本发明属于中药提取领域，具体涉及一种桑叶提取物及其制得的具有降血糖作用的桑叶多组分混合物。
背景技术：
：桑叶，为桑科桑属植物桑树(morusalbal.)的叶子，其含有人体必需的氨基酸、维生素、矿物质等营养素及黄酮类、生物碱、多糖类、多酚类等多种生物活性成分。其中包括一种多羟基生物碱——1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，dnj)，它可以同小肠中的麦芽糖酶、蔗糖酶和乳糖酶等双糖苷酶结合，使双糖不能进一步分解为单糖被机体吸收，从而明显抑制餐后血糖急剧升高的现象，延缓糖尿病的发生与发展。此外，根据文献“桑叶多组分协同降血糖作用，王德萍、江岩等”记载，桑叶多糖、黄酮、dnj混合物可通过减轻糖尿病小鼠体内氧化损伤，修复受损胰岛细胞、改善机体胰岛素效应细胞的抵抗作用，达到协同降血糖效应。因此，有效的从桑叶中提取出dnj，对制备治疗糖尿病的药物具有非常重要的价值。目前，有关dnj提取工艺的研究报道较少，现有提取工艺主要有微波辅助法、稀酸提取法、超声波辅助法。文献“正交优化桑叶中1-脱氧野尻霉素酸水提取的工艺”公开了一种用酸性水溶液提取桑叶中dnj的方法，在其最佳工艺下：桑叶粉末粒度60目、提取温度55℃、ph＝3盐酸溶液、料液比为1:20(g/ml)、提取时间为1.5h，dnj得率为0.062％，纯度为19.7％。文献“超声波辅助提取桑叶中1-脱氧野尻霉素工艺的响应面法优化”公开了一种以水为溶剂的超声波辅助提取方法，在其最佳提取工艺条件下：提取时间为60min、提取温度为75℃、超声功率为350w、液料比为16ml/g，dnj最大提取量为1.873mg/g。上述提取方法均采用水作为提取溶剂，增加了后处理时除去溶剂的难度，不适应大规模生产；而且上述方法所得桑叶提取物中dnj得率较低，增加了生产成本。因此，亟需一种能够提高桑叶提取物中dnj的提取率和纯度的提取工艺。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种桑叶dnj提取物及其制得的具有降血糖作用的桑叶多组分混合物。本发明提供了一种桑叶dnj提取物，它是通过以下方法制得的：以桑叶为原料，利用酸性的乙醇溶液提取，即得；所述乙醇溶液浓度为65％～75％，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为15～30ml/g。进一步地，所述酸性的乙醇溶液的ph为1～3，乙醇溶液浓度为70％～71％，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为20～26ml/g，所述桑叶为粉碎后过60目筛的桑叶粉末；和/或，所述提取时，提取温度为45～65℃，优选为50～61℃。进一步地，所述提取方法为浸提法，包括以下步骤：以桑叶为原料，用ph为1～3的乙醇溶液提取；所述乙醇溶液浓度为70％～71％，提取温度为60～61℃，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为20～21ml/g，提取次数为1～2次，提取时间为每次148～150min。进一步地，所述提取方法为超声波辅助酸性乙醇浸提法，包括以下步骤：以桑叶为原料，用ph为2～3的乙醇溶液在功率为320～322w的超声波下提取；所述乙醇溶液浓度为70％，提取温度为50℃，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为20ml/g，提取次数为1～2次，提取时间为每次30～31min。