新颖噬菌体和包括其的抗细菌组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有针对病原性产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens)的特 异性杀细菌活性的新颖噬菌体和包括其的抗细菌组合物。此外，本发明涉及使用所述新颖 噬菌体或抗细菌组合物预防或治疗动物疾病的方法。
【背景技术】
[0002] 产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens,CP)是革兰氏阳性大型专性厌氧芽孢 杆菌，已被认为是不具有鞭毛并且形成孢子的细菌。产气荚膜梭菌是一种特别是在如鸡、猪 等家畜中造成腹泻等等的细菌，和造成禽伤寒的沙门氏菌一样，已被公认为畜牧业中重要 的致死性病原细菌之一。
[0003]目前，在家禽和猪肉行业中频繁产生的疾病之一是由产气荚膜梭菌引起的坏死性 肠炎。已知坏死性肠炎是因产气荚膜梭菌和球虫的协同感染而频繁产生，并且作为坏死性 肠炎的主要症状，在鸡类、猪类等等的小肠下部由于严重坏死性病斑而存在出血性腹泻。
[0004] 此坏死性肠炎根据疾病严重程度而导致感染动物的脱水症状、周期性腹泻等等， 逐渐使动物身体衰弱，并且造成生长迟缓等，此使得坏死性肠炎已变成畜牧业的显著问题。 另外，因为产气荚膜梭菌易于经由动物粪便传播，所以共同繁殖空间中动物之间的传染可 易于经由土壤或污染的饲料等的经口感染而导致。特别是，仔畜中的发病率高，使得产气荚 膜梭菌已变成问题。
[0005] 同时，噬菌体是仅感染和破坏细菌并且仅可在宿主细菌内部自体复制的专门类型 的病毒。噬菌体与抗生素相比具有强大的宿主特异性，并且近来，抗生素抗性菌株出现的问 题已变得严重，使得对噬菌体实际用途的关注已增加（非专利文件1和2)。
[0006] 因此，已在全世界多个国家积极进行与噬菌体有关的研究，并且除关于噬 菌体的专利申请以外，含有噬菌体的组合物获得食品及药品管理局（FoodandDrug Administration,FDA)批准的尝试已逐渐增加。
[0007] 作为与噬菌体有关的现有技术文件，具有针对产气荚膜梭菌的特异性杀细菌 活性的嗤菌体已公开在专利文件1中，并且具有针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)的特异性杀细菌活性的噬菌体已公开在专利文件2中。另外，来源于噬菌体的特异 性破坏细菌细胞膜的肽聚糖结构的溶解蛋白质、和溶解蛋白质的细菌溶解物已公开在专利 文件3中。
[0008] 然而，尽管存在以下现有技术，但是与噬菌体相关联的用于预防和/或治疗感染 性疾病（特别是在包含家禽和猪肉行业的畜牧业中仍是重要问题的由产气荚膜梭菌引起 的坏死性肠炎）的技术仍不充分，因此应开发噬菌体和与噬菌体相关联的技术。
[0009] [现有技术文件]
[0010] [专利文件]
[0011] (专利文件1)韩国专利公开第10-2012-0076710 A号
[0012] (专利文件2)韩国专利登记号10-0910961 B1
[0013] (专利文件3)韩国专利公开第10-2009-0021475A号
[0014] [非专利文件]
[0015] (非专利文件1)希斯罗（CisloM)等人，免疫学治疗实验档案（Arch.Immunol. Ther.Exp.)2 ： 175-183,1987
[0016](非专利文件2)金成励（SungHoonKim)等人，嗤菌体，新颖替代性抗生素 (Bacteriophage，novelalternativeantibiotics)，生物波（BioWave)第 7 卷第 15 期， 2005,BRIC
【发明内容】
[0017] 技术问题
[0018] 本发明人进行研究以便解决如在使用抗生素后出现抗性细菌、抗生素残留于肉类 中等的问题，并且有效预防和治疗由产气荚膜梭菌引起的感染性疾病，因此，本发明人从自 然界分离出具有针对产气荚膜梭菌的特异性杀细菌活性的新噬菌体OCJ21 (KCCM11363P)。 [0019] 此外，本发明人辨明了所述新颖噬菌体的形态学、生物化学和遗传特征并且证实 所述噬菌体具有极好的耐酸性、耐热性、耐旱性等，从而使用新颖噬菌体开发抗生素、消毒 剂、饲料添加剂和其它组合物。另外，本发明人开发出一种用于预防或治疗由产气荚膜梭菌 引起的感染性疾病的组合物和一种使用所述组合物预防或治疗所述疾病的方法。
[0020] 本发明打算提供一种具有针对产气荚膜梭菌的特异性杀细菌活性的新颖噬菌体 〇CJ21(KCCM11363P) 〇
[0021] 此外，本发明打算提供一种含有噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)作为活性成分的用 于预防和/或治疗由产气荚膜梭菌引起的感染性疾病的组合物。
