专利名称：一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种食品检测方法，具体地说是涉及一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含
量测定方法。
背景技术：
枸杞多糖是枸杞子中主要的活性物质，因其在枸杞子中含量低(3-5% )，水溶性良好，又不被树脂吸附，所以工业生产上枸杞多糖的富集和精制比较困难。目前，市场上所提供的含量大于40%的产品，多为加了多聚糖干扰物的伪品，这些伪品用目前常用的分析手段(比色法)，根本无法分辨真假。伪品的存在给使用者、供应商和消费者带来极大不便与困惑。而专用于枸杞多糖真伪鉴别及其含量的测定方法，尚未见记载。
发明内容
本发明的目的是提供一种枸杞多糖真伪鉴别及其含量测定方法。
本发明一种枸杞多糖真伪鉴别及其含量测定方法通过下述技术方案予以实现本
发明一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法包括如下步骤 1).真伪鉴别 性状及感官鉴别 枸杞多糖应为浅黄棕色至黄棕色均匀粉末，具有枸杞多糖特有的香气，在水中溶解度良好，溶液为浅黄棕色，气味、颜色和溶解度不符均可判定为伪品；
多聚糖干扰物鉴别 取样品适量，置玻璃试管中，加入适量蒸馏水常温溶解，加入2-3滴鉴定试剂KP-1，摇匀，观察反应现象，呈阳性反应，颜色迅速加深，则说明样品中含有多聚糖干扰物；
2).单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置 取枸杞多糖约0. 4g，精密称定，精确至0. 0001g，置于圆底烧瓶中，加入80 %乙醇溶液200ml，加热回流1小时，趁热过滤，残渣用热80%乙醇溶液分次洗涤(约10mlX10)，残渣连同滤纸置烧瓶中，加入100ml蒸馏水，加热提取1小时，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤(约10ml X 10)，合并滤液与洗液，放冷，移入250ml容量瓶，水稀释至刻度，摇匀即得样品溶液； 3).标准曲线的制备 精密称取105t:干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. lg，置1000ml容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照品溶液0. lml，O. 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml， 1. Oml，分别置具塞试管中，分别加蒸馏水至2. Oml，各精密加入苯酚溶液1. Oml，摇匀，迅速精密加入硫酸5. Oml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
4).样品中多糖含量测定
精密量取样品溶液一定量(视样品溶液含量而定)，置具塞试管中，加蒸馏水至2. Oml，照标准曲线的制备项下的方法，自"各精密加入苯酚溶液1. Oml"起，测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量；
5).结果计算
PX250 X f 计算公式恥-X 100
m X 1000 XV
式中w——多糖含量(％ )
P——显色液中葡萄糖含量(g)
f——3. 19葡萄糖换算多糖的换算因素
m——试样的质量(g)
V——吸取样品溶液的体积(ml)。 本发明一种枸杞多糖真伪鉴别及其含量测定方法与现有技术相比较有如下有益效果本发明方法结合枸杞多糖特有物理化学性质，通过其真伪鉴别及其含量测定，将试样溶于蒸馏水中(常温)，加入鉴定试剂KP-1，辨别是否掺有多聚糖干扰物。不含干扰物的试样，用80%乙醇回流提取，除去单糖低聚糖及苷类等干扰物质后，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定多糖含量。本发明能够快速有效鉴别是否掺有多聚糖干扰物，并能有效去除单糖、低聚糖及苷类干扰成分，使枸杞多糖含量测定可靠、真实、准确。本发明方法适用于掺有多聚糖干扰物的枸杞多糖真伪鉴别。适用于含有或不含单糖、低聚糖及苷类等干扰成分的枸杞多糖的含量测定。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明一种枸杞多糖真伪鉴别及其含量测定方法技术方案作进一步描述。 本发明一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法包括如下步骤
1).真伪鉴别
性状及感官鉴别 枸杞多糖应为浅黄棕色至黄棕色均匀粉末，具有枸杞多糖特有的香气，在水中溶解度良好，溶液为浅黄棕色，气味、颜色和溶解度不符均可判定为伪品；
多聚糖干扰物鉴别 取样品适量，置玻璃试管中，加入适量蒸馏水常温溶解，加入2-3滴鉴定试剂KP-1，摇匀，观察反应现象，呈阳性反应，颜色迅速加深，则说明样品中含有多聚糖干扰物；
2).单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置 取枸杞多糖约0. 4g，精密称定，精确至0. 0001g，置于圆底烧瓶中，加入80%乙醇溶液200ml，加热回流1小时，趁热过滤，残渣用热80%乙醇溶液分次洗涤(约10mlX 10)，残渣连同滤纸置烧瓶中，加入100ml蒸馏水，加热提取1小时，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤(约10ml X 10)，合并滤液与洗液，放冷，移入250ml容量瓶，水稀释至刻度，摇匀即得样品溶液；
5