进一步地，所述提取方法为微波辅助酸性乙醇浸提法，包括以下步骤：以桑叶为原料，用ph为2～3的乙醇溶液在功率为300～306w的微波下提取；所述乙醇溶液浓度为70％，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为25～26ml/g，提取次数为1～2次，提取时间为每次70s。进一步地，所述方法还包括纯化步骤，纯化方法为：将提取所得产物经过大孔树脂和/或离子交换树脂纯化；优选的，所述大孔树脂为nka-9大孔树脂，所述离子交换树脂为001×7阳离子交换树脂。进一步地，经过大孔树脂纯化时，上样条件如下：上样浓度为1.5mg/ml，ph＝8，上样流速为1.5bv/h；洗脱条件如下：洗脱剂为75％乙醇，洗脱剂流速为2bv/h；和/或，经过离子交换树脂纯化时，上样条件如下：上样浓度为0.8mg/ml，ph＝2，上样流速为1.5bv/h；洗脱条件如下：洗脱剂为1mol/l氨水，洗脱剂流速为1bv/h。本发明还提供了一种桑叶多组分混合物，所述桑叶多组分混合物是将上述桑叶dnj提取物与桑叶黄酮提取物、桑叶多糖提取物混合后所得；优选的，所述桑叶多组分混合物中，dnj、黄酮、多糖的重量比为1:6:8。进一步地，所述桑叶黄酮提取物是通过以下方法制得的：以桑叶为原料，利用乙醇溶液提取，即得；所述乙醇溶液浓度为70％，提取温度为88℃，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为30ml/g，提取时间为2.5h；或，所述桑叶黄酮提取物是通过以下方法制得的：以桑叶为原料，用乙醇溶液在功率为126w的超声波下提取，即得；所述乙醇溶液浓度为51％，提取温度为70℃，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为25ml/g，提取时间为36min；和/或，所述桑叶多糖提取物是通过以下方法制得的：以桑叶为原料，用水提取，即得；所述提取温度为82℃，水与桑叶的体积质量比为17ml/g，提取时间为74min。进一步地，所述桑叶黄酮提取物的制备方法还包括以下纯化步骤：将提取后所得产物经过ab-8大孔树脂纯化；优选的，纯化时的上样浓度为3mg/ml，上样流速为2bv/h；洗脱剂为70％乙醇，洗脱剂流速为2bv/h；和/或，所述桑叶多糖提取物的制备方法还包括以下纯化步骤：将提取后所得产物用乙醇溶液沉淀；优选的，所述乙醇溶液浓度为95％，乙醇溶液体积为多糖提取物的3倍，沉淀温度为2～4℃，沉淀时间为12h；优选的，所述桑叶多糖提取物的制备方法还包括以下纯化步骤：将上述用乙醇溶液沉淀后的体系经过ab-8大孔树脂纯化；优选的，纯化时的上样浓度为0.7mg/ml，上样流速为3bv/h，洗脱剂为蒸馏水，洗脱剂流速为2bv/h。如无特别说明，本发明的混合溶液的浓度均为体积浓度，比如70％乙醇为体积浓度70％的乙醇溶液。本发明提供了3种制备桑叶dnj提取物的方法，实验证明：(1)采用酸性乙醇浸提时，在以下特定提取条件下：乙醇浓度为70～71％、提取时间为148～150min、液料比为20～21ml/g、提取温度为60～61℃，所得提取物中dnj的得率高达2.939mg/g；(2)采用超声波辅助酸性乙醇浸提法提取时，在以下特定提取条件下：超声波功率为320～322w、提取时间为30～31min、液料比为2ml/g、提取温度为50℃，所得提取物中dnj的得率高达3.203mg/g；(3)采用微波辅助酸性乙醇浸提法提取时，在以下特定提取条件下：微波功率为300～306w、提取时间为70s、液料比为25～26ml/g，所得提取物中dnj的得率高达3.097mg/g。本发明还利用nka-9大孔树脂、001×7阳离子交换树脂对所得桑叶dnj提取物进行纯化，在特定的纯化条件下，显著提高了提取物中dnj的纯度。此外，本发明以上述方法制得的桑叶dnj提取物为原料，与桑叶黄酮提取物、桑叶多糖提取物在特定比例下(控制dnj：黄酮：多糖的重量比为1:6:8)混合得到的桑叶多组分混合物具有优异的降血糖作用，在制备降血糖药物中具有良好的应用前景。