一种鉴定周麦23号小麦品种的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于小麦种质资源品种鉴定技术领域，具体设及一种鉴定周麦23号小麦 品种的方法。
【背景技术】
[0002] 小麦是我国最重要的粮食作物之一，年种植面积比较稳定，常年在3. 6亿亩上下 浮动，年需求小麦良种90亿斤左右。随着优良新品种的不断出现和种子商业化水平的提 高，我国小麦品种更换越来越快，农民每年购买良种率也在不断提高，每年需求小麦良种约 50亿斤，并且换种率在不断提高。商业价值的存在致使很多经营玉米杂交种的企业开始 经营小麦良种，造成企业对小麦品种权激烈竞争，没有品种权的企业为获得高额利润，侵权 假冒现象泛滥，假包装、随意更换品种名字等现象在市场上普遍存在，伪劣假冒种子伤农害 农现象屡次发生，严重影响农民购买良种，也影响到育种家的利益，遏制了育种家创新的动 力，影响我国种业的健康快速发展。为保护小麦新品种权，给维权打假工作提供有效证据， 亟待需要准确、快速、简便、稳定的品种鉴定方法。
[0003] 通过巧粒、幼苗和植株等性状的表型鉴定需要经验丰富的专家进行，而且往往存 在时间较长、易受人为因素影响等问题，法院不易采用；采用苯酪染色法、氨氧化钢测定法 等化学鉴定方法往往存在受种子发育程度、环境条件等制约，鉴定不同的品种准确度不高； 采用醇溶蛋白的酸性聚丙締酷胺电泳法等蛋白标记鉴定小麦品种真实性往往存在条带较 多、受种植环境条件制约，对亲缘关系较近的品种之间鉴定有较大的困难；又因小麦基因组 相对较大、且80%都是重复序列，进行单个品种的全基因组测序存在技术复杂、耗时较长、 测序费用多等诸多问题，基层育种单位和种子企业往往无法进行。W上技术特点决定了针 对不同小麦品种往往难W采用统一的鉴定方法。
[0004] 现有技术中，分子标记(包括RAPD、RFLP、SSR和RGAP)技术在小麦基因组的研究中 得到了广泛应用。其中SSR技术具有共显性、高多态性、容易检测和重验性好等优点，并且 成本低，是一种较为理想的分子标记方法，目前己广泛用于群体遗传结构和遗传多样性分 析、亲缘关系的比较和鉴定、物种的进化和系统发生研究、构建基因连锁图谱进行功能基因 定位和WL分析等方面。因此，根据分子标记技术特点，如果能够利用分子标记技术筛选出 该针对小麦品种的1个或几个特异引物，而该些引物能够真实反应该品种的基因型信息， 因而即可利用针对该小麦品种的特异性引物用于小麦品种的鉴定工作。另外考虑到SSR技 术的准确、快速、简便、稳定等特点，采用该方法可为特定小麦品种的维权打假工作提供有 效证据，利于相关品种保护和其他工作开展。需要强调的是，由于小麦属于自花授粉作物， 且具有特殊的地域性，在不同的生态区可推广的审定品种数量有限，品种特性固定，该又为 此方法在特定品种鉴定中提高了准确性，因而是具有较好的应用意义的。
【发明内容】
[0005] 本发明目的是提供一种利用SSR技术针对小麦品种周麦23号的鉴定方法，该方法 采用能够较好的表达黄淮麦区小麦品种的特异性利用该引物可为周麦23号小麦 品种的快速、准确的检测、鉴定提供较好的保障。
[0006] 本发明所采取的主要技术方案如下。
[0007] -种鉴定周麦23号小麦品种的方法，包括W下步骤： (1) 采用单巧粒DNA提取法，分别对周麦23号小麦和待测小麦种子提取DNA; (2) W步骤（1)中提取的周麦23号小麦和待测小麦种子的DNA为模板，W扳證仿为引 物序列，分别进行PCR扩增； 所述为引物序列为； 上游序列TCATTGGTGTCATCCCTCGTGT; 下游序列GAATAATGCCTTGACCCTGGAC; 15化PCR扩增反应体系设置如下； 2XI'aqPCRMix(含Taq酶 0. 1U/ML、dNTPs500 帕ol/L、Tris-肥 1 20mmol/L、KCl100mmol/L'MgClg3mmol/T.) 7. 5ML， 引物扳證份（10帕ol/L)，上游序列、下游序列各1化， 步骤（1)提取的DNA模板，1. 5化， 超纯水4化； PCR扩增程序；94°C预变性 5min;94°C变性 1min，55°C退火 1min，72°C延伸 1min， 35个循环；72°C延伸7min;PCR扩增产物置于4°C保存备用； (3) 对步骤（2)中PCR扩增产物进行电泳，电泳前，加入指示剂，W步骤（2)中15MLPCR 扩增产物为例，加入3yL变性上样指示剂；94°C变性lOmin后，立即放入冰水混合物中冷却 lOmin;然后取处理后的样品6. 5化在质量浓度为6%的变性聚丙締酷胺凝胶中电泳分离， 银染显色； 所述变性上样指示剂组分为；98%无离子甲酯胺、lOmM邸TAp服.0,0. 1 %漠酪藍和 0. 1%二甲苯青； (4) 对步骤（3)显色后样品进行带型统计，对比判定，如果待测小麦种子的PCR扩增样 品电泳结果与周麦23号小麦的PCR扩增样品结果带型一致，表明待测小麦种子为周麦23 号品种，如果不一致，则表明待测小麦种子非周麦23号品种。
[0008] 本发明利用SSR技术，通过对小麦21条染色体上的340个SSR引物进行筛选，确 认Zc證65?引物序列针对周麦23号小麦品种具有较好的特异性，可W用于周麦23号品种的 检测、鉴定。总体而言，本发明技术成熟，快速、简便、准确度较高，能够较为便捷、有效的鉴 定出周麦23号品种，有利于新品种推广和种质资源保护，同时也为其他小麦品种的推广利 用和保护提供了较好的应用借鉴。
【附图说明】
[0009] 图1为初次筛选特异性引物过程中未经处理的部分引物电泳图；其中，第=泳道 为周麦13号，第五泳道为新麦9号，第六泳道为周麦23号； 图2为初次筛选特异性引物过程中未经处理的部分引物电泳图；其中第一泳道为周麦 13号，第二泳道为新麦9号，第S泳道为周麦23号； 图3为二次筛选过程中针对特异引物的电泳对比图，其中从左到右分别是 Marker、A组（Al-A7)、B组（Bl-B15)、C组（Cl-C14)。
[0010]
【具体实施方式】
[0011] 下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明，具体介绍实施例前，对本发明所 设及的部分小麦品种来源和主要应用试剂简要介绍如下。
[0012] 周麦23号小麦品种及其他小麦供试材料均由周口市农