3).标准曲线的制备 精密称取105t:干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. lg，置1000ml容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照品溶液0. lml，O. 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml， 1. Oml，分别置具塞试管中，分别加蒸馏水至2. Oml，各精密加入苯酚溶液1. Oml，摇匀，迅速精密加入硫酸5. Oml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
4).样品中多糖含量测定 精密量取样品溶液一定量(视样品溶液含量而定)，置具塞试管中，加蒸馏水至2. Oml，照标准曲线的制备项下的方法，自"各精密加入苯酚溶液1. Oml"起，测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量；
5).结果计算
PX250 X f 计算公式￥= - x 100
m X 1000 XV 式中W-多糖含量(％ ) P——显色液中葡萄糖含量(g) f——3. 19葡萄糖换算多糖的换算因素 m——试样的质量(g) V——吸取样品溶液的体积(ml)。 所述的真伪鉴别及其含量测定具有重复性，每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，允许相对偏差为5%。 所述的单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置步骤中取枸杞多糖约0. 4g，精密称定，精确至0. OOOlg;所述的标准曲线的制备步骤中精密称取105t:干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. lg，精确至0. OOOlg。
所述的鉴别及其含量测定所用的试剂为 95%乙醇或无水乙醇(分析纯)、鉴定试剂KP-1、硫酸(分析纯) 苯酚液取苯酚100g，加铝片0. lg与碳酸氢钠0. 05g，蒸馏收集172t:馏分，称取
此馏分10g，加水150ml，置于棕色瓶中即得。 所述的方法所用仪器为 分析天平 玻璃回流装置 紫外可见分光光度计 电热恒温水浴 玻璃蒸馏装置 250ml容量瓶、移液管、具塞试管、烧杯、玻棒。
实施例l。 本发明适用于掺有多聚糖干扰物的枸杞多糖真伪鉴别。 适用于含有或不含单糖、低聚糖及苷类等干扰成分的枸杞多糖的含量测定。
1.引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文
件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修改版均不适用于本标准，然而，鼓励根
据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文
件，其最新版本适合本标准。 GB/T 18672-2002附录A枸杞多糖测定 2.原理概要 将试样溶于蒸馏水中(常温)，加入鉴定试剂KP-l，辨别是否掺有多聚糖干扰物。不含干扰物的试样，用80%乙醇回流提取，除去单糖低聚糖及苷类等干扰物质后，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定多糖含量。
3.主要试剂和仪器
3. 1.主要试剂 95%乙醇或无水乙醇(分析纯)、鉴定试剂KP-1、硫酸(分析纯) 苯酚液取苯酚100g，加铝片0. lg与碳酸氢钠0. 05g，蒸馏收集172t:馏分，称取
此馏分10g，加水150ml，置于棕色瓶中即得。 3.2.仪器 分析天平 玻璃回流装置 紫外可见分光光度计 电热恒温水浴 玻璃蒸馏装置 250ml容量瓶、移液管、具塞试管、烧杯、玻棒 4.真伪鉴别及含量测定 4. 1.真伪鉴别 4. 1. 1.性状及感官鉴别 枸杞多糖应为浅黄棕色至黄棕色均匀粉末，具有枸杞多糖特有的香气，在水中溶解度良好，溶液为浅黄棕色，气味、颜色和溶解度不符均可判定为伪品。
4. 1. 2.多聚糖干扰物鉴别 取样品适量，置玻璃试管中，加入适量蒸馏水(常温)溶解，加入2-3滴鉴定试剂KP-1，摇匀，观察反应现象，呈阳性反应(颜色迅速加深)则说明样品中含有多聚糖干扰物。
4.2.单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置 取枸杞多糖约0. 4g，精密称定，精确至0. OOOlg，置于圆底烧瓶中，加入80%乙醇溶液200ml，加热回流1小时，趁热过滤，残渣用热80%乙醇溶液分次洗涤(约10mlX10)，残渣连同滤纸置烧瓶中，加入100ml蒸馏水，加热提取1小时，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤(约10ml X 10)，合并滤液与洗液，放冷，移入250ml容量瓶，水稀释至刻度，摇匀即得样品溶液。 4.3.标准曲线的制备 精密称取105t:干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. lg(精确至0.0001g)，置
71000ml容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液0. 1ml，0. 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml， 1. Oml，分别置具塞试管
中，分别加蒸馏水至2. Oml，各精密加入苯酚溶液1. Oml，摇匀，迅速精密加入硫酸5. 0ml ，摇
匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，在
490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 4.4.样品中多糖含量测定 精密量取样品溶液一定量(视样品溶液含量而定)，置具塞试管中，加蒸馏水至2. Oml，照标准曲线的制备项下的方法，自"各精密加入苯酚溶液1. Oml"起，测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