本发明提供的提取方法操作简单、条件温和，在本发明特定的提取条件下，所得桑叶dnj提取物中dnj的得率和纯度显著提高。本发明的桑叶dnj提取物在制备活性成分只含桑叶dnj，或者包含桑叶多糖、黄酮、dnj混合物的降血糖药物中具有很好的前景。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。具体实施方式本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。nka-9大孔树脂购于河北沧州宝恩吸附材料科技公司，比表面积450-520，平均孔径12.5-13.5nm。将白桑(morusalbal.)桑叶洗净阴干，用万能粉碎机粉碎，过60目筛，得桑叶粉，避光贮存，备用。实施例1采用酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj称取2g桑叶粉置于平底烧瓶，加入42ml用盐酸调整的ph＝2浓度为71％乙醇，在提取温度61℃条件下提取148min，提取2次，得到本发明的桑叶dnj提取物1。dnj得率为2.939(mg/g)。实施例2采用超声波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj称取2g桑叶粉置于平底烧瓶，加入40ml用盐酸调整的ph＝2浓度为70％乙醇，在提取温度50℃，超声波功率为322w条件下提取31min，提取2次，得到本发明的桑叶dnj提取物2。dnj得率为3.203(mg/g)。实施例3采用微波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj称取2g桑叶粉置于平底烧瓶，分别加入52ml用盐酸调整的ph＝2浓度为70％乙醇，微波功率为306w条件下提取70s，提取2次，得到本发明的桑叶dnj提取物3。dnj得率为3.097(mg/g)。实施例4桑叶dnj提取物的纯化以实施例1制得的桑叶dnj提取物1(dnj纯度为8.2％)为粗品，采用nka-9大孔树脂进行纯化。样品上样条件如下：上样浓度为1.5mg/ml，ph＝8，流速为1.5bv/h；洗脱剂为75％乙醇，洗脱剂流速为2bv/h。经过上述纯化过程后，所得桑叶dnj提取物的dnj纯度从8.2％增加为28.4％，其纯度提高了3.5倍。实施例5桑叶dnj提取物的进一步纯化以实施例4制得的纯化桑叶dnj提取物(dnj纯度为28.4％)为粗品，采用001×7阳离子交换树脂进一步纯化。样品上样条件如下：上样ph＝2，浓度为0.8mg/ml，流速为1.5bv/h；洗脱剂为1mol/l氨水，洗脱流速为1bv/h。经过上述进一步的纯化过程后，所得桑叶dnj提取物的dnj纯度从28.4％增加为70.4％，其纯度进一步提高了2.5倍。实施例6采用乙醇浸提法提取桑叶黄酮称取2g桑叶粉置于平底烧瓶，加入60ml浓度为70％乙醇，在提取温度88℃条件下提取2.5h，得到本发明的桑叶黄酮提取物1。黄酮得率为4.16％。黄酮得率＝桑叶黄酮提取物中的黄酮质量/桑叶粉质量。实施例7采用超声波辅助乙醇浸提提取桑叶黄酮称取2g桑叶粉置于平底烧瓶，加入50ml浓度为51％乙醇，在超声温度为70℃、超声功率为126w条件下提取36min，得到本发明的桑叶黄酮提取物2。黄酮得率为3.79％。实施例8桑叶黄酮提取物的纯化以实施例6制得的桑叶黄酮提取物1(黄酮纯度为8.49％)为粗品，采用ab-8大孔树脂进行纯化。样品上样条件如下：上样浓度为3mg/ml，流速为2bv/h；洗脱剂为70％乙醇，洗脱剂流速为2bv/h。经过上述纯化过程后，桑叶黄酮提取物的黄酮纯度从8.49％增加为52.34％，其纯度提高了6.16倍。