先兆子痫、血管炎、癌症、炎性疾病、静脉功能不 全、eNOS活性和NO产生降低的遗传疾病如MTHFR基因变异、肌营养不良患者中的运动后疲 劳。根据另一个优选实施方案，上述蛋白质、多核苷酸或载体用作用于血管阻塞的一种或更 多种支架（优选含药支架）的植入中的共辅助剂（co-adjuvant)。
[0017] 最后，本发明提供了一种药物组合物，其包含与可药用载剂和赋形剂组合的本发 明的蛋白质或多核苷酸。
[0018] 通过以下详细描述和权利要求，本发明的其他特征和优点将变得明显。
【附图说明】
[0019] 图1示出了实施例3中使用的编码INFT hBPIFB4(SEQ ID NO :3)或VTFT hBPIFB4(SEQ ID N0:1)之pRK5载体的序列，其中BPIFB4蛋白的序列以下划线表示，而EGFP 的序列以斜体表示。
[0020] 图2示出了对实施例3中用编码INFT BPIFB4之质粒（左图）或对照空pRK5质 粒（右图）离体灌注的肠系膜血管中的绿色荧光蛋白的检测。
[0021] 图3表示用空载体（EV)、编码INFT hBPIFB4或VTFT hBPIFB4之质粒灌注的肠系 膜血管中的BPIFB4蛋白表达和eNOS活化。图a示出了 7个合并实验的Western印迹以及 对BPIFB4(顶部）和P-eN0S S1177(中间）的检测。图b示出了对BPIFB4表达的量化并 且图c示出了对eNOS之1177位丝氨酸上的磷酸化的量化。
[0022] 图4、5和6 :图4a、5a和6a表示在实施例3中在用空质粒pRK5质粒（EV/图4a)、 编码 INFT hBPIFB4 之 pRK5 质粒（INFT/ 图 5a)或编码 VTFT hBPIFB4 之 pRK5 质粒（VTFT/ 图6a)离体灌注的肠系膜血管中观察到的KCl诱导的血管收缩。图4b、5b和6b表示在实施 例3中在用空质粒pRK5质粒（EV/图4b)、编码INFT hBPIFB4之pRK5质粒（INFT/图5b) 或编码VTFT hBPIFB4之pRK5质粒（VTFT/图6b)离体灌注的肠系膜血管中观察到的去氧 肾上腺素诱导的血管扩张。图4c、5c和6c表示在实施例3中在用空质粒pRK5质粒（EV/ 图 4c)、编码 INFT hBPIFB4 之 pRK5 质粒（INFT/ 图 5c)或编码 VTFT hBPIFB4 之 pRK5 质粒 (VTFT/图6c)离体灌注的肠系膜血管中观察到的乙酰胆碱（acetylcoline)诱导的血管收 缩。用编码VNFT hBPIFB4(SEQ ID N0:4)、ITFT hBPIFB4(SEQ ID N0:5)、VTLI hBPIFB4(SEQ ID NO :6)和INLI hBPIFB4(SEQ ID NO :7)之质粒在灌注的肠系膜血管中对以下进行观察 所观察到的结果与用空载体获得的结果叠加（数据未示出）：KC1诱导的血管收缩、去氧肾 上腺素诱导的血管收缩或乙酰胆碱诱导的血管扩张。
[0023] 图7和8 :图7a和8a表示eNOS抑制剂L-NAME对用空pRK5质粒（EV/图7a)或 编码突变VTFT hBPIFB4之pRK5质粒（VTFT/图8a)离体灌注的血管中乙酰胆碱诱导的舒 张的影响。图8b表示亚甲基四氢叶酸还原酶敲除小鼠（Mthfr+勺、对照（Mthfr +/+)和用空 pRK5 质粒（Mthfr+/-EV)(图 7b)或编码 VTFT hBPIFB4 之 pRK5 质粒（Mthfr+A-M)(图 8b) 处理的敲除小鼠之血管中的血管舒张的恢复。
[0024] 图9 :图a)示出了证明在HEK293T细胞中H2O2诱导BPIFB4表达的RT-PCR。图b) 示出了对表达VTFT hBPIFB4 (VTFT)之HEK293T细胞和过量表达INFT hBPIFB4 (INFT)之细 胞或暴露于空载体（EV)之细胞中eNOS之1177位丝氨酸上的磷酸化的Western印迹。图 c)顶部示出了 β-肌动蛋白标准化的0D。
[0025] 发明详沐
[0026] 本发明的第一个目的是BPIFB4蛋白变体，其具有与SEQ ID NO :1的氨基酸序列有 至少85%同源性的氨基酸序列并且特征在于所述序列包含在对应于SEQ ID NO :1的229位 的位置处的缬氨酸（以下称为缬氨酸229)，在对应于SEQ ID NO :1的281位的位置处的苏 氨酸（以下称为苏氨酸281)，在对应于SEQ ID NO :1的488位的位置处的苯丙氨酸（以下 称为苯丙氨酸488)，以及在对应于SEQ ID NO :1的494位的位置处的苏氨酸（以下称为苏 氨酸494)。
[0027] 所述同源性优选是至少90%，更优选至少95%，甚至更优选至少99%。
[0028] 本发明之BPIFB4蛋白变体的氨基酸序列与SEQ ID NO :1的氨基酸序列的不同之 处可在于存在氨基酸的添加、缺失或另外的替换。
