构域)。半胱氨酸残基可存在于连接体中(图1a)和/或存在于异源二聚体促进结构域中(图1b)。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。在这个图中以及在提供结合分子结构域的示意性呈现的所有图中的波浪线(www)代表一个或多个任选的异源二聚体促进结构域，其是优选地存在的。图2提供了具有由两条多肽链组成的两个表位结合结构域的代表性共价结合的双抗体分子的示意图，每条多肽链具有ch2结构域和ch3结构域，使得缔合的链形成fc区的全部或部分。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。图3a-图3c提供了显示具有由两对多肽链(即，总共四条多肽链)组成的四个表位结合结构域的代表性共价结合的四价双抗体的示意图。每一对中的一条多肽链具备ch2结构域和ch3结构域，使得缔合的链形成fc区的全部或部分。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。两对多肽链可为相同的。在这种实施方式中，其中两对多肽链为相同的并且vl结构域和vh结构域识别不同的表位(如图3a-图3b中显示)，所得分子具备四个表位结合结构域并且就每个结合的表位而言为双特异性的和二价的。在这种实施方式中，其中vl结构域和vh结构域识别相同的表位(例如，在两条链上使用相同的vl结构域cdr和相同的vh结构域cdr)，所得分子具备四个表位结合结构域并且就单个表位而言为单特异性的和四价的。可选地，两对多肽可为不同的。在这种实施方式中，其中两对多肽链为不同的并且每对多肽的vl结构域和vh结构域识别不同的表位(如图3c中通过不同的阴影和图案显示)，所得分子具备四个表位结合结构域并且就每个结合表位而言为四特异性的和单价的。图3a显示了含有fc区的双抗体，其含有包括半胱氨酸残基的肽异源二聚体促进结构域。图3b显示了含有fc区的双抗体，其含有包括半胱氨酸残基的e-螺旋和k-螺旋异源二聚体促进结构域和连接体(具有任选的半胱氨酸残基)。图3c显示了含有fc区的双抗体，其含有抗体ch1结构域和cl结构域。如下面提供的，通过多肽链的缔合形成的vl/vh结合位点可为相同的或不同的，以便允许作为单特异性、双特异性、三特异性或四特异性的四价结合。图4a-图4b提供了具有由三条多肽链组成的两个表位结合结构域的代表性共价结合的双抗体分子的示意图。多肽链中的两条具备ch2结构域和ch3结构域，使得缔合的链形成fc区的全部或部分。包括vl结构域和vh结构域的多肽链进一步包括异源二聚体促进结构域。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。图5提供了具有由五条多肽链组成的四个表位结合结构域的代表性共价结合的结合分子的示意图。多肽链中的两条具备ch2结构域和ch3结构域，使得缔合的链形成包括fc区的全部或部分的fc区。包括连接的vl结构域和vh结构域的多肽链进一步包括异源二聚体促进结构域。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。如下面提供的，通过多肽链的缔合形成的vl/vh结合位点可为相同的或不同的，以便允许四价结合为单特异性、双特异性、三特异性或四特异性。图6a-图6f提供了具有三个表位结合结构域的代表性含有fc区的三价结合分子的示意图。图6a示意性阐释了包括具有不同结构域定向的两个双抗体型结合结构域和fab型结合结构域的三价结合分子的结构域，其中双抗体型结合结构域为n-末端至fc区。图6b示意性阐释了包括具有不同结构域定向的两个双抗体型结合结构域和fab型结合结构域的三价结合分子的结构域，其中双抗体型结合结构域为fc区的c-末端。图6a-图6b中的分子包括四条链。图6c和图6d分别示意性阐释了包括n-末端至fc区的两个双抗体型结合结构域和其中轻链和重链经多肽间隔子连接的fab型结合结构域或scfv型结合结构域的三价结合分子的结构域。图6e和图6f中的三价结合分子分别示意性阐释了包括c-末端至fc区的两个双抗体型结合结构域和其中轻链和重链经多肽间隔子连接的fab型结合结构域或scfv型结合结构域的三价结合分子的结构域。图6c-图6f中的三价结合分子包括三条链。识别相同表位的vl结构域和vh结构域使用相同的阴影或填充图案显示。图7a-图7b显示了7b2、种系化7b2(7b2gl)和指示的人种系的氨基酸序列的比对。与7b2的差异被加了阴影，指出了框架(fw)区和cdr区并且提供了kabat编号。vl结构域在图7a中呈现并且vl结构域在图7b中呈现。图8a-图8b显示了如通过attanacella200qcm测量的，结合固定的7b2igg(图8a)和7b2gligg(图8b)的重组体hiv-1jrflgp140(100，50，25nm)的传感图。图9显示了dart-a(包括优化的以使免疫原性最小化的7b2glvl结构域和vh结构域)和dart-1(包括亲本7b2vl结构域和vh结构域)结合表达gp140的hek293/d371细胞的表面的能力。图10显示了如在jurkatt细胞报告测试中测量的，dart-a(包括优化的以使免疫原性最小化的7bglvl结构域和vh结构域)和dart-1(包括亲本7b2vl结构域和vh结构域)激活t细胞的能力。图11显示了在ctl测试中，dart-a(包括优化的以使免疫原性最小化的7bglvl结构域和vh结构域)和dart-1(包括亲本7b2vl结构域和vh结构域)介导表达hivgp41的靶细胞的t细胞重定向杀伤的能力。具体实施方式本发明涉及具有降低的免疫原性的优化的结合hiv-1gp41的分子。更具体地，本发明涉及包括已经被优化的结合gp41的可变轻链(vl)结构域和/或结合gp41的可变重链(vh)结构域的优化的结合gp41的分子，以在施用至接受受试者时降低这种结构域的免疫原性。本发明特别地涉及为多特异性结合gp41的分子(包括双特异性双抗体(包括双抗体)、双特异性抗体、三价结合分子(包括tridenttm分子)等)的结合gp41的分子，其包括：(i)这种优化的结合gp41的可变结构域和(ii)能够结合存在于效应细胞的表面上的分子的表位的结构域。本发明还涉及包括任何这种结合gp41的分子的药物组合物，以及涉及任何这种结合gp41的分子在hiv-1感染的治疗中的用途的方法。i.抗体和其他结合分子a.抗体本发明的结合gp41的分子可为抗体，或可为由结合gp41的抗体衍生的(例如，通过抗体多肽的片段化、切割等)，或从抗体分子的一条或多条多肽链的氨基酸序列的使用获得的，或通过编码这种多肽的多核苷酸表达的，或从这种多核苷酸的核苷酸序列获得的。抗体为能够特异性结合分子，比如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等的特定结构域或部分(moiety)或构造(“表位”)的免疫球蛋白分子。含表位的分子可具有免疫原性活性，使得其引起动物中的抗体产生应答；这种分子被称为“抗原”。如本文使用的，术语“抗体(antibody)”和“抗体(antibodies)”指单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、多克隆抗体、骆驼源化抗体(camelizedantibody)、单链fvs(scfv)、单链抗体、fab部分、f(ab')部分、二硫键连接的双特异性fv(sdfv)、胞内抗体(intrabodies)和任何上述表位结合结构域。这种免疫球蛋白分子可为任何类型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)；类别(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亚类；或种类(牛、马、猫、犬、啮齿动物、灵长类(例如，包括猴子比如，食蟹猴、人等))。术语“单克隆抗体”指同源性抗体群，其中单克隆抗体包括涉及抗原的选择性结合的氨基酸(天然存在的或非天然存在的)。单克隆抗体为高度特异性，针对单个表位(或抗原位点)。术语“单克隆抗体”不仅仅涵盖完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，而且也涵盖其部分(比如fab、fab'、f(ab')2、(fv)、单链(scfv)、其突变体、包括抗体部分的融合蛋白、人源化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和包括结合抗原所需特异性和能力的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型。就抗体的来源或其制备的方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物等)而言，不旨在是限制性的。术语包括完整的免疫球蛋白以及上面根据“抗体”的定义描述的部分等。制备单克隆抗体的方法是本领域已知的。可采用的一种方法是kohler，g.等(1975)“continuousculturesoffusedcellssecretingantibodyofpredefinedspecificity,”nature256:495-497的方法或其修饰。典型地，单克隆抗体在小鼠、大鼠或兔子中开发。通过用免疫原性量的细胞、细胞提取物或包含期望表位的蛋白质制品免疫动物而产生抗体。免疫原可为但不限于原代细胞、培养细胞系、癌细胞、蛋白质、肽、核酸或组织。在其用作免疫原之前，用于免疫的细胞可被培养一段时间(例如，至少24小时)。细胞它们本身或联合非变性佐剂(比如ribi)可用作免疫原(见，例如，jennings，v.m.(1995)“reviewofselectedadjuvantsusedinantibodyproduction,”ilarj.37(3):119-125)。一般而言，在用作免疫原时，细胞应保持完整并且优选地是活的。相比于破裂的细胞，完整的细胞可允许抗原被免疫的动物更好地检测到。变性佐剂或烈性佐剂(harshadjuvants)，例如，弗氏佐剂的使用，可使细胞破裂并且因此受阻。以周期性间隔免疫原可被施用多次，比如两周一次或一周一次，或可以以在动物中(例如，在组织重组体中)维持生存力的这种方式被施用。可选地，对于期望的致病表位是免疫特异性的现有单克隆抗体和任何其他等效抗体可被测序，并通过本领域中已知的任何手段重组产生。在一个实施方式中，对这种抗体测序，然后将多核苷酸序列克隆到载体中用于表达或增殖。编码感兴趣的抗体的序列可在宿主细胞内保持在载体中，然后可扩增和冷冻宿主细胞，用于将来的使用。这种抗体的多核苷酸序列可用于基因操作，以产生本发明的单特异性或多特异性(例如，双特异性、三特异性和四特异性)分子以及亲和力优化的嵌合抗体、人源化抗体和/或犬源化(caninized)抗体，以改善抗体的亲和力或其他特征，如下所详述。本发明的抗体和结合分子以“免疫特异性”方式经它们的结合结构域结合表位。如本文所用，如果分子相对于可选的表位与该表位更频繁、更迅速、以更长的持续时间和/或以与该表位更大的亲和力结合或缔合，则认为该分子以免疫特异性的方式(或“免疫特异性地”)结合另一分子的该表位。例如，免疫特异性结合病毒表位的抗体是相比于其免疫特异性结合其他病毒表位或非病毒表位以更大的亲和力、亲合性、更容易地和/或以更长的持续时间结合该病毒表位的抗体。通过阅读该定义也应理解，例如，免疫特异性结合第一靶的抗体(或部分或表位)可特异性地或优先地结合第二靶标或可不特异性地或不优先地结合第二靶标。正因如此，“免疫特异性结合”并不一定要求(尽管其可包括)排他性结合。一般地，但不一定，提及结合意味着“免疫特异性”结合。天然抗体仅能够结合一种表位种类(即，它们为“单特异性的”)，尽管它们可免疫特异性结合该种类的多个拷贝(即，展示出“二价”或“多价”)。如果这种结合展示出受体结合它们各自配体的特异性，则两个分子视为能够以“生理特异性的”方式彼此结合。过去几十年已经看出对抗体的治疗潜力的关注的复苏，并且抗体已经变成生物技术衍生的药物的主导类别之一(chan，c.e.等(2009)“theuseofantibodiesinthetreatmentofinfectiousdiseases,”singaporemed.j.50(7):663-666)。超过200种基于抗体的药物已经被批准使用或在开发中。1.抗体的一般结构属性天然存在的免疫球蛋白(例如，igg)的基本结构单元是由两条较短“轻链”与两条较长的“重链”复合组成的四聚物，并且通常表达为约150,000da的糖蛋白。每条链由包含“可变结构域”的氨基末端(“n-末端”)部分和包含至少一个“恒定结构域”的羧基末端(“c-末端”)部分组成。igg轻链由单个“轻链可变结构域”(“vl”)和单个“轻链恒定结构域”(“cl”)组成。因此，igg分子的轻链的结构是n-vl-cl-c(其中n和c分别代表多肽的n-末端和c-末端)。igg重链由单个“重链可变结构域”(“vh”)、三个“重链恒定结构域”(“ch1”、“ch2”和“ch3”)和位于ch1和ch2结构域之间的“铰链”区(“h”)组成。因此，igg重链的结构是n-vh-ch1-h-ch2-ch3-c(其中n和c分别代表多肽的n-末端和c-末端)。完整的、未修饰的抗体(例如，igg抗体)结合抗原表位的能力取决于可变结构域的存在和序列。除非特别地说明，否则本文所述的蛋白质分子的结构域的顺序为“n-末端至c-末端”方向。(a)恒定结构域(i)轻链恒定结构域优选的cl结构域为人iggclκ结构域。示例性人clκ结构域的氨基酸序列为(seqidno:1)：rtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec可选地，示例性cl结构域为人iggclλ结构域。示例性人clλ结构域的氨基酸序列为(seqidno:2)：qpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvettpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs(ii)重链ch1结构域抗体的两条重链的ch1结构域与抗体的轻链的“cl”恒定区复合,并且经间插铰链结构域附接至重链的ch2结构域。示例性ch1结构域为人igg1ch1结构域。示例性人igg1ch1结构域的氨基酸序列为(seqidno:3)：astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrv示例性ch1结构域为人igg2ch1结构域。示例性人igg2ch1结构域的氨基酸序列为(seqidno:4)：astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktv示例性ch1结构域为人igg3ch1结构域。示例性人igg3ch1结构域的氨基酸序列为(seqidno:5)：astkgpsvfplapcsrstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtytcnvnhkpsntkvdkrv示例性ch1结构域为人igg4ch1结构域。示例性人igg4ch1结构域的氨基酸序列为(seqidno:6)：astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrv(b)重链铰链区一个示例性铰链结构域为人igg1铰链结构域。示例性人igg1铰链结构域的氨基酸序列为(seqidno:7)：epkscdkthtcppcp。另一示例性铰链结构域为人igg2铰链结构域。示例性人igg2铰链结构域的氨基酸序列为(seqidno:8)：erkccvecppcp。另一示例性铰链结构域为人igg3铰链结构域。示例性人igg3铰链结构域的氨基酸序列为(seqidno:9)：elktplgdtthtcprcpepkscdtpppcprcpepkscdtpppcprcpepkscdtpppcprcp。另一示例性铰链结构域为人igg4铰链结构域。示例性人igg4铰链结构域的氨基酸序列为(seqidno:10)：eskygppcpscp。如本文描述的，igg4铰链结构域可包括稳定突变比如s228p替换。示例性s228p-稳定的人igg4铰链结构域的氨基酸序列为(seqidno:11)：eskygppcppcp。(c)重链ch2结构域和ch3结构域两条重链的ch2结构域和ch3结构域相互作用以形成被细胞fc受体识别的igg抗体的“fc结构域”，fc受体包括但不限于fcγ受体(fcγr)。如本文使用的，术语“fc区”用于限定igg重链的c-末端区。fc区的一部分(包括涵盖完整的fc区的部分)在本文中称为“fc结构域”。如果fc区的氨基酸序列相对于其他igg同种型与该同种型最同源，则认为fc区具有特定的igg同种型、类别或亚类。除其已知的在诊断中的用途外，抗体还显示可用作治疗剂。示例性人igg1的ch2-ch3结构域的氨基酸序列为(seqidno:12)：如通过kabat中所示的eu索引所编号，其中x是赖氨酸(k)或不存在。示例性人igg2的ch2-ch3结构域的氨基酸序列为(seqidno:13)：如通过kabat中所示的eu索引所编号，其中x是赖氨酸(k)或不存在。示例性人igg3的ch2-ch3结构域的氨基酸序列为(seqidno:14)：如通过kabat中所示的eu索引所编号，其中x是赖氨酸(k)或不存在。示例性人igg4的ch2-ch3结构域的氨基酸序列为(seqidno:15)：如通过kabat中所示的eu索引所编号，其中x是赖氨酸(k)或不存在。遍及本申请说明书，igg重链的恒定区中的残基的编号是按照kabat等的sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版，公共卫生署(publichealthservice)，nh1，md(1991)(“kabat”)中eu索引的编号，其通过引用明确地并入本文。术语“如kabat中的eu索引”指人igg1eu抗体的恒定结构域的编号。在抗体恒定区内在许多不同位置(例如，fc位置，包括但不限于通过kabat中所示的eu索引所编号的位置270、272、312、315、356和358)已经观察到多态性，并且因此在所展示出的序列和现有技术中的序列之间可存在轻微差异。已经很好地表征了人免疫球蛋白的多态形式。目前，18gm同种异型是已知的：g1m(1、2、3、17)或g1m(a、x、f、z)、g2m(23)或g2m(n)、g3m(5、6、10、11、13、14、15、16、21、24、26、27、28)或g3m(b1、c3、b3、b0、b3、b4、s、t、g1、c5、u、v、g5)(lefranc等“thehumaniggsubclasses：molecularanalysisofstructure，functionandregulation.”pergamon，oxford，pp.43-78(1990)；lefranc，g.等1979，hum.genet.：50，199-211)。具体地，考虑本发明的抗体可并入任何免疫球蛋白基因的任何同种异型(allotype)、异种型(isoallotype)或单体型(haplotype)，并且不限于本文提供的序列的同种异型、异种型或单体型。而且，在一些表达系统中，ch3结构域的c-末端氨基酸残基(上文粗体)可在翻译后去除。相应地，在本发明的结合gp41的分子中，ch3结构域的c-末端残基为任选的氨基酸残基。具体地，本发明涵盖的为缺少ch3结构域的c-末端残基的结合gp41的分子。同样具体地，本发明涵盖的为包括ch3结构域的c-末端赖氨酸残基的这种构建体。(d)可变结构域igg分子的可变结构域由三个“互补决定区”(“cdr”)以及称为“框架区”(“fr”)的间插非-cdr区段组成，cdr包含抗体的将与表位接触的氨基酸残基，fr大体上保持cdr环(loop)的结构和确定cdr环的定位以允许这种接触(尽管某些框架残基也可接触表位)。因此，vl结构域和vh结构域具有结构n-fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4-c。cdr的氨基酸序列确定抗体是否将能够结合特定的表位。抗体轻链与抗体重链的相互作用，并且具体地，它们的vl结构域和vh结构域的相互作用形成抗体的表位结合结构域。来自免疫球蛋白的成熟的重链和轻链的可变结构域的氨基酸也是通过链中氨基酸的位置命名。kabat描述了关于抗体的许多氨基酸序列、鉴定了每个亚组的氨基酸共有序列并且为每个氨基酸指定了残基编号，并且鉴定cdr，如通过kabat定义(应理解，通过chothia，c.&lesk，a.m.((1987)“canonicalstructuresforthehypervariableregionsofimmunoglobulins,”j.mol.biol.196:901-917)定义的cdrh1提前五个残基开始)。kabat的编号方案可通过参照保守氨基酸将考虑的抗体与kabat中的共有序列之一比对而扩展至不包括在其纲要中的抗体。用于指定残基编号的该方法在本领域中已经变成了标准，并且易于鉴定在包括嵌合或人源化变体的不同抗体中在等同位置处的氨基酸。例如，在人抗体轻链的位置50处的氨基酸占据与小鼠抗体轻链的位置50处的氨基酸等同的位置。是(或可用作)抗体轻链的第一cdr、第二cdr和第三cdr的多肽在本文中分别命名为：cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域。类似地，是(或可用作)抗体重链的第一cdr、第二cdr和第三cdr的多肽在本文中分别命名为：cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域。因此，术语cdrl1结构域、cdrl2结构域、cdrl3结构域、cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域涉及这种多肽：当其并入到蛋白中时，引起该蛋白能够结合特定表位，而无论这种蛋白是具有轻链和重链的抗体或是双抗体或单链结合分子(例如，scfv、等)，或是另一类型蛋白。术语“表位结合结构域”(例如，结合gp41的结构域)意指有助于结合分子免疫特异性结合表位(例如，gp41的表位)的能力的结合分子的一部分(或具有这种部分的氨基酸序列的多肽)。表位结合结构域可含有抗体的vl结构域或vh结构域，或抗体的任何1个、2个、3个、4个或5个cdr结构域，或可含有抗体的全部6个cdr结构域，并且，尽管能够免疫特异性结合这种表位，但对不同于这种抗体的表位的这种表位可展示出免疫特异性、亲和力或选择性。表位结合结构域可仅含有部分cdr，即对于结合所需的cdr残基的子集，称为sdr(kim，j.h.等(2012)“humanizationbycdrgraftingandspecificity-determiningresiduegrafting,”methodsmol.biol.907:237-245；kim，k.s.等(2010)“constructionofahumanizedantibodytohepatitisbsurfaceantigenbyspecificity-determiningresidues(sdr)-graftingandde-immunization,”biochem.biophys.res.commun.396(2):231-237；kashmiri，s.v.等(2005)“sdrgrafting–anewapproachtoantibodyhumanization,”methods36(1):25-34；gonzales，n.r.等(2004)“sdrgraftingofamurineantibodyusingmultiplehumangermlinetemplatestominimizeitsimmunogenicity,”mol.immunol.41:863-872)。然而，优选地，表位结合结构域将含有这种抗体的全部6个cdr结构域。表位结合结构域可为单个多肽链(例如，scfv)，或可包括两条或更多条多肽链，其各自可具有氨基末端和羟基末端(例如，双抗体、fab部分、fab2部分等)，并且其可经二硫键彼此共价结合。2.抗体的人源化本发明还特别地涵盖包括抗体的vl结构域或vh结构域，并且优选地抗体的vl结构域和vh结构域二者的结合分子。优选地，这种抗体为人源化抗体。单克隆抗体通常在如小鼠或兔的非人物种中制备。这种抗体的可变结构域和/或恒定结构域可被识别为免疫原，从而诱发针对它们的免疫应答。然而，这种分子可通过引入一个或多个氨基酸替换而被“人源化”，以便使得这种抗体更像由人产生的抗体，从而减少或消除它们的免疫原性。术语“人源化”抗体指通常使用重组技术制备的嵌合分子，其具有来自非人物种的免疫球蛋白的表位结合位点和剩余的基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的分子的免疫球蛋白结构。这种抗体的可变结构域的多核苷酸序列可用于遗传操纵以产生这种衍生物并且改善这种抗体的亲和力或其他特征。已经通过lobuglio，a.f.等(1989)“mouse/humanchimericmonoclonalantibodyinman：kineticsandimmuneresponse,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)86:4220-4224；sato，k.等(1993)cancerres53:851-856.riechmann，l.等(1988)“reshapinghumanantibodiesfortherapy,”nature332:323-327；verhoeyen，m.等(1988)“reshapinghumanantibodies：graftinganantilysozymeactivity,”science239:1534-1536；kettleborough，c.a.等(1991)“humanizationofamousemonoclonalantibodybycdr-grafting：theimportanceofframeworkresiduesonloopconformation,”proteinengineering4:773-3783；maeda，h.等(1991)“constructionofreshapedhumanantibodieswithhiv-neutralizingactivity,”humanantibodieshybridoma2:124-134；gorman，s.d.等(1991)“reshapingatherapeuticcd4antibody,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:4181-4185；tempest，p.r.等(1991)“reshapingahumanmonoclonalantibodytoinhibithumanrespiratorysyncytialvirusinfectioninvivo,”bio/technology9:266-271；co，m.s.等(1991)“humanizedantibodiesforantiviraltherapy,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:2869-2873；carter，p.等(1992)“humanizationofananti-p185her2antibodyforhumancancertherapy,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)89:4285-4289；andco，m.s.等(1992)“chimericandhumanizedantibodieswithspecificityforthecd33antigen,”j.immunol.148:1149-1154报道了这种方式对各种抗体的应用。在一些实施方式中，人源化抗体保留全部的cdr序列(例如，包含来自小鼠抗体的全部六个cdr的人源化小鼠抗体)。在其他实施方式中，人源化抗体相对于原抗体具有序列不同的一个或多个(一个、两个、三个、四个、五个或六个)cdr。