之处在于其包含229位的 异亮氨酸、281位的天冬酰胺、488位的亮氨酸和494位的异亮氨酸。尽管VNFT hBPIFB4、 ITFT hBPIFB4、VTLI hBPIFB4和INLI hBPIFB4对血管功能没有表现出任何作用并且INFT hBPIFB4强烈抑制任何血管功能，从而阻断血管收缩和血管扩张两者，VTFT BPIFB4蛋白表 现出弱的血管收缩抑制作用但显著增强血管扩张。已证明，这种作用是通过经由1177位丝 氨酸上的磷酸化活化eNOS来介导的，因而其与内皮细胞的NO释放增加有关。VTFT hBPIFB4 诱导eNOS活化的能力已在细胞系HEK293T中得到证实（实施例5)。
[0035] 上述数据在与NO产生受损有关的血管疾病动物模型（杂合Mthfr敲除小鼠）中 也得到了证实，其中已显示VTFT hBPIFB4蛋白的转染恢复NO释放和内皮依赖性血管扩张 反应（实施例4)。
[0036] 本发明的第三个目的是本发明的BPIFB4蛋白变体的片段，其具有包含上文所述 的缬氨酸229、苏氨酸281、苯丙氨酸488和苏氨酸494的序列。
[0037] 本文明的上述BPIFB4蛋白变体或片段由于其生物活性而可有利地用于预防、改 善、治疗由NO产生或eNOS活性降低引起的内皮性病理病症或受益于提高eNOS活性或NO 产生的病状或病症，和/或降低其风险。
[0038] 由此，本发明的第四个目的是上述BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段，其用于治疗。 优选地，本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段用于预防、改善、治疗由于内皮细胞的NO 释放低于生理水平或eNOS的活性降低而引起的功能障碍和/或降低其风险，或者用于其 中受益于提高eNOS的活化和/或NO的产生的临床情况。根据本发明的一个优选实施方 案，本发明的所述BPIFB4蛋白变体、所述蛋白质或所述片段用于预防、改善、治疗选自以下 的病状或降低其风险：动脉高血压、动脉粥样硬化、糖尿病、血脂异常、肾衰竭、代谢综合征、 卒中、心肌梗死、勃起功能障碍、神经变性疾病、多发性硬化、认知障碍、视网膜变性、葡萄膜 视网膜炎、血管性视网膜病、白内障、青光眼、冠状痉挛性心绞痛、血栓形成、肺动脉高压、先 兆子痫、血管炎、癌症、炎性疾病、静脉功能不全、eNOS活性和NO产生降低的遗传疾病，例如 MTHFR基因变异。
[0039] 根据本发明的一个替代优选实施方案，所述BPIFB4蛋白变体用于改善肌营养不 良患者中的运动后疲劳以及作为用于血管阻塞的一种或更多种支架（优选含药物的）的植 入中的共辅助剂。
[0040] 可将根据本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段通过经口、经鼻、静脉内、局 部、眼内或眼后施用施用于有此需要、受上述任一种病状侵袭或处于上述临床状态的患者。
[0041] 因此，本发明的第五个目的是优选适用于经口、经鼻、静脉内、局部、眼内或眼后施 用的药物组合物，其包含与可药用载剂和/或赋形剂混合的本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋 白质或片段。适用于本发明的药物组合物的配制在本领域中是公知的，并且在例如最新的 "Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook''，Mack Publishing Company，Easton， Pennsylvania 或 Babizhayev MA. Drug Testing and Analysis，第 4 卷，第 6 期，第 468-485 页，2012年6月）中进行了描述。
[0042] 特别适用于施用根据本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段的药物制剂基于 使用聚氨基酸和多糖结构的合成共聚物，其能够与BPIFB4蛋白变体、蛋白质或其片段通过 静电、疏水或其他物理相互作用形成可逆的物理复合物，并产生在施用后从其释放完整形 式之蛋白质或片段的纳米聚集体（Diaz-Fernandez YA等，Biosens Bioelectron. 2010年9 月 15 日；26(1) :29-35)。
[0043] 本发明的第六个目的是多核苷酸，优选DNA多核苷酸，其编码根据本发明的 BPIFB4蛋白变体、蛋白质或多肽的氨基酸序列。根据一个优选的实施方案，所述多核苷酸的 序列包含SEQ ID NO :2或其片段的序列，或者由SEQ ID NO :2或其片段的序列组成，所述片 段含有编码上述缬氨酸229、苏氨酸281、苯丙氨酸488和苏氨酸494的核苷酸。
[0044] 可使用上述多核苷酸借助于包含它的合适表达载体体外、离体或体内获得突变蛋 白质或多肽在宿主细胞中的表达。
[0045] 因此，本发明的第七个目的是包含与表达控制序列有效连接本发明的上述多核苷 酸的载体。
[0046] 根据一个优选的实施方案，本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段是在经上述 载体转染的宿主细胞中重组产生的。根据该实施方案，本发明的载体优选是适合以高产量 产生蛋白质或多肽的载体。例如，可使用pcDNA?3. 3-TOPO?载体来获得本发明的蛋白 质在瞬时转染后在贴壁哺乳动物组织培养细胞中的高水平表达，或者使用Freestyle? MAX CHO和Freestyle? MAX 293系统（Invitrogen INC.)来获得分泌性蛋白质的高水平表达。
