ntration)，使离心上清液中的黄霉素在水溶液中不易形成 胶束或胶束的聚集度下降，从而提高了黄霉素透过膜孔的比例。
[0053]2、黄霉素A在不同甲酰胺添加量下的截留
[0054] 添加lmL、10mL、20mL、30mL、40mL、50mL甲酰胺于离心上清液，其他条件如实施例 1，结果如表2所示：
[0055] 表2黄霉素A在不同甲酰胺添加量下的截留
[0056]
[0057] 可见，随着甲酰胺的用量增加，超滤膜对黄霉素A组分的截留量下降。
[0058] 实施例1
[0059] -种超滤处理黄霉素发酵液的方法，包括以下步骤：
[0060] 1)将黄霉素发酵液（固含量为30g/L)放于冰箱冷藏室（4°C)过夜，8000r/min条 件下离心l〇min，去除沉淀物，上清液备用；
[0061]2)取400mL上清液用去离子水连续超滤lh，压力为25psi;
[0062] 3)将超滤液用pH值为9. 0的质量分数为1 %尿素水溶液继续超滤1. 0h，收集 1200mL超滤液；
[0063] 超滤选用聚砜超滤膜，超滤膜分子截留量为10000 ;
[0064] 检测收率与纯度。黄霉素A组分的纯度为51. 5%，收率为57. 4%。
[0065] 4)取400mL超滤后的富集黄霉素的透析液，调节pH= 3. 0,以50cm/hr流速栗入 装填有反相色谱填料的层析柱（20X250mm)。接着以同样流速，用pH= 8. 30的20%甲醇 作为A洗脱液，100 %甲醇为B洗脱液，按照0-40 %B线性梯度方式洗脱40min，再用40 %B 等梯度方式洗脱至MonA组分完全解吸，合并高纯度MonA馏分。经超滤或旋蒸去溶剂，冷 冻干燥得到产品；
[0066] 其中，所用的反相色谱填料孔径为3()〇A，粒径为50ym，反相色谱填料为硅胶改 性的C8,精制后的黄霉素A组分纯度达到94%。
[0067] 实施例2
[0068] -种超滤处理黄霉素发酵液的方法，包括以下步骤：
[0069] 1)将黄霉素发酵液（固含量为30g/L)放于冰箱冷藏室（4°C)过夜，8000r/min条 件下离心l〇min，去除沉淀物，上清液备用；
[0070] 2)取400mL上清液用去离子水连续超滤lh，压力为25psi，收集过滤液；
[0071 ] 3)将过滤液用pH值为7. 5的体积分数为2 %的甲醇水溶液继续超滤1.Oh，收集 1200mL超滤液；
[0072] 超滤选用聚丙烯腈超滤膜，超滤膜分子截留量为30000 ;
[0073] 检测收率与纯度。黄霉素A组分的纯度为48. 3%，收率为59. 7%。
[0074] 4)取400mL超滤后的富集黄霉素的透析液，调节pH= 3. 5,以100cm/hr流速栗入 装填有反相色谱填料的层析柱（20X250mm)。接着以同样流速，用pH= 8. 30的20%甲醇 作为A洗脱液，100 %甲醇为B洗脱液，按照0-40 %B线性梯度方式洗脱40min，再用40 %B 等梯度方式洗脱至MonA组分完全解吸，合并高纯度MonA馏分。经超滤或旋蒸去溶剂，冷 冻干燥得到产品。
[0075] 其中，所用的反相色谱填料孔径j50A，粒径为35ym，反相色谱填料为苯乙烯-二 乙烯苯基质的聚合物填料，精制后的黄霉素A组分纯度达到95 %。
[0076] 实施例3
[0077] -种超滤处理黄霉素发酵液的方法，包括以下步骤：
[0078] 1)将黄霉素发酵液（固含量为30g/L)放于冰箱冷藏室（4°C)过夜，8000r/min条 件下离心l〇min，去除沉淀物，上清液备用；
[0079] 2)取400mL上清液用去离子水连续超滤lh，压力为25psi，收集过滤液；
[0080] 3)将过滤液用pH值为7. 0的体积分数为1. 5 %乙二醇水溶液继续超滤1. 0h，收集 1200mL超滤液；
[0081] 超滤选用聚酰胺超滤膜，超滤膜分子截留量为50000 ;
[0082] 检测收率与纯度。黄霉素A组分的纯度为46. 3%，收率为60. 4%。
[0083] 4)取400mL超滤后的富集黄霉素的透析液，调节pH= 4. 0,以150cm/hr流速栗入 装填有反相色谱填料的层析柱（20X250mm)。接着以同样流速，用pH= 8. 30的20%甲醇 作为A洗脱液，100 %甲醇为B洗脱液，按照0-40 %B线性梯度方式洗脱40min，再用40 %B 等梯度方式洗脱至MonA组分完全解吸，合并高纯度MonA馏分。经超滤或旋蒸去溶剂，冷 冻干燥得到产品。
[0084] 其中，所用的反相色谱填料孔径250A,粒径为75ym，反相色谱填料为聚甲基丙 烯酸酯类基质的聚合物填料，精制后的黄霉素A组分纯度达到93 %。
[0085] 实施例4
[0086] -种超滤处理黄霉素发酵液的方法，包括以下步骤：
[0087] 1)将黄霉素发酵液（固含量为30g/L)放于冰箱冷藏室（4°C)过夜，8000r/min条 件下离心l〇min，去除沉淀物，上清液备用；
[0088] 2)取400mL上清液用去离子水连续超滤lh，压力为25psi，收集过滤液；
[0089] 3)将过滤液用pH值为6. 0的质量分数为1 %甲酰胺水溶液继续超滤1. 0h，收集 1200mL超滤液；
[0090] 选用聚醚砜超滤膜，超滤膜分子截留量为3000 ;