使抗体人源化的一般原则涉及保留抗体的表位结合结构域的基本序列，同时用人抗体序列交换该抗体的非人剩余部分。使单克隆抗体人源化有四个常规步骤。这些步骤是：(1)确定起始抗体轻链可变结构域和重链可变结构域的核苷酸和预测的氨基酸序列；(2)设计人源化抗体或犬源化抗体，即决定在人源化或犬源化过程期间使用哪个抗体框架区；(3)实际的人源化或犬源化方法/技术；和(4)人源化抗体的转染和表达。见，例如美国专利号4,816,567、5,807,715、5,866,692和6,331,415。已经描述了包括源自非人免疫球蛋白的表位结合结构域的许多人源化抗体分子，包括具有啮齿动物可变结构域或修饰的啮齿动物可变结构域和与人恒定结构域融合的它们缔合的互补决定区(cdr)的嵌合抗体(见，例如winter等(1991)“man-madeantibodies,”nature349:293-299；lobuglio等(1989)“mouse/humanchimericmonoclonalantibodyinman：kineticsandimmuneresponse,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)86:4220-4224(1989)；shaw等(1987)“characterizationofamouse/humanchimericmonoclonalantibody(17-1a)toacoloncancertumor-associatedantigen,”j.immunol.138:4534-4538；和brown等(1987)“tumor-specificgeneticallyengineeredmurine/humanchimericmonoclonalantibody,”cancerres.47:3577-3583)。其他参考文献描述了在与适当的人抗体恒定结构域融合之前移植到人支撑框架区(fr)中的啮齿动物cdr(见，例如riechmann，l.等(1988)“reshapinghumanantibodiesfortherapy,”nature332:323-327；verhoeyen，m.等(1988)“reshapinghumanantibodies：graftinganantilysozymeactivity,”science239:1534-1536；和jones等(1986)“replacingthecomplementarity-determiningregionsinahumanantibodywiththosefromamouse,”nature321:522-525)。另一参考文献描述了通过重组修饰的啮齿动物框架区支撑的啮齿动物cdr。见，例如欧洲专利公开号519,596。这些“人源化”分子被设计为使得对啮齿动物抗人抗体分子的不期望的免疫应答最小化，该不期望的免疫应答限制了那些部分在人接受者中治疗应用的持续时间和功效。也可使用的使抗体人源化的其他方法公开在下面文献中：daugherty等(1991)“polymerasechainreactionfacilitatesthecloning，cdr-grafting，andrapidexpressionofamurinemonoclonalantibodydirectedagainstthecd18componentofleukocyteintegrins,”nucl.acidsres.19:2471-2476和美国专利号6,180,377、6,054,297、5,997,867和5,866,692。本发明特别地涵盖包括“人源化”抗体的vl结构域和/或vh结构域的结合分子(包括抗体和双抗体)。尽管取得了这种成功，通过仔细考虑和放置在多肽链中采用的结构域，可以进一步改善为治疗用途优化的稳定的、功能性异源二聚化的、非单特异性双抗体的制备。因此，本发明涉及提供特异性的多肽，所述多肽经特别地设计以经共价结合形成能够同时结合gp41和存在于免疫效应细胞的表面上的分子的稳定且在治疗上有用的异源二聚化双抗体和异源二聚化fc双抗体。b.双特异性抗体如以上指示，天然抗体能够结合仅一种表位种类(即，它们为单特异性)，尽管它们可结合该种类的多个拷贝(即，展示出二价或多价)。抗体结合抗原表位的能力取决于抗体的vl结构域和vh结构域的存在和氨基酸序列。抗体的轻链和重链的相互作用并且，特别地，其vl结构域和vh结构域的相互作用形成天然抗体，比如igg的两个表位结合结构域之一。抗体的官能度可通过产生可同时结合两个分开且不同抗原(或相同抗原的不同表位)的基于多特异性抗体的分子和/或通过产生对于相同表位和/或抗原具有更高价(即，大于两个结合结构域)的基于抗体的分子增强。为了提供比天然抗体具有更高能力的分子，已经开发了各种重组双特异性抗体形式(见，例如pct公开号wo2008/003116、wo2009/132876、wo2008/003103、wo2007/146968、wo2009/018386、wo2012/009544、wo2013/070565)。大多数这类方法使用连接体肽以将另外的结合结构域(例如，scfv、vl、vh等)与抗体核心(iga、igd、ige、igg或igm)融合或融合到抗体核心内，或以使多个抗体结合部分(例如，两个fab部分或scfv)彼此融合。可选的形式使用连接体肽以将结合蛋白(例如，scfv、vl、vh等)与二聚结构域比如ch2-ch3结构域或可选的多肽融合(wo2005/070966、wo2006/107786a、wo2006/107617a、wo2007/046893)。典型地，这种方法涉及折中(compromises)和权衡(trade-offs)。例如，pct公开号wo2013/174873、wo2011/133886和wo2010/136172公开了连接体的使用可能引起治疗设置中的问题并且教导了这种三特异性抗体：其中cl结构域和ch1结构域从各自天然位置转换以及vl结构域和vh结构域已经被多样化(wo2008/027236、wo2010/108127)，以允许它们结合多于一个抗原。从而，在这些文件中公开的分子以结合特异性换取结合另外的抗原种类的能力。pct公开号wo2013/163427和wo2013/119903公开了修饰ch2结构域以包含包括结合结构域的融合蛋白加合物(adduct)。文件指出ch2结构域可能在介导效应子功能中仅起到最小的作用。pct公开号wo2010/028797、wo2010028796和wo2010/028795公开了其fc区已经用另外的vl结构域和vh结构域替换以形成三价结合分子的重组抗体。pct公开号wo2003/025018和wo2003012069公开其单个链包含scfv结构域的重组双抗体。pct公开号wo2013/006544公开了多价fab分子，其被合成为单个多肽链且然后经历蛋白水解以产生异源二聚体结构。因此，在这些文件中公开的分子以介导效应子功能的能力的全部或一些换取结合另外的抗原种类的能力。pct公开号wo2014/022540、wo2013/003652、wo2012/162583、wo2012/156430、wo2011/086091、wo2008/024188、wo2007/024715、wo2007/075270、wo1998/002463、wo1992/022583和wo1991/003493公开了将另外的结合结构域或官能团添加至抗体或抗体部分(例如，添加双抗体至抗体的轻链，或添加另外的vl结构域和vh结构域至抗体的轻链和重链，或添加异源融合蛋白或将多个fab结构域彼此连接)。因此，在这些文件中公开的分子以天然的抗体结构换取结合另外的抗原种类的能力。ii.双特异性双抗体本领域还已经指出在能够结合两个或更多个不同表位种类方面(即，除了二价或多价外，还展示出双特异性或多特异性)产生不同于天然抗体的双抗体的能力(见，例如holliger等(1993)“’diabodies’：smallbivalentandbispecificantibodyfragments,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)90:6444-6448；us2004/0058400(hollinger等)；us2004/0220388(mertens等)；alt等(1999)febslett.454(1-2):90-94；lu，d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672；wo02/02781(mertens等)；olafsen，t.等(2004)“covalentdisulfide-linkedanti-ceadiabodyallowssite-specificconjugationandradiolabelingfortumortargetingapplications,”proteinengdessel.17(1):21-27；wu，a.等(2001)“multimerizationofachimericanti-cd20singlechainfv-fvfusionproteinismediatedthroughvariabledomainexchange,”proteinengineering14(2):1025-1033；asano等(2004)“adiabodyforcancerimmunotherapyanditsfunctionalenhancementbyfusionofhumanfcdomain,”abstract3p-683，j.biochem.76(8):992；takemura，s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588；baeuerle，p.a.等(2009)“bispecifictcellengagingantibodiesforcancertherapy,”cancerres.69(12):4941-4944)。双抗体的设计基于单链可变结构域部分(scfv)的结构，其中使用短的连接肽将轻链和重链可变结构域彼此连接。bird等(1988)(“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)描述了连接肽的示例，所述连接肽在一个可变结构域的羧基末端和另一个可变结构域的氨基末端之间桥接约3.5nm。已经设计和使用其他序列的连接体(bird等(1988)“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)。为了另外功能，比如药物的附接或附接至固体载体，连接体可又被修饰。可重组地或合成地产生单链变体。对于scfv的合成产生，可使用自动合成仪。对于scfv的重组产生，可将适当的编码scfv的含有多核苷酸的质粒引入适当的宿主细胞，真核细胞，比如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞；或原核细胞，比如大肠杆菌。编码感兴趣的scfv的多核苷酸可通过常规操作比如多核苷酸的连接(ligation)制造。所得scfv可使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离。提供非单特异性“双抗体”对抗体带来了显著的优势：共连接和共定位表达不同表位的细胞的能力。因此，双特异性双抗体具有包括治疗和免疫诊断的广泛的应用。双特异性使双抗体在各种应用中的设计和工程化允许极大的灵活性，从而提供增强的对多聚体抗原的亲和力、不同抗原的交联以及依赖于靶抗原二者的存在对特定细胞类型的定向靶向。由于它们的二价、低解离速率和从循环中的快速清除(对于小尺寸的双抗体，等于或低于～50kda)，本领域已知的双抗体分子也已显示在肿瘤成像领域中的特殊用途(fitzgerald等(1997)“improvedtumourtargetingbydisulphidestabilizeddiabodiesexpressedinpichiapastoris,”proteineng.10:1221)。产生双特异性双抗体的能力导致它们用于(以“反式(trans)”)将两个细胞共连接一起，例如，通过共连接存在于不同细胞的表面上的受体(例如，将细胞毒性t细胞交联至靶细胞，比如表达疾病抗原的癌细胞或感染病原体的细胞)(staerz等(1985)“hybridantibodiescantargetsitesforattackbytcells,”nature314:628-631，andholliger等(1996)“specifickillingoflymphomacellsbycytotoxict-cellsmediatedbyabispecificdiabody,”proteineng.9:299-305；marvin等(2005)“recombinantapproachestoigg-likebispecificantibodies,”actapharmacol.sin.26:649-658；sloan等(2015)“targetinghivreservoirininfectedcd4tcellsbydual-affinityre-targetingmolecules(darts)thatbindhivenvelopeandrecruitcytotoxictcells,”plospathog11(11)：e1005233.doi:10.1371/journal.ppat.1005233))。可选地(或另外地)，双特异性(或多特异性)双抗体可用于(以“顺式(cis)”)共连接存在于相同细胞的表面上的分子，比如受体等。不同的细胞和/或受体的共连接用于调节效应器功能和/或免疫细胞信号传导。包括表位结合结构域的多特异性分子(例如，双特异性双抗体)可针对t淋巴细胞、天然杀伤(nk)细胞、抗原呈递细胞或其他单核细胞上表达的任何免疫细胞的表面决定子，比如cd2、cd3、cd8、cd16、tcr、nkg2d等，或针对b细胞的表面决定子，比如cd19、cd20、cd22、cd30、cd37、cd40和cd74(moore，p.a.等(2011)“applicationofdualaffinityretargetingmoleculestoachieveoptimalredirectedtcellkillingofb-celllymphoma,”blood117(17):4542-4551；cheson，b.d.等(2008)“monoclonalantibodytherapyforb-cellnon-hodgkin’slymphoma,”n.engl.j.med.359(6):613-626；castillo，j.等(2008)“newermonoclonalantibodiesforhematologicalmalignancies,”exp.hematol.36(7):755-768)。特别地，针对存在于免疫效应细胞上的细胞表面受体的表位结合结构域用于产生能够介导重定向细胞杀伤的多特异性结合分子。在许多研究中，还发现了结合效应细胞决定子，例如，fcγ受体(fcγr)的双抗体激活效应细胞(holliger等(1996)“specifickillingoflymphomacellsbycytotoxict-cellsmediatedbyabispecificdiabody,”proteineng.9:299-305；holliger等(1999)“carcinoembryonicantigen(cea)-specifict-cellactivationincoloncarcinomainducedbyanti-cd3xanti-ceabispecificdiabodyandb7xanti-ceabispecificfusionproteins,”cancerres.59:2909-2916以及pct公布号wo2006/113665；wo2008/157379；wo2010/080538；wo2012/018687和wo2012/162068)。通常地，效应细胞激活是通过结合抗原的抗体通过fc-fcγr相互作用与效应细胞的结合而触发；因此，就此而言，双抗体分子可展现出ig样官能度，而不依赖它们是否包括fc结构域(例如，如在本领域已知的或本文举例说明的任何效应子功能测试中(例如，adcc测试)分析的)。通过使肿瘤细胞和效应细胞交联，双抗体不仅仅使效应细胞进入肿瘤细胞的附近内，而且导致有效的肿瘤杀伤(见，例如cao等(2003)“bispecificantibodyconjugatesintherapeutics,”adv.drug.deliv.rev.55:171-197)。然而，上述双特异性双抗体的优势的成本是显著的。这种非单特异性双抗体的形成要求两条或更多条独特且不同的多肽的成功组装(即，这种形成要求通过不同多肽链种类的异源二聚化而形成双抗体)。该事实与通过相同的多肽链的同源二聚化形成的单特异性双抗体相反。因为必须提供至少两条不同的多肽(即，两种多肽种类)，以便形成非单特异性双抗体，并且因为这种多肽的同源二聚化而导致不活跃的分子(takemura，s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588)，必须以防止相同种类的多肽之间的共价结合(即，以便防止同源二聚化)的方式完成这种多肽的产生(takemura，s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588)。因此，本领域已经教导了这种多肽的非共价缔合(见，例如，olafsen等(2004)“covalentdisulfide-linkedanti-ceadiabodyallowssite-specificconjugationandradiolabelingfortumortargetingapplications,”prot.engr.des.sel.17:21-27；asano等(2004)“adiabodyforcancerimmunotherapyanditsfunctionalenhancementbyfusionofhumanfcdomain,”abstract3p-683，j.biochem.76(8):992；takemura，s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588；lu，d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672)。然而，本领域认识到，由非共价缔合的多肽组成的双特异性双抗体是不稳定的并且容易离解成非功能性单多肽链单体(见，例如，lu，d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672)。面对该挑战时，本领域已经成功开发了稳定的共价结合的异源二聚化非单特异性双抗体，称为双抗体，见，例如，liu.l等(2017)“mgd011，acd19xcd3dual-affinityretargetingbi-specificmoleculeincorporatingextendedcirculatinghalf-lifeforthetreatmentofb-cellmalignancies,”clincancerres.23(6):1506-1518；tsai，p.等(2016)“cd19xcd3dartproteinmediateshumanb-celldepletioninvivoinhumanizedbltmice,”mol.ther.oncolytics3:15024.doi：10.1038/mto.2015.24；chen，x.等(2016)“mechanisticprojectionoffirst-in-humandoseforbispecificimmunomodulatoryp-cadherinlp-dart：anintegratedpk/pdmodelingapproach,”clin.pharmacol.ther.100(3):232-241；sloan，d.d.等(2015)“targetinghivreservoirininfectedcd4tcellsbydual-affinityre-targetingmolecules(darts)thatbindhivenvelopeandrecruitcytotoxictcells,”plospathog.11(11):e1005233.doi：10.1371/journal.ppat.1005233；alhussaini，m.等(2015)“targetingcd123inamlusingat-celldirecteddual-affinityre-targetingplatform,”bloodpii：blood-2014-05-575704；chichili，g.r.等(2015)“acd3xcd123bispecificdartforredirectinghosttcellstomyelogenousleukemia：preclinicalactivityandsafetyinnonhumanprimates,”sci.transl.med.7(289):289ra82；johnson，s.等(2010)“effectorcellrecruitmentwithnovelfv-baseddual-affinityre-targetingproteinleadstopotenttumorcytolysisandinvivob-celldepletion,”j.molec.biol.399(3):436-449；veri，m.c.等(2010)“therapeuticcontrolofbcellactivationviarecruitmentoffcgammareceptoriib(cd32b)inhibitoryfunctionwithanovelbispecificantibodyscaffold,”arthritisrheum.62(7):1933-1943；moore，p.a.等(2011)“applicationofdualaffinityretargetingmoleculestoachieveoptimalredirectedtcellkillingofb-celllymphoma,”blood117(17):4542-4551；美国专利号9,932,400；9,908,938；9,889,197；9,884,921；9,822,181；9,296,816；9,284,375；8,795,667；8,187,593；8,669,349；8,784,808；8,795,667；8,802,091；8,802,093；8,946,387和8,968,730,以及美国专利公布号2009/0060910；2010/0174053；2011/0081347；2011/0097323；2011/0117089；2012/0034221；2012/0294796；2013/0149236；2013/0295121；2014/0017237；2014/0099318；2014/0255407；2015/0175697；2016/0017038；2016/0159908；2016/0159908；2016/0194396；2016/0194396；2016/0200827；2016/0200827；2016/0222105；2016/0222105；2016/0333111；2016/0355586；2016/0355586；2017/0157251；2017/0157251；2017/0198037；2017/0198037；2017/0198045；2017/0204176；2017/0204176；2017/0247452和2018/0094072；欧洲专利文件号ep1868650；ep2158221；ep2247304；ep2252631；ep2282770；ep2328934；ep2376109；ep2542256；ep2601216；ep2714079；ep2714733；ep2786762；ep2839842；ep2840091；和pct公布号wo2006/113665；wo2008/157379；wo2010/027797；wo2010/033279；wo2010/080538；wo2011/109400；wo2012/018687；wo2012/162067；wo2012/162068；wo2014/159940；wo2015/021089；wo2015/026892和wo2015/026894)。这种双抗体包含两条或更多条共价复合的多肽并且涉及将一个或多个半胱氨酸残基工程化进入每个采用的多肽种类，其允许形成二硫键并且从而彼此共价地结合一对或多对这种多肽链。例如，已经显示半胱氨酸残基添加至这种构建体的c-末端以允许涉及的多肽链之间的二硫键键合，从而稳定化所得的双抗体且不受双抗体的结合特征的干扰。最简单的双抗体包括两条多肽链，每条多肽链包括三个结构域(图1a-图1b)。第一多肽链包括：(i)包含第一免疫球蛋白的轻链可变结构域的结合区的结构域(vl1)，(ii)包含第二免疫球蛋白的重链可变结构域的结合区的第二结构域(vh2)，和(iii)用来促进与第二多肽链的异源二聚化并且将双抗体的第一多肽链共价结合第二多肽链的第三结构域(“异源二聚体促进结构域”)。第二多肽链包含互补的第一结构域(vl2结构域)、互补的第二结构域(vh1结构域)和与第一多肽链的第三结构域复合以促进异源二聚化和与第一多肽链的共价结合的第三结构域(“异源二聚体促进结构域”)。这种分子是稳定的、强效的并且具有同时结合两个或更多个抗原的能力。在一个实施方式中，第一多肽链和第二多肽链的第三结构域各自包含半胱氨酸残基，其用于经二硫键将多肽结合在一起。多肽链中的一条或两条的第三结构域可另外地具有ch2-ch3结构域的序列，使得双抗体多肽的复合形成能够结合细胞(如，b淋巴细胞、树突细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞)的fc受体的fc结构域。已经描述了这种分子的许多变型(见，例如，美国专利公布号2013-0295121；2010-0174053；2007-0004909；2009-0060910；欧洲专利公布号ep2714079；ep2601216；ep2376109；ep2158221和pct公布号wo2012/162068；wo2012/018687；wo2010/080538；wo2006/113665)并且在本文提供。已经描述了这种分子的许多变型(见，例如，美国专利公布号2015/0175697；2014/0255407；2014/0099318；2013/0295121；2010/0174053；2009/0060910；2007-0004909；欧洲专利公布号ep2714079；ep2601216；ep2376109；ep2158221；ep1868650和pct公布号wo2012/162068；wo2012/018687；wo2010/080538；wo2006/113665)并且在本文提供。对于在期望双特异性或四价分子但不需要fc的应用，可选的构建体在本领域中是已知的，其包括但不限于双特异性t细胞接合分子，也称为(见，例如，pct公布号：wo1993/11161和wo2004/106381)和四价串联抗体，也称为(见，例如，美国专利公布号：2011-0206672；欧洲专利公布号ep2371866和pct公布号wo1999/057150、wo2003/025018和wo2013/013700)。由包括串联连接的scfv的单条多肽链形成，而由两条相同的多肽链的同型二聚化形成，每条多肽链具备vh1结构域、vl2结构域、vh2结构域和vl2结构域。iii.本发明的实施方式本发明涉及“结合表位的分子”，其包括“结合表位的结构域”，比如cdrl1结构域、cdrl2结构域、cdrl3结构域、cdrh1结构域、cdrh2结构域或cdrh3结构域，或足以形成允许分子结合表位的“结合表位的位点”的其任何组合或其子组合。例如，“结合gp41表位的分子”包括“结合表位的结构域”，比如cdrl1结构域、cdrl2结构域、cdrl3结构域、cdrh1结构域、cdrh2结构域或cdrh3结构域，或足以形成允许分子结合gp41的表位的“结合gp41表位的位点”的其任何组合或其子组合。