[0047]因此，本发明的第八个目的是经本发明的上述载体转染的宿主细胞。
[0048] 本发明的第九个目的是重组产生根据本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段 的方法，其包括在允许所述BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段表达的条件下培养上述宿主细 胞并回收所述BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段。
[0049] 作为原样直接施用的替代选择，本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段可在向 有此需要的患者施用根据本发明的载体之后在靶组织中表达，所述施用优选通过静脉内 (endovenous)、皮下、眼内、眼后途径，所述载体适合诱导所述突变蛋白质或多肽在所述靶 组织中表达。所述靶组织可根据待治疗的病状而不同并且可以是例如内皮组织、肝组织、心 脏组织、肾组织、眼组织或肌肉组织。
[0050] 根据该实施方案，本发明的载体是优选适合在静脉内施用后转染目的靶组织之细 胞的载体。
[0051] 根据一个特别优选的实施方案，所述载体是病毒载体，基于对目的靶组织的特 异性，优选腺病毒载体，更优选选自AAV血清型1-9载体的载体，（Varadi K，等，Gene Ther. (2012) ;19 (8) :800-9 ;Zincarelli C 等，Mol Ther. (2008)，16(6) :1073-80 ; Diaz-Fernandez YA 等，Oligonucleotides. 2010 ;20 (4) :191-8.)〇
[0052] 因此，本发明的第十个目的是本发明之上述用于治疗的所述多核苷酸或载体。优 选地，所述多核苷酸或载体用于预防、改善、治疗由于内皮细胞的NO释放低于生理水平或 eNOS的活性降低而引起的内皮功能障碍和/或降低其风险，或者用于受益于提高eNOS的活 化和/或NO的产生的情况中。根据本发明的一个优选实施方案，所述多核苷酸或载体用于 预防、改善、治疗选自以下的病状或病症或者降低其风险：动脉高血压、动脉粥样硬化、糖尿 病、血脂异常、肾衰竭、代谢综合征、卒中、心肌梗死、勃起功能障碍、神经变性疾病、多发性 硬化、认知障碍、视网膜变性、葡萄膜视网膜炎、血管性视网膜病、白内障、青光眼、冠状痉挛 性心绞痛、血栓形成、肺动脉高压、先兆子痫、血管炎、癌症、炎性疾病、静脉功能不全、eNOS 活性和NO产生降低的遗传疾病，例如MTHFR基因变异。
[0053] 根据本发明的一个替代优选实施方案，所述多核苷酸或载体用于改善肌营养不良 患者中的运动后疲劳以及作为用于血管阻塞的一种或更多种支架（优选含药的）的植入中 的共辅助剂。
[0054] 本发明的第十一个目的是优选适用于静脉内、皮下、眼内或眼后施用的药物组合 物，其包含根据本发明的载体与可药用载剂和/或赋形剂的混合物。适用于本发明的药物 组合物的配制在本领域中是公知的。作为一个实例，可使用基于聚合物的纳米系统或配位 聚剂纳米系统（polycomplex nanosystem)来递送本发明的载体（Murano E等，Nat Prod Commun. (2011)，6 (4) :555-72 ;Moustafine RI 等，Int J Pharm. 2012 年 10 月 3 日）〇
[0055] 本发明的BPIFB4蛋白变体、蛋白质或片段或载体的平均日剂量将取决于多种因 素，例如患者的疾病严重程度和情况（年龄、性别和体重）。技术人员可使用本领域中公知 的技术手段来发现正确的剂量和方案从而确保在每种特定病状情况下的最佳治疗。
[0056] 将通过下文的实施例对本发明进行更好的说明，但不应将其解释为是对本发明的 限制。 实施例
[0057] 实施例1 :鉴宙三个独立群体中的VTFThBPIFB4蛋白
[0058] 最近发表之对南部意大利百岁老人（Southern Italian Centenarian，SIC)进行 的全基因组关联研宄（Genome Wide Association Study，GWAS)已鉴定出若干与长寿个 体有关的遗传变体（Malovini 等，Rejuvenation Research 2011 ;第 14(3)卷，第 283-291 页）。
[0059] 为了证实该研宄中所报道的前4种改变（p < IxKT4)，在招募来进行德国人百岁 研宄（German Centenary Study) (Keidorp 等；Aging Cell 2011 ;第 10 卷，第 622-8 页） 的第一重复同龄组（r印lication cohort)中进行了重复尝试，所述第一重复同龄组包含 1447个长寿个体（LLI)(年龄范围为95岁至110岁，平均年龄98. 8岁）和1029个较年轻 的对照（年龄范围为60岁至75岁，并且平均年龄为66. 8岁）。结果，通过Taqman分析已 测试到两个非同义的单核苷酸多态性（single-nucleotide polymorphism，SNP)