荸荠皮提取贯众素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然有机化学领域，具体是涉及一种贯众素的提取分离方法，特别是 涉及一种从荸荠皮中提取分离贯众素的方法。
【背景技术】
[0002] 贯众素（Cyrtominetin)，也称贯众亭，化学名为（R)-6,8-二甲 基_5,7,3'，4'-四羟基二氢黄酮，存在鳞毛蕨科贯众属植物中。贯众素为C-甲基化二 氢黄酮，该类化合物具有抗氧化、抗炎、镇痛、抗肿瘤等多种药理活性。贯众素结构特别，在 植物中的分布少且含量不高。目前还没有发现有关从植物中提取分离贯众素的工艺技术文 献。
[0003] 荸养（Eleocharis tuberosa)，又称马蹄，属莎草科多年生浅水草本植物荸养的地 下球茎，我国大部分地区都有栽培。其中，广西荸荠产量占全国70%，贺州荸荠产量占广西 70%。据文献报道，荸荠有抗菌、抗肿瘤、防治呼吸道疾病、利肠通便和利尿排淋等作用；临 床上可用于治疗咽喉疼痛、痰热咳嗽、热病烦渴、小便不利、痢疾等症。研宄表明，荸荠的活 性物质主要富集在果皮和果肉之间。在荸荠加工过程中，被丢弃的荸荠皮质量约占新鲜荸 荠质量的25%，资源非常丰富。我们在研宄中发现荸荠皮中含有贯众素，但目前未见从荸荠 皮中提取分离该化合物的文献报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于：提出一种荸荠皮提取贯众素的方法。
[0005] 本发明的荸荠皮提取贯众素的方法，应用常规提取法和MCI、聚酰胺以及半制备型 高效液相色谱技术从荸荠皮中提取分离贯众素，具体包括步骤如下：
[0006] (1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份，加入提取 罐中，每次加入4-10份70%体积百分比的丙酮水溶液，在25°C下浸泡24h，浸泡3次，过滤， 合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。
[0007] (2)以重量计，将提取物1份分散在5份水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸 乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。
[0008] (3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇 挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相 梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90%百分比的洗脱液，减压浓缩，获 得粗品A。
[0009] (4)往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至 干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为2:1-0:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法 检测，收集合并含有贯众素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。
[0010] (5)以重量计，将所得粗品B 1份溶于2-5份甲醇中，用半制备型高效液相色谱纯 化，以46-58%体积百分比的甲醇水溶液为流动相，收集合并含有贯众素的洗脱液，减压浓 缩，干燥，获得含量达95%以上的贯众素产品。
[0011] 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤⑶中的所述的MCI柱规格 为70X460mm，填充材料为MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为 50mL/min，检测波长为245nm ;所述的流动相为40-100%体积百分比的甲醇水溶液。
[0012] 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4)中所述的聚酰胺，规格 为200-300目；所用洗脱液为体积比为2:1-0:1的氯仿-甲醇溶液。
[0013] 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤￠)中的所用色谱柱为 Zorbax SB-C18 (9. 4mm 25cm)柱；所述流动相为46-58%体积百分比的甲醇水溶液。
[0014] 本发明与现有技术相比其有益效果是：设计科学合理，开辟了从天然植物中提取 分离贯众素的新途径，分离效果好，产品纯度高，使一贯被视为废弃物的荸荠皮变废为宝， 所选用的层析材料MCI和聚酰胺均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，可进行 规模化生产，具有较好的应用前景。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0016] 本发明的荸荠皮提取贯众素的方法，应用常规提取法和MCI、聚酰胺以及半制备型 高效液相色谱技术从荸荠皮中提取分离贯众素，具体包括步骤如下：
[0017] (1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用。称取一定质量（g)的荸荠皮粉末加入提取 罐中，再加入4-10倍体积（mL)的70%体积百分比的丙酮水溶液，在25°C下浸泡24h，浸泡 3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。
[0018] (2)将提取物（g)分散在5倍体积（mL)的水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙 酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。
[0019] (3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇 挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，柱规格为70mm X 460mm，填充材料为日本三菱化 学公司生产的MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min， 检测波长为254nm，以40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，根据检测峰 变化情况调节洗脱液浓度，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为 70-90 %百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A。
[0020] (4)往粗品中加入甲醇至完全溶解，加入2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发 干，转入聚酰胺的色谱柱进行分离，用体积比为2:1-0:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱 法检测，收集合并含有贯众素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。
[0021] (5)将所得粗品B(g)溶于2-5倍体积（mL)的甲醇中，用半制备型高效液相色谱纯 化，所用色谱柱为美国安捷伦公司生产的Zorbax SB-C18 (9. 4mm 25cm)柱，以46-58%体积 百分比的甲醇水溶液为流动相，收集合并含有贯众素的洗脱液，减压浓缩，干燥，获得含量 达95%以上的贯众素产品。
[0022] 实施例1
[0023] 将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70%体积百分比的丙酮水溶 液，在25°C下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物I. 05kg。
[0024] 将提取物加入5. OL水中制成浑浊液，用5. OL乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减 压浓缩，获得萃取物120g。
[0025] 往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用26