然而，优选地，这种结合gp41的分子将具备免疫特异性结合gp41的表位的“抗gp41抗体”的cdrl1结构域、cdrl2结构域、cdrl3结构域、cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域。在一些实施方式中，这种分子可包括仅这种抗gp41抗体的gp41-vl结合结构域或仅这种抗gp41抗体的gp41-vh结合结构域，其结构域可与其他结合结构域相互作用以介导免疫特异性结合gp41的表位，或可足以通过它们自己介导这种结合。在一些实施方式中，这种分子可包括可源自相同抗体或不同抗体的抗gp41抗体的gp41-vl结合结构域和抗gp41抗体的gp41-vh结合结构域两者。本发明的一个实施方式涉及“多特异性”结合gp41的分子，其为双特异性的并且能够结合“第一表位”和“第二表位”，这种表位彼此不相同。表位表示为“第一表位”、“第二表位”等仅旨在给它们的描述提供前提基础并且不意味实质性区别。这种多特异性分子包括能够结合第一表位的“vl1”结构域/“vh1”结构域，和能够结合第二表位的“vl2”结构域/“vh2”结构域。符号“vl1”和“vh1”分别表示结合这种双特异性分子的第一表位的可变轻链结构域和可变重链结构域。类似地，符号“vl2”和“vh2”分别表示结合这种双特异性分子的第二表位的轻链可变结构域和重链可变结构域。是否特定的表位被命名为第一表位、第二表位等无关紧要；这种符号仅相对于本发明的结合分子的多肽链的结构域的存在和定向具有关联。在一个实施方式中，一个这种表位为人gp41的表位，并且另一个这种表位为gp41的不同表位或为不是gp41的分子的表位。在特别的实施方式中，一个这种表位为人gp41的表位，并且另一个这种表位为存在于效应细胞，比如t淋巴细胞、天然杀伤(nk)细胞或其他单核细胞的表面上的分子(例如，cd2、cd3、cd8、cd16、t-细胞受体(tcr)、nkg2d等)的表位。在某些实施方式中，多特异性分子包括大于两个表位结合结构域。在某些实施方式中，本发明的多特异性分子为三特异性并且能够结合第一表位、第二表位和“第三表位”。这种三特异性分子包括能够结合第一表位的vl1结构域/vh1结构域、能够结合第二表位的vl2结构域/vh2结构域和能够结合第三表位的“vl3”结构域和“vh3”结构域。在其他实施方式中，本发明的多特异性分子为四特异性的并且能够结合第一表位、第二表位、第三表位和“第四表位”。这种四特异性分子包括能够结合第一表位的vl1结构域/vh1结构域、能够结合第二表位的vl2结构域/vh2结构域、能够结合第三表位的vl3结构域/vh3结构域和能够结合第四表位的“vl4”结构域/“vh4”结构域。这种多特异性分子将结合至少一个gp41的表位和至少一个不是gp41的分子的表位，并且可进一步结合gp41的另外表位和/或不是gp41的分子的另外表位。本发明特别涵盖使用任何本文提供的方法产生的双特异性双抗体、抗体、和三价分子。多特异性结合gp41的分子在一个实施方式中，本发明的结合gp41的分子将为多特异性的结合gp41的分子，其能够结合两个或更多个不同的表位，并且将包括：(1)第一表位结合结构域，其免疫特异性结合gp41的表位(即，结合gp41的结构域，优选地包括本发明的优化的结合gp41的vl结构域和/或本发明的优化的结合gp41的vh结构域)；和(2)第二表位结合结构域，其免疫特异性结合第二表位，其中这种第二表位为(i)gp41的不同表位或(ii)不是gp41的分子的表位；和(3)任选地，一个或多个另外表位结合结构域，其免疫特异性结合第三另外表位、第三另外表位和第四另外表位等，其中这种另外表位结合结构域可与第一表位或第二表位相同或不同。这种结合gp41的分子优选地包括识别对靶细胞或免疫效应细胞独特的一组抗原的表位结合结构域的组合。特别地，本发明涉及多特异性结合gp41的分子，其能够结合gp41的表位和存在于效应细胞(即，效应细胞分子(“ecm”))的表面的分子的表位，尤其存在于t淋巴细胞、天然杀伤(nk)细胞或其他单核细胞的表面的分子的表位。例如，可构建本发明的这种结合gp41的分子以包括免疫特异性结合gp41的表位的第一表位结合结构域和免疫特异性结合ecm，尤其是cd2、cd3、cd8、cd16、t-细胞受体(tcr)或nkg2d的表位的第二表位结合结构域。在本发明的其他实施方式中，这种结合分子将另外含有足以允许这种分子结合ecm的另外表位和/或存在于hiv-1感染细胞的表面上的分子的另外表位(例如，gp41的第二表位或hiv-1包膜蛋白质的其他表位)的表位结合结构域。本发明还涉及包括这种分子的药物组合物。在一个实施方式中，这种结合gp41的分子将为双特异性的但是为单价的，以便具备结合gp41的仅单个表位和存在于效应细胞(ecm)的表面上的分子的仅单个表位的能力。可选地，这种分子可为多特异性的且多价的，即，能够结合总计一个、两个、三个或四个表位，其可以任何方式分配以结合gp41的一个、两个或三个表位(其中两个或三个gp41表位可为相同的或不同的)和一个或多个ecm的三个、两个或一个表位；或gp41的一个或两个表位(其中两个gp41表位可为相同的或不同的)和一个或多个ecm的两个或一个表位，和任选地一个或多个不同hiv-1分子的一个或两个表位，特别是其中这种分子在hiv-1感染细胞的表面上表达。因此，其中这种分子能够免疫特异性结合仅单个ecm，它们能够免疫特异性结合：(1)仅一个gp41表位和ecm的一个、两个或三个表位(其中两个表位可为相同的或不同的，和其中三个表位可为相同的，或可为不同的，或可为两个相同的表位和一个不同的表位)，或(2)仅两个gp41表位(其中两个表位可为相同的或不同的)和ecm的一个或两个表位(其中两个表位可为相同的或不同的)；或(3)三个gp41表位(其中三个表位可为相同的，或可为不同的或可为两个相同的表位和一个不同的表位)和ecm的一个表位，或任选地它们能够结合一个或两个gp41表位(其中表位可为相同的或不同的)和不同hiv-1分子的两个或一个表位(其中两个表位可为相同的或不同的)。类似地，其中这种分子能够免疫特异性结合两个不同的ecm(例如，第一ecm和第二ecm)，它们能够免疫特异性结合：(1)仅一个gp41表位和第一ecm的一个或两个表位(其中两个第一ecm表位可为相同的或不同的)和第二ecm的两个或一个表位(其中两个第二ecm可为相同的或不同的)，或(2)仅两个gp41表位(其中两个表位可为相同的或不同的)和第一ecm的一个表位和第二ecm的一个表位，或任选地它们能够结合一个gp41表位和不同hiv-1分子的一个表位。下面描述了能够结合两个表位的这种多特异性分子的非限制性示例并且包括：(1)dart-a，其结合gp41的一个表位，和ecm，cd3的一个表位；和(2)dart-b，其结合gp41的一个表位，和ecm，cd16的一个表位。下面描述了能够结合三个表位的这种多特异性分子的非限制性示例并且包括：(1)trident-a，其结合gp41的一个表位，和两个不同ecm(cd3和cd8)的表位；(2)trident-b，其结合gp41的一个表位、ecm(cd3)的一个表位，以及不同hiv-1分子(gp120)的一个表位；(3)trident-c，其结合gp41的一个表位、ecm(cd16)的一个表位，以及不同hiv-1分子(gp120)的一个表位；和(4)trident-d，其结合gp41的两个表位，和ecm(cd3)的一个表位。表1进一步阐释了本发明的示例性分子的可能组合结合特异性。通过形成更复杂的分子，可获得具备大于四个表位结合结构域的能够结合一个或多个ecm和任选地一个或多个不同hiv-1分子的结合gp41的分子。因此，不限制可被本发明的分子结合的表位和另外表位的性质，只要这种另外的结合能力不防止能够结合gp41的表位的分子或其结合结构域的这种结合并且不防止能够结合ecm的表位的分子或其结合结构域的这种结合即可。因此，本发明的结合gp41的分子可具备可选的或另外的表位结合结构域。作为示例，本发明考虑包括能够免疫特异性结合gp41的表位的第一表位结合结构域和能够免疫特异性结合ecm的表位的第二表位结合结构域和能够免疫特异性结合不同ecm或任选地不同hiv-1分子的第三表位结合结构域的结合gp41的分子。1.缺少fc结构域的多特异性结合gp41的双抗体在一个实施方式中，本发明的多特异性结合gp41的分子将为双特异性双抗体并且将包括能够结合第一表位和第二表位二者的结构域，但是将缺少fc结构域，并且因此将不能经fc-fcγr相互作用结合fcγr分子。然而，这种分子能够经它们的gp41结合结构域的sdr或cdr结合gp41。因此，fc结构域的缺失用于防止分子结合fcγr，比如抑制受体cd32b。双特异性双抗体的这种实施方式的第一多肽链优选地在n-末端至c-末端方向上包括：n-末端、能够结合第一表位或第二表位的单克隆抗体的vl结构域(即，vlgp41或vl第二表位)、第一间插间隔肽(连接体1)、能够结合第二表位的单克隆抗体的vh结构域(如果这种第一多肽链含有vlgp41)或能够结合gp41的单克隆抗体的vh结构域(如果这种第一多肽链含有vl第二表位)、任选地含有半胱氨酸残基的第二间插间隔肽(连接体2)、异源二聚体促进结构域和c-末端(图1a-图1b)。双特异性双抗体的该实施方式的第二多肽链在n-末端至c-末端方向上包括：n-末端、能够结合第一表位或第二表位的单克隆抗体的vl结构域(即，vlgp41或vl第二表位，并且为未被选择包含在双抗体的第一多肽链中的vl结构域)、间插间隔肽(连接体1)、能够结合第一表位或第二表位的单克隆抗体的vh结构域(即，vhgp41或vh第二表位，并且为未被选择包含在双抗体的第一多肽链中的vh结构域)、任选地含有半胱氨酸残基第二间插间隔肽(连接体2)、异源二聚体促进结构域和c-末端(图1a-图1b)。对特定的表位特异性的采用的vl结构域和vh结构域优选地从相同单克隆抗体获得或源自相同单克隆抗体。然而，这种结构域可源自不同单克隆抗体，前提是它们缔合以形成能够免疫特异性结合这种表位的功能结合结构域。这种不同抗体在本文被称为“相应的”抗体。这种双抗体的第一多肽链的vl结构域与这种双抗体的第二多肽链的vh结构域相互作用以形成对一个表位(例如，第一表位或第二表位)特异性的第一功能表位结合结构域。相似地，第二多肽链的vl结构域与第一多肽链的vh结构域相互作用以便形成对另一个表位(即，第二表位或第一表位)特异性的第二功能表位结合结构域。因此，第一多肽链和第二多肽链的vl结构域和vh结构域的选择是“协调的”，使得双抗体的两条多肽链共同包括能够结合第一表位和第二表位二者的vl结构域和vh结构域(即，它们共同包括vl第一表位/vh第一表位和vl第二表位/vh第二表位)，比如vlgp41/vhgp41和vl第二表位/vh第二表位。最优选地，将这种vl结构域和vh结构域分开的间插间隔肽(即，“连接体1”)的长度被选择为基本上或完全防止多肽链的vl结构域和vh结构域彼此结合(例如，由0、1、2、3、4、5、6、7、8或9个间插连接体氨基酸残基组成)。因此，第一多肽链的vl结构域和vh结构域基本上或完全不能彼此结合。相似地，第二多肽链的vl结构域和vh结构域基本上或完全不能彼此结合。优选的间插间隔肽(连接体1)具有序列(seqidno:16)：gggsgggg。基于促进这种二聚化的一个或多个多肽结构域(即，“异源二聚体促进结构域”)的选择来选择第二间插间隔肽(“连接体2”)的长度和组成。典型地，第二间插间隔肽(“连接体2”)的长度将在3和20个氨基酸残基之间。特别地，在采用的异源二聚体促进结构域不包括半胱氨酸残基的情况下，利用含半胱氨酸的第二间插间隔肽(连接体2)。含半胱氨酸的第二间插间隔肽(连接体2)将含有1、2、3或大于3个半胱氨酸。优选的含半胱氨酸的间隔肽(连接体2)具有序列ggcggg(seqidno:17)。可选地，连接体2不包括半胱氨酸(例如，ggg、gggs(seqidno:18)、lgggsg(seqidno:19)、gggsgggsggg(seqidno:20)、astkg(seqidno:21)、lepkss(seqidno:22)、apsss(seqidno:23)等)并且使用如下面描述的含半胱氨酸的异源二聚体促进结构域。任选地，使用含半胱氨酸的连接体2和含半胱氨酸的异源二聚体促进结构域二者。异源二聚体促进结构域可为一条多肽链上的gvepksc(seqidno:24)或vepksc(seqidno:25)或aepksc(seqidno:26)和另一条多肽链上的gfnrgec(seqidno:27)或fnrgec(seqidno:28)(us2007/0004909)。在优选的实施方式中，异源二聚体促进结构域将包括相反电荷的串联重复的螺旋结构域，例如，“e-螺旋”异源二聚体促进结构域(seqidno:29：evaalek-evaalek-evaalek-evaalek)，在ph7其谷氨酸残基将形成负电荷；或“k-螺旋”异源二聚体促进结构域(seqidno:30：kvaalke-kvaalke-kvaalke-kvaalke)，在ph7其赖氨酸残基将形成正电荷。这种带电的结构域的存在促进第一多肽和第二多肽之间的缔合，并且因此促进异源二聚体形成。可利用包括上述e-螺旋和k-螺旋序列的修饰的异源二聚体促进结构域，以便包括一个或多个半胱氨酸残基。这种半胱氨酸残基的存在允许存在于一条多肽上链的螺旋与存在于另一多肽链上的互补的螺旋共价结合，从而将多肽链彼此共价结合并且增加双抗体的稳定性。这种特别地优选的示例为包括具有氨基酸序列evaacek-evaalek-evaalek-evaalek(seqidno:31)的修饰的e-螺旋，和具有氨基酸序列kvaacke-kvaalke-kvaalke-kvaalke(seqidno:32)的修饰的k-螺旋的异源二聚体促进结构域。如wo2012/018687中公开的，为了改善双抗体的体内药物代谢动力学的特性，双抗体可被修饰以在双抗体的一个或多个末端包含结合血清的蛋白的多肽部分。最优选地，这种结合血清的蛋白的多肽部分将置于双抗体的多肽链的c-末端处。白蛋白是在血浆中最丰富的蛋白，并且在人中具有19天的半衰期。白蛋白具备数个小分子结合结构域，其允许白蛋白与其他蛋白非共价结合从而延长了它们的血清半衰期。链球菌(streptococcus)菌株g148的蛋白g的结合白蛋白的结构域3(abd3)由形成稳定的三螺旋束的46个氨基酸残基组成并且具有广泛的结合白蛋白的特异性(johansson，m.u.等(2002)“structure，specificity，andmodeofinteractionforbacterialalbumin-bindingmodules,”j.biol.chem.277(10):8114-8120)。因此，用于改善双抗体的体内药物代谢动力学特性的结合血清的蛋白的特别地优选的多肽部分为来自链球菌蛋白g的结合白蛋白的结构域(abd)，并且更优选地为链球菌菌株g148的蛋白g的结合白蛋白的结构域3(abd3)(seqidno:33)：laeakvlanreldkygvsdyyknlidnaksaegvkalideilaalp。如wo2012/162068中公开的(通过引用并入本文)，seqidno:33的“去免疫化”变体具有减弱或消除mhcii类结合的能力。基于组合的突变结果，下列的替换组合被认为是用于形成这种去免疫化abd的优选替换：66d/70s+71a；66s/70s+71a；66s/70s+79a；64a/65a/71a；64a/65a/71a+66s；64a/65a/71a+66d；64a/65a/71a+66e；64a/65a/79a+66s；64a/65a/79a+66d；64a/65a/79a+66e。变体abd具有修饰l64a、i65a和d79a或修饰n66s、t70s和d79a。特别优选具有氨基酸序列：laeakvlanreldkygvsdyyknlid66naks70a71egvkalideilaalp(seqidno:34)，或氨基酸序列：laeakvlanreldkygvsdyykna64a65nnaktvegvkalia79eilaalp(seqidno:35)，或氨基酸序列：laeakvlanreldkygvsdyyknlis66naks70vegvkalia79eilaalp(seqidno:36)的变体去免疫化abd，因为这种去免疫化abd展示出基本上野生型的结合，同时提供减弱的mhcii类结合。因此，具有abd的这种双抗体的第一多肽链含有第三连接体(连接体3)，其优选地定位在这种多肽链的e-螺旋(或k-螺旋)结构域的c-末端，以便间插在e-螺旋(或k-螺旋)结构域和abd(其优选地为去免疫化abd)之间。用于这种连接体3的优选的序列为seqidno:18：gggs。2.包括fc结构域的多特异性的结合gp41的双抗体本发明的一个实施方式涉及包括fc结构域并且能够同时结合gp41的表位和第二表位(例如，不同hiv-1包膜蛋白质的表位，或在效应细胞的表面上表达的表位)的多特异性双抗体(例如，双特异性、三特异性、四特异性等)。这种分子的fc结构域可为任何同种型的(例如，igg1、igg2、igg3或igg4)。分子可进一步包括ch1结构域和/或铰链结构域。当存在时，ch1结构域和/或铰链结构域可为任何同种型(例如，igg1、igg2、igg3，或igg4)，并且优选地为与期望的fc结构域相同的同种型。将iggch2-ch3结构域添加至一条或两条双抗体多肽链，使得双抗体链复合导致fc结构域的形成，增加了生物半衰期和/或改变了双抗体的效价。这种双抗体包括两条或更多条多肽链，其序列允许多肽链彼此共价结合以形成共价缔合的能够同时结合gp41和第二表位的双抗体。将iggch2-ch3结构域并入双抗体的两条多肽上将允许形成两链的双特异性的含fc结构域的双抗体(图2)。可选地，将iggch2-ch3结构域并入双抗体的仅一条多肽上将允许形成更复杂的四链的双特异性的含fc结构域的双抗体(图3a-图3c)。图3c显示了具有恒定轻(cl)结构域和恒定重ch1结构域的代表性四链的双抗体，然而，可选地可采用这种结构域的部分以及其他多肽(见，例如，图3a和图3b，美国专利公布号2013-0295121；2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公布号ep2714079；ep2601216；ep2376109；ep2158221和pct公布号wo2012/162068；wo2012/018687；wo2010/080538)。因此，例如，代替ch1结构域，可采用源自人igg的铰链结构域的具有氨基酸序列gvepksc(seqidno:24)、vepksc(seqidno:25)或aepksc(seqidno:26)的肽，并且代替cl结构域，可采用人κ轻链的c-末端6个氨基酸gfnrgec(seqidno:27)或fnrgec(seqidno:28)。在图3a中显示了含有代表性肽的四链双抗体。可选地，或另外地，可采用包括相反电荷的串联螺旋结构域比如“e-螺旋”螺旋结构域(seqidno:29：evaalek-evaalek-evaalek-evaalek或seqidno:31：evaacek-evaalek-evaalek-evaalek)；和“k-螺旋”结构域(seqidno:30：kvaalke-kvaalke-kvaalke-kvaalke或seqidno:32：kvaacke-kvaalke-kvaalke-kvaalke)的肽。在图3b中显示了含有代表性螺旋结构域的四链双抗体。本发明的含fc结构域的双抗体分子可包括另外的间插间隔肽(连接体)，一般这种连接体将并入异源二聚体促进结构域(例如，e-螺旋或k-螺旋)和ch2-ch3结构域之间和/或ch2-ch3结构域和可变结构域(即，vh或vl)之间。典型地，另外的连接体将包括3-20个氨基酸残基并且可任选地含有全部或一部分igg铰链结构域(优选地igg铰链结构域的含半胱氨酸的部分具有1、2、3或更多个半胱氨酸残基)。在本发明的双特异性含fc结构域的双抗体分子中可采用的连接体包括：gggs(seqidno:18)、lgggsg(seqidno:19)、gggsgggsggg(seqidno:20)、astkg(seqidno:21)、lepkss(seqidno:22)、apsss(seqidno:23)、apssspme(seqidno:37)、vepksadkthtcppcp(seqidno:38)、lepksadkthtcppcp(seqidno:39)、dkthtcppcp(seqidno:40)；scfv连接体：ggggsggggsggggs(seqidno:41)；“长”连接体：ggggsgggsggg(seqidno:42)、ggc和ggg。为了易于克隆，可使用连接体lepkss(seqidno:22)代替ggg或ggc。另外，肽ggg或lepkss(seqidno:22)可紧随着dkthtcppcp(seqidno:40)以形成交替连接体：gggdkthtcppcp(seqidno:43)和lepkssdkthtcppcp(seqidno:44)。除了或代替连接体，本发明的双特异性含fc结构域的分子可并入igg铰链结构域。示例性铰链结构域包括：来自igg1的epkscdkthtcppcp(seqidno:7)、来自igg2的erkccvecppcp(seqidno:8)、来自igg3的elktplgdtthtcprcpepkscdtpppcprcpepkscdtpppcprcpepkscdtpppcprcp(seqidno:9)、来自igg4的eskygppcpscp(seqidno:10)和eskygppcppcp(seqidno:11)、包括稳定的s228p替换(加下划线显示)(如通过kabat中所示的eu索引所编号)的igg4铰链变体，以减少链交换。如图3a-图3c中提供的，本发明的含fc结构域的双抗体可包括四条链。这种双抗体的第一多肽链和第三多肽链含有三个结构域：(i)含vl1的结构域、(ii)含vh2的结构域、(iii)异源二聚体促进结构域和(iv)含ch2-ch3序列的结构域。第二多肽链和第四多肽链含有：(i)含vl2的结构域、(ii)含vh1的结构域和(iii)异源二聚体促进结构域，其中异源二聚体促进结构域促进第一多肽链/第三多肽链与第二多肽链/第四多肽链的二聚化。第三多肽链和第四多肽链的vl结构域和/或vh结构域和第一多肽链和第二多肽链的vl结构域和/或vh结构域可为相同的或不同的，以便允许单特异性、双特异性或四特异性的四价结合。符号“vl3”和“vh3”分别表示这种双抗体的结合“第三表位”的轻链可变结构域和可变重链结构域。类似地，符号“vl4”和“vh4”分别表示这种双抗体的结合“第四表位”的轻链可变结构域和可变重链结构域。本发明的代表性四链双特异性含fc结构域的双抗体的多肽链的总体结构提供在表2中：hpd＝异源二聚体促进结构域在具体的实施方式中，本发明的双抗体为双特异性的、四价的(即，具备四个表位结合结构)、含fc的双抗体，其由总计四条多肽链组成(图3a-图3c)。本发明的双特异性的、四价的、含fc的双抗体包括两个第一表位结合结构域和两个第二表位结合结构域。在进一步的实施方式中，本发明的含fc结构域的双抗体可包括三条多肽链。这种双抗体的第一多肽含有三个结构域：(i)含vl1的结构域、(ii)含vh2的结构域和(iii)含ch2-ch3序列的结构域。这种双抗体的第二多肽含有：(i)含vl2的结构域、(ii)含vh1的结构域和(iii)促进与双抗体的第一多肽链的异源二聚化和共价结合的结构域。这种双抗体的第三多肽包括ch2-ch3序列。因此，这种双抗体的第一多肽链和第二多肽链缔合在一起以形成能够结合第一表位或第二表位的vl1/vh1表位结合结构域，以及能够结合另一个这种表位的vl2/vh2表位结合结构域。第一多肽和第二多肽通过涉及它们各自第三结构域中的半胱氨酸残基的二硫键彼此结合。注意，第一多肽链和第三多肽链经二硫键彼此复合以形成稳定的fc结构域。这种双特异性双抗体具有增强的功效。图4a和图4b阐释了这种双抗体的结构。这种含fc结构域的双抗体可具有两个定向中的一个(表3)：hpd＝异源二聚体促进结构域在具体的实施方式中，本发明的双抗体为双特异性的、二价的(即，具备两个结合表位的结构域)、含fc的双抗体，其由总计三条多肽链组成(图4a-图4b)。本发明的双特异性的、二价的含fc的双抗体包括对第一表位或第二表位免疫特异性的一个表位结合结构域，以及能够结合另一个这种表位的vl2/vh2表位结合结构域。在进一步的实施方式中，含fc结构域的双抗体可包括总计五条多肽链。在特别的实施方式中，五条多肽链的两条具有相同的氨基酸序列。这种双抗体的第一多肽链含有：(i)含vh1的结构域、(ii)含ch1的结构域和(iii)含ch2-ch3序列的结构域。第一多肽链可为含有vh1和重链恒定区的抗体的重链。这种双抗体的第二多肽链和第五多肽链含有：(i)含vl1的结构域和(ii)含cl的结构域。这种双抗体的第二多肽链和/或第五多肽链可为含有与第一多肽链/第三多肽链的vh1互补的vl1的抗体的轻链。第一多肽链、第二多肽链和/或第五多肽链可从天然存在的抗体分离。可选地，它们可重组地构建。这种双抗体的第三多肽链含有：(i)含vh1的结构域、(ii)含ch1的结构域、(iii)含ch2-ch3序列的结构域、(iv)含vl2的结构域、(v)含vh3的结构域和(vi)异源二聚体促进结构域，其中异源二聚体促进结构域促进第三链与第四链的二聚化。这种双抗体的第四多肽含有：(i)含vl3的结构域、(ii)含vh2的结构域和(iii)促进与双抗体的第三多肽链的异源二聚化和共价结合的结构域。因此，这种双抗体的第一多肽链和第二多肽链以及第三多肽链和第五多肽链缔合在一起以形成两个能够结合第一表位的vl1/vh1表位结合结构域。这种双抗体的第三多肽链和第四多肽链缔合在一起以形成能够结合第二表位的vl2/vh2表位结合结构域，以及能够结合第三表位的vl3/vh3表位结合结构域。第一多肽和第三多肽通过涉及它们各自恒定区中的半胱氨酸残基的二硫键彼此结合。注意，第一多肽链和第三多肽链彼此复合以形成fc结构域。这种多特异性双抗体具有增强的功效。图5阐释了这种双抗体的结构。应当理解，vl1/vh1结构域、vl2/vh2结构域和vl3/vh3结构域可为相同的或不同的，以便允许单特异性、双特异性或三特异性的结合。选择多肽链的vl结构域和vh结构域，以便形成对期望的表位特异性的vl/vh表位结合结构域。由多肽链的缔合形成的vl/vh表位结合结构域可为相同的或不同的，以便允许单特异性的、双特异性的、三特异性的或四特异性的四价结合。特别地，可以选择vl结构域和vh结构域，使得多价双抗体可包括针对第一表位的两个结合结构域和针对第二表位的两个结合结构域，或针对第一表位的三个结合结构域和针对第二表位的一个结合结构域，或针对第一表位的两个结合结构域、针对第二表位的一个结合结构域和针对第三表位的一个结合结构域(如图5中描绘的)。本发明的代表性五链含fc结构域的双抗体的多肽链的总体结构提供在表4中：hpd＝异源二聚体促进结构域在具体的实施方式中，本发明的双抗体为双特异性的、四价的(即，具有四个结合表位的结构域)、含fc的双抗体，其由总计五条多肽链组成，具有对第一表位免疫特异性的两个表位结合结构域和对第二表位特异性的两个表位结合结构域。在另一实施方式中，本发明的双特异性的、四价的、含fc的双抗体包括对第一表位免疫特异性的三个表位结合结构域和对第二表位特异性的一个表位结合结构域。如以上提供的，可选择vl结构域和vh结构域以允许三特异性结合。相应地，本发明也涵盖三特异性的、四价的、含fc的双抗体。本发明的三特异性的、四价的、含fc的双抗体包括对第一表位免疫特异性的两个表位结合结构域、对第二表位免疫特异性的一个表位结合结构域和对第三表位免疫特异性的一个表位结合结构域。在传统的免疫功能中，抗体-抗原复合物与免疫系统的细胞的相互作用导致各种各样的应答，范围从效应子功能比如抗体-依赖性细胞毒性、大细胞脱粒和吞噬至免疫调节信号比如调节淋巴细胞增殖和抗体分泌。所有这些相互作用通过抗体或免疫复合物的fc结构域与造血细胞上特有的细胞表面受体的结合被启动。如以上讨论的，通过抗体和免疫复合物触发的细胞应答的多样性由三种fc受体：fcγri(cd64)、fcγrii(cd32)和fcγriii(cd16)的结构异质性引起。