采用hplc法对上述ab-8大孔树脂纯化后的提取物进行组分分析，发现其中主要包含5个黄酮类化合物，各黄酮类化合物含量如下：绿原酸86.50mg/g、异槲皮苷60.94mg/g、紫云英苷35.12mg/g、芦丁23.75mg/g、槲皮素14.87mg/g。实施例9采用水浸提乙醇沉淀法提取桑叶多糖(1)桑叶多糖提取液的制备将桑叶粉过40目筛，石油醚脱脂。称取2g桑叶粉置于圆底烧瓶中，加入蒸馏水，在液料比为17:1ml/g，提取温度82℃，提取时间74min，提取2次的条件下提取。将所得提取液离心，收集上清液，真空浓缩3倍，得到桑叶多糖浓缩液。(2)乙醇沉淀取步骤(1)所得桑叶多糖浓缩液，加入3倍体积的95％的乙醇溶液，低温(2～4℃)静置沉淀12h，高速离心分离(3000r/min，15min)，得桑叶多糖提取物，多糖得率为14.24％。多糖得率＝桑叶多糖提取物中的多糖质量/桑叶粉质量。实施例10桑叶多糖的纯化以实施例9制得的乙醇沉淀后的桑叶多糖提取物为粗品，采用ab-8大孔树脂进行纯化。样品上样条件如下：上样浓度为0.7mg/ml，流速为3bv/h；洗脱剂为蒸馏水，洗脱剂流速为2bv/h。经过上述纯化过程后，所得桑叶多糖提取物的多糖纯度为32.6％，多糖得率为19.3％，多糖保留率56.5％，脱蛋白率68.4％，脱色率50.8％。实施例11桑叶多组分混合物的制备将实施例1～5任一个实施例制得的桑叶dnj提取物、实施例6～8任一个实施例制得的桑叶黄酮提取物、实施例9～10任一个实施例制得的桑叶多糖提取物混合，控制dnj：黄酮：多糖的重量比为1:6:8，得到桑叶多组分混合物。以下通过实验例证明本发明的有益效果。实验例1桑叶dnj提取物中dnj含量及纯度的测试1.1试剂的配制(1)dnj标准溶液配制：准确称取5mgdnj标准品于烧杯中，加少量0.05mol/l盐酸溶解，加入一定蒸馏水，移入50ml容量瓶，冲洗三次烧杯和玻璃棒一并移入容量瓶，定容至50ml，得0.1mg/ml的dnj标准溶液。(2)wagner试剂配制：称取lgi2及10gki，于烧杯中，加入少量蒸馏水溶解，加少量醋酸加热，用蒸馏水稀释至100ml，贮存于棕色广口瓶中备用。1.2确定特异吸收波长dnj属于一种哌啶生物碱，在酸性条件下与wagner试剂生成络合物，可以在紫外条件下检出。取0.lmg/mldnj标准溶液5ml于25ml容量瓶中，加入少量wagner试剂，于紫外分光光度计240nm-420nm波长范围内扫描，确定dnj特异吸收波长。1.3绘制标准曲线分别吸取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的dnj标准样品溶液，于5支不同编号的具塞试管中，各具塞试管中加入等量碘-碘化钾试剂作显色剂，加蒸馏水使样品溶液总体积为5ml，另取一支具塞试管加入等量碘-碘化钾试剂，逐渐加入蒸馏水调整溶液体积为5ml，作为空白对照。在最大吸收波长下测定各个试管溶液的吸收值，以dnj浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。1.4dnj含量的测定(1)取一定量的样品溶液于25ml容量瓶中，加入wagner试剂，定容，振荡，在最大吸收波长下测定其吸光度，由标准曲线算出其对应的样品浓度，并按照下式计算dnj得率(即dnj含量)：c：标准曲线dnj浓度(μg/ml)n：稀释倍数v：样液体积(ml)w：桑叶质量(g)1.5dnj纯度的测定取待测的桑叶dnj提取物，按照下式进行计算：c：标准曲线dnj浓度(mg/ml)n：稀释倍数v：样液体积(ml)m：待测样品烘干后重量(g)1.6实验结果采用上述方法，得dnj的标准曲线：y＝0.1641x-0.0013，r2＝0.9991。