HarpinEa的高效可溶性表达及生产方法和应用

文档序号:26139543发布日期:2021-08-03 14:23阅读:来源:国知局

技术特征:

1.harpinea蛋白mrnatir经优化后所获得的harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白,其特征在于,mrnatir优化是指:将harpinea基因+24位的g改为t,+30位的g改为a,+6位的g改为t,+15位的c改为t,+36位的c改为t,+45位的g改为a,+51位的c改为t。

2.根据权利要求1所述的harpinea蛋白mrnatir经优化后所获得的harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白,其特征在于,所述harpinea1编码基因的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述harpinea2编码基因的核苷酸序列如seqidno.4所示;

所述harpinea3编码基因的核苷酸序列如seqidno.5所示。

3.根据权利要求1所述的harpinea蛋白mrnatir经优化后所获得的harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白,其特征在于,所述harpinea蛋白为:

(1)seqidno.1所示的氨基酸序列;或,

(2)seqidno.1同源性75%以上的氨基酸序列;或,

(3)在seqidno.1的基础上进行一个或多个氨基酸替换,和/或缺失,和/或添加后获得的具有seqidno.1相同功能的氨基酸序列。

4.harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白的核酸分子,其特征在于,

所述harpinea1编码基因的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述harpinea2编码基因的核苷酸序列如seqidno.4所示;

所述harpinea3编码基因的核苷酸序列如seqidno.5所示。

5.含有harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白编码基因的表达盒、重组载体或重组菌,其特征在于,

所述harpinea蛋白的编码基因如序列表seqidno.2所示;

所述harpinea1编码基因的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述harpinea2编码基因的核苷酸序列如seqidno.4所示;

所述harpinea3编码基因的核苷酸序列如seqidno.5所示。

6.根据权利要求5所述含有harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白编码基因的表达盒、重组载体或重组菌,其特征在于,含有harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白编码基因的重组菌的构建方法是:将harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3的编码基因与表达载体进行无缝克隆连接后转化入宿主细胞所得。

7.harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白的制备方法,其特征在于,将含有harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白编码基因的重组菌接种至发酵培养基中,待od600达到0.6-1.8,添加iptg诱导表达,离心收获菌体,破碎,取破碎液上清液,经ni-nta亲和层析纯化,得到harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3;

所述harpinea蛋白的编码基因如序列表seqidno.2所示;

所述harpinea1编码基因的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述harpinea2编码基因的核苷酸序列如seqidno.4所示;

所述harpinea3编码基因的核苷酸序列如seqidno.5所示。

8.根据权利要求7所述harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白的制备方法,其特征在于,培养条件为:以1-10%的接种量接种发酵培养基,待od600达到0.6-1.8,添加iptg至终浓度0.1-0.6mm,15-20℃,低温诱导16-20h;所述发酵培养基为含卡那霉素的lb培养基;iptg的添加量为终浓度0.2-0.4mm。

9.harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白的应用,其特征在于,所述harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白在促进植物生长及提高植物抗性,或制备植物促生长和提高抗性的制剂中的应用。

10.根据权利要求9的应用,其特征在于,所述harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白在促进植物生长中的应用方法如下:将harpinea、harpinea1、harpinea2或harpinea3蛋白配比成终浓度为0.125-50μg/ml的溶液,单独使用或与化学农药/微生物菌肥/土壤调理剂/植物刺激剂/植物提取物混合后,进行叶面喷施或灌根,激发植物的免疫反应。


技术总结
本发明涉及HarpinEa蛋白及高效可溶性表达及生产方法和应用,具体涉及到免疫蛋白HarpinEa的mRNA TIR优化方法,mRNA TIR优化后的HarpinEa1、HarpinEa2、HarpinEa3蛋白,HarpinEa、HarpinEa1、HarpinEa2、HarpinEa3蛋白编码基因,含有HarpinEa、HarpinEa1、HarpinEa2、HarpinEa3蛋白编码基因的表达盒、重组载体或重组菌,以及免疫蛋白HarpinEa、HarpinEa1、HarpinEa2、HarpinEa3蛋白的高效可溶性表达及生产方法,和HarpinEa、HarpinEa1、HarpinEa2或HarpinEa3蛋白在促进植物生长和提高植物抗性中的应用。通过本发明的方案,HarpinEa蛋白占可溶性蛋白的总量从12.9%提升至46.7%,提高了约3.6倍,大大促进了HarpinEa蛋白的可溶性表达。在此基础上,通过Ni‑NTA一步纯化的方法,获得了纯度超过90%的高纯度HarpinEa蛋白。

技术研发人员:孙爱友;蔡增英
受保护的技术使用者:华东理工大学;宁夏中宁枸杞产业创新研究院有限公司
技术研发日:2021.04.21
技术公布日:2021.08.03
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