fcγri(cd64)、fcγriia(cd32a)和fcγriii(cd16)为激活(即，免疫系统增强)受体；fcγriib(cd32b)为抑制(即，免疫系统降低)受体。另外，与新生fc受体(fcrn)的相互作用介导igg分子由内体至细胞表面的再循环并且释放至血液。以上呈现了示例性野生型igg1(seqidno:12)、igg2(seqidno:13)、igg3(seqidno:14)和igg4(seqidno:15)的氨基酸序列。fc结构域的修饰可导致改变的表型，例如改变的血清半衰期、改变的稳定性、改变的对细胞酶的敏感性或改变的效应子功能。所以，针对效应子功能，可期望修饰本发明的含fc结构域的结合分子，例如，以便增强这种分子在治疗癌症中的功效。在某些情况下，fc结构域介导的效应子功能的减少或消除是期望的，例如在抗体的作用机理涉及阻断或拮抗作用但不杀死携带靶抗原的细胞的情况下。当针对非期望的细胞，比如其中fcγrs在低水平表达的肿瘤和外源细胞，例如，具有低水平的fcγriib的肿瘤特异性b细胞(例如，非霍奇金淋巴瘤、cll和burkitt淋巴瘤)时，通常期望增加的效应子功能。具备这种赋予的或改变的效应子功能活性的本发明的分子用于治疗和/或预防其中期望增强功效的效应子功能活性的疾病、不适(disorder)或感染。相应地，在某些实施方式中，本发明的结合gp41的含fc结构域的分子的fc结构域可为工程化的变体fc结构域。尽管本发明的双特异性含fc结构域的分子的fc结构域可具备结合一个或多个fc受体(例如，fcγr)的能力，但是更优选地这种变体fc结构域具有改变的结合fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)(相对于野生型fc结构域展示出的结合)，例如，将具有增强的结合激活受体和/或将具有基本上减少的结合抑制受体或没有结合抑制受体的能力。因此，本发明的含fc结构域的分子的fc结构域可包括完整fc结构域的部分或全部ch2结构域和/或部分或全部ch3结构域，或可包括变体ch2和/或变体ch3序列(其可包括，例如，相对于完整fc结构域的ch2结构域或ch3结构域的一个或多个插入和/或一个或多个删除)。这种fc结构域可包括非fc多肽部分，或可包括部分非天然完整的fc结构域，或可包括非天然存在的定向的ch2结构域和/或ch3结构域(比如，例如，两个ch2结构域或两个ch3结构域，或在n-末端至c-末端方向上，连接至ch2结构域的ch3结构域等)。鉴定为改变效应子功能的fc结构域修饰在本领域是已知的，其包括增加结合激活受体(例如，fcγriia(cd16a)和减少结合抑制受体(例如，fcγriib(cd32b)的修饰(见，例如，stavenhagen，j.b.等(2007)“fcoptimizationoftherapeuticantibodiesenhancestheirabilitytokilltumorcellsinvitroandcontrolstumorexpansioninvivovialow-affinityactivatingfcgammareceptors,”cancerres.57(18):8882-8890)。表5列出了增加结合激活受体和/或减少结合抑制受体的示例性修饰的示例性单重、双重、三重、四重或五重替换((根据eu索引的)编号和替换为相对于如以上呈现的seqidno:12的氨基酸序列)具有减少的结合cd32b和/或增加的结合cd16a的人igg1fc结构域的示例性变体含有f243l、r292p、y300l、v305i或p396l替换，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。这些氨基酸替换可以任何组合存在于人igg1fc结构域中。在一个实施方式中，变体人igg1fc结构域含有f243l、r292p和y300l替换。在另一实施方式中，变体人igg1fc结构域含有f243l、r292p、y300l、v305i和p396l替换。在某些实施方式中，本发明的含fc结构域的结合分子的fc结构域优选地展示出减少的(或基本上不)结合fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)(相对于由野生型igg1fc结构域(seqidno:12)展示出的结合)。在具体的实施方式中，本发明的含fc结构域的结合分子包括iggfc结构域，其展示出减少的抗体-依赖性细胞-介导细胞毒性(adcc)效应子功能。在优选的实施方式中，这种结合分子的ch2-ch3结构域包括下列替换中的任何1个、2个、3个或4个：l234a、l235a、d265a、n297q和n297g，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。在另一实施方式中，ch2-ch3结构域含有n297q替换、n297g替换、l234a和l235a替换或d265a替换，因为这些突变消除了fcr结合。可选地，利用固有地展示出减少的(或基本上不)结合fcγriiia(cd16a)和/或减少的效应子功能(相对于由野生型igg1fc结构域(seqidno:12)展示出的结合和效应子功能)的天然存在的fc结构域的ch2-ch3结构域。在具体的实施方式中，本发明的含fc结构域的结合分子包括igg2fc结构域(seqidno:13)、igg3fc结构域(seqidno:14)或igg4fc结构域(seqidno:15)。当利用igg4fc结构域时，本发明也涵盖引入稳定的突变，比如上述铰链区s228p替换(见，例如，seqidno:11)。因为n297g、n297q、l234a、l235a和d265a替换消除了效应子功能，在其中期望效应子功能的情形下，可优选地不采用这些替换。具有减少或消除效应子功能的本发明的含fc结构域的分子的ch2结构域和ch3结构域的优选的igg1序列将包括替换l234a/l235a(seqidno:45)：apeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。包括fc结构域的蛋白质的血清半衰期可通过增加fc结构域对fcrn的结合亲和力而增加。如本文使用的术语“半衰期”意指分子的药物代谢动力学特性，其是分子在其施用后平均存活时间的度量。半衰期可表示为从受试者(例如，人患者或其他哺乳动物)的身体或其特定区室消除已知量的分子的百分之五十(50％)需要的时间，例如，如在血清中测量的，即循环半衰期，或在其他组织中测量的。一般而言，半衰期的增加导致施用的分子在循环中的平均停留时间(mrt)的增加。在一些实施方式中，本发明的含fc结构域的结合分子包括变体fc结构域，其包括相对于野生型fc结构域的至少一个氨基酸修饰，使得分子具有增加的半衰期(相对于如果包括野生型fc结构域的这种分子)。在一些实施方式中，本发明的含fc结构域的结合分子包括变体iggfc结构域，其在选自由下列组成的组中的一个或多个位置处包括延长半衰期的氨基酸替换：238、250、252、254、256、257、256、265、272、286、288、303、305、307、308、309、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428、433、434、435和436，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。能够增加含fc结构域的分子的半衰期的许多突变在本领域是已知的，并且其包括，例如m252y、s254t、t256e和其组合。例如，见下列中描述的突变：美国专利号6,277,375、7,083,784、7,217,797、8,088,376；美国公开号2002/0147311、2007/0148164；和pct公开号wo98/23289、wo2009/058492和wo2010/033279，其通过引用以其整体并入本文。在一些实施方式中，展示出增加的半衰期的本发明的含fc结构域的结合分子具有变体fc结构域，其包括在fc结构域残基250、252、254、256、257、288、307、308、309、311、378、428、433、434、435和436的两个或更多个处的替换。特别地，两个或更多个替换选自：t250q、m252y、s254t、t256e、k288d、t307q、v308p、a378v、m428l、n434a、h435k和y436i，其中编号为如kabat中的eu索引的编号。在具体的实施方式中，这种分子可具有变体iggfc结构域，其包括替换：(a)m252y、s254t和t256e；(b)m252y和s254t；(c)m252y和t256e；(d)t250q和m428l；(e)t307q和n434a；(f)a378v和n434a；(g)n434a和y436i；(h)v308p和n434a；或(i)k288d和h435k。在优选的实施方式中，本发明的结合gp41的含fc结构域的分子具有变体iggfc区，其包括下列替换中的任何1个、2个或3个：m252y、s254t和t256e。本发明进一步涵盖具有变体fc区的结合gp41的分子，其包括：(a)改变效应子功能和/或fcγr的一个或多个突变；和(b)延长血清半衰期的一个或多个突变。提供增加的半衰期的(并且其在结合食蟹猴和人fcrn二者具有10倍的增加)(dall’acqua，w.f.等(2006)“propertiesofhumanigg1sengineeredforenhancedbindingtotheneonatalfcreceptor(fcrn),”j.biol.chem.281(33):23514-23524)的本发明的含fc结构域的分子的ch2结构域和ch3结构域的igg1序列将包括替换m252y/s254t/t256e(seqidno:46)：apellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。组合由替换l234a/l235a提供的减少或消除的效应子功能和由替换m252y/s254t/t256e提供的增加的血清半衰期的本发明的含fc结构域的分子的ch2结构域和ch3结构域的可选igg1序列由seqidno:47提供：apeaaggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。对于期望具有不同氨基酸序列的含fc结构域的多肽链(例如，期望其含fc结构域的多肽链是不相同的)的某些抗体、双抗体和三价结合分子，期望减少或防止在相同链的ch2-ch3结构域之间(例如，两条第一多肽链或两条第三多肽链的ch2-ch3结构域之间)发生同源二聚化。这种多肽链的ch2结构域和/或ch3结构域的序列不需要为相同的，并且有利地被修饰以促进两条多肽链之间的异源二聚体复合。例如，氨基酸替换(优选地，用包括形成“杵(knob)”的庞大侧基的氨基酸，例如色氨酸替换)可引入至ch2或ch3结构域，使得空间干扰将防止与类似突变的结构域的相互作用，并且将迫使突变的结构域与互补的或适应性的突变已经被工程化至其中的结构域即“臼(hole)”(例如，用甘氨酸替换)配对。这种突变的组可被工程化进入任何对的多肽，其包括形成fc结构域的ch2-ch3结构域以促进异源二聚化。相对于同源二聚化，支持异源二聚化的蛋白质工程化方法是本领域熟知的，特别是关于免疫球蛋白样的分子的工程化，并且被涵盖在本文中(见，例如，ridgway等(1996)“‘knobs-into-holes’engineeringofantibodych3domainsforheavychainheterodimerization,”proteinengr.9:617-621，atwell等(1997)“stableheterodimersfromremodelingthedomaininterfaceofahomodimerusingaphagedisplaylibrary,”j.mol.biol.270：26-35，和xie等(2005)“anewformatofbispecificantibody：highlyefficientheterodimerization，expressionandtumorcelllysis,”j.immunol.methods296:95-101；其每一篇通过引用以其整体并入本文)。优选的杵通过修饰iggfc结构域以含有修饰t366w形成。优选的臼通过修饰iggfc结构域以含有修饰t366s、l368a和y407v形成。为了有助于从最终的双特异性异源二聚体的含fc结构域的分子中纯化携带臼的多肽链同源二聚体，多肽链的携带臼的ch2结构域和ch3结构域的蛋白a结合结构域优选地通过在位置435处的氨基酸替换(h435r)而突变。因此，携带臼的多肽链同源二聚体将不结合蛋白a，而双特异性异源二聚体将经蛋白a结合结构域而保留其结合蛋白a的能力。在可选的实施方式中，携带臼的多肽链可在位置434和435处并入氨基酸替换(n434a/n435k)。本发明的含fc结构域的分子的一条含fc结构域的多肽链的ch2结构域和ch3结构域的优选的igg1氨基酸序列将具有“携带杵”的序列(seqidno:48)：apeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。本发明的具有m252y/s254t/t256e替换和“携带杵”的序列的含fc结构域的分子的一条含fc结构域的多肽链的ch2结构域和ch3结构域的可选的igg1氨基酸序列为seqidno:49：apeaaggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。本发明的具有两条多肽链的含fc结构域的分子的另一条含fc结构域的多肽链(或具有三条、四条或五条多肽链的含fc结构域的分子的第三多肽链)的ch2结构域和ch3结构域的优选的igg1氨基酸序列将具有“携带臼”的序列(seqidno:50)：apeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。本发明的具有m252y/s254t/t256e替换和“携带臼”的序列的含fc结构域的分子的另一条含fc结构域的多肽链的ch2结构域和ch3结构域的可选的igg1氨基酸序列为seqidno:51：apeaaggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。本发明的含fc结构域的分子的一条含fc结构域的多肽链的ch2结构域和ch3结构域的igg4氨基酸序列具有增加的血清半衰期(相对于igg1ch2结构域和ch3结构域)，原因是其具备y252/t254/e256(seqidno:52)：apeflggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。这种igg4ch2-ch3氨基酸序列的“携带杵”的变体具有seqidno:53的氨基酸序列：apeflggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。这种igg4ch2-ch3氨基酸序列的“携带臼”的变体具有seqidno:54的氨基酸序列：apeflggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvsrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnrytqkslslslgx其中x是赖氨酸(k)或不存在。如将指出的，seqidno:51、seqidno:52、seqidno:53和seqidno:54的ch2-ch3结构域包括在位置234处用丙氨酸和在位置235处用丙氨酸的替换，并且因此形成展示出减少的(或基本上不)结合fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)(相对于由野生型fc结构域(seqidno:12)展示的结合)的fc结构域。本发明也涵盖这种ch2-ch3结构域，其包括野生型丙氨酸残基，修饰fc结构域的效应子功能和/或fγr结合活性的可选的替换和/或另外的替换。本发明也涵盖这种ch2-ch3结构域，其进一步包括一个或多个延长半衰期的氨基酸替换。特别地，本发明涵盖进一步包括m252y/s254t/t256e的这种携带臼的和这种携带杵的ch2-ch3结构域。优选地，第一多肽链将具有“携带杵”的ch2-ch3序列，比如seqidno:48或seqidno:49的序列。然而，如将认识到，“携带臼”的ch2-ch3结构域(例如，seqidno:50或seqidno:51)可被采用在第一多肽链中，在这种情况下，“携带杵”的ch2-ch3结构域(例如，seqidno:48或seqidno:49)将被采用在具有两条多肽链的本发明的含fc结构域的分子的第二多肽链中(或在具有三条、四条或五条多肽链的含fc结构域的分子的第三多肽链中)。在其他实施方式中，本发明涵盖含fc结构域的结合分子，其包括已经使用本领域已知的突变进行工程化以比同源二聚化更利于异源二聚化的ch2结构域和/或ch3结构域，比如在pct公开号wo2007/110205、wo2011/143545、wo2012/058768、wo2013/06867、wo2014/081955、wo2016/086189公开的那些，其所有通过引用以其整体并入本文。3.含有fc结构域的三价结合分子本发明的进一步实施方式涉及三价结合分子，其包括fc结构域并且能够同时结合第一表位、第二表位和第三表位，其中这些表位的至少一个与另一个表位是不相同的。这种三价结合分子包括三个表位结合结构域，其中两个为双抗体型结合结构域，其提供结合结构域a和结合结构域b，并且其中之一为fab型结合结构域或scfv-型结合结构域，其提供结合结构域c(见，例如，图6a-图6f，pct公布号wo2015/184207和wo2015/184203)。这种三价结合分子因此包括这种三价结合分子的能够结合第一表位的“vl1”/“vh1”结构域和能够结合第二表位的“vl2”/“vh2”结构域和能够结合第三表位的“vl3”和“vh3”结构域。“双抗体型结合结构域”为存在于双抗体中的表位结合结构域类型，如上述，其中单个多肽链包括vl结构域和vh结构域二者，但是这种结构域不相互作用以形成表位结合位点。“fab型结合结构域”和“scfv型结合结构域”中的每一种为存在于抗体中的表位结合结构域的类型，如上述，其中单个多肽链包括(1)vl结构域或vh结构域，并且第二多肽链包括相应的vh结构域或vl结构域，以便形成表位结合位点，或(2)vl结构域和vh结构域二者，其中这种结构域相互作用以形成表位结合位点。fab型结合结构域也与双抗体型结合结构域的区别在于形成fab型结合结构域的两条多肽链仅包括单个表位结合结构域，而形成双抗体型结合结构域的两条多肽链包括至少两个表位结合结构域。类似地，scfv型结合结构域与双抗体型结合结构域的区别也在于它们仅包括单个表位结合结构域。因此，如本文使用的fab型和scfv型结合结构域与双抗体型结合结构域是不同的。典型地，本发明的三价结合gp41的分子将包括四条不同多肽链(见图6a-图6b)，然而，分子可包括更少或更多数目的多肽链，例如通过将这种多肽链彼此融合(例如，经肽键)，或通过将这种多肽链分开以形成另外的多肽链，或通过将更少或另外的多肽链经二硫键缔合。图6c-图6f通过示意性描绘具有三条多肽链这种分子而阐释了本发明的该方面。如图6a-图6f中提供的，本发明的三价结合分子可具有可选的定向，其中双抗体型结合结构域在fc结构域的n-末端(图6a、图6c和图6d)或c-末端(图6b、图6e和图6f)。可用于产生三价结合分子的ch2结构域和ch3结构域在上文提供并且包括携带杵的和携带臼的结构域。在某些实施方式中，本发明的这种三价结合gp41的分子的第一多肽链含有：(i)含vl1的结构域、(ii)含vh2的结构域、(iii)异源二聚体促进结构域和(iv)含ch2-ch3序列的结构域。vl1结构域和vl2结构域位于含ch2-ch3的结构域的n-末端或c-末端，如表5中所示(也见，图6a和图6b)。这种实施方式的第二多肽链含有：(i)含vl2的结构域、(ii)含vh1的结构域和(iii)异源二聚体促进结构域。这种实施方式的第三多肽链含有：(i)含vh3的结构域、(ii)含ch1的结构域和(iii)含ch2-ch3序列的结构域。第三多肽链可为含有vh3和重链恒定区的抗体或含有这种结构域的多肽的重链。这种实施方式的第四多肽含有：(i)含vl3的结构域和(ii)含cl的结构域。第四多肽链可为含有与第三多肽链的vh3互补的vl3的抗体或含有这种结构域的多肽的轻链。第三多肽链或第四多肽链可从天然存在的抗体分离。可选地，它们可重组地、合成地或通过其他手段构建。第一多肽链和第二多肽链的轻链可变结构域通过间插间隔肽与这种多肽链的重链可变结构域分开，所述间插间隔肽具有的长度太短而不允许它们的vl1/vh2(或它们的vl2/vh1)结构域缔合在一起以形成能够结合第一表位或第二表位的表位结合结构域。用于该目的的优选的间插间隔肽(连接体1)具有序列(seqidno:16)：gggsgggg。三价结合分子的其他结构域可通过任选地包括半胱氨酸残基的一个或多个间插间隔肽(连接体)分开。特别地，如以上提供的，这种连接体将通常被并入在可变结构域(即，vh或vl)和肽异源二聚体促进结构域(例如，e-螺旋或k-螺旋)之间以及这种肽异源二聚体促进结构域(例如，e-螺旋或k-螺旋)和ch2-ch3结构域之间。上面提供了用于产生三价结合分子的示例性连接体并且也提供在国际专利公布号：wo2015/184207和wo2015/184203。因此，这种三价结合分子的第一多肽链和第二多肽链缔合在一起以形成能够结合第一表位的vl1/vh1结合结构域，以及能够结合第二表位的vl2/vh2结合结构域。这种三价结合分子的第三多肽链和第四多肽链缔合在一起以形成能够结合第三表位的vl3/vh3结合结构域。如上所述，本发明的三价结合gp41的分子可包括三条多肽。包括三条多肽链的三价结合分子可通过n-末端的第四多肽的结构域连接至第三多肽的含vh3的结构域(例如，使用间插间隔肽(连接体4))获得。可选地，利用本发明的含有下列结构域的三价结合分子的第三多肽链：(i)含vl3的结构域、(ii)含vh3的结构域和(iii)含ch2-ch3序列的结构域，其中vl3和vh3通过间插间隔肽彼此间隔开，所述间插间隔肽足够长(至少9个或更多个氨基酸残基)以便允许这些结构域缔合以形成表位结合结构域。用于该目的一个优选的间插间隔肽具有序列：ggggsggggsggggs(seqidno:41)。应当理解，这种三价结合分子的vl1/vh1、vl2/vh2和vl3/vh3结构域可不同，以便允许单特异性、双特异性或三特异性的结合。特别地，可选择vl结构域和vh结构域，使得三价结合分子包括针对第一表位的两个结合结构域和针对第二表位的一个结合结构域，或针对第一表位的一个结合结构域和针对第二表位的两个结合结构域，或针对第一表位的一个结合结构域、针对第二表位的一个结合结构域和针对第三表位的一个结合结构域。本发明的代表性三价结合分子的多肽链的总体结构提供在图6a-图6h中和表6中：hpd＝异源二聚体促进结构域如以上提供的，这种三价结合分子可包括三条、四条、五条或更多条多肽链。iv.本发明的示例性结合gp41的分子本发明涉及能够结合gp41hiv-1包膜(env)蛋白质的表位的结合gp41的分子(例如，抗体、双抗体、scfv、抗体、tridenttm等)，因为它们具备具有7b2抗体的结合特异性的优化的gp41结合结构域。a.hiv的包膜(env)糖蛋白hiv的包膜(env)糖蛋白在多产地感染的细胞的表面上表达。hiv1型(hiv-1)通过被称为转胞吞作用的过程中的所有传播中的粘膜进入宿主(shen，r.等(2010)“gp41-specificantibodyblockscell-freehivtype1transcytosisthroughhumanrectalmucosaandmodelcolonicepithelium,”j.immunol.184(7):3648-3655)。已经报道，跨肠和生殖器上皮的hiv-1转胞吞作用涉及病毒组分，其包括gp41env蛋白质(bomsel，m.等(1998)“intracellularneutralizationofhivtranscytosisacrosstightepithelialbarriersbyanti-hivenvelopeproteindigaorigm,”immunity9:277-287；alfsen，a.等(2002)“hiv-1gp41enveloperesidues650-685exposedonnativevirusactasalectintobindepithelialcellgalactosylceramide,”j.biol.chem.277:25649-25659；alfsen，a.等(2001)“secretoryigaspecicforaconservedepitopeongp41envelopeglycoproteininhibitsepithelialtranscytosisofhiv-1,”j.immunol.166:6257-6265；tudor，d.等(2009)“hiv-1gp41-specificmonoclonalmucosaligasderivedfromhighlyexposedbutigg-seronegativeindividualsblockhiv-1epithelialtranscytosisandneutralizecd4+cellinfection：anigageneandfunctionalanalysis,”mucosalimmunol.2:412-426)、gp120和gp160；和宿主上皮细胞受体和附接分子，包括糖鞘脂半乳糖神经酰胺、辅助受体ccr5和硫酸肝素蛋白聚糖附接受体、多配体聚糖和集聚蛋白(shen，r.等(2010)“gp41-specificantibodyblockscell-freehivtype1transcytosisthroughhumanrectalmucosaandmodelcolonicepithelium,”j.immunol.184(7):3648-3655。因此，gp41可用作用于细胞毒素免疫缀合物(ic)的靶，其中包括毒素、药物或放射性核素的细胞-杀伤部分化学或基因连接至结合gp41的分子(见，例如，pincus，s.h.等(2017)“designandinvivocharacterizationofimmunoconjugatestargetinghivgp160,”j.virol.91(3).pii：e01360-16.doi：10.1128/jvi.01360-16)。b.抗体7b2抗体7b2(genbank登记号jx188438和jx188439)为在分子的免疫显性的螺旋-环-螺旋区中598-604处结合hivgp41的抗hivenv人igg1抗体(sadraeian，m.等(2017)“selectivecytotoxicityofanovelimmunotoxinbasedonpulchellinachainforcellsexpressinghivenvelope,”sci.rep.7(1):7579doi：10.1038/s41598-017-08037-3)。使用epstein-barr(eb)病毒b细胞转化和异种杂交瘤产生而从hiv-1慢性感染的受试者分离抗体(pincus，s.h.等(2003)“invivoefficacyofanti-glycoprotein41，butnotanti-glycoprotein120，immunotoxinsinamousemodelofhivinfection,”j.immunol.170(4):2236-2241)。已经发现抗体7b2能够识别病毒颗粒和感染细胞二者(santra，s.等(2015)“humannon-neutralizinghiv-1envelopemonoclonalantibodieslimitthenumberoffoundervirusesduringshivmucosalinfectioninrhesusmacaques,”plospathog.11(8):e1005042.doi：10.1371/journal.ppat.1005042；tay，m.z.