专利名称：多价多糖或多糖蛋白混合物中各单价多糖含量的检测方法
技术领域：
本发明涉及多价多糖或多糖蛋白混合物中各单价多糖含量的检测方法，尤其适用 于两种或者多种由化学性质，以及物理性质相同或者极其相似的糖链的混合物，包括与糖 链偶联的蛋白等的混合物的分析，目前与多糖偶联的蛋白包括精制破伤风类毒素、白喉类 毒素、减毒白喉毒素、B群脑膜炎球菌外膜蛋白、牛血清白蛋白等。
背景技术：
糖是生物环境中含量最多的有机化合物之一，在许多生命体系中起着重要作用。 糖类化合物的分析对生命科学、食品科学、药物学、农业科学都有着重要意义。糖类的检测方法大体包括分光光度法、液相色谱法、气相色谱法等糖含量的检测多种多样，许多多糖混合物可以根据多糖之间不同的物理性质、化 学性质、或者生物学性质而加以区分，或者定量检出。例如脑膜炎奈瑟球菌多糖中的A群与 C群，A群脑膜炎奈瑟球菌多糖中有不同于C群脑膜炎奈瑟球菌多糖的磷酸盐组成，所以可 以通过检测磷酸盐的含量进而就可以算得A群脑膜炎奈瑟球菌多糖的含量，同样C群脑膜 炎奈瑟球菌多糖也拥有完整的N-乙酰神经氨酸，所以也可以通过检测唾液酸的方法检出C 群脑膜炎奈瑟球菌多糖的含量。
权利要求
1.多价多糖或多糖蛋白混合物中各单价多糖含量的检测方法，其特征在于，包括以下 步骤步骤1、将多糖降解为完整单糖，步骤2、使用常规技术手段定量测定降解后的单糖的含量。
2.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，包括所有含有可检测的小分子化合物且 小分子化合物在样品组成单位上以氧连接或者氮连接，连接在每个基团上，尤其是适用于 性质极其近似的糖链混合物。
3.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，所述多糖，选自C群脑膜炎奈瑟球菌多糖、 Y群脑膜炎奈瑟球菌多糖、W135群脑膜炎奈瑟球菌多糖或它们的混合物。
4.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，其中所述的将多糖降解为完整单糖，可以 采用任何现有的已经知道的降解技术，如水解，酸解等。
5.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，其中所述常规技术手段包括分光光度法、 液相色谱法、气相色谱法、液质联用、气质联用、原子吸收等等各种检测单糖的检测手段。
6.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，包括以下步骤步骤1、将多糖或者多糖蛋白结合物中容易在酸水解过程中聚合的活性基团还原为相 对稳定的基团的步骤，步骤2、得到的产物必要时可以通过透析、纯化、脱盐柱、超滤膜包等方法除去其中的小 分子物质。步骤3、将多糖降解为完整单糖，步骤4、使用常规技术手段定量测定降解后的单糖的含量。
7.根据权利要求6的检测方法，其特征在于，所述还原使用的还原剂包括硼氢化钠、硼 氢化钾、四氢铝锂等以及能还原双键的一切还原剂。
8.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，还原剂加入量约相当于样品中糖类质量 的3倍为最优。
9.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，水解，包括酸水解、碱水解等各种水解方 法，最好采用稀酸，尤以lmol/L的硫酸为最优。
10.根据权利要求1的检测方法，其特征在于，水解温度控制在100度为最优，水解时间 根据样品而定，以保证水解彻底为准。
全文摘要
本发明涉及多价多糖或多糖蛋白混合物中各单价多糖含量的检测方法，尤其适用于两种或者多种由化学性质，以及物理性质相同或者极其相似的糖链的混合物，包括与糖链偶联的蛋白等的混合物的分析，本发明的检测方法，包括以下步骤步骤1、将多糖降解为完整单糖，步骤2、使用常规技术手段定量测定降解后的单糖的含量。
文档编号G01N1/34GK102053029SQ20101053410
公开日2011年5月11日 申请日期2010年11月2日 优先权日2010年11月2日
发明者刘刚, 朱向国, 杜琳, 郑佳 申请人:北京绿竹生物制药有限公司