分别计算出各实施例中dnj得率，如表1所示。本发明采用超声波辅助酸性乙醇法提取dnj的得率为3.203mg/g，较酸性乙醇法得率提高了9.0％；采用微波辅助酸性乙醇法提取dnj的得率为3.097mg/g，较酸性乙醇法得率提高了5.4％。如表2所示，实施例4经过nka-9大孔树脂纯化后的桑叶dnj提取物的dnj纯度从8.2％增加为28.4％，其纯度提高了3.5倍。实施例5经过001×7阳离子交换树脂进一步纯化后的桑叶dnj提取物的dnj纯度从28.4％增加为70.4％，其纯度进一步提高了2.5倍。表1各实施例dnj得率计算结果样品提取方法dnj得率(mg/g)实施例1酸性乙醇浸提法2.939实施例2超声波辅助酸性乙醇浸提法3.203实施例3微波辅助酸性乙醇浸提法3.097表2各实施例dnj纯度计算结果样品提取方法dnj纯度实施例1酸性乙醇浸提法8.2％实施例4nka-9大孔树脂纯化28.4％实施例5001×7阳离子交换树脂纯化70.4％实验例2桑叶黄酮提取物中黄酮含量及纯度的测试2.1硝酸铝-亚硝酸钠法测定原理黄酮类化合物与硝酸铝反应之后，形成的黄酮铝盐络合离子呈黄色，其颜色的深浅与黄酮含量成一定的比例关系，可以定量测定。2.2绘制标准曲线称取10.00mg芦丁标准品，溶于65％乙醇溶液，定容至50ml，配成0.2mg/ml的芦丁标准溶液。分别吸取0、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml芦丁标准溶液于10ml容量瓶中，加0.5mlnano2(1:20)溶液，摇匀放置6min，加0.5mlal(no3)3(1:10)溶液，摇匀放置6min，加4ml1mol/l的naoh溶液，65％乙醇溶液定容，摇匀放置10～20min，以第一管溶液作为空白对照，于510nm波长下测定吸光度。以芦丁标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。2.3桑叶黄酮含量测定取待测样品溶液0.5ml于容量瓶中，按绘制标准曲线的方法操作，按公式计算黄酮含量(即黄酮得率)。公式如下：式中：c—标准曲线黄酮浓度(mg/ml)n—稀释倍数v—样液体积(ml)w—桑叶质量(g)2.4桑叶黄酮纯度测定取待测的桑叶黄酮提取物，按以下公式计算黄酮的纯度。式中：c—标准曲线黄酮浓度(mg/ml)n—稀释倍数v—样液体积(ml)m—提取物冷冻干燥后重量(g)2.5实验结果采用上述方法，得芦丁的标准曲线：a(y)＝10.949(x)+0.0138，r2＝0.9991。计算出实施例6所得提取物黄酮得率为4.16％，实施例7所得提取物黄酮得率为3.79％。实施例8经ab-8大孔树脂纯化后的黄酮提取物，黄酮纯度从8.49％增加为52.34％，其纯度提高了6.16倍。实验例3桑叶多糖提取物中多糖含量及纯度的测试3.1多糖保留率测定采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，按以下计算多糖保留率。3.2脱蛋白率测定采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。考马斯亮蓝g-250的配制：称取100mg考马斯亮蓝g-250，溶于50ml90％乙醇中，加入85％(w/v)的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到1000ml。配制100μg/ml的牛血清蛋白，分别取0ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml于试管中，用0.15mnacl溶液补至1ml后加入5ml事先配制好的考马斯亮蓝溶液，静置10min后于595nm测定吸光值，绘制标准曲线。