等(2016)“antibody-mediatedinternalizationofinfectioushiv-1virionsdiffersamongantibodyisotypesandsubclasses,”plospathog.12(8):e1005817.doi：10.1371/journal.ppat.1005817)。7b2抗体的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:55)在下面和图7a中显示(cdrl残基用下划线显示)：divmtqspdslavspgeratihckssqtllyssnnrhsiawyqqrpgqppklllywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltinnlqaedvaiyychqysshpptfghgtrveik7b2抗体的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:56)在下面和图7b中显示(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsgggvfkpggslrlsceasgftfteyymtwvrqapgkglewlayiskngeyskyspssngrftisrdnaknsvflqldrlsaddtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgarvtvssc.优化的7b2gl优化的7b2gl抗体的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:57)在下面和图7a中显示(cdrl残基用下划线显示)：divmtqspdslavslgeratinckssqtllyssnnrhsiawyqqkpgqppklliywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqysshpptfgqgtkveik优化的7b2gl抗体的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:58)在下面和图7b中显示(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfseyymtwirqapgkglewvsyiskngeyskyspssngrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgtlvtvssv.示例性效应细胞结合能力如本文提供的，本发明涉及能够结合gp41的表位和效应细胞表面分子(“ecm”)的表位的多特异性结合gp41的分子。如本文使用的，术语“效应细胞”表示直接或间接介导靶细胞(例如，外源细胞、感染细胞或癌细胞)的杀伤的细胞。效应细胞的示例包括辅助t细胞、细胞毒性t细胞、天然杀伤(nk)细胞、浆细胞(分泌抗体的b细胞)、巨噬细胞和粒细胞。优选的效应细胞表面分子(“ecm”)包括cd2、cd3、cd8、cd16、tcr和nkg2d受体。相应地，按照本发明的原理，可使用能够免疫特异性结合这种分子的表位，或其他效应细胞表面分子的分子。下面提供了示例性抗体，它的vh和/或vl结构域，和/或vl区的cdrl的1个、2个或全部3个和/或vh结构域的cdrh的1个、2个或全部3个，可用于构建能够介导靶细胞的重定向杀伤的分子。a.示例性cd2结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合存在于这种效应细胞的表面上的cd2的表位。cd2为在t-细胞和天然杀伤(nk)细胞的表面上发现的细胞粘附分子。cd2增强nk细胞的细胞毒性，可能作为nk细胞纳米管形成的促进子(mace，e.m.等(2014)“cellbiologicalstepsandcheckpointsinaccessingnkcellcytotoxicity,”immunol.cell.biol.92(3):245-255；comerci，c.j.等(2012)“cd2promoteshumannaturalkillercellmembranenanotubeformation,”plosone7(10):e47664:1-12)。特异性结合cd2的分子包括抗cd2抗体“cd2mablo-cd2a”。cd2mablo-cd2a的vh结构域的氨基酸序列(atcc登记号：hb-11423)；seqidno:59)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlqqsgpelqrpgasvklsckasgyifteyymywvkqrpkqglelvgridpedgsidyvekfkkkatltadtssntaymqlssltsedtatyfcargkfnyrfaywgqgtlvtvsscd2mablo-cd2a的vl结构域的氨基酸序列(atcc登记号：11423；seqidno:60)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：dvvltqtpptllatigqsvsiscrssqsllhssgntylnwllqrtgqspqpliylvsklesgvpnrfsgsgsgtdftlkisgveaedlgvyycmqfthypytfgagtklelkb.示例性cd3结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合cd3的表位。cd3为由四条不同的链组成的t-细胞共受体(wucherpfennig，k.w.等(2010)“structuralbiologyofthet-cellreceptor：insightsintoreceptorassembly，ligandrecognition，andinitiationofsignaling,”coldspringharb.perspect.biol.2(4):a005140；1-14页)。在哺乳动物中，复合物含有cd3γ链、cd3δ链和两条cd3ε链。这些链与被称为t-细胞受体(tcr)的分子缔合以便在t淋巴细胞中产生激活信号。在缺少cd3的情况下，tcr不适合组装并且被分解(thomas，s.等(2010)“molecularimmunologylessonsfromtherapeutict-cellreceptorgenetransfer,”immunology129(2):170–177)。发现cd3结合所有成熟的t-细胞的膜，并且几乎不在其他细胞类型中(见，janeway，c.a.等(2005)in：immunobiology：theimmunesysteminhealthanddisease,”6thed.garlandsciencepublishing，ny，pp.214-216；sun，z.j.等(2001)“mechanismscontributingtotcellreceptorsignalingandassemblyrevealedbythesolutionstructureofanectodomainfragmentofthecd3ε:γheterodimer,”cell105(7):913-923；kuhns，m.s.等(2006)“deconstructingtheformandfunctionofthetcr/cd3complex,”immunity.2006feb；24(2):133-139)。特异性结合cd3的分子包括抗cd3抗体“cd3mab1”和“okt3”。抗cd3抗体cd3mab1能够结合非人灵长类(例如，食蟹猴)。人源化cd3mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:61)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkdrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhgnfgnsyvswfaywgqgtlvtvss人源化cd3mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:62)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：qavvtqepsltvspggtvtltcrsstgavttsnyanwvqqkpgqaprgliggtnkrapwtparfsgsllggkaaltitgaqaedeadyycalwysnlwvfgggtkltvlg可并入人源化变体“cd3mab1(d65g)”。cd3mab1(d65g)包括cd3mab1的vl结构域(seqidno:62)和具有d65g替换的vhcd3mab1结构域(kabat位置65，对应于seqidno:63的残基68)。cd3mab1(d65g)的vh的氨基酸序列(seqidno:63)显示在下面(cdrh残基用下划线显示，替换的位置(d65g)以双下划线显示)：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkgrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhgnfgnsyvswfaywgqgtlvtvss可选地，可并入cd3mab1的人源化亲和性变体。变体包括命名为“cd3mab1低”的低亲和性变体和命名为“cd3mab1快”的具有更快的解离速率(offrate)的变体。cdmab1的vl结构域(seqidno:62)对于cd3mab1低和cd3mab1快是通用的并且在以上提供。下面提供每个cd3mab1低和cd3mab1快的vh结构域的氨基酸序列。抗人cd3mab1低的可变重链结构域的氨基酸序列(seqidno:64)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkgrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhgnfgnsyvtwfaywgqgtlvtvss抗人cd3mab1快的可变重链结构域的氨基酸序列(seqidno:65)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkgrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhknfgnsyvtwfaywgqgtlvtvss可利用的另一抗cd3抗体为抗体莫罗单抗-cd3“okt3”。(xu等(2000)“invitrocharacterizationoffivehumanizedokt3effectorfunctionvariantantibodies,”cell.immunol.200:16-26)；norman，d.j.(1995)“mechanismsofactionandoverviewofokt3,”ther.drugmonit.17(6):615-620；canafax，d.m.等(1987)“monoclonalantilymphocyteantibody(okt3)treatmentofacuterenalallograftrejection,”pharmacotherapy7(4):121-124；swinnen，l.j.等(1993)“okt3monoclonalantibodiesinduceinterleukin-6andinterleukin-10：apossiblecauseoflymphoproliferativedisordersassociatedwithtransplantation,”curr.opin.nephrol.hypertens.2(4):670-678)。okt3的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:66)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlqqsgaelarpgasvkmsckasgytftrytmhwvkqrpgqglewigyinpsrgytnynqkfkdkatlttdkssstaymqlssltsedsavyycaryyddhycldywgqgttltvssokt3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:67)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：qivltqspaimsaspgekvtmtcsasssvsymnwyqqksgtspkrwiydtsklasgvpahfrgsgsgtsysltisgmeaedaatyycqqwssnpftfgsgtkleinr可利用的另外抗cd3抗体包括但不限于pct公布号wo2008/119566和wo2005/118635中描述的那些。c.示例性cd8结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合存在于这种效应细胞的表面上的cd8的表位。cd8为由在细胞毒性t细胞上表达的两条不同的链组成的t-细胞共受体(leahy，d.j.，(1995)“astructuralviewofcd4andcd8,”fasebj.，9:17-25)。已经发现通过抗原：在靶细胞的表面上排列的主要组织相容性i类(mhci)分子复合物和在cd8+t-细胞的表面上排列的cd8和t-细胞受体的复合物之间的共刺激相互作用来介导cd8+t-细胞的激活(gao，g.和jakobsen，b.，(2000)."molecularinteractionsofcoreceptorcd8andmhcclassi：themolecularbasisforfunctionalcoordinationwiththet-cellreceptor".immunoltoday21：630–636)。不像仅通过某些免疫系统细胞表达的mhcii分子，mhci分子被非常广泛地表达。因此，细胞毒性t细胞能够结合各种细胞类型。激活的细胞毒性t细胞通过它们细胞毒素穿孔蛋白、颗粒酶和粒溶蛋白的释放介导细胞杀伤。特异性结合cd8的抗体包括抗cd8抗体“okt8”和“trx2”。okt8的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:68)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqllesgpellkpgasvkmsckasgytftdynmhwvkqshgkslewigyiypytggtgynqkfknkatltvdsssstaymelrsltsedsavyycarnfrytywyfdvwgqgttvtvssokt8的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:69)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：divmtqspaslavslgqratiscrasesvdsydnslmhwyqqkpgqppkvliylasnlesgvparfsgsgsrtdftltidpveaddaatyycqqnnedpytfgggtkleikrtrx2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:70)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfsdfgmnwvrqapgkglewvaliyydgsnkfyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakphydgyyhffdswgqgtlvtvsstrx2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:71)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：diqmtqspsslsasvgdrvtitckgsqdinnylawyqqkpgkapklliyntdilhtgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycyqynngytfgqgtkveikd.示例性cd16结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合cd16的表位。cd16由结合聚集的人igg但不结合单体人igg生物嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、天然杀伤(nk)细胞和组织巨噬细胞表达(peltz，g.a.等(1989)“humanfcgammariii：cloning，expression，andidentificationofthechromosomallocusoftwofcreceptorsforigg,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)86(3):1013-1017；bachanova，v.等(2014)“nkcellsintherapyofcancer,”crit.rev.oncog.19(1-2):133-141；miller，j.s.(2013)“therapeuticapplications：naturalkillercellsintheclinic,”hematologyam.soc.hematol.educ.program.2013:247-253；youinou，p.等(2002)“pathogeniceffectsofanti-fcgammareceptoriiib(cd16)onpolymorphonuclearneutrophilsinnon-organ-specificautoimmunediseases,”autoimmunrev.1(1-2):13-19；peipp，m.等(2002)“bispecificantibodiestargetingcancercells,”biochem.soc.trans.30(4):507-511)。特异性结合cd16的分子包括抗cd16抗体“3g8”和“a9”。人源化3g8(“h3g8”)抗体描述在pct公布号wo03/101485中。鼠3g8的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:72)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvtlkesgpgilqpsqtlsltcsfsgfslrtsgmgvgwirqpsgkglewlahiwwdddkrynpalksrltiskdtssnqvflkiasvdtadtatyycaqinpawfaywgqgtlvtvsa鼠3g8的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:73)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：dtvltqspaslavslgqratisckasqsvdfdgdsfmnwyqqkpgqppklliyttsnlesgiparfsasgsgtdftlnihpveeedtatyycqqsnedpytfgggtkleikh3g8的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:74)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvtlresgpalvkptqtltltctfsgfslstsgmgvgwirqppgkalewlahiwwdddkrynpalksrltiskdtsknqvvltmtnmdpvdtatyycaqinpawfaywgqgtlvtvss鼠h3g8的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:75)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：divmtqspdslavslgeratinckasqsvdfdgdsfmnwyqqkpgqppklliyttsnlesgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqsnedpytfgqgtkleika9的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:76)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlqqsgaelvrpgtsvkisckasgytftnywlgwvkqrpghglewigdiypgggytnynekfkgkatvtadtssrtayvqvrsltsedsavyfcarsaswyfdvwgarttvtvssa9的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:77)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：diqavvtqesalttspgetvtltcrsntgtvttsnyanwvqekpdhlftglightnnrapgvparfsgsligdkaaltitgaqtedeaiyfcalwynnhwvfgggtkltvl美国专利号9,035,026描述了能够结合cd16a但不结合cd16b的抗cd16抗体。这种抗体特别地用作定向针对疾病相关的细胞的双特异性结合分子或多特异性结合分子的组分，因为其主要招募nk细胞，并且不被循环可溶性cd16b结合或通过结合嗜中性粒细胞或激活嗜酸性粒细胞而从nk细胞结合转移。美国专利号9,035,026的抗cd16a抗体的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:78)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvqsgaevkkpgeslkvsckasgytftsyymhwvrqapgqglewmgiinpsggstsyaqkfqgrvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycargsayyydfadywgqgtlvtvss美国专利号9,035,026的这种抗cd16a抗体的七个合适的vl结构域的氨基酸序列下面显示为seqidno:79-85：syelmqppsvsvssgqtasipcsgdkleekyvswyqqrpgqspvlviyqdnkrpsgiperfsgsnsgntatltisgtqamdeadyycqvwdnysvlfgggtkltvl(seqidno:79)syeltqplsesvaqgqtaritcggnniesrnvhwyqqkpgqapvlviyrdnnrpsgiperfsgsnsgnmatltisraqagdaadyycqvwdnytvlfgggtkltvl(seqidno:80)syeltqppsvavapgktaritcggnnigsknvhwyqqkpgqapvlviyrdsnrpsgiperfsgsnsgntatltisraqagdeadfycqvwdnyivlfgggtkltvl(seqidno:81)qavltqppsvsvapgqtaripcegnnigsknvhwyrqkpgqvpvlvmyddsdrpsgiperfsgsnsgntatltisgtqamdeadyycqvwdnysvlfgggtkltvl(seqidno:82)qpvltqplsvsvapgqtaritcggnnigsknvhwyqqkpgqapvlviyrdssrpsgiperlsgsnsgdtatltisraqagdeadyycqvwddyivvfgggtkltvl(seqidno:83)syeltqppsvsvtpgqtatitcgandigkrnvhwyqqrpgqspvlviyqdnkrpsgiperfsgsnsgntatltisgtqamdeadyycqvwdnysvlfgggtkltvl(seqidno:84)qpvltqpssvsvapgqtatiscgghnigsknvhwyqqrpgqspvlviyqdnkrpsgiperfsgsnsgntatltisgtqamdeadyycqvwdnysvlfgggtkltvl(seqidno:85)在进一步的实施方式中，可采用人源化抗cd16抗体，hcd16-m1或人源化抗cd16抗体，hcd16-m2的结合cd16的结构域与结合gp41的结构域配合以产生能够结合cd16和gp41的多特异性结合分子。hcd16-m1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:127)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsnygmswvrqapgkglewvatisgggsytfypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslrtedtalyycvrqsarapepywgqgtlvtvsshcd16-m1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:128)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：diqmtqspsflsasvgdrvtitcrasqnvgthvawyqqkpgkapksllysasyrysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqsediatyycqqyksypltfgqgtkleik抗体hcd16-m2为鼠抗人cd16单克隆抗体cd16-m2的人源化衍生物。人源化产生两个合适的vh结构域(hcd16-m2vh1和hcd16-m2vh2)，其任一个都可与获得的人源化vl结构域(hcd16-m2vl1)一起使用。hcd16-m2vh1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:129)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftssamhwvrqapgqglewmgyinhyndgikynerfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycatgyryaswfaswgqgtlvtvsshcd16-m2vh2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:130)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftssamhwvrqapgqglewmgyinhyndgikynerfkgrvtitadkststaymelsslrsedtavyycagyryaswfaswgqgtlvtvss如将认识到，hcd16-m2vh1的氨基酸序列(seqidno:129)与hcd16-m2vh2的氨基酸序列(seqidno:130)的不同在于就在cdrh3之前的残基中具有t98r替换(上面框中显示)。