[0022] 另外，本发明打算提供含有噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)作为活性成分的抗生素、 饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁剂。
[0023] 此外，本发明打算提供一种使用噬菌体OCJ21 (KCCM11363P)或含有其 (KCCM11363P)作为活性成分的组合物来预防和/或治疗除人类以外的动物由产气荚膜梭 菌引起的感染性疾病的方法。
[0024] 问题解决方案
[0025] 根据本发明的一个示例性实施例，提供一种具有针对产气荚膜梭菌的特异性杀细 菌活性的新颖噬菌体OCJ21 (KCCM11363P)。
[0026] 根据本发明的另一个示例性实施例，提供一种用于预防或治疗由产气荚膜梭菌引 起的感染性疾病的组合物，所述组合物含有如上所述的噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)作为 活性成分。
[0027] 根据本发明的另一个示例性实施例，提供含有如上所述的噬菌体 OCJ21 (KCCM11363P)作为活性成分的抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁 剂。
[0028] 根据本发明的另一个示例性实施例，提供一种预防或治疗由产气荚膜梭菌引起的 感染性疾病的方法，包括向除人类以外的动物投予如上所述的噬菌体〇CJ21 (KCCM11363P) 或含有其的组合物。
[0029] 本发明的有利作用
[0030] 根据本发明的噬菌体OCJ21 (KCCM11363P)具有特异性地杀死产气荚膜梭菌的作 用。
[0031] 此外，根据本发明的噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)具有极好的耐酸性、耐热性和耐 旱性，使得噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)可以用作在各种温度或pH范围、湿度等条件下用于 预防或治疗由产气荚膜梭菌引起的感染性疾病的材料，并且用作抗生素、饲料添加剂、饮用 水添加剂、消毒剂、清洁剂等。
[0032] 另外，根据本发明，由产气荚膜梭菌引起的感染性疾病可以通过向除人类以外的 动物投予噬菌体〇CJ21(KCCM11363P)或含有其（KCCM11363P)作为活性成分的组合物来预 防或治疗。
【附图说明】
[0033] 图1是新颖噬菌体〇CJ21(KCCM11363P，在下文中称为"OCJ21"）的电子显微照 片。
[0034] 图2示出了新颖嗤菌体①CJ21的脉冲场凝胶电泳（pulsedfieldgel electrophoresis,PFGE)结果。
[0035] 图3示出了新颖嗤菌体OCJ21的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiu mdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)结果。
[0036] 图4是示出新颖噬菌体OCJ21的耐酸性试验结果的图形。
[0037] 图5是示出新颖噬菌体OCJ21的耐热性试验结果的图形。
[0038] 图6是示出新颖噬菌体OCJ21的耐旱性试验结果的图形。
【具体实施方式】
[0039] 在下文中，将详细描述本发明。因为本说明书中未描述的内容可被所属领域或类 似领域的技术人员充分认可及推断出，故不再对其予以赘述。
[0040] 在一个实施例中，本发明提供一种具有针对产气荚膜梭菌（CP)的特异性杀细菌 活性的新颖噬菌体OCJ21 (KCCM11363P)。
[0041] 已知产气荚膜梭菌是革兰氏阳性大型专性厌氧芽孢杆菌，其不具有鞭毛并且形成 孢子。产气荚膜梭菌是一种在动物中（特别是在如家禽、猪类等家畜中）造成腹泻等的细 菌，已被公认为畜牧业中危险且致死的病原细菌之一，如造成禽伤寒的沙门氏菌。
[0042] 噬菌体是感染特定细菌以抑止和抑制所述细菌生长的细菌特异性病毒，并且意指 包含单股或双股脱氧核糖核酸（DNA)或核糖核酸（RNA)作为遗传物质的病毒。
[0043] 本发明的噬菌体OCJ21是具有选择性地感染产气荚膜梭菌的物种特异性的噬菌 体，具有等距衣壳和不可收缩尾部，并且形态上属于长尾噬菌体科（Siphoviridae)(图1)。 噬菌体OCJ21与其它噬菌体之间核酸序列的同源性分析数据在表1中示出。噬菌体OCJ21 的活性在pH4到pH9. 8的范围下是稳定的（耐酸性，参见图4)。OCJ21当其暴露在60°C 下时保留其活性2小时（耐热性，参见图5)，并且其效价在干燥后降低约1/10 (参见图6)。 噬菌体OCJ21的核酸序列与SEQIDN0 :1相同。
[0044] 噬菌体OCJ21是由本发明人最新分离的噬菌体，在2013年1月30日以保藏编号 K