一种提高孢子量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物发酵工程领域，尤其涉及在微生物培养过程中的一种提高孢子 量的方法。
【背景技术】
[0002] 在发酵工程中，米曲霉作为最为重要的工业微生物菌种之一，被广泛用于食品发 酵、酶工程等领域，菌种质量是微生物工业中的核心技术。优良的工业菌种，除了具有优良 的代谢能力以外，还必须易于扩大培养。因此，在米曲霉菌株的工业化应用中，孢子的形成 情况对产品质量起着非常重要的作用，是米曲霉扩大培养的关键性指标。扩大培养的直接 目的就是为了获得大量的优良孢子。
[0003] 如果筛选获得了具有优良性状的菌株，但因产孢量低而满足不了工业化生产使用 需求，该菌株也是难以被产业化应用的。因此，提高米曲霉的孢子量一直以来是米曲霉菌种 研宄中的重要工作，方法主要包括菌种选育和条件控制两个方面。
[0004] 菌种选育主要指通过诱变、融合等技术手段、结合大量的筛选工作，获得目标菌 株。菌种选育的首要目标一般是代谢能力，未有专门通过菌种选育来定向提高产孢量的专 利报道。发明人曾在"双亲灭活电融合技术选育酱油生产菌株"一文中通过电融合技术使 得曲霉菌种的产孢能力有了比较大的提升。但是，产孢能力与综合酶系等性能之间并无直 接关联，选育获得的高产孢子量菌株多数不具有综合酶系性能优良的特征，一些综合酶系 性能优良的菌株，也由于产孢量的不足而难以被产业化应用。因此，该方法的优点是提高幅 度大、缺点是工作量大且会存在负突变，难以获得高产孢量且综合酶系性能优良的菌种。因 而该方法不能直接用于解决低产孢量菌株的工业化应用问题。
[0005] 条件控制是提高孢子量的重要手段。目前工作中，采用的方法主要包括营养条件 (调整碳氮比、微量元素、草木灰等）和环境条件（光照、温度、湿度、磁场等）。如在"磁场 对白僵菌菌丝生长和产孢量的影响"一文中利用磁场处理提高了白僵菌产孢量；在"响应面 法优化米曲霉产孢工艺条件"一文中通过工艺优化提高了米曲霉的产孢量；在"一种链格孢 菌培养基及其制备方法"专利中通过培养基营养成分的优化提高了链格孢菌的产孢量。以 上方法的优点是容易实现、缺点是由于产孢量主要是由菌株本身的基因决定的，因而提升 幅度有限，故同样难以解决低产孢量菌株的工业化应用问题。
[0006] 日本研宄人员从米曲霉中分离获得了产孢促进剂物质，表明通过化学合成获得了 产孢促进剂的结构类似物，同样具有促进产孢的作用。但是，不论是分离纯化还是人工合 成，该物质的应用成本均很高，且难以实现工业应用，因而未有该物质的应用技术报道。
[0007] 综上，如何提供一种能够提升孢子产量、工作量不大又不致形成负突变，且成本相 对较小的孢子量提高方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0008] 本发明实施例提供了一种提高孢子量的方法，能够解决低产孢量菌株工业化应用 中扩大培养的问题，并且成本低廉。
[0009] 一种提高孢子量的方法，包括步骤：
[0010] 1)获取带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物；
[0011] 2)对所述获取的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物进行灭活处理；
[0012] 3)将经步骤2)灭活处理后的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物添加至低产 孢量菌株的培养基中。
[0013] 本发明中高产孢量菌株是相对于低产孢量菌株而言，即相对于低产孢量、产孢量 少的菌株，能够产生较多孢量的菌株。
[0014] 优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物含有孢子、菌丝 体或培养基物质中的一种或多种。
[0015] 优选地，所述步骤2)中的灭活处理为利用温度、水分、氧气、射线、压强、化学试剂 灭活处理方式中的一种或多种。
[0016] 优选地，所述利用温度进行灭活处理方式中的条件具体为：温度60°C~150°C，灭 活时间5s~24h。
[0017] 优选地，所述利用压强、温度进行灭活处理方式中的条件具体为：压强0. llMPa， 温度121°C，灭活时间30min。
[0018] 优选地，所述步骤3)中的添加具体为：添加的时间为低产孢量菌株培养阶段的 Oh~72h，添加量为培养基成分重量的0.01 %~100%。
[0019] 优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为带有孢子的 培养物。
[0020] 优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为取走孢子后 的培养物废料。
[0021] 优选地，所述步骤1)中的带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物为孢子。
[0022] 优选地，所述步骤1)中带有产孢促进剂的高产孢量菌株培养物的培养时间为 lh ~150h〇
[0023] 本发明中所采用的产孢促进剂，一般为杂环类有机化合物。
[0024] 从以上技术方案可以看出，本发明实施例具有以下优点：
[0025] 本发明中，通过利用高产孢量菌株的培养物中带有产孢促进剂，通过将该培养物 加入到低产孢量菌株的扩培工艺中，使得低产孢量菌株的产孢量大幅度提高，同时，工作量 不大又不致形成负突变，且成本相对较小，解决了低产孢量菌株的产业化应用中的扩培难 题，具有很好的应用前景。
【具体实施方式】
[0026] 本发明实施例提供了一种提高孢子量的方法，用于解决低产孢量菌株工业化应用 中扩大培养的问题，并且成本相对较为低廉。
[0027] 为了说明本发明的原理和扩培过程，本发明实施例中的培养以米曲霉和酱油曲霉 菌株为例进行说明，本发明实施例中，为了实现提高低产孢量米曲霉或酱油曲霉菌株产孢 量的目的，进行了综合的条件控制实验，主要包括原料碳氮比的调整、添加微量元素或无机 盐，同时调整培养过程中的光照、温度和湿度等条件，从而确定了最优培养条件。本发明实 施例利用高产孢量米曲霉菌株的培养物作为产孢促进剂，灭活后添加到低产孢量菌株的扩 培工艺中，从而提高了低产孢量菌株的产孢量。
[0028] 详细步骤如下：
[0029] 步骤一：带有产孢促进剂培养物的获取：高产孢量菌株是指在最优培养条件下， 比低产孢量菌株的产孢量高出5亿/g干基以上的菌株，且菌株培养物的产孢量越高，其中 所含的产孢促进剂越多。将高产孢量菌株的培养物作为产孢促进剂，该培养物可以是含有 孢子、菌丝