025 %时，每半小时取样一次监测；当流出液pH跳至2-4，且ADP基本洗尽或只有ATP时，洗涤结束，开始洗脱；
[0102](4)洗脱:用 ρΗ3.5-3.8 的 lmol/LnaCl-0.01mol/L HCl 浓盐液进行洗脱，当洗脱流出液ATP浓度>0.38%时，收集洗脱液，送脱色；当洗脱流出液ATP浓度〈0.38%时，即停止收集；
[0103]3)精制
[0104](I)脱色:洗脱液根据色泽加入0.1-0.5%活性炭和0.1-0.3%硅藻土搅拌I小时脱色，离心分离过滤后，脱色液经检验合格后送超滤除蛋白；
[0105](2)超滤:将脱色液用〈I万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后送去结晶；
[0106](3)结晶:超滤液先用CP级HCl调pH至2.5-3.3，再用> I万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后放入结晶釜，开动搅拌，开始加入95% (v/v)乙醇，出现白色混浊前酒精加入速度控制在100L/h ;出现白色混浊时，停止加酒精，搅拌半小时，然后继续加酒精至料液体积的1.5-2.0倍，保持温度搅拌半小时，然后开夹套冷却水，将料液冷至室温，静止I小时；
[0107]离心分离结晶液，湿品先用95% (v/v)酒精洗涤，再用无水乙醇浸泡，最后用干送去干燥；母液调PH至6.0-7.0后送蒸馏工段进行回收酒精；
[0108]4)干燥包装
[0109](I)干燥:将湿品放入真空干燥箱中，真空度彡一 0.lOMpa，控制温度在40_42°C，干燥2个小时，然后，调整真空度彡一 0.08Mpa，控制温度在37-38 °C，干燥4个小时，水分(8%时可出料；
[0110](2)包装:将合格的产品按规定的批量放入混合器中混合15-20分钟，然后按进行包装送检，合格入库；
[0111]所用原料的用量按重量份计为:腺苷40份、速冻酵母900份、磷酸二氢钾40份、磷酸氢二钾232份、硫酸镁20份、蔗糖200份、苯扎溴铵溶液20份、反渗透水2000份。
【主权项】
1.一种改进的三磷酸腺苷二钠的生产方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)生化反应 (1)硫酸镁溶液、腺苷溶液、苯扎溴铵溶液的制备: ①用少量反渗透水溶解硫酸镁制成硫酸镁溶液； ②用适量室温的反渗透水溶解腺苷制成腺苷溶液； ③用适量的反渗透水溶解苯扎溴铵稀释成5%苯扎溴铵溶液； (2)投放速冻酵母:加反渗透水于反应锅中，开动搅拌用夹套热水加热至40-45?，投放蔗糖及磷酸二氢钾和磷酸氢二钾，使其溶解，待其全部溶解后，停止加热，开循环水降温，当温度降至40°C以下时，投放速冻酵母，并用夹套热水缓慢升温； 所述的速冻酵母，是指将啤酒酵母泥用适量反渗透水清洗，然后再用板框过滤器过滤，得到白色或淡褐色泥状物，再通过速冻得到； (3)ATP生化反应:当反应锅内温度升至20°C ± I时，依次投放硫酸镁溶液、苯扎溴铵溶液、腺苷溶液，反应开始计时，将反应液继续加热至36-39°C，保温，待有气泡溢出，开始取样测定ATP转化率，当反应达到ATP —条带时，反应结束； (4)灭活、调酸碱:反应结束，立即放掉夹套热水，迅速投放大量冰于反应锅内，并通冷却水降温，当温度降至4°C以下，用磷酸调pH至2.5-3.0，I小时后，再用液碱调pH至5.5-6.0，调好碱后30分钟开始压榨，压榨完毕，再用反渗透水顶洗滤饼，水顶液合并压榨液，检验含量、透光度，合格送分离工段处理； 2)树脂分呙 (1)串柱上样:将压榨液及水顶液稀释至0.2-0.45%，上D296树脂柱，流速为4-6L/min，定时检测流出液，查看是否有ATP漏出；当流出液中ATP浓度多0.03%时，停止上样，用反渗透水正顶至流出液ATP浓度< 0.01 %后，继续上样，如此反复直至上样结束； (2)水洗杂质:串柱上样结束，用反渗透水正进洗涤至流出液A257nmS0.2 ;然后反进水洗至树脂上层无浑浊机械杂质且流出液A257nmS 0.2后结束；流速控制在4-6L/min ； (3)稀盐洗杂质:水洗结束，用ρΗ2.0-2.2 的 0.04mol/LNaCl—0.01mol/L HCl 稀盐液反进流洗，流速为6-10L/min ;每小时取样，测流出液中ATP浓度，当流出液中ATP浓度^ 0.03%时，反进洗杂质结束；改正进，正进流速不变，每小时取样一次，测流出液中ATP的浓度，当流出液中ATP浓度多0.025 %时，每半小时取样一次监测；当流出液pH跳至2-4，且ADP基本洗尽或只有ATP时，洗涤结束，开始洗脱； (4)洗脱:用ρΗ3.5-3.8的Imol/LnaCl-0.01mol/L HCl浓盐液进行洗脱，当洗脱流出液ATP浓度>0.38%时，收集洗脱液，送脱色；当洗脱流出液ATP浓度〈0.38%时，即停止收集； 3)精制 (1)脱色:洗脱液根据色泽加入0.1-0.5%活性炭和0.1-0.3%硅藻土搅拌I小时脱色，离心分离过滤后，脱色液经检验合格后送超滤除蛋白； (2)超滤:将脱色液用〈I万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后送去结晶； (3)结晶:超滤液先用CP级HCl调pH至2.5-3.3，再用> I万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后放入结晶釜，开动搅拌，开始加入95% (v/v)乙醇，出现白色混浊前酒精加入速度控制在100L/h ;出现白色混浊时，停止加酒精，搅拌半小时，然后继续加酒精至料液体积的1.5-2.0倍，保持温度搅拌半小时，然后开夹套冷却水，将料液冷至室温，静止I小时； 离心分离结晶液，湿品先用95% (v/v)酒精洗涤，再用无水乙醇浸泡，最后甩干送去干燥；母液调PH至6.0-7.0后送蒸馏工段进行回收酒精； 4)干燥包装 (1)干燥:将湿品放入真空干燥箱中，真空度彡一0.lOMpa，控制温度在40-42°C，干燥2个小时，然后，调整真空度彡一 0.08Mpa，控制温度在37-38°C，干燥4个小时，水分彡8%时可出料； (2)包装:将合格的产品按规定的批量放入混合器中混合15-20分钟，然后按进行包装送检，合格入库。
2.根据权利要求1所述的一种改进的三磷酸腺苷二钠的生产方法，其特征在于:所用原料的用量按重量份计为:腺苷38-42份、速冻酵母880-920份、磷酸二氢钾38-42份、磷酸氢二钾230-235份、硫酸镁18-22份、蔗糖190-210份、苯扎溴铵溶液18-22份、反渗透水1950-2050 份。
3.根据权利要求2所述的一种改进的三磷酸腺苷二钠的生产方法，其特征在于:所用原料的用量按重量份计为:腺苷40份、速冻酵母900份、磷酸二氢钾40份、磷酸氢二钾232份、硫酸镁20份、蔗糖200份、苯扎溴铵溶液20份、反渗透水2000份。
4.根据权利要求1所述的一种改进的三磷酸腺苷二钠的生产方法，其特征在于:步骤2)所述串柱上样，定时检测流出液，当流出液中ATP浓度< 0.025%时，每两小时取样检定一次；当流出液中0.025%〈ATP浓度〈0.03%时，每小时取样检定一次。
【专利摘要】本发明公开了一种改进的三磷酸腺苷二钠的生产方法，本发明是用适量室温的反渗透水溶解腺苷制成腺苷溶液，不仅节约能耗15％以上，而且操作简单且有效的避免了对酶的损害。现有技术中，在树脂分离工序的上样时，是采用单条树脂柱上样至结束，单条树脂柱上样会有很多弊端，比如单条树脂柱上样往往容易流穿且流速需实时控制、延长了上样时间而且产品量还收率较低；而本发明采用串柱上样可以显著提高流速，缩短上样时间50％以上，且因为是串柱洗涤，产品流穿的可能性也小了很多，极大的提高了产品的收率，收率提高30％以上。本发明采用两段法真空干燥，既避免了污染的发生，又节约了时间。
【IPC分类】C07H19-20, C12P19-32, C12R1-865, C07H1-06
【公开号】CN104862358
【申请号】CN201510280691
【发明人】阮传明, 卢志荣, 黄伟
【申请人】广西浦北制药厂
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月28日