[0029] 然而，本发明变体的一个基本特征是其包含上文所述的4个氨基酸。在因氨基酸 缺失或添加而不同于SEQ ID NO :1的同源物的情况下，上述4个氨基酸存在于对应于其在 SEQ ID NO :1中的原始位置的位置。在因氨基酸替换而不同于SEQ ID NO :1的同源物的情 况下，上述4个氨基酸存在于与SEQ ID NO :1中相同的位置。根据一个优选的实施方案，本 发明的蛋白质具有对应于SEQ ID NO 1的氨基酸序列，其中在不同于SEQ ID NO 1之229 位、281位、488位和494位的位置处的一个或更多个氨基酸已被保守氨基酸替换。"保守氨 基酸"指其物理化学性质在功能上等同于原始氨基酸的氨基酸。
[0030] 根据本发明，特别优选的蛋白质具有已知在以下中鉴定的BPIFB4蛋白的氨基酸 序列：智人（Homo Sapiens) (Acc. N. NP-59827. 2 ;SEQ ID NO :1 或 Acc. N. NP-872325. 2， 对应于较长的同工型）、猫（Felis Catus) (Acc Ν· XP003983665. 1);黑猩猩（Pan Troglodytes) (Acc N XP525303);亚马逊松鼠猴（Samiri boliviensis boliviensis) (Acc N XP-003932113.I);猕猴（Macaca Mulatta)(Acc N NP-001230192.I);倭黑 渥渥（Pan paniscus) (Acc N.XP-003814776. I);小耳大婴猴（Otolemur garnettii) (Acc Ν·ΧΡ_003788148·1);苏门答腊猩猩（Pongo abelii)(Acc N XP-003780649.1.); 袋獾（Sarcophilus harrisii) (Acc N.XP-003758987.1);褐家鼠 （Rattus norvegicus) (Acc N.NP-001102679. 2);普通狨（Callithrix jacchus) (Acc N.XP-003732841.1);小 鼠 （Mus musculus) (Acc N.NP-001030047.2);牛（Bos taurus) (Acc N XP-003586861. I); 家犬（Canis lupus familiaris)(Acc N.XP-534383.3);野猪（Sus scrofa)(Acc N.XP-003134448.3);原鸡（Gallus gallus)(Acc No XP-425718);北美负鼠 （Didelphis virginiana) (L0C100032880)或非洲爪蟾（Xenopus) (L0C100485776)，已对其进行修饰使 得其包含在对应于SEQ ID NO :1的229位的位置处的缬氨酸，在对应于SEQ ID NO :1的281 位的位置处的苏氨酸，在对应于SEQ ID NO :1的488位的位置处的苯丙氨酸，以及在对应于 SEQ ID NO :1的494位的位置处的苏氨酸。
[0031] 根据一个特别优选的实施方案，本发明的BPIFB4蛋白变体具有SEQ ID NO :1的序 列。在下文中将具有这样的序列的蛋白质称为VTFT hBPIFB4。
[0032] 本发明的第二个目的是一种蛋白质，其具有由与能够赋予该蛋白质特别有利特性 的另外的氨基酸序列连接的根据本发明之BPIFB4蛋白变体的氨基酸序列组成的序列。优 选地，所述另外的氨基酸序列用于识别根据本发明的BPIFB4蛋白变体或者用于将本发明 的BPIFB4蛋白变体靶向至特定的器官或组织。优选地，所述蛋白质是嵌合蛋白。
[0033] 如实验部分中将详细描述的，本发明人意外地发现上述VTFT hBPIFB4与3个独立 群体中的异常长寿有关。本发明人还证明突变蛋白质对预期寿命的有益作用是其能够调节 与衰老相关的血管功能障碍的结果。如实验部分中所证明的，这种调节依赖于本发明VTFT hBPIFB4中对应于SEQ ID NO :1之229位、281位、488位和494位的位置处的特定4个氨 基酸的存在。
[0034] 如实施例3中所示，小鼠肠系膜血管被离体灌注空质粒或者编码VTFT hBPIFB4或 与VTFT hBPIFB4的不同之处在于对4个相关氨基酸之多种替换的蛋白质的质粒，所述蛋白 质为：具有SEQ ID NO :3的氨基酸序列的INFT hBPIFB4,其与VTFT hBPIFB4的不同之处 在于其包含分别在229位和281位的异亮氨酸和天冬酰胺（Aspargin);具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的VNFT hBPIFB4,其与VTFT hBPIFB4的不同之处在于其包含281位的天 冬酰胺；具有SEQ ID N0:5的氨基酸序列的ITFT hBPIFB4,其与VTFT hBPIFB4的不同之 处在于其包含229位的异亮氨酸；具有SEQ ID NO :6的氨基酸序列的VTLI hBPIFB4,其与 VTFT hBPIFB4的不同之处在于其包含448位的亮氨酸和494位的异亮氨酸；具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列的INLI hBPIFB4,其与VTFT hBPIFB4的不同