[0091] 检测收率与纯度。黄霉素A组分的纯度为52. 8%，收率为54. 6%。
[0092] 4)取400mL超滤后的富集黄霉素的透析液，调节pH= 4. 5,以250cm/hr流速栗入 装填有反相色谱填料的层析柱（20X250mm)。接着以同样流速，用pH= 8. 30的20%甲醇 作为A洗脱液，100 %甲醇为B洗脱液，按照0-40 %B线性梯度方式洗脱40min，再用40 %B 等梯度方式洗脱至MonA组分完全解吸，合并高纯度MonA馏分。经超滤或旋蒸去溶剂，冷 冻干燥得到产品。
[0093] 其中，所用的反相色谱填料孔径1〇〇A，粒径为20-45ym，反相色谱填料为硅胶改 性的C18,精制后的黄霉素A组分纯度达到97%。
[0094] 综上所述，通过实验发现，黄霉素的胶束大小，也即黄霉素在水溶液中的聚合程度 通过添加剂可以调节，这就使得超滤法预分离黄霉素成为可能，从而使黄霉素A组分的制 备工艺大为简化。
【主权项】
1. 一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 将黄霉素发酵液用去离子水连续超滤lh，弃去透析液； 2) 将步骤1)超滤截留的黄霉素发酵液用含有胶束调节剂的水溶液继续超滤lh，收集 富集黄霉素的透析液。2. 根据权利要求1所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，步骤2)所 述的胶束调节剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、甲酰胺或尿素。3. 根据权利要求1所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，超滤所用 超滤膜的材质为聚醚砜、聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。4. 根据权利要求1所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，超滤所用 超滤膜的截留分子量为3000~50000。5. 根据权利要求1所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，在步骤1) 前还包括对黄霉素发酵液进行预处理，具体操作为：将黄霉素发酵液于4°C冷藏过夜，然后 在8000r/min的条件下离心lOmin。6. 根据权利要求1所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，在步骤2) 后还包括对富集黄霉素的透析液采用色谱法进行精制的步骤。7. 根据权利要求6所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，精制采用 正相色谱法、反相色谱法或离子交换色谱法。8. 根据权利要求7所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，正相色谱 的填料为硅胶，其粒径为20~150ym; 离子交换色谱填料的骨架为聚甲基丙烯酸酯类，其功能基团为-CH2-CH2-NH-(C2H5)2，粒 径为20~75ym。9. 根据权利要求6所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，反相色谱 法具体操作为： 将富集黄霉素的透析液的pH值调节至3. 0~4. 5,以50~250cm/hr的流速栗入装填 有反相色谱填料的层析柱，以相同的流速，选取pH值为8. 30的20%甲醇溶液为A流动相， 以纯甲醇为B流动相，按照0~40 %B流动相线性梯度洗脱40min，再用40 %B流动相等梯 度洗脱至黄霉素A组分完全解吸，合并高纯度黄霉素A组分，去除溶剂后冷冻干燥，得到精 制后的黄霉素A组分产品。10. 根据权利要求9所述的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，其特征在于，所用的反 相色谱填料孔径为100A~300A，粒径为20~75ym;反相色谱填料为硅胶改性的C8、C18 填料，或者为聚合物基质的色谱填料； 聚合物基质为苯乙烯-二乙烯苯聚合物或聚甲基丙烯酸酯类聚合物。
【专利摘要】本发明公开的一种超滤处理黄霉素发酵液的方法，属于生物化工技术领域，包括以下步骤：1)将黄霉素发酵液用去离子水连续超滤1h，弃去透析液；2)将步骤1)超滤截留的黄霉素发酵液用含有胶束调节剂的水溶液继续超滤1h，收集富集黄霉素的透析液。本发明采用的超滤法先通过去离子水除去发酵液中的小分子杂质，再通过添加胶束调节剂水溶液继续超滤除去大分子杂质，进一步对富含黄霉素的超滤液通过色谱法精制得到黄霉素A组分。与现有工艺相比，工艺简单，操作流程大为缩短，耗能低，绿色环保，适合工业化规模生产。
【IPC分类】C07H1/06, C07H13/12
【公开号】CN105037451
【申请号】CN201510433960
【发明人】陈斌, 李蓉, 俱名扬, 郭燕彬, 杨凯迪, 马晓迅
【申请人】西北大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年7月22日