按以下公式计算脱蛋白率。3.3脱色率测定配制浓度为1％的桑叶粗多糖溶液，对其进行可见-紫外全波长扫描，结果表明，该溶液无最大吸收波长。根据互补色原理可知，溶液呈现的颜色是它吸收光的互补色，由于多糖溶液脱色前后稀释后均为橙黄色，所以溶液主要吸收蓝色波段可见光。因此选择处于该波段中心的450nm波长为检测波长，测定溶液的吸光度。并按以下公式计算脱色率。3.4纯化后桑叶多糖纯度的测定取待测桑叶多糖提取物，按照以下公式进行计算多糖纯度：式中：c—标准曲线多糖浓度(mg/ml)n—稀释倍数v—样液体积(ml)m—提取物冷冻干燥后重量(g)3.5实验结果经过ab-8大孔树脂纯化过程后，实施例10所得桑叶多糖提取物的多糖纯度为32.6％，多糖得率为19.3％，多糖保留率56.5％，脱蛋白率68.4％，脱色率50.8％。实验例4采用酸性乙醇提取桑叶dnj的工艺筛选1、实验方法参照实施例1的工艺，按照表3改变乙醇浓度、提取时间、液料比、提取温度，分别提取桑叶dnj提取物，按照实验例1的方法计算各工艺下的dnj得率。每个工艺条件下重复5次，取平均值。2、实验结果结果如表3所示，可以看出，利用酸性乙醇提取桑叶时，当乙醇浓度为70～71％、提取时间为148～150min、液料比为20～21ml/g、提取温度为60～61℃时，所得提取物中dnj的得率最高。表3酸性乙醇法提取桑叶dnj的工艺筛选实验结果实验例5采用超声波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj的工艺筛选1、实验方法参照实施例2的工艺，按照表4改变超声波功率、提取时间、液料比、提取温度，分别提取桑叶dnj提取物，按照实验例1的方法计算各工艺下的dnj得率。2、实验结果结果如表4所示，可以看出，利用超声波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶时，当超声波功率为320～322w、提取时间为30～31min、液料比为20ml/g、提取温度为50℃时，所得提取物中dnj的得率最高。表4超声波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj的工艺筛选实验结果实验例6采用微波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj的工艺筛选1、实验方法参照实施例3的工艺，按照表5改变微波功率、提取时间、液料比，分别提取桑叶dnj提取物，按照实验例1的方法计算各工艺下的dnj得率。2、实验结果结果如表5所示，可以看出，利用微波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶时，当微波功率为300～306w、提取时间为70s、液料比为25～26ml/g时，所得提取物中dnj的得率最高。表5微波辅助酸性乙醇浸提法提取桑叶dnj的工艺筛选实验结果实验例7桑叶多组分混合物的降血糖作用表征1、实验方法实验药物：实施例11制得的桑叶多组分混合物；阳性药物为二甲双胍。建立糖尿病大鼠模型：取健康雄性sd大鼠，高脂饲料喂饲6周后，一次性腹腔注射链脲佐菌素溶液(30mg/kg·bw)，72h后测定空腹血糖，以空腹血糖≥11.1mmol/l指标确定糖尿病大鼠造模成功。将桑叶多组分混合物(100mg/kg·d·bw)或阳性药物(185mg/kg·d·bw)喂饲(灌胃)建模后的sd雄性大鼠，共计治疗6周。以喂饲相同体积生理盐水的建模后的sd雄性大鼠作为模型对照组，以喂饲相同体积生理盐水的正常sd大鼠作为空白对照组。