萃取，合并萃取相， 用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物 使用柱层析纯化，得到化合物?ν-l，白色固体，ESI-MS，m/z = 257([M+H]+)。
[0029] Β·化合物VI-I的合成
[0030] 将I. 39g (IOmmol)化合物V-I溶于IOmL醋酸酐中，加入0. 3g无水醋酸钠，氮气保 护下回流3小时，TLC检查反应完成。反应完成后，往反应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅 拌3小时，使用50mLX 3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，依次用饱和NaHCO 3溶液和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物溶于20mL无 水乙醇中，加入浓氨水5mL，回流5分钟。冷却后混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌3小时， 使用50mLX3的CH 2Cl2萃取，合并萃取相，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥 剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯化，得到化合物VI-1，白色固体， ESI-MS，m/z = 182([M+H]+)。
[0031] C化合物VII-I的合成
[0032] 将 L 28g(5mmol)化合物 IV-I 和 0· 91g(5mmol)VI-l 溶于 20mL 干燥的 DMF 中，加 入2. 07g (15_〇1)碳酸钾固体，而后室温下搅拌过夜，TLC检查反应完成。反应完成后，往反 应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌，使用50mLX 3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯 化，得到化合物 VII-1，白色固体，ESI-MS，m/z = 401([M+H]+)。
[0033] D.化合物I-I的合成
[0034] 将I. 60g(4mmol)化合物VII-I溶于15mL CH2Cl2*，室温下搅拌，加入 3.45g(20mmol)间氯过氧苯甲酸（mCPBA)，反应混合物在室温下搅拌1小时后，升温回流 3小时，TLC检查反应完成。反应完成后，往反应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌，使用 50mLX3的CH 2Cl2萃取，合并萃取相，依次使用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠 干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯化，得到化 合物 I-I 白色固体，ESI-MS，m/z = 433([M+H]+)。
[0035] 实施例2-4
[0036] 参照实施例1的方法，合成了下表所列化合物。
[0037]
[0038] 实施例5参比化合物D-I的合成
[0039] Α·化合物IV-5的合成
[0040] 在IOOmL的干燥圆底烧瓶中将2. 06g(IOmmol)化合物II-5溶于20mL干燥的THF 中，冷却至-78°C，搅拌，通过注射器慢慢滴加6. 25mL (IOmmol) I. 6M的n-BuLi的THF溶液， 滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时。用注射器慢慢滴加 I. 42g (IOmmol)三 氟化硼乙醚，而后再慢慢滴加0. 93g (IOmmol) (R) -3-氯-1，2-环氧丙烷溶于2mL干燥的THF 中制成的溶液，滴加完毕后，反应混合物在室温下搅拌5小时，TLC显示反应完成。反应完 成后，往反应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌，使用50mLX 3的CH2Cl2萃取，合并萃取相， 用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物 使用柱层析纯化，得到化合物IV-5,白色固体，ESI-MS，m/z = 222([M+H]+)。
[0041] B.化合物VI-5的合成
[0042] 将I. 25g (IOmmol)化合物V-5溶于IOmL醋酸酐中，加入0. 3g无水醋酸钠，氮气保 护下回流3小时，TLC检查反应完成。反应完成后，往反应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅 拌3小时，使用50mLX 3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，依次用饱和NaHCO 3溶液和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物溶于20mL无 水乙醇中，加入浓氨水5mL，回流5分钟。冷却后混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌3小时， 使用50mLX3的CH 2Cl2萃取，合并萃取相，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥 剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯化，得到化合物VI-5,白色固体， ESI-MS，m/z = 168([M+H]+) 〇