hcd16-m2vl1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:131)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：eivltqspatlsvspgeratlscrasqnigtsihwyqqkpdqspklliksvsesisgvpsrfsgsgsgtdftltinsleaedfatyycqqsnswpltfgqgtkleik可利用的另外抗cd16抗体包括但不限于商业上可得的抗体dj130c(tamm，a.等(1996)“thebindingepitopesofhumancd16(fcgammariii)monoclonalantibodies.implicationsforligandbinding,”j.immunol.157(4):1576-1581)、ebiocb16(thermofisher)或1d3(abcam)，或pct公布号wo03/101485和wo2006/125668中描述的那些。e.示例性tcr结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合t细胞受体(tcr)的表位。t细胞受体由cd4+t细胞或cd8+t细胞天然表达，并且允许这种细胞识别由抗原呈递细胞的i型或ii型mhc蛋白质结合并且呈递的抗原肽。tcr对pmhc(肽-mhc)复合物的识别启动细胞免疫应答的传播，其导致细胞因子的产生和抗原呈递细胞的裂解(见，例如，armstrong，k.m.等(2008)“conformationalchangesandflexibilityint-cellreceptorrecognitionofpeptide–mhccomplexes,”biochem.j.415(pt2):183–196；willemsen，r.(2008)“selectionofhumanantibodyfragmentsdirectedagainsttumort-cellepitopesforadoptivet-celltherapy,”cytometrya.73(11):1093-1099；beier，k.c.等(2007)“masterswitchesoft-cellactivationanddifferentiation,”eur.respir.j.29:804-812；mallone，r.等(2005)“targetingtlymphocytesforimmunemonitoringandinterventioninautoimmunediabetes,”am.j.ther.12(6):534–550).cd3isthereceptorthatbindstothetcr(thomas，s.等(2010)“molecularimmunologylessonsfromtherapeutict-cellreceptorgenetransfer,”immunology129(2):170-177；guy，c.s.等(2009)“organizationofproximalsignalinitiationatthetcr:cd3complex,”immunol.rev.232(1):7-21；st.clair，e.w.(epub2009oct12)“noveltargetedtherapiesforautoimmunity,”curr.opin.immunol.21(6):648-657；baeuerle，p.a.等(epub2009jun9)“bispecifict-cellengagingantibodiesforcancertherapy,”cancerres.69(12):4941-4944；smith-garvin，j.e.等(2009)“tcellactivation,”annu.rev.immunol.27:591-619；renders，l.等(2003)“engineeredcd3antibodiesforimmunosuppression,”clin.exp.immunol.133(3):307-309)。特异性结合t细胞受体的分子包括抗tcr抗体“bma031”。(ep0403156；kurrle，r.等(1989)“bma031–atcr-specificmonoclonalantibodyforclinicalapplication,”transplantproc.21(1pt1):1017-1019；nashan，b.等(1987)“finespecificityofapanelofantibodiesagainstthetcr/cd3complex,”transplantproc.19(5):4270-4272；shearman，c.w.等(1991)“construction，expression，andbiologicactivityofmurine/humanchimericantibodieswithspecificityforthehumanα/βtcell,”j.immunol.146(3):928-935；shearman，c.w.等(1991)“construction，expressionandcharacterizationofhumanizedantibodiesdirectedagainstthehumanα/βtcellreceptor,”j.immunol.147(12):4366-4373)。bma031的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:86)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgykftsyvmhwvrqapgqglewigyinpyndvtkynekfkgrvtitadkststaylqmnslrsedtavhycargsyydydgfvywgqgtlvtvssbma031的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:87)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：eivltqspatlslspgeratlscsatssvsymhwyqqkpgkapkrwiydtsklasgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyycqqwssnpltfgqgtkleikf.示例性nkg2d结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合nkg2d受体的表位。nkg2d受体在所有人(和其他哺乳动物)天然杀伤细胞上表达(bauer，s.等(1999)“activationofnkcellsandtcellsbynkg2d，areceptorforstress-induciblemica,”science285(5428):727-729；jamieson，a.m.等(2002)“theroleofthenkg2dimmunoreceptorinimmunecellactivationandnaturalkilling,”immunity17(1):19-29)以及在所有cd8+t细胞上表达(groh，v.等(2001)“costimulationofcd8αβtcellsbynkg2dviaengagementbymicinducedonvirus-infectedcells,”nat.immunol.2(3):255-260；jamieson，a.m.等(2002)“theroleofthenkg2dimmunoreceptorinimmunecellactivationandnaturalkilling,”immunity17(1):19-29)。特异性结合nkg2d受体的分子包括抗nkg2d抗体“kyk-1.0”和“kyk-2.0”。(kwong，ky等(2008)“generation，affinitymaturation，andcharacterizationofahumananti-humannkg2dmonoclonalantibodywithdualantagonisticandagonisticactivity,”j.mol.biol.384:1143-1156)。kyk-1.0的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:88)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesgggvvqpggslrlscaasgftfssygmhwvrqapgkglewvafirydgsnkyyadsvkgrftisrdnskntkylqmnslraedtavyycakdrfgyyldywgqgtlvtvsskyk-1.0的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:89)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：qpvltqpssvsvapgetaripcggddietksvhwyqqkpgqapvlviyddddrpsgiperffgsnsgntatlsisrveagdeadyycqvwddnndewvfgggtqltvlkyk-2.0的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:90)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfssygmhwvrqapgkglewvafirydgsnkyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakdrglgdgtyfdywgqgttvtvsskyk-2.0的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:91)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：qsaltqpasvsgspgqsitiscsgsssnignnavnwyqqlpgkapklliyyddllpsgvsdrfsgsksgtsaflaisglqsedeadyycaawddslngpvfgggtkltvlg.示例性nkp46结合能力在一个实施方式中，本发明的分子能够结合nkp46(cd335)的表位。nkp46为主要的nk细胞-激活受体，其涉及靶细胞的消除(sivoris,等(1997)."p46，anovelnaturalkillercell–specificsurfacemoleculethatmediatescellactivation,"j.exp.med.186(7)：1129–36.)。nkp46是在所有nk细胞子集合上唯一地表达(narni-mancinellie,等(2011).“fatemappinganalysisoflymphoidcellsexpressingthenkp46cellsurfacereceptor,”procnatlacadsciusa108:18324–9)。特异性结合nkp46的分子包括抗nkp46抗体“bab281”和“nkp46-3”(wo2015/197593)。bab281的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:92)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qiqlvqsgpelqkpgetvkisckasgytftnygmnwvkqapgkglkwmgwintntgeptyaeefkgrfafsletsastaylqinnlknedtatyfcardylyyfdywgqgttltvssbab281的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:93)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：dnivmtqspksmsmsvgervtltckasenvvtyvswyqqkpeqspklliygasnrytgvpdrftgsgsatdftltissvqaedladyhcgqgysypytfgggtkleiknkp46-3的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:94)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlqqsgpelvkpgasvkiscktsgytfteytmhwvkqshgkslewiggispniggtsynqkfkgkatltvdkssstaymelrsltsedsavyycarrggsfdywgqgttltvssnkp46-3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:95)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：divmtqspatlsvtpgdrvslscrasqsisdylhwyqqkshesprllikyasqsisgipsrfsgsgsgsdftlsinsvepedvgvyycqnghsfpltfgagtklelk结合nkp46的另外抗体在wo2015/197593和wo2017/016805中描述。结合天然杀伤细胞的细胞表面的其他示例性抗体包括抗体：a1、ac2、epr3678(2)、epr20461、epr20627和img17b5f11(其结合cd39)；tb01、hnk-1/leu-7和nk1(其结合cd57)；fn50(其结合cd69)；5b5、b-l2、ts82b和c33(其结合cd82)；3b3、b199.2和ep7169(其结合cd161)；17d9(其结合clec1b)；2f9(其结合kir2dl1)；epr8825(其结合kir2dl2)；mab33(其结合kir2dl4)；11e3、17b4、epr4392(2)、epr20261和epr20627(其结合淋巴细胞激活基因3)；a10、c7、cx5、1d11和mm0489-10r27(其结合nkg2d)；bmk13(其结合prg2)；epr9916(其结合slamf6)等。能够结合每种这种nk细胞表面分子的抗体是从abcamplc和其他来源商业上可得的，并且可容易地适应于本发明的目的。vi.示例性可选的hiv-1结合分子成熟的人免疫缺陷病毒类型1(hiv-1)包膜(env)糖蛋白三聚体包括由病毒gp160前体蛋白质的切割产生的非共价连接gp120/gp41异源二聚体的三份拷贝。在一个实施方式中，本发明的分子能够结合不同于7b2的表位的hiv-1env蛋白质gp120、gp160和/或gp41的表位。单克隆抗体a32识别hiv-1envgp120的c1区中的构象表位(wyatt等(1995)“involvementofthev1/v2variableloopstructureintheexposureofhumanimmunodeficiencyvirustype1gp120epitopesinducedbyreceptorbinding,”j.virol.69:5723-5733)并且介导有效的adcc活性以及可阻断相当比例的hiv-1感染的个体中可检测的adcc-介导ab活性(ferrari，g.等(2011)“anhiv-1gp120envelopehumanmonoclonalantibodythatrecognizesac1conformationalepitopemediatespotentantibody-dependentcellularcytotoxicity(adcc)activityanddefinesacommonadccepitopeinhumanhiv-1serum,”j.virol.85(14):7029-7036)。在本领域中已经报道了抗体a32的多种vh结构域，报道的框架区1和/或4中具备最小的变化(见，例如，蛋白质数据库登记号pdb：4ybl_h、us2015/0239961和wo2006/044410)。按照本发明可采用任何这些变体抗体a32vh结构域。a32的阐释性vh结构域的氨基酸序列(seqidno:96)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlqesgpglvkpsqtlslsctvsggssssgahywswirqypgkglewigyihysgntyynpslksritisqhtsenqfslklnsvtvadtavyycargtrlrtlrnafdiwgqgtlvtvssa32的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:97)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：qsaltqppsasgspgqsvtisctgtssdvggynyvswyqhhpgkapkliisevnnrpsgvpdrfsgsksgntasltvsglqaedeaeyycssytdihnfvfgggtkltvl可采用a32的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:97)与a32的阐释性vh结构域(seqidno:96)或与任何变体抗体a32vh结构域(见，例如，蛋白质数据库登记号pdb：4ybl_h，us2015/0239961和wo2006/044410)以形成抗hiv-1envgp120表位结合位点。单克隆抗体10-1074靶向hiv-1envgp120的v3环的基础部分(见，例如，wo2014/063059)并且在最有效的分离的抗hiv-1中和抗体之中，并且在早期临床试验中已经显示出一些体内活性(caskey，m.，等，(2017)“antibody10-1074suppressesviremiainhiv-1-infectedindividuals.”natmed.23:185-191)。10-1074的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:98)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlqesgpglvkpsetlsvtcsvsgdsmnnyywtwirqspgkglewigyisdresatynpslnsrvvisrdtsknqlslklnsvtpadtavyycatarrgqriygvvsfgeffyyysmdvwgkgttvtvss10-1074的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:99)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：syvrplsvalgetariscgrqalgsravqwyqhrpgqapilliynnqdrpsgiperfsgtpdinfgtratltisgveagdeadyychmwdsrsgfswsfggatrltvl单克隆抗体3bnc117靶向gp120的cd4结合位点并且为广泛地中和抗hiv-1抗体(见，例如，wo2013/016468)，其在早期临床试验中已经显示出一些体内活性(caskey，m.,等(2015)“viraemiasuppressedinhiv-1-infectedhumansbybroadlyneutralizingantibody3bnc117,”nature522:487-491)。3bnc117的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:100)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqllqsgaavtkpgasvrvsceasgynirdyfihwwrqapgqglqwvgwinpktgqpnnprqfqgrvsltrhaswdfdtfsfymdlkalrsddtavyfcarqrsdywdfdvwgsgtqvtvss3bnc117的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:101)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：diqmtqspsslsasvgdtvtitcqangylnwyqqrrgkapklliydgsklergvpsrfsgrrwgqeynltinnlqpediatyfcqvyefvvpgtrldlk单克隆抗体pgt121和pgt145为广泛地中和hiv-1抗体，其主要取决于用于env识别的gp120聚糖(mouqueth，等，(2012)“complex-typen-glycanrecognitionbypotentbroadlyneutralizinghivantibodies.”procnatlacadsciusa109：e3268–3277；yasmeen，a.,等(2014)“differentialbindingofneutralizingandnon-neutralizingantibodiestonative-likesolublehiv-1envtrimers，uncleavedenvproteins，andmonomericsubunits.”retrovirology11:41；wo2012/030904)。pgt121的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:102)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qmqlqesgpglvkpsetlsltcsvsgasisdsywswirrspgkglewigyvhksgdtnyspslksrvnlsldtsknqvslslvaataadsgkyycartlhgrriygivafnewftyfymdvwgngtqvtvsspgt121的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:103)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：sdisvapgetariscgekslgsravqwyqhragqapsliiynnqdrpsgiperfsgspdspfgttatltitsveagdeadyychiwdsrvptkwvfgggttltvlpgt145的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:104)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgnsfsnhdvhwvrqatgqglewmgwmshegdktglaqkfqgrvtitrdsgastvymelrgltaddtaiyycltgskhrlrdyflyneygpnyeewgdylatldvwghgtavtvsspgt145的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:105)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：evvitqsplflpvtpgeaaslsckcshslqhstganylawylqrpgqtprllihlathrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrvesddvgtyycmqglhspwtfgqgtkveik单克隆抗体vrc01为定向针对gp120的cd4结合位点的广泛地中和抗hiv-1抗体(wu，x.等(2010)“rationaldesignofenvelopeidentifiesbroadlyneutralizinghumanmonoclonalantibodiestohiv-1,”science329:856-861andzhou，t.等(2010)“structuralbasisforbroadandpotentneutralizationofhiv-1byantibodyvrc01,”science329:811-817；wo2013/163427)。vrc01的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:106)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：qvqlvqsggqmkkpgesmriscrasgyefidctlnwirlapgkrpewmgwlkprggavnyarplqgrvtmtrdvysdtaflelrsltvddtavyfctrgkncdynwdfehwgrgtpvivssvrc01的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:107)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：eivltqspgtlslspgetaiiscrtsqygslawyqqrpgqaprlviysgstraagipdrfsgsrwgpdynltisnlesgdfgvyycqqyeffgqgtkvqvdikr单克隆抗体10e8为广泛地中和hiv-1gp41膜-邻近的外部区(mper)-特异性抗体(huang，j.,等2012.“broadandpotentneutralizationofhiv-1byagp41-specifichumanantibody.”nature.491:406-12)。10e8的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:108)显示在下面(cdrh残基用下划线显示)：evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvss10e8的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:109)显示在下面(cdrl残基用下划线显示)：syeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvl本发明特别地包括和涵盖包含以上提供的抗hiv-1单克隆抗体的vl结构域和/或vh结构域，和/或vl区的1个、2个或全部3个cdrl和/或vh结构域的1个、2个或全部3个cdrh的多特异性结合gp41的分子。vii.示例性多特异性结合gp41的分子本文提供了一系列并入对gp41的表位免疫特异性的第一表位结合结构域(即，结合gp41的结构域)和对ecm的表位免疫特异性的第二表位结合结构域的示例性结合gp41的分子。任选地这种分子并入对gp41的不同表位和/或不同hiv-1分子的表位和/或ecm的不同表位和/或不同ecm的表位免疫特异性的第三表位结合结构域(或第三表位结合结构域和第四表位结合结构域)。特别地优选的是包括7b2gl的优化的结合gp41的结构域的这种分子。这种阐释性结合gp41的分子的结构和序列总结在表7中并且下面详细地描述。如将认识到，可同样地构建类似的分子(通过采用期望的抗体的vl结构域和vh结构域代替阐释性结合gp41的分子中使用的vl结构域和vh结构域)。a.gp41xcd3结合分子，dart-1命名为“dart-1”的gp41xcd3结合分子为第一阐释性双特异性结合gp41的分子。dart-1为能够结合gp41和cd3抗原的含fc结构域的双特异性双抗体。dart-1由三条多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp41的表位免疫特异性)和包括cd3mab1的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd3抗原的表位免疫特异性)。