用于减少cd36表达的方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2006年9月18日、分案提交日为2012年2月9日、申请号为 201210028972. 2、发明名称为"用于减少⑶36表达的方法"的分案申请的再次分案申请，其 中，申请号为201210028972. 2的分案申请是申请号为200680040019. 2、申请日为2006年9 月18日、发明名称为"用于减少CD36表达的方法"的发明专利申请的分案申请。
[0002] 本申请要求对2005年9月16日提交的美国临时申请序列号为60/718, 170的优 先权。美国临时申请序列号为60/718, 170的说明书（专利申请）以引用方式结合于本文。
[0003] 在本申请中描述的发明得到以下单位的资助：美国国家药物滥用研宄所（the NationalInstituteofDrugAbuse)，资助号P01DA08924;美国神经疾病与中风研宄所 (theNationalInstituteofNeurologicalDiseasesandStroke)，资助号R21NS48295; 以及美国心肺血液研宄所（theNationalHeart,LungandBloodInstitute)，资助号 R01HL082511。美国政府具有本发明的某些权利。
技术领域
[0004] 本发明涉及用于减少⑶36表达的方法。
【背景技术】
[0005] ⑶36是B类清道夫受体家族的一种跨膜蛋白。该蛋白被广泛表达在许多细胞上， 如微血管内皮细胞、巨噬细胞、血小板、脂肪细胞、上皮细胞（例如，肠上皮细胞和肾小管细 胞等）、胰岛细胞以及心肌细胞。该受体可以与多种细胞外配体相互作用，如血小板凝血酶 敏感蛋白-1、长链脂肪酸、以及氧化型低密度脂蛋白。
[0006] ⑶36的异常表达与多种疾病和病症有关。例如，与野生型小鼠相比，当进食西方饮 食（Westerndiet)时，缺少CD36的小鼠具有较少的动脉粥样硬化病变。另外据报道，CD36 基因剔除小鼠可避免患有急性脑缺血。
[0007] 因此，用于减少CD36表达的方法可有助于治疗特征为CD36异常表达的疾病或病 症。
【发明内容】
[0008] 在一种实施方式中，本发明提供了一种用于减少细胞中的⑶36表达的方法。该方 法包括使细胞与有效量的芳族阳离子肽（aromatic-cationicpeptide)接触。
[0009] 在另一种实施方式中，本发明提供了一种在有需要的哺乳动物中减少CD36表达 的方法。该方法包括给予哺乳动物有效量的芳族阳离子肽。
[0010] 在又一种实施方式中，本发明提供了一种在有需要的哺乳动物中治疗特征为CD36 表达增加的疾病或病症的方法。该方法包括给予哺乳动物有效量的芳族阳离子肽。
[0011] 在一种进一步的实施方式中，本发明提供了一种在有需要的哺乳动物中治疗输尿 管梗阻的方法。该方法包括给予哺乳动物有效量的芳族阳离子肽。
[0012] 在一种更进一步的实施方式中，本发明提供了一种在有需要的哺乳动物中治疗糖 尿病肾病的方法。该方法包括给予哺乳动物有效量的芳族阳离子肽。
[0013] 在另一种实施方式中，本发明提供了一种用于减少取出的器官或组织中的⑶36 表达的方法。该方法包括给予哺乳动物有效量的芳族阳离子肽。
[0014] 本发明的方法中所用的芳族阳离子肽具有：至少一个净正电荷；最少4个氨基酸； 最多大约20个氨基酸；净正电荷的最小数目（Pm)与氨基酸残基的总数（r)之间的关系，其 中3Pm是小于或等于r+1的最大数；以及芳族基团的最小数目（a)与净正电荷的总数（Pt) 之间的关系，其中2a是小于或等于Pt+1的最大数，除非当a为1时之外，Pt也可以是1。
【附图说明】
[0015] 图1，SS-31减少了小鼠腹腔巨噬细胞中的oxLDL(氧化修饰低密度脂蛋白）诱导 的⑶36mRNA表达、⑶36蛋白表达、以及泡沫细胞的形成。
[0016] 图2,在患有急性脑缺血的野生型小鼠中，SS-31疗法（或治疗）减小了梗死体积 和脑半球肿胀（hemisphericswelling)。
[0017] 图3，SS_31疗法减少了野生型小鼠局部缺血后的脑中的还原型谷胱甘肽（GSH)的 降低。
[0018] 图4,在患有急性脑缺血的⑶36基因剔除（敲除）小鼠中，SS-31在减少梗死体积 或脑半球肿胀方面没有作用（疗效）。
[0019] 图5,SS-31没有减少来自⑶36基因剔除小鼠缺血后的脑中的GSH的消耗（排除， depletion)〇
[0020] 图6,SS-31减少了野生型小鼠缺血后的脑中的⑶36mRNA的表达。
[0021] 图7，SS-31降低了在单侧输尿管梗阻（UUO)后肾小管细胞中的⑶36表达。对侧未 梗阻肾（A);用盐水处理的动物的梗阻肾⑶；以及用SS-31处理的获自大鼠的梗阻肾（C)。
[0022] 图8,SS-31减少了UUO后的肾中的脂质过氧化作用。在梗阻肾中的肾小管细胞 (B);对侧未梗阻对照（A);以及来自用SS-31处理的大鼠的梗阻肾（C)。
