一种嵌合抗原受体T细胞及其应用的制作方法

文档序号:21501653发布日期:2020-07-14 17:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种嵌合抗原受体t细胞,其特征在于,所述嵌合抗原受体t细胞同时表达靶向cd19和pd-l1的嵌合抗原受体。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体t细胞,其特征在于,所述cd19嵌合抗原受体包括:cd19抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域;

优选地,所述cd19抗原结合结构域包括如seqidno.1所示的氨基酸序列;

优选地,所述cd19嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括cd28胞内结构域、cd3ζ、tlr1、tlr2、4-1bb或cd27中的任意一种或至少两种的组合;

优选地,所述cd19嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括4-1bb共刺激结构域和cd3ζ胞内信号传导结构域;

优选地,所述cd19嵌合抗原受体包括如seqidno.2所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体t细胞,其特征在于,所述pd-l1嵌合抗原受体包括:pd-l1抗原结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域和胞内共刺激信号传导结构域;

优选地,所述pd-l1抗原结合结构域包括如seqidno.3、seqidno.4或seqidno.5所示的任意一种氨基酸序列,优选为seqidno.3;

优选地,所述pd-l1嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括cd28胞内结构域、cd3ζ、tlr1、tlr2、4-1bb或cd27中的任意一种或至少两种的组合;

优选地,所述pd-l1嵌合抗原受体的胞内共刺激信号传导结构域包括cd28胞内结构域;

优选地,所述pd-l1嵌合抗原受体包括如seqidno.6、seqidno.7或seqidno.8所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1-3任一项所述的嵌合抗原受体t细胞,其特征在于,所述cd19嵌合抗原受体和pd-l1嵌合抗原受体通过2a或ires进行连接;

优选地,所述2a的氨基酸序列包括如seqidno.9所示的氨基酸序列。

5.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体用于制备如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体t细胞;

优选地,所述表达载体包括编码cd19嵌合抗原受体的核酸分子、编码2a肽的核酸分子和编码pd-l1嵌合抗原受体的核酸分子;

优选地,所述编码cd19嵌合抗原受体的核酸分子包括如seqidno.10所示的核酸序列;

优选地,所述编码pd-l1嵌合抗原受体的核酸分子包括如seqidno.11、seqidno.12或seqidno.13所示的核酸序列。

6.根据权利要求5所述的表达载体,其特征在于,所述编码cd19嵌合抗原受体和编码pd-l1嵌合抗原受体的核酸分子共用一个启动子;

优选地,所述启动子为ef1α;

优选地,所述表达载体包括病毒载体;

优选地,所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种,优选为慢病毒载体。

7.一种重组慢病毒,其特征在于,所述重组慢病毒采用如权利要求5或6所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到;

优选地,所述哺乳细胞包括293细胞、293t细胞或293e细胞中的任意一种或至少两种的组合。

8.一种如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体t细胞的制备方法,其特征在于,所述方法包括将如权利要求5或6所述的表达载体或如权利要求7所述的重组慢病毒导入t细胞的步骤。

9.一种组合物,其特征在于,所述组合物包括如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体t细胞、如权利要求5或6所述的表达载体或如权利要求7所述的重组慢病毒中的任意一种或至少两种的组合。

10.一种如权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体t细胞、如权利要求5或6所述的表达载体、如权利要求7所述的重组慢病毒或如权利要求9所述的组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用;

优选地,所述肿瘤为血液相关的肿瘤疾病;

优选地,所述血液相关的肿瘤疾病为白血病和/或淋巴瘤。


技术总结
本发明提供一种嵌合抗原受体T细胞及其应用。所述嵌合抗原受体T细胞同时表达靶向CD19和PD‑L1的嵌合抗原受体。所述嵌合抗原受体T细胞同时表达CD19 CAR结构与PD‑L1 CAR结构,所述PD‑L1 CAR与肿瘤细胞表达的PD‑L1结合后可通过胞内传递激活信号。因此,所述嵌合抗原受体T细胞不仅可以靶向识别表达CD19的肿瘤细胞,还可以解除肿瘤细胞表达的PD‑1对T细胞的免疫抑制,避免肿瘤细胞的免疫逃逸机制,缓解CAR‑T治疗的耐药性问题,为CAR‑T治疗以及过继回输免疫细胞治疗提供了一种新思路。

技术研发人员:苏小平;李锐
受保护的技术使用者:格源致善(上海)生物科技有限公司
技术研发日:2020.04.10
技术公布日:2020.07.14
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