三条多肽链缔合以形成能够免疫特异性结合gp41的表位和cd3抗原的表位的共价结合的双抗体(见，例如，图4a)。dart-1的第一多肽链具有seqidno:110的氨基酸序列：divmtqspdslavspgeratihckssqtllyssnnrhsiawyqqrpgqppklllywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltinnlqaedvaiyychqysshpptfghgtrveikgggsggggevqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkgrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhgnfgnsyvswfaywgqgtlvtvssastkgevaacekevaalekevaalekevaalekgggdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkdart-1的第一多肽链(seqidno:110)的残基1-113对应于7b2的vl结构域(seqidno:55)。第一多肽链的残基114-121(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第一多肽链的残基122-246对应于cd3mab1(d65g)的vh结构域(seqidno:63)。残基247-251对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第一多肽链的残基252-279对应于含半胱氨酸的e-螺旋(seqidno:31)。第一多肽链的残基280-292对应于连接体(seqidno:40)。第一多肽链的残基293-509对应于“携带杵”的(seqidno:48)，其中最后的残基为赖氨酸。dart-1的第二多肽链具有seqidno:111的氨基酸序列：qavvtqepsltvspggtvtltcrsstgavttsnyanwvqqkpgqaprgliggtnkrapwtparfsgsllggkaaltitgaqaedeadyycalwysnlwvfgggtkltvlggggsggggqvqlvqsgggvfkpggslrlsceasgftfteyymtwvrqapgkglewlayiskngeyskyspssngrftisrdnaknsvflqldrlsaddtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgarvtvssastkgkvaackekvaalkekvaalkekvaalkedart-1的第二多肽链(seqidno:111)的残基1-110对应于cd3mab1的vl结构域(seqidno:62)。第二多肽链的残基111-118(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第二多肽链的残基119-244对应于7b2的vh结构域(seqidno:56)。第二多肽链的残基245-249对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第二多肽链的残基250-277对应于含半胱氨酸的k-螺旋(seqidno:32)。dart-1的第三多肽链具有seqidno:112的氨基酸序列：dkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgkdart-1的第三多肽链(seqidno:112)的残基1-10对应于连接体(seqidno:40)。第三多肽链的残基11-227对应于含有h435r替换(显示加下划线的)的“携带臼”的igg1ch2-ch3结构域(seqidno:50)，并且其中最后的残基为赖氨酸。如以上叙述的，h435r替换消除了分子结合结合蛋白a的能力。如将认识到，dart-1的第三多肽链不含有任何表位结合位点并且因此可在具有图4a-图4b中提供的总体结构的各种结合gp41的分子中采用。相应地，dart-1的第三多肽链在本文被称为“普通双抗体多肽链”。b.gp41xcd3结合分子，dart-a命名为“dart-a”的第二阐释性gp41xcd3结合分子类似于上述dart-1，但是含有代替亲本7b2vl结构域和vh结构域的抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域。dart-a的第一多肽链具有seqidno:113的氨基酸序列：divmtqspdslavslgeratinckssqtllyssnnrhsiawyqqkpgqppklliywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqysshpptfgqgtkveikgggsggggevqlvesggglvqpggslrlscaasgftfstyamnwvrqapgkglewvgrirskynnyatyyadsvkgrftisrddsknslylqmnslktedtavyycvrhgnfgnsyvswfaywgqgtlvtvssastkgevaacekevaalekevaalekevaalekgggdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkdart-a的第一多肽链(seqidno:113)的残基1-113对应于7b2gl的vl结构域(seqidno:57)。第一多肽链的残基114-121(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第一多肽链的残基122-246对应于cd3mab1(d65g)的vh结构域(seqidno:63)。残基247-251对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第一多肽链的残基252-279对应于含半胱氨酸的e-螺旋(seqidno:31)。第一多肽链的残基280-292对应于连接体(seqidno:40)。第一多肽链的残基293-509对应于“携带杵的”(seqidno:48)，其中最后的残基为赖氨酸。dart-a的第二多肽链具有seqidno:114的氨基酸序列：qavvtqepsltvspggtvtltcrsstgavttsnyanwvqqkpgqaprgliggtnkrapwtparfsgsllggkaaltitgaqaedeadyycalwysnlwvfgggtkltvlggggsggggqvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfseyymtwirqapgkglewvsyiskngeyskyspssngrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgtlvtvssastkgkvaackekvaalkekvaalkekvaalkedart-a的第二多肽链(seqidno:114)的残基1-110对应于cd3mab1的vl结构域(seqidno:62)。第二多肽链的残基111-118(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第二多肽链的残基119-244对应于7b2gl的vh结构域(seqidno:58)。第二多肽链的残基245-249对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第二多肽链的残基250-277对应于含半胱氨酸的k-螺旋(seqidno:32)。dart-a的第三多肽链的氨基酸序列与dart-1的第三多肽链的氨基酸序列(即，seqidno:112)相同。c.gp41xcd16结合分子，dart-b命名为“dart-b”的gp41xcd16结合分子为第三阐释性双特异性结合gp41的分子。dart-b类似于上述dart-a，但是包括代替dart-a的结合cd3的结构域的结合cd16的结构域。因此，dart-b由三条多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp41的表位是免疫特异性的)，和包括抗人cd16抗体3g8的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd16的表位是免疫特异性的)。dart-b的第一多肽链具有seqidno:115的氨基酸序列：divmtqspdslavslgeratinckssqtllyssnnrhsiawyqqkpgqppklliywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqysshpptfgqgtkveikgggsggggqvtlresgpalvkptqtltltctfsgfslstsgmgvgwirqppgkalewlahiwwdddkrynpalksrltiskdtsknqvvltmtnmdpvdtatyycaqinpawfaywgqgtlvtvssastkgevaacekevaalekevaalekevaalekgggdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgkdart-b的第一多肽链(seqidno:115)的残基1-113对应于7b2gl的vl结构域(seqidno:57)。第一多肽链的残基114-121(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第一多肽链的残基122-239对应于h3g8的vh结构域(seqidno:74)。残基240-244对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第一多肽链的残基245-272对应于含半胱氨酸的e-螺旋(seqidno:31)。第一多肽链的残基273-285对应于连接体(seqidno:40)。第一多肽链的残基286-502对应于“携带杵”的(seqidno:48)，其中最后的残基为赖氨酸。dart-b的第二多肽链具有seqidno:116的氨基酸序列：divmtqspdslavslgeratinckasqsvdfdgdsfmnwyqqkpgqppklliyttsnlesgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqsnedpytfgqgtkleikgggsggggqvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfseyymtwirqapgkglewvsyiskngeyskyspssngrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgtlvtvssastkgkvaackekvaalkekvaalkekvaalkedart-b的第二多肽链(seqidno:116)的残基1-111对应于h3g8的vl结构域(seqidno:75)。第二多肽链的残基112-119(加双下划线的)对应于连接体1(gggsgggg；seqidno:16)。第二多肽链的残基120-245对应于7b2gl的vh结构域(seqidno:58)。第二多肽链的残基246-250对应于连接体(seqidno:21，加下划线的)。第二多肽链的残基251-278对应于含半胱氨酸的k-螺旋(seqidno:32)。dart-b的第三多肽链的氨基酸序列与dart-1的第三多肽链的氨基酸序列(即，seqidno:112)相同。d.gp41xcd3xcd8结合分子，trident-a命名为“trident-a”的gp41xcd3xcd8结合分子为第一阐释性三价结合gp41的分子。trident-a由四多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp41的表位是免疫特异性的)、包括cd3mab1的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd3抗原的表位是免疫特异性的)和包括trx8的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd8抗原的表位是免疫特异性的)。四条多肽链缔合以形成能够免疫特异性结合gp41的表位、cd3抗原的表位和cd8的表位的共价结合的三价分子(见，例如，图6a)。trident-a的第一多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第一多肽链的氨基酸序列(seqidno:113)相同。类似地，trident-a的第二多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第二多肽链的氨基酸序列(seqidno:114)相同。trident-a的第三多肽链具有seqidno:117的氨基酸序列：qvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfsdfgmnwvrqapgkglewvaliyydgsnkfyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakphydgyyhffdswgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgktrident-a的第三多肽链的残基1-121对应于抗cd8抗体trx2的vh结构域(seqidno:70)。残基121-219对应于igg1ch1结构域(seqidno:3)。残基220-234对应于igg1铰链结构域(seqidno:7)。残基235-451对应于igg1“携带臼”的ch2-ch3结构域(seqidno:50)。trident-a的第四多肽链具有seqidno:118的氨基酸序列：diqmtqspsslsasvgdrvtitckgsqdinnylawyqqkpgkapklliyntdilhtgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycyqynngytfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgectrident-a的第四多肽链的残基1-106对应于抗cd8抗体trx2的vl结构域(seqidno:71)。残基107-213对应于clκ结构域(seqidno:1)。e.gp41xcd3xgp120结合分子，trident-b命名为“trident-b”的第二阐释性三价gp41xcd3xgp120结合分子类似于上述trident-a，但是含有代替trident-a的trx8vl结构域和vh结构域的抗人gp120抗体a32的vl结构域和vh结构域。因此，trident-b由四条多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp41的表位是免疫特异性的)、包括cd3mab1的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd3抗的表位是免疫特异性的)和包括a32的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp120抗的表位是免疫特异性的)。trident-b的第一多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第一多肽链的氨基酸序列(seqidno:113)相同。类似地，trident-b的第二多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第二多肽链的氨基酸序列(seqidno:114)相同。trident-b的第三多肽链的seqidno:119的氨基酸序列：qvqlqesgpglvkpsqtlslsctvsggssssgahywswirqypgkglewigyihysgntyynpslksritisqhtsenqfslklnsvtvadtavyycargtrlrtlrnafdiwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgktrident-b的第三多肽链的残基1-123对应于抗gp120抗体a32的vh结构域(seqidno:96)。残基124-221对应于igg1ch1结构域(seqidno:3)。残基222-236对应于igg1铰链结构域(seqidno:7)。残基237-453对应于igg1“携带臼”的ch2-ch3结构域(seqidno:50)。trident-b的第四多肽链具有seqidno:120的氨基酸序列：qsaltqppsasgspgqsvtisctgtssdvggynyvswyqhhpgkapkliisevnnrpsgvpdrfsgsksgntasltvsglqaedeaeyycssytdihnfvfgggtkltvlrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgectrident-b的第四多肽链的残基1-110对应于抗gp120抗体a32的vl结构域(seqidno:97)。残基111-217对应于clκ结构域(seqidno:1)。f.gp41xcd16xgp120结合分子，trident-c命名为“trident-c”的第三阐释性三价gp41xcd16xgp120结合分子类似于上述trident-b，但是含有代替trident-b的cd3mab1(d65g)vl结构域和vh结构域的抗人cd16抗体h3g8的vl结构域和vh结构域。因此，trident-c由四条多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp41的表位是免疫特异性的)、包括h3g8的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd16抗原的表位是免疫特异性的)和包括a32的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对gp120抗的表位是免疫特异性的)。trident-c的第一多肽链的氨基酸序列与上述dart-b双抗体的第一多肽链的氨基酸序列(seqidno:115)相同。类似地，trident-c的第二多肽链的氨基酸序列与上述dart-b双抗体的第二多肽链的氨基酸序列(seqidno:116)相同。trident-c的第三多肽和第四多肽的氨基酸序列与上述trident-b的第三多肽和第四多肽的氨基酸序列(seqidno:119和seqidno:120)相同。g.gp41xcd3xgp41结合分子，trident-d命名为“trident-d”的第三阐释性三价gp41xcd3xgp41结合分子类似于上述trident-a，但是含有代替trident-a的trx2抗cd8vl结构域和vh结构域的抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域。因此，trident-d由四条多肽链组成并且具备包括抗人gp41抗体7b2gl的vl结构域和vh结构域的两个结合结构域(并且因此对gp41的表位是免疫特异性的)、包括hcd3mab1的vl结构域和vh结构域的一个结合结构域(并且因此对cd3抗的表位是免疫特异性的)。trident-d的第一多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第一多肽链的氨基酸序列(seqidno:113)相同。类似地，trident-d的第二多肽链的氨基酸序列与上述dart-a双抗体的第二多肽链的氨基酸序列(seqidno:114)相同。trident-d的第三多肽链具有seqidno:121的氨基酸序列：qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfseyymtwirqapgkglewvsyiskngeyskyspssngrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycaradgltyfsellqyifdlwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnrytqkslslspgktrident-d的第三多肽链的残基1-126对应于优化的抗gp41抗体7b2gl的vh结构域(seqidno:58)。残基127-224对应于igg1ch1结构域(seqidno:3)。残基225-239对应于igg1铰链结构域(seqidno:7)。残基240-456对应于igg1“携带臼”的ch2-ch3结构域(seqidno:50)。trident-d的第四多肽链具有seqidno:122的氨基酸序列：divmtqspdslavslgeratinckssqtllyssnnrhsiawyqqkpgqppklliywasmrlsgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqysshpptfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgectrident-b的第四多肽链的残基1-113对应于抗gp41抗体7b2gl的vl结构域(seqidno:57)。残基114-220对应于clκ结构域(seqidno:1)。h.可选的多特异性结合gp41的分子如鉴于本公开将认识到，具有包括7b2gl的vl结构域和vh结构域并且包括可选的ecm和/或hiv-1抗原的结合位点的任何上述示例性分子的总体结构的另外多特异性结合gp41的分子可通过采用可选的ecm和/或hiv-1抗体的vl结构域和vh结构域代替存在于上述分子中的vl结构域和vh结构域构建。本文提供了来自许多可选的ecm和hiv-1结合位点的vl结构域和vh结构域，另外的vl结构域和vh结构域是本领域已知的。类似地，如本文提供的，可选的多特异性结合gp41的分子可同样地被构建并入可选的连接体和/或异源二聚体促进结构域，特别是本文提供的那些。viii.产生方法本发明的分子最优选地通过编码这种多肽的核酸分子的重组表达产生，如本领域所熟知的。本发明的多肽可方便地使用固相肽合成制备(merrifield，b.(1986)“solidphasesynthesis,”science232(4748):341-347；houghten，r.a.(1985)“generalmethodfortherapidsolid-phasesynthesisoflargenumbersofpeptides：specificityofantigen-antibodyinteractionatthelevelofindividualaminoacids,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)82(15):5131-5135；ganesan，a.(2006)“solid-phasesynthesisinthetwenty-firstcentury,”minirev.med.chem.6(1):3-10)。抗体可使用本领域已知的任何方法被重组制备和表达。抗体可通过首先分离从宿主动物制备的抗体、获得它们的dna序列和使用这种dna序列在宿主细胞(例如cho细胞)中重组表达抗体而重组制备。可采用的另一方法是在植物(例如，烟草)或转基因动物的奶中表达抗体序列。已经公开了在植物或奶中重组表达抗体的合适的方法(见，例如peeters等(2001)“productionofantibodiesandantibodyfragmentsinplants,”vaccine19:2756；lonberg，n.等(1995)“humanantibodiesfromtransgenicmice,”int.rev.immunol13:65-93；和pollock等(1999)“transgenicmilkasamethodfortheproductionofrecombinantantibodies,”j.immunol.methods231:147-157)。制备抗体衍生物，例如，人源化、单链等的合适的方法在本领域是已知的，并且在已经在上面描述了。在另一可选方案中，抗体可通过噬菌体展示技术重组制备(见，例如美国专利号5,565,332、5,580,717、5,733,743、6,265,150；和winter，g.等(1994)“makingantibodiesbyphagedisplaytechnology,”annu.rev.immunol.12.433-455)。含有感兴趣的多核苷酸(例如，编码本发明的结合分子的多肽链的多核苷酸)的载体可通过许多合适的手段中的任何一种引入宿主细胞中，所述手段包括电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、deae-葡聚糖或其他物质的转染；微粒轰击；脂质转染；和感染(例如，其中载体为感染剂，比如牛痘病毒)。引入载体或多核苷酸的选择将通常取决于宿主细胞的特征。能够过表达异源dna的任何宿主细胞可用于表达感兴趣的多肽或蛋白的目的。合适的哺乳动物宿主细胞的非限制性示例包括但不限于cos、hela和cho细胞。本发明包括包含本发明的结合分子的氨基酸序列的多肽。本发明的多肽可通过本领域已知的程序制备。多肽可通过抗体的蛋白水解或其他降解、通过如上述重组方法(即，单个多肽或融合多肽)或通过化学合成产生。抗体的多肽，尤其至多(upto)约50个氨基酸的较短多肽，通过化学合成方便制备。化学合成的方法在本领域是已知的并且是商业上可得的。本发明包括公开的结合分子的变体，其包括不显著影响这种分子的特性的功能上等同的多肽以及具有增加的或减少的活性的变体。多肽的修饰在本领域是常规实践并且不需要在本文进行详细描述。修饰的多肽的示例包括具有氨基酸残基的保守替换、不显著地或不利地改变功能活性的氨基酸的一个或多个缺失或添加或化学类似物的使用的多肽。可彼此为保守替换的氨基酸残基包括但不限于：甘氨酸/丙氨酸；丝氨酸/苏氨酸；缬氨酸/异亮氨酸/亮氨酸；天冬酰胺/谷氨酰胺；天冬氨酸/谷氨酸；赖氨酸/精氨酸；和苯丙氨酸/酪氨酸。这些多肽也包括糖基化和非糖基化的多肽，以及具有其他翻译后修饰，比如，例如用不同糖的糖基化、乙酰化和磷酸化的多肽。优选地，氨基酸替换将是保守的，即替换的氨基酸将具有与原始氨基酸类似的电荷、尺寸等化学性质。这种保守替换是本领域已知的并且已经在上面提供了示例。氨基酸修饰的范围可从改变或修饰一个或多个氨基酸至完全重新设计区，比如可变结构域。可变结构域中的变化可改变结合亲和性和/或特异性。修饰的其他方法包括使用本领域已知的偶联技术，其包括但不限于酶促方式、氧化替换和螯合。修饰可用于，例如附接用于免疫测试的标签，比如附接用于放射性免疫测试的放射性部分。使用本领域建立的程序制备修饰的多肽并且可使用本领域已知的标准测试筛选。在一种实施方式中，提供了包括轻链、重链或轻链和重链二者的融合多肽。在另一实施方式中，融合多肽含有异源免疫球蛋白恒定区。在另一实施方式中，融合多肽含有从公众保藏的杂交瘤中产生的抗体的vh结构域和vl结构域。为了本发明的目的，抗体融合蛋白含有能够使蛋白免疫特异性结合gp41和ecm(例如，cd3、cd16等)的多肽结构域，并且其含有天然分子中未连接到其上的另一氨基酸序列，例如来自另一区的异源序列或同源序列(例如，去免疫化结合白蛋白的结构域、蛋白a识别序列、肽标签等)。本发明特别地涵盖缀合至诊断或治疗部分的这种结合分子(例如，抗体、双抗体、三价结合分子等)。为了诊断目的，本发明的结合分子可被偶联至可检测的物质。这种结合分子可作为临床测试程序的一部分，用于疾病的发展或进展的监测和/或预后，比如确定特定疗法的功效。