[0043] C.化合物VII-5的合成
[0044] 将 I. llg(5mmol)化合物 IV-5 和 0· 84g(5mmol)VI-5 溶于 20mL 干燥的 DMF 中，加 入2. 07g (15_〇1)碳酸钾固体，而后室温下搅拌过夜，TLC检查反应完成。反应完成后，往反 应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌，使用50mLX 3的CH2Cl2萃取，合并萃取相，盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯 化，得到化合物 VII-5,白色固体，ESI-MS，m/z = 353([M+H]+)。
[0045] D.化合物D-I的合成
[0046] 将I. 41g(4mmol)化合物VII-5溶于15mL CH2ClA，室温下搅拌，加入 3.45g(20mmol)间氯过氧苯甲酸（mCPBA)，反应混合物在室温下搅拌1小时后，升温回流 3小时，TLC检查反应完成。反应完成后，往反应混合物倾倒入IOOmL冰水中，搅拌，使用 50mLX3的CH 2Cl2萃取，合并萃取相，依次使用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠 干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物使用柱层析纯化，得到化 合物 D-1，白色固体，ESI-MS，m/z = 420([M+H]+)。
[0047] 实施例6化合物体外对葡萄糖激酶的激活
[0048] 体外葡萄糖激酶测试
[0049] 本发明的葡萄糖激酶活化剂的体外活性在两个独立的测试中进行评价：用EC5tl 测试以评价各个化合物在固定的、生理学相关浓度的葡萄糖下的效力，以及于固定的、近 饱和（若可能）浓度的化合物下的葡萄糖S a5测试以评价其对于葡萄糖的Vm和S α5的作 用。对于每个这些测试，葡萄糖激酶活性通过于含有NAD+和葡萄糖6-磷酸脱氢酶的偶联 的测试系统中，在340nm监测吸收度的增加而估算。测试在30°C，利用恒温控制的酶标仪 (absorbance plate reader)和透明、96 孔、平底、聚苯乙條板（Costar 3695, Coming)进 行。每个5(^1^测试混合物含有1〇11111(+]\?^34!17.2,211111%(：12,5〇11111((：1，0.01%1'1^〇11 X-100, 2% DMSO, ImM DTT, ImM ATP, ImM NAD+, 5U/mL 葡萄糖 6-磷酸脱氢酶，约 5nM 人葡萄 糖激晦和（取决于测试）不同浓度的葡萄糖和测试化合物。在340nm动态监测5分钟时期 (IOs/循环）的吸收度，且速率（rate)由拟合原始数据的直线的斜卒估算。
[0050] 葡萄糖激酶EC50测试：
[0051] 对于该测试，葡萄糖浓度固定在5mM，而对照或测试化合物以10个点（Ι-point)、 3倍稀释系列且通常范围为高剂量50 μ M至低剂量约2. 5nM。用标准、4参数对数模型拟合 原始数据（速率相比于化合物浓度）： y = A+(B-A)/[l+C/x]D
[0052] 其中X为化合物的浓度，y为估算的速率，A和B分别为下渐近线和上渐近线，C为 EC5Q，DSHill斜率。EC5tl定义为上渐近线和下渐近线之间的中点或拐点。本发明中某些 化合物的EC 5tl数据如下表所示：
[0053]
[0054] 葡萄糖S0. 5测试：
[0055] 对于此测试，对照或测试化合物的浓度固定在或接近于饱和浓度，若可能，通常为 50 μ M，而葡萄糖浓度从80至约0. 16mM，经10个点、2倍稀释系列变化。使用与对于EC5tl测 试相同的4参数对数模型测定相关的动力学参数。在该测试中，对于变量和参数的定义类 似，除了 X表示葡萄糖的浓度，B为饱和葡萄糖的速率（Vm)，C为葡萄糖的Sa5(在Vm/2葡 萄糖的浓度下）和D为Hill系数。本发明中某些化合物的S a5数据如下表所示：
[0056]
[0057] 上述两个表的活性测定结果表明，本发明的化合物为强的葡萄糖激酶活化剂，可 以用来制备治疗2型糖尿病的药物。
【主权项】
1. 具有通式I结构的化合物，其中，X选自卤素取代基。2. 权利要求2所定义的通式I化合物，选自：3. 合成权利要求1-2任一所定义的属于通式I的化合物的方法：化合物II经过n-BuLi处理，得到其对应的芳基锂III ;111在三氟化硼乙醚的催化下 与（R) -3-氯-1，2-环氧丙烷发生加成反应，得到化合物IV ;化合物V与酸酐Ac2O反应得 到VIA，VIA使用氨水或者甲胺等处理得到化合物VI ;化合物IV和VI在碱性环境中发生反 应，得到VII ;化合物VII使用氧化剂氧化得到产物I ;其中，X的定义如权利要求1-2任一 所述。4.权利要求1-2之一所定义的通式I化合物在制备治疗2型糖尿病药物方面的应用。
【专利摘要】本发明涉及与2型糖尿病相关的药物领域。具体而言，本发明涉及一类含卤代喹啉结构的葡萄糖激酶活化剂、其制备方法、以及在制备2型糖尿病药物中的应用。其中，X选自卤素取代基。
【IPC分类】A61P3/10, C07D215/18
【公开号】CN104892505
【申请号】CN201510351854
【发明人】蔡子洋
【申请人】佛山市赛维斯医药科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月23日