[0023] 图9，SS_31减少了UUO后的梗阻肾中的肾小管细胞凋亡。来自盐水处理的动物的 梗阻肾（B);对侧未梗阻对照（A);来自SS-31处理的动物的梗阻肾（C)。
[0024] 图10，SS_31减少了由UUO诱导的梗阻肾中的巨噬细胞浸润。梗阻肾⑶；对侧未 梗阻对照（A);用SS-31处理的大鼠的梗阻肾（C)。
[0025] 图11，SS_31减少了UUO后的梗阻肾中的间质纤维化。梗阻的肾（B);对侧未梗阻 对照（A);用SS-31处理的大鼠的梗阻肾（C)。
[0026] 图12,用SS-31或SS-20阻止⑶36表达上调的离体（分离的）心脏的冷储存（冷 藏）。"背景"对照（A和B)表示来自正常非缺血心脏的两个切片，其没有用第一抗CD36抗 体（primaryanti-〇)36antibody)加以处理。"正常心脏"（C和D)表示获自非缺血心脏 的两个切片。与"正常心脏"相比，来自代表性心脏（其在4°C的St.Thomas溶液中储存了 18小时）的切片（E和F)显示出增强的CD36染色。在具有InMSS-31 (G和H)或IOOnM SS-20(1和J)的St.Thomas溶液中储存的心脏中，CD36染色显著降低。
[0027] 图13，SS_31和SS-20减少了离体豚鼠心脏中的脂质过氧化作用，其中离体豚鼠心 脏在延长的（prolonged)冷缺血以后经受热再灌注。经受在St.Thomas溶液中冷藏18小 时的心脏的HNE染色（A)与非缺血心脏的HNE染色进行对比（B)。在贮存于SS-31 (C)或 SS-20 (D)的心脏中，HNE染色减少。
[0028] 图14，SS_31和SS-20消除了离体豚鼠心脏中的内皮细胞凋亡，其中该离体豚鼠心 脏在持续的冷缺血以后经受热再灌注。在St.Thomas溶液中经受18小时冷藏的心脏（C和 D);非缺血正常心脏（A和B)。在贮存于SS-31 (E和F)或SS-20 (G和H)的心脏中没有观 察到凋亡的细胞。
[0029] 图15，SS_31和SS-20可维持离体豚鼠心脏中的冠状动脉流量，其中离体豚鼠心脏 在延长的冷缺血以后经受热再灌注。单独用心脏停搏液（St.Thomas溶液）或用包含InM SS-31 (A)或IOOnMSS-20 (B)的St.Thomas溶液灌注豚鼠心脏3分钟，然后经受18小时的 冷缺血（4°C)。
[0030] 图16,SS-31防止对糖尿病小鼠近端小管的损伤。通过链脲霉素（STZ)注射5天 来诱导糖尿病。在3周后获得的肾切片显示，在STZ处理的动物中失去刷状缘（B)，而在未 用STZ处理的小鼠中则没有观察到失去刷状缘（A)。在每日接受SS-31(3mg/kg)的用STZ 处理的动物中没有观察到刷状缘的丧失（C)。
[0031] 图17,SS-31防止了糖尿病小鼠中肾小管上皮细胞的凋亡。通过链脲霉素（STZ) 注射5天来诱导糖尿病。3周后获得的肾切片显示，在STZ处理的动物中近端小管中凋亡的 细胞显著增加（A，图片b)，而在未用STZ处理的小鼠中则未观察到近端小管中凋亡的细胞 显著增加（A，图片a)。在每日接受SS-31(3mg/kg)的小鼠中未观察到STZ诱导的凋亡（A， 图片c)。SS-31疗法显著降低了由STZ引起的凋亡细胞的百分数（B)。
【具体实施方式】
[0032]
[0033] 本发明涉及通过某些芳族阳离子肽来减少⑶36表达。这些芳族阳离子肽是水溶 性的和高极性的。尽管有这些性质，但这些肽可以容易地穿透细胞膜。
[0034] 本发明所用的芳族阳离子肽包括最少3个氨基酸，并且优选包括最少4个氨基酸， 氨基酸通过肽键共价相连。
[0035] 在本发明的芳族阳离子肽中存在的氨基酸的最大数目为大约20个，它们通过肽 键共价相连。优选地，氨基酸的最大数目为约12个，更优选约9个，以及最优选约6个。最 佳地，在肽中存在的氨基酸的数目为4个。
[0036] 本发明所用的芳族阳离子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。如在本文中所使用的， 术语"氨基酸"用来指任何包含至少一个氨基基团和至少一个羧基基团的有机分子。优选 地，至少一个氨基基团是在羧基基团的a位。
[0037] 氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括，例如，二十种最常见的通常 存在于哺乳动物蛋白质中的左旋（L)氨基酸，S卩，丙氨酸（Ala)、精氨酸（Arg)、天冬酰胺 (Asn)、天冬氨酸（Asp)、半胱氨酸（Cys)、谷氨酰胺（Gln)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸（Gly)、组氨 酸（His)、异亮氨酸（Ileu)、亮氨酸（Leu)、赖氨酸（Lys)、蛋氨酸（Met)、苯丙氨酸（Phe)、脯 氨酸（Pro)、丝氨酸（Ser)、苏氨酸（Thr)、色氨酸（Trp)、酪氨酸（Ty