用，所述异源交联物是由两种异源的抗体通过交联反应而获得的，所述异源交联物包括由 所述两种异源的抗体形成的四聚体形式的异源交联抗体。优选地，所述两种异源的抗体为 非人的病原体抗体和健康的未感染病原体的人抗体；优选地，所述四聚体形式的异源交联 抗体在所述异源交联物中所占的质量比不小于50%。
[0010] 本发明的另一个目的在于提供一种替代病人阳性血液的质控品，所述质控品包括 稀释液和一种由两种异源的抗体通过交联反应而获得的异源交联物，所述异源交联物包括 由所述两种异源的抗体形成的四聚体形式的异源交联抗体，所述稀释液可选自小牛血清或 胎牛血清，优选为小牛血清，在所述质控品中，所述异源交联物浓度为5~25 y g/ml，优选 20 y g/ml。优选地，所述两种异源的抗体为非人的病原体抗体和健康的未感染病原体的人 抗体；优选地，所述四聚体形式的异源交联抗体在所述异源交联物中所占的质量比不小于 50%〇
[0011] 特别地，本发明提供一种替代病人TORCH病原体抗体阳性血液的质控品，其特征 在于，所述质控品包括稀释液和一种由非人的TORCH病原体抗体和健康的未感染TORCH 病原体的人抗体通过交联反应所获得的异源交联物，所述异源交联物包括由所述非人的 TORCH病原体抗体和所述健康的未感染TORCH病原体的人抗体形成的四聚体形式的异源交 联抗体，所述稀释液可选自小牛血清或胎牛血清，优选为小牛血清，在所述质控品中，所述 异源交联物浓度为5~25 y g/ml，优选20 y g/ml。优选地，所述四聚体形式的异源交联抗 体在所述异源交联物中所占的质量比不小于50 %。
[0012] 与现有技术相比，本发明所获得的有益效果为：
[0013] 首先，本发明的异源交联物含有四聚体形式的异源交联抗体。所述异源交联物作 为病人阳性血液中病原体抗体的替代物，在-20°C和4°C下保存一个月后的稳定性测试中， 所述异源交联物都具有非常好的稳定性。
[0014] 其次，本发明的异源交联物作为病人阳性血液中病原体抗体的替代物，能够很好 地替代病人阳性血液中的病原体抗体。
[0015] 再次，本发明的异源交联物来源于非人的病原体抗体和健康的未感染病原体的人 抗体，经稀释液稀释后，可作为替代病人阳性血液的质控品，这种质控品与病人阳性血液的 性能相当，又能避免病人阳性血液的潜在感染性，同时这种异源交联物具有生产制备简单 和成本低的特点。
[0016] 并且，本发明的质控品批间差较小，能够有效地降低检测误差。
【具体实施方式】
[0017] 本发明利用诸如SPDP、GMBS和DTNB之类的交联剂将两种异源的抗体交联在一起， 从而形成包括四聚体形式的异源交联抗体在内的异源交联物。本发明发现当所述异源交联 物含有四聚体形式的异源交联抗体时，所述异源交联物可作为病人阳性血液中病原体抗体 的替代物，经稀释液稀释后作为替代病人阳性血液的质控品，用于免疫检测，如胶体金免疫 层析检测，乳胶免疫层析检测，放射免疫检测、酶联免疫检测、时间分辨荧光免疫检测或化 学发光免疫检测，同时具有非常好的灵敏度、特异性和稳定性。所述四聚体形式的异源交联 抗体在所述异源交联物中所占的质量比优选为不小于50 %。
[0018] 在每个所述四聚体形式的异源交联抗体分子中，所述两种异源的抗体分子数比为 3:1或2:2或1:3。在结构式1中，所述两种异源的抗体分子数比为3:1。在结构式2(a) 或2(b)中，所述两种异源的抗体分子数比为2:2。在结构式3中，所述两种异源的抗体分 子数比为1 :3。在这些结构式中，所述两种异源的抗体分别用Abl和Ab2表示，L是利用交 联剂对所述两种异源的抗体进行交联反应时形成的连接物。
【主权项】
1. 一种异源交联物，其特征在于，所述的异源交联物包括由小鼠 anti-TOXO McAb和健 康的未感染TOXO的人IgG所形成的四聚体形式的异源交联抗体。所述的异源交联物是由 以下方法制备得到： (1) 将5mg小鼠 anti-TOXO McAb溶解于交联缓冲液中，搅拌加入50 μ ISPDP交联剂，室 温下反应2个小时后，装入透析袋，用还原缓冲液透析，换液四次；其中所述的交联缓冲液 包括0.1 M磷酸钾，0.1 M NaCl，ρΗ7. 5 ;所述交联剂浓度为3. 2mg/ml，交联剂溶解于无水乙醇 中；所述的还原缓冲液包括〇. IM乙酸钠，0.1 M NaCl，pH4. 5 ; (2) 将5mg健康的未感染TOXO的人IgG溶解于交联缓冲液中，搅拌加入50 μ I SPDP交 联剂，室温下反应2个小时后，装入透析袋，用交联缓冲液透析，换液四次； (3) 在（1)中加入30 μ I DTT，室温反应30分钟后，装入透析袋，用交联缓冲液透析，换 液四次；所述的DTT浓度为1Μ，是将DTT溶解于0.0 lM乙酸钠溶液至终浓度为1Μ，ρΗ5. 2 ; (4) 将（2)、（3)中的处理物混合，在4°C下反应15个小时； (5) 往⑷中加入0.4mg碘乙酰胺封闭剂，反应30分钟以封闭未反应的活性基团，然后 装入透析袋，用交联缓冲液透析，换液四次； (6) 将（5)中的产物装载到HiLoad 16/60Superdex 200PG凝胶过滤柱中，以交联缓冲 液进行洗脱，并利用HD-3紫光分析仪实时检测洗脱产物在280nm波长时的吸光值，同时用 XWT-S小型记录仪绘制层析图谱，按峰收集洗脱产物； (7) 获得含有四聚体形式的异源交联抗体的异源交联物。
2. 如权利要求1所述的异源交联物，其特征在于，所述异源交联物保存在一种冻存液 中，并在-20°C下保存，所述冻存液包括稳定剂，甘油和防腐剂。
3. 如权利要求2所述的异源交联物，其特征在于，所述稳定剂可选自BSA或明胶，所述 防腐剂可选自叠氮钠或硫柳汞。
4. 如权利要求1至3之一所述的异源交联物在制备弓形虫免疫检测试剂盒中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种新型的抗体，包括由小鼠anti-TOXO McAb和健康的未感染TOXO的人IgG所形成的四聚体形式的异源交联抗体，本发明还提供所述的异源交联物在制备弓形虫免疫检测试剂盒中的应用。所述抗体生产制备简单、成本低，同时具有非常好的安全性和稳定性，可有效降低免疫检测中的检测误差。
【IPC分类】G01N33-569, C07K16-46
【公开号】CN104650239
【申请号】CN201510017003
【发明人】潘剑用, 周海涛, 闵丹
【申请人】英科隆生物技术（杭州）有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年6月28日