治疗6周后，测试大鼠血糖水平、胰岛素水平；测试大鼠血清中的总胆固醇、甘油三酯、ldl-c及hdl-c；测试大鼠血清中的抗氧化酶：超氧化物歧化酶sod、谷胱甘肽过氧化物酶gsh-px、过氧化氢酶cat的活性，过氧化脂质丙二醛mda水平；测试大鼠血清中的脂肪细胞因子：游离脂肪酸、tnf-α、瘦素和炎症因子c反应蛋白水平；测试大鼠血清中的肾功指标尿素氮、肌酐水平；观察大鼠肝脏组织、胰腺组织、肾组织切片。2、实验结果6周后，桑叶多组分混合物组大鼠血糖水平、胰岛素水平仅为模型对照组的26.06％、53.30％(p<0.05)，与阳性药物二甲双胍对照组相当(p>0.05)，具有较好的降血糖效果。6周后，桑叶多组分混合物组大鼠血清中的总胆固醇、甘油三酯、ldl-c及hdl-c分别是模型对照组的79.10％、49.50％、74.24％及1.33倍(p<0.05)，且与空白对照组和阳性对照组均无显著性差异(p>0.05)，说明桑叶多组分混合物能有效改善糖尿病大鼠脂质代谢紊乱。6周后，桑叶多组分混合物组大鼠血清中的抗氧化酶：超氧化物歧化酶sod、谷胱甘肽过氧化物酶gsh-px、过氧化氢酶cat的活性分别是模型组的1.26倍、1.34倍、1.36倍(p<0.05)，过氧化脂质丙二醛mda水平则是模型组的84.06％(p<0.05)，与阳性对照组无显著性差异(p>0.05)。桑叶多组分混合物通过提高糖尿病大鼠体内抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化，改善糖尿病大鼠体内的氧化应激状态。6周后，桑叶多组分混合物组大鼠血清中的脂肪细胞因子：游离脂肪酸、tnf-α、瘦素和炎症因子c反应蛋白水平下降至模型对照组的68.63％、88.25％、84.15％和41.03％(p<0.05)，脂肪细胞因子脂联素水平则升至模型组的1.16倍(p<0.05)，且均与阳性对照二甲双胍组无明显差异(p>0.05)。桑叶提取物能够有效下调糖尿病大鼠体内脂肪细胞因子及c反应蛋白的异常高表达，改善胰岛素抵抗状态；并激活脂联素表达，增强胰岛素敏感性。6周后，桑叶多组分混合物组大鼠血清中的肾功指标尿素氮、肌酐水平分别是模型组的71.31％、62.23％(p<0.05)，且接近阳性对照组，无统计学差异(p>0.05)。6周后，桑叶多组分混合物组大鼠肝脏脂肪空泡明显减少，细胞排列有序、形态相对完整，肝小叶结构完整。胰岛细胞边界清楚，排列规则，胰岛细胞数量增多。肾小球体积轻度增大，肾小管未见透明变，肾小球及肾小管基底膜增厚明显减轻，肾组织的病理状态好转。提示桑叶提取物具有改善高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素所致的糖尿病大鼠肝脏脂肪变性，并修复受损胰岛细胞，减轻持续高血糖对肾脏损害等作用。所以，本发明制得的桑叶多组分混合物能够通过提高糖尿病大鼠体内抗氧化酶活性，减轻肝脏、胰腺等组织的氧化应激损伤，改善胰岛素抵抗状态，增强胰岛素敏感性，从而有效降低糖尿病大鼠血糖水平，并改善大鼠脂质代谢紊乱，具有优异的降血糖效果。综上，本发明提供了一种桑叶dnj提取物，它是以桑叶为原料，利用酸性的乙醇溶液提取所得；所述乙醇溶液浓度为65％～75％，乙醇溶液与桑叶的体积质量比为15～30ml/g。该方法中，提取的方式可以是浸提、超声波辅助酸性乙醇提取或微波辅助酸性乙醇提取。在本发明特定的提取条件下，所得桑叶dnj提取物中dnj的得率和纯度显著提高。本发明的桑叶dnj提取物在制备活性成分只含桑叶dnj，或者包含桑叶多糖、黄酮、dnj混合物的降血糖药物中具有很好的前景。特别的，本发明提供的由桑叶dnj提取物、桑叶黄酮提取物、桑叶多糖提取物以1:6:8的比例组成桑叶多组分混合物能够通过提高糖尿病大鼠体内抗氧化酶活性，减轻肝脏、胰腺等组织的氧化应激损伤，改善胰岛素抵抗状态，增强胰岛素敏感性，从而有效降低糖尿病大鼠血糖水平，并改善大鼠脂质代谢紊乱，具有优异的降血糖效果，应用前景广阔。当前第1页12