4. 5.结果计算
PX250 X f
计算公式￥= - X 100
m X 1000XV 式中w——多糖含量(％ ) P——显色液中葡萄糖含量(g) f——3. 19葡萄糖换算多糖的换算因素 m——试样的质量(g) V——吸取样品溶液的体积(ml) 4. 6重复性 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，允许相对偏差为5%。
权利要求
一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法，其特征于所述的真伪鉴别及其含量测定方法包括如下步骤1).真伪鉴别性状及感官鉴别枸杞多糖应为浅黄棕色至黄棕色均匀粉末，具有枸杞多糖特有的香气，在水中溶解度良好，溶液为浅黄棕色，气味、颜色和溶解度不符均可判定为伪品；多聚糖干扰物鉴别取样品适量，置玻璃试管中，加入适量蒸馏水常温溶解，加入2-3滴鉴定试剂KP-1，摇匀，观察反应现象，呈阳性反应，颜色迅速加深，则说明样品中含有多聚糖干扰物；2).单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置取枸杞多糖约0.4g，精密称定，精确至0.000lg，置于圆底烧瓶中，加入80％乙醇溶液200ml，加热回流1小时，趁热过滤，残渣用热80％乙醇溶液分次洗涤(约10ml×10)，残渣连同滤纸置烧瓶中，加入100ml蒸馏水，加热提取1小时，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤(约10ml×10)，合并滤液与洗液，放冷，移入250ml容量瓶，水稀释至刻度，摇匀即得样品溶液；3).标准曲线的制备精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.1g，置1000ml容量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照品溶液0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，分别置具塞试管中，分别加蒸馏水至2.0ml，各精密加入苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5.0ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；4).样品中多糖含量测定精密量取样品溶液一定量(视样品溶液含量而定)，置具塞试管中，加蒸馏水至2.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液1.0ml”起，测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量；5).结果计算计算公式式中W——多糖含量(％)P——显色液中葡萄糖含量(g)f——3.19葡萄糖换算多糖的换算因素m——试样的质量(g)V——吸取样品溶液的体积(ml)。F2009102650910C00021.tif
2. 根据权利要求1所述的枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法，其特征在于所述的真伪鉴别及其含量测定具有重复性，每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，允许相对偏差为5%。
3. 根据权利要求1所述的枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法，其特征在于所述的单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置步骤中取枸杞多糖约0. 4g，精密称定，精确至o. oooig ;所述的标准曲线的制备步骤中精密称取105t:干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0. lg，精确至0. OOOlg。
4. 根据权利要求1所述的枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法，其特征在于，所述的鉴别及其含量测定所用的试剂为95%乙醇或无水乙醇(分析纯)、鉴定试剂KP-1、硫酸(分析纯)苯酚液取苯酚100g，加铝片0. lg与碳酸氢钠0. 05g，蒸馏收集172t:馏分，称取此馏分10g，加水150ml，置于棕色瓶中即得。
5. 根据权利要求1所述的枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法，其特征在于，所述的方法所用仪器为分析天平玻璃回流装置紫外可见分光光度计电热恒温水浴玻璃蒸馏装置250ml容量瓶、移液管、具塞试管、烧杯、玻棒。
全文摘要
本发明涉及一种食品检测方法，具体地说是涉及一种枸杞多糖的真伪鉴别及其含量测定方法。本发明方法包括如下步骤1)真伪鉴别；2)单糖、低聚糖及苷类干扰物的去除及样品溶液配置；3)标准曲线的制备；4)样品中多糖含量测定；5)结果计算。本发明有如下有益效果本发明能够快速有效鉴别是否掺有多聚糖干扰物，并能有效去除单糖、低聚糖及苷类干扰成分，使枸杞多糖含量测定可靠、真实、准确。本发明方法适用于掺有多聚糖干扰物的枸杞多糖真伪鉴别。适用于含有或不含单糖、低聚糖及苷类等干扰成分的枸杞多糖的含量测定。
文档编号G01N1/28GK101762575SQ20091026509
公开日2010年6月30日 申请日期2009年12月28日 优先权日2009年12月28日
发明者孙允武, 朱占军, 李刚, 束彤, 解芳, 陈睿, 马正创 申请人:青海康普生物科技股份有限公司