可检测的物质的示例包括各种酶(例如，辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶等)、辅基(例如，抗生物素蛋白/生物素)、荧光物质(例如，伞形酮、荧光素或藻红蛋白)、发光物质(例如，发光氨)、生物发光物质(例如，荧光素酶或发光蛋白质)、放射性物质(例如，碳14、锰54、锶85或锌65)、正电子发光金属和非放射性顺磁金属离子。可检测的物质可使用本领域已知的技术直接地或通过中间体(例如连接体)间接地被偶联或缀合至结合分子。为了治疗目的，本发明的结合分子可被缀合至治疗部分，比如细胞毒素(例如，细胞抑制剂或杀细胞剂)、治疗剂或放射性金属离子，例如、α-发射剂。细胞毒素或细胞毒素剂包括对细胞有害的任何试剂，比如，例如假单胞菌外毒素、白喉毒素、肉毒杆菌毒素a至f、篦麻毒素、相思豆毒素、皂草素和这种试剂的细胞毒素片段。治疗剂包括具有治疗效果以预防性或治疗性治疗不适的任何试剂。这种治疗剂可为化学治疗剂、蛋白质或多肽治疗剂，并且包括具备期望的生物学活性和/或修饰给定的生物学应答的治疗剂。治疗剂的示例包括烷基化剂、血管生成抑制剂、抗有丝分裂剂、激素治疗剂和可用于治疗细胞增生性不适的抗体。治疗部分可使用本领域已知的技术直接地或通过中间体(例如，连接体)间接地被偶联或缀合至结合分子。ix.本发明的结合分子的用途如上所讨论，能够结合gp41和ecm二者的分子能够介导在其细胞表面上表达这种gp41的靶细胞(即，感染病原体的细胞)的重定向细胞杀伤。这种分子可用于治疗性目的，例如在患有感染，特别是潜伏hiv-1感染的受试者中。因此，本发明的结合分子具有治疗与gp41，特别是潜伏hiv-1感染的表达相关或特征在于gp41，特别是潜伏hiv-1感染的表达的疾病或病况的能力。因此，但不限于，本发明的结合分子可用于hiv-1感染，特别是潜伏hiv-1感染的治疗。具体地，本发明涵盖这种方法，其中能够结合gp41的分子包括能够结合gp41的抗体的“结合表位的结构域”并且也包括能够结合免疫效应细胞的表面上的ecm(具体地，cd3和/或cd16)的结合表位的结构域以便介导表达gp41的靶细胞的重定向杀伤(例如，通过介导重定向细胞杀伤(例如，重定向的t-细胞细胞毒性))。在某些方面中，本发明提供了本发明的结合gp41的分子，特别是多特异性结合gp41的分子比如但不限于双特异性和三特异性分子(例如，双特异性抗体、双特异性双抗体、三价结合分子等)在治疗和预防个体中hiv-1感染的方法中的用途，所述方法包括以药学上可接受的形式给个体施用治疗有效量的包括本发明的结合gp41的分子的组合物。在某些实施方式中，结合gp41的分子结合不同的hiv-1表位，优选地存在于hiv-1包膜上的不同表位。本文描述的的各种结合gp41的分子具有实用性，例如，在包括但不限于下面的情形中：i)在预期的已知暴露于hiv-1感染的情形下，可作为杀微生物剂预防性地施用(例如，iv、局部或鼻内)本发明的结合gp41的分子，ii)在已知或怀疑暴露的情形下，比如在强奸受害者或商业性工作者的情形下发生的，或在没有避孕套保护的任何同性恋或异性恋传播中，可作为暴露后预防施用，例如，iv或局部施用本发明的结合gp41的分子，和iii)在急性hiv-1感染(ahi)的情形下，本发明的结合gp41的分子可作为用于控制初始病毒载量的ahi，或用于消除感染病毒的cd4t细胞的治疗施用。按照本发明，本发明的结合gp41的分子可在受试者或受试者的免疫系统/细胞与hiv-1的接触之前或这种接触的约48小时内施用。该时间范围内施用可使受试者的易感细胞被hiv感染的抑制最大化。另外，本发明的结合gp41的分子的各种形式可施用至慢性或急性感染的hiv-1受试者并且用于杀伤剩余感染病毒的细胞，原因是这些结合gp41的分子结合感染病毒的细胞的表面并且能够介导这种感染的细胞的重定向细胞杀伤。在某些实施方式中，本发明的结合gp41的分子可以与潜伏期激活剂组合施用，以便激活可存在于受试者中的感染hiv的细胞的潜伏库。预期是通过激活静息细胞中的潜伏的前病毒的hiv-1dna，先前不活跃的细胞将开始产生新的病毒并且将通过已经通过本发明的结合gp41的分子扩增的免疫系统识别且消除。潜伏期激活试剂的非限制性示例为hdac抑制剂，例如，伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、双硫仑、jq1、苔藓抑素、pma、离子霉素或其任何组合。见bullen等naturemedicine20，425-429(2014)。在某些实施方式中，本发明的结合gp41的分子可以与抗逆转录病毒剂组合施用。在具体的实施方式中，能够结合gp41和ecm的分子为双特异性抗体、或在具体的实施方式中，能够结合gp41和ecm的分子为双特异性双抗体。在具体的实施方式中，能够结合gp41和ecm的分子为三价结合分子。如本文使用的，术语：“提供疗法”和“治疗”指与任何有利或期望结果的指征相关的组合物的任何施用，所述结果包括但不限于任何临床结果，比如减少疾病所引起的症状；减轻感染的症状(例如，病毒载量、发烧、疼痛、脓毒症等)；疾病所引起的症状的减少；受体受试者生活质量的增加；提供以治疗受试者疾病的其他药物剂量的减少；另一药物效果比如经靶向和/或内化的增强；疾病进展的延迟；和/或受试者存活的延长。用于治疗的受试者包括动物，最优选哺乳动物物种，比如非灵长类(例如，牛、马、猫、犬、啮齿动物等)或灵长类(例如，猴子如食蟹猴、人等)。在优选的实施方式中，受试者为人。可通过本发明的各种实施方式治疗的示例性不适包括但不限于hiv-1感染(尤其是与由能够介导重定向细胞杀伤的分子结合的gp41的表达相关的潜伏hiv-1感染)。在各种实施方式中，本发明涵盖用于治疗、预防或管理受试者中的疾病或不适的方法或组合物，其包括向受试者施用治疗有效量的本发明的结合分子。这种分子特别地可用于减少hiv-1载量或消除感染hiv的细胞。尽管不期望受到特定作用机理的束缚，但是这种分子可介导针对靶细胞的效应子功能、促进免疫系统针对靶细胞的激活、使细胞表面抗原和/或受体在靶细胞上交联和增强细胞凋亡或负增长调节信号或其组合，引起靶细胞的清除和/或数量减少。x.药物组合物本发明涵盖包括本发明的结合gp41的分子的组合物。本发明的组合物包括可用于制造药物组合物的原料药组合物(例如，不纯的或非灭菌的组合物)和可以以单位剂型的制剂使用的药物组合物(即，适合于施用至受试者的组合物)。这种组合物包括预防或治疗有效量的能够结合gp41并且也能够结合ecm以便能够介导靶细胞(例如，感染hiv的细胞等)的重定向杀伤的分子(即，gp41xecm结合分子)，或这种试剂和药学上可接受的载体的组合。优选地，本发明的组合物包括预防或治疗有效量的本发明的结合分子和药学上可接受的载体。在优选的方面中，这种组合物基本上是纯的(即，基本上不含限制其效果或产生不期望的副作用的物质)。这种组合物的各种制剂可用于施用。除了药理学活性剂之外，本发明的组合物可含有包括赋形剂和辅料的合适的药学上可接受的载体，其是本领域熟知的并且其是有助于药理学有效物质的施用或有助于将活性化合物加工成可药学上用于递送至作用位点的制剂的相对惰性物质。例如，赋形剂可给予形状(form)或稠度(consistency)或充当稀释剂。合适的赋形剂包括但不限于稳定剂、润湿剂和乳化剂、用于改变渗透压的盐、胶囊化剂、缓冲剂和皮肤渗透增强剂。在具体的实施方式中，术语“药学上可接受的”指被联邦政府或州政府管理机构许可的或列于美国药典或其他通常获得认可的用于动物，更特别是用于人的药典中。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或媒介。一般而言，本发明组合物的成分被单独提供或以单位剂型混合在一起，例如作为在标明活性剂的量的气密密封容器比如安瓿或药囊(sachette)中的干燥冻干粉或无水浓缩物。当通过输注施用组合物时，其可以用含有无菌药物级水或生理盐水(saline)的输注瓶分配。当通过注射施用组合物时，则可提供注射用无菌水或生理盐水的安瓿，以便可以在施用前混合成分。本发明也提供了药物包(pack)或试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器填充有单独的本发明的结合gp41的分子或填充有本发明的结合gp41的分子与这种药学上可接受的载体。另外，用于治疗疾病的一种或多种其他预防或治疗的试剂也可包括在药物包或试剂盒中。本发明也提供了药物包或试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器填充有本发明药物组合物的一种或多种成分。任选地与这种容器关联的可为以由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的告示(notice)，所述告示反映了管理机构许可制造、使用或销售，供人施用。本发明提供可用于以上方法的试剂盒。试剂盒可包括本发明的结合分子中的任一种。试剂盒还可进一步在一个或多个容器中包括用于治疗癌症的一种或多种其他预防和/或治疗的试剂。xi.施用的方法通过向受试者施用有效量的包括本发明的结合gp41的分子的药物组合物，可提供本发明的组合物用于治疗、预防和改善与疾病、不适或感染相关的一种或多种症状。在优选的方面中，这种组合物基本上是纯的(即，基本上不含限制其效果或产生不期望的副作用的物质)。在具体的实施方式中，受试者为动物，优选哺乳动物，比如非灵长类(例如牛、马、猫、犬、啮齿动物等)或灵长类(例如，猴子如食蟹猴、人等)。在优选的实施方式中，受试者为人。施用本发明的结合gp41的分子或包括这种结合gp41的分子的组合物的方法包括但不限于，肠胃外施用(例如，皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外和粘膜(例如，鼻内和口服路径)。在具体的实施方式中，肌内、静脉内或皮下施用本发明的结合分子。可通过任何方便的路径，例如通过输注或弹丸注射、通过经上皮或粘膜皮肤保护层(例如，口腔粘膜、直肠和肠道粘膜等)吸收，施用组合物，并且组合物可与其他生物活性剂一起施用。施用可为全身的或局部的。本发明也提供了本发明的结合gp41的分子的制剂被包装在指示分子的量的气密密封容器，如安瓿或药囊中。在一个实施方式中，这种结合gp41的分子作为干燥灭菌的冻干粉或无水浓缩物提供在气密密封容器中并且可以例如用水或生理盐水重构至适当的浓度，以施用至受试者。优选地，本发明的结合gp41的分子作为无菌的冻干粉提供在气密密封容器中。本发明的结合gp41的分子的冻干制剂应在它们的初始容器中储存在2℃和8℃之间并且该分子应在重构之后的12小时内、优选地6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在可选的实施方式中，这种分子以液体形式提供在指示分子、融合蛋白或缀合分子的量和浓度的气密密封容器中。优选地，液体形式提供时的这种结合分子提供在气密密封容器中。可通过标准临床技术确定本发明的这种制剂有效治疗、预防或改善与不适相关的一种或多种症状的量。制剂中采用的精确剂量也取决于施用的路径和病症的严重性，并且应根据医师的判断和每个受体受试者的情况决定。有效的剂量可从源自体外或动物模型测试系统的剂量响应曲线推出。如本文使用的，药物组合物的“有效量”是足以实现有益的或期望的结果的量，结果包括但不限于临床结果，比如减轻疾病引起的症状、缓解感染的症状(例如，病毒载量、发烧、疼痛、脓毒症等)，从而提高遭受疾病的那些人的生活质量、减少治疗疾病需要的其他药物的剂量、增强另一药物治疗比如经靶向和/或内化的效果、延迟疾病的进展和/或延长个体的存活。当应用于单独施用时的单个活性成分，该术语指该单独的成分。当应用于组合时，该术语指无论组合、连续或同时施用，引起治疗效果的活性成分的组合量。有效量可在一次或多次施用中施用。为了本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效量是足够的量：以直接地或间接地杀死和/或减少感染hiv-1的细胞的增殖；或降低hiv-1病毒的增殖(或效果)和降低和/或延迟hiv-介导的疾病的发展。在一些实施方式中，药物、化合物或药物组合物的有效量可结合或不结合另一药物、化合物或药物组合物而实现。因此，“有效量”可在施用一种或多种化疗剂的背景下考虑，并且如果结合一种或多种其他试剂，期望的结果可以实现或被实现，则可以考虑以有效量给予单一试剂。尽管个体需求不同，但是确定每种组分的有效量的最佳范围在本领域技术人员的技能范围内。对于本发明涵盖的结合分子，优选基于接收受试者的体重(kg)确定施用至受体受试者的剂量。对于本发明涵盖的结合分子，施用至受体受试者的剂量通常是约0.01μg/kg受试者体重至约30mg/kg受试者体重或更高。可通过修饰比如，例如脂质化增强分子的吸收和组织渗透而降低或改变施用本发明的结合分子的剂量和频率。可计算用作单一试剂疗法的施用至受体受试者的本发明的结合分子的剂量。可选地，分子可以与其他治疗性组合物组合使用，并且施用至受体受试者的剂量小于当所述分子用作单一试剂疗法时使用的剂量。本发明的药物组合物可局部施用至需要治疗的区；这可通过，例如，但不限于局部输注、通过注射或通过移植物实现，所述移植物是多孔的、无孔的或胶状的材料，其包括膜，比如膜或纤维。优选地，当施用本发明的分子时，必须注意使用不吸附该分子的材料。本发明的组合物可以在囊泡尤其脂质体中递送(见langer(1990)“newmethodsofdrugdelivery,”science249:1527-1533)；treat等，inliposomesinthetherapyofinfectiousdiseaseandcancer，lopez-beresteinandfidler(eds.)，liss，newyork，pp.353-365(1989)；lopez-berestein，出处同上，pp.317-327)。用治疗或预防有效量的本发明的结合分子治疗受试者可包括单次治疗，或优选地可包括一系列治疗。在优选的示例中，用本发明的药物组合物治疗受试者约1至10周之间，优选地2至8周之间，更优选地约3至7周之间，甚至更优选地约4周、5周或6周。可每天施用一次本发明的药物组合物，其中进行这种施用一周一次、一周两次、每两周一次、一月一次、每六周一次、每两月一次、一年两次或一年一次等。可选地，可一天两次施用本发明的药物组合物，其中进行这种施用一周一次、一周两次、每两周一次、一月一次、每六周一次、每两月一次、一年两次或一年一次等。可选地，可一天三次施用本发明的药物组合物，其中进行这种施用一周一次、一周两次、每两周一次、一月一次、每六周一次、每两月一次、一年两次或一年一次等。也将认识到用于治疗的分子的有效剂量可随着具体治疗过程的推移而增加或减少。实施例已经大体上描述了本发明，通过参考下列实施例将更容易理解本发明，除非指明，否则通过例证的方式提供下列实施例并且不期望限制本发明。实施例1优化发现命名为“7b2igg”的抗hiv-1env(gp41蛋白质)抗体(genbank登记号afq31503；buchacher，a.等(1994)“generationofhumanmonoclonalantibodiesagainsthiv-1proteins；electrofusionandepstein-barrvirustransformationforperipheralbloodlymphocyteimmortalization,”aidsres.hum.retroviruses10(4):359-369；shen，r.(2010)“gp41-specificantibodyblockscell-freehiv-1type1transcytosisthroughhumanrectalmucosaandmodelcolonicepithelium,”j.immunol.184(7):3648-3655)在其框架区中包括许多人igg种系库中稀有的氨基酸残基。这种稀有的非种系残基的存在可为免疫原性的并且当重复施用至受体受试者时导致抗药物-抗体的产生。为了减少或甚至消除这些结构域的免疫原性潜力，通过将突变引入其框架区以用种系氨基酸残基代替这种稀有的氨基酸残基而优化7b2可变区。如图7a-图7b中显示，将九(9)个突变引入vl框架区中(图7a)并且将十七(17)个氨基酸替换引入vh框架区中(图7b)，以产生分别命名为“7b2glvl”和“7b2glvh”的完全种系化的vl结构域和vh结构域。所得vl结构域/vh结构域共同地被称为“7b2gl”。抗体7b2和抗体7b2gl的vl结构域的氨基酸序列已经在以上呈现(分别为seqidno:55和seqidno:57)。框架1-3供体(igkv4-1)的vl结构域的氨基酸序列和框架4供体(igkj1-01)的框架4区的氨基酸序列为：igkv4-1(seqidno:123)：divmtqspdslavslgeratinckssqsvlyssnnknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqyystp和igkj1-01(seqidno:124)：fgqgtkveik。抗体7b2和抗体7b2gl的vh结构域的氨基酸序列已经在以上呈现(分别为seqidno:56和seqidno:58)。框架1-3供体(igvh3-11)的vh结构域的氨基酸序列和框架4供体(ighj4-01)的框架4区的氨基酸序列为：igvh3-11(seqidno:125)：qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyymswirqapgkglewvsyisssssytnyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar和ighj4-01(seqidno:126)：wgqgtlvtvss通过attanacella200qcm检测包括完全种系化可变区的igg(命名为“7b2gligg”)的结合。简言之，将hiv-1jrflgp140重组蛋白质(hiv-1env蛋白质减去跨膜和c-末端氨基酸残基，但是保留由7b2识别的gp41表位)以25nm、50nm和100nm经过独立地捕获在用抗人iggfc表面涂覆的attana传感器芯片上的7b2igg(图8a)或7b2gligg(图8b)。对于动力学参数(ka，kd，kd)的分析，选择1:1结合作为合适的模型，因为其为数学上最少操作的模型。然而，因为jrflgp140为单体(20-30％)、二聚体(40％)和三聚体(30％)的混合物，该模型不完全地描述相互作用。相应地，表8中提供的动力学参数(ka、kd、kd，使用1:1结合拟合)主要用于直接比较7b2和7b2gl构建体彼此的ag结合活性的目的。尽管许多改变位于已知对抗原结合是重要的(例如，vh结构域kabat位置：30、48、49和79，和vl结构域kabat位置48)(footeandwinter(1992)“antibodyframeworkresiduesaffectingtheconformationofthehypervariableloops,”j.mol.biol.224:487-499)，并且通常不改变(见，例如，chromikova等(2015)“introductionofgermlineresiduesimprovesthestabilityofanti-hivmab2g12-igm,”biochim.biophys.acta1854:1536-1544)的游标(vernier)区中，但是这些研究显示，所有26个种系突变有良好的耐性，并且完全种系化的抗体展示出与野生型抗体7b2的那些几乎相同的表位结合动力学。实施例2hivxcd3结合分子产生了能够结合hivenvgp41蛋白质和示例性免疫效应细胞靶，cd3的两个hivxcd3结合分子。尤其，产生了包括7b2或7b2gl可变结构域且具有三条多肽链的两个双特异性双抗体(命名为“dart-1”和“dart-a”)，每个包括cd3mab1(d65g)可变结构域。dart-1和dart-a为能够结合hiv和cd3的具有图4a中显示的总体结构的含fc结构域的双特异性双抗体。上面详细地描述了这些示例性分子的结构域和氨基酸序列。在许多测试中检查了dart-1和dart-a的生物活性。通过流式细胞术评估dart-1和dart-a结合hek/d371细胞的表面上表达的gp41的能力。简言之，表达gp140的hek293/d371细胞(强力霉素-可诱导的表达的hiv-1cm244(亚型ae)gp140包膜，从dr.johnkappes获得的(universityofalabama，birmingham)，在用1μg/ml强力霉素预孵育24小时后)用连续稀释(10μg/ml-0.0024μg/ml)的dart-1、dart-a或rsvxcd3阴性对照孵育。在冲洗后，用alexa488-抗人igg1fc二抗孵育细胞并且通过流式细胞术(例如，使用guavaeasycyte8ht(millipore)和通过graphpadprism7绘制的mfi)分析。如图9中显示，dart-1和dart-a以类似的剂量依赖性方式结合表达gp140的hek293/d371细胞。使用jurkatt细胞报告测试(promega)评估dart-1和dart-a激活t细胞的能力。简言之，在连续稀释(10μg/ml-0.0024μg/ml)的dart-1、dart-a或rsvxcd3阴性对照存在的情况下，用表达gp140的hek293/d371细胞(20:1)共培养jurkatil2luc2p报告细胞，并且使用one-glotm荧光素酶分析系统(promega)测量发光。如图10中显示，dart-1和dart-a展示出相当的t-细胞激活活性。使用ctl测试评估dart-1和dart-a介导t细胞重定向靶细胞杀伤的能力。简言之，pant细胞是从健康的人pbmc分离的(例如，使用untouchedtm人t细胞试剂盒(invitrogen))。以效应子：靶(e:t)比例＝10:1，或以如指示的改变e:t比例的其他方式与人t细胞一起，用连续稀释的dart-1、dart-a或rsvxcd3阴性对照处理表达gp140的hek293/d371(1-4x105细胞/ml)，并且在37℃，5％co2孵育24小时。通过乳酸脱氢酶(ldh)释放(例如，使用cytotox非放射性细胞毒性测试，promega)测量细胞毒性。如图11中显示，dart-1和dart-a展示出相当的t细胞重定向靶细胞杀伤活性。这些研究的结果表明，将许多替换引入7b2的vl结构域和vh结构域以产生优化的完全种系化7b2gl结构域，在上述测试中不影响gp140结合或生物活性。本说明书中提及的所有出版物和专利以如同每个出版物或专利申请被明确且单独地指出以其全部内容通过引用并入的程度通过引用并入本文。尽管已经结合其具体实施方式描述了本发明，但是应当理解它能进一步改变，并且本申请意欲涵盖总体上遵循本发明的原理并且包括落入本发明所属领域内的已知或惯常实践内的并且可适用于前文所提出的实质特征的这种偏离的本发明的任何变化、应用或调整。序列表<110>宏观基因股份有限公司lam,chia-yangdiedrich,gundo<120>优化的结合gp41的分子及其用途<130>1301.0155pct<150>us62/673,462<151>2018-05-18<160>131<170>patentin版本3.5<210>1<211>107<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(107)<223>人iggclκ结构域<400>1argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu151015glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe202530tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln354045serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser505560thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu65707580lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser859095provalthrlysserpheasnargglyglucys100105<210>2<211>104<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(104)<223>人iggclλ结构域<400>2glnprolysalaalaproservalthrleupheproproserserglu151015gluleuglnalaasnlysalathrleuvalcysleuileseraspphe202530tyrproglyalavalthrvalalatrplysalaaspserserproval354045lysalaglyvalgluthrthrproserlysglnserasnasnlystyr505560alaalasersertyrleuserleuthrprogluglntrplysserhis65707580argsertyrsercysglnvalthrhisgluglyserthrvalglulys859095thrvalalaprothrglucysser100<210>3<211>98<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(98)<223>人igg1ch1结构域<400>3alaserthrlysglyproservalpheproleualaproserserlys151015serthrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthr65707580tyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplys859095argval<210>4<211>98<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(98)<223>人igg2ch1结构域<400>4alaserthrlysglyproservalpheproleualaprocysserarg151015serthrsergluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserasnpheglythrglnthr65707580tyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlysvalasplys859095thrval<210>5<211>98<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(98)<223>人igg3ch1结构域<400>5alaserthrlysglyproservalpheproleualaprocysserarg151015serthrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthr65707580tyrthrcysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplys859095argval<210>6<211>98<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(98)<223>人igg4ch1结构域<400>6alaserthrlysglyproservalpheproleualaprocysserarg151015serthrsergluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserser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