提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0021] 培养液成份为：葡萄糖44g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/L， (NH4)2HPO4 15g/L，KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 .7H20 0.8g/L，NaCl0.1g/L;pH6. 8。
[0022] 湿酵母细胞制备过程如下：酿酒酵母ATCC204508D-5经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。5L发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将酿酒酵母种子液接 种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为I. 2VAV分钟），30°C培养75小时，用过滤式离心 机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0023] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物对乙基苯乙酮，使浓度为90g/L，麦芽浸膏22g，蔗糖酯9g/L，蔗糖28g/L、麦芽糖12g/L、 异丙醇8%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C时，加入湿酵母细胞使浓 度为84g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为82小时；反应结束 后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-对乙基苯乙醇，反应 转化率98 %，产品收率96 %，对映体过量率99 %。
[0024] 实施例3 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0025] 培养液成份为：葡萄糖40g/L，木糖7. 5g/L，玉米胚芽粉11g/L，酵母提取物 4. 5g/L, (NH4)2HPO4 13g/L,KH2PO4 7g/L.MgSO4 . 7H20 0. 75g/L,NaCl0. 09g/ L;pH6. 8。
[0026] 湿酵母细胞制备过程如下：酿酒酵母ATCC204508D-5经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至30°C，将酿酒酵母种子液接 种至发酵罐，接种比例为6. 3%，通气比为I.IVAV分钟），30°C培养48小时，用过滤式离心 机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0027] 生物催化转化：IOL底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物对乙基苯乙酮，使浓度为85g/L，麦芽浸膏22g，蔗糖酯8g/L，蔗糖26g/L、麦芽糖13g/L、 异丙醇9%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至29°C时，加入湿酵母细胞使浓 度为82g/L，通气比为0. 16V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为74小时；反应结束 后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-对乙基苯乙醇，反应 转化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0028] 实施例4 种子培养基成份为：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.8;配制 固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0029] 培养液成份为：葡萄糖42g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/ L, (NH4)2HPO4 15g/L,KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 . 7H20 0.75g/L,NaCl0.1g/L;pH6. 8 〇
[0030] 湿酵母细胞制备过程如下：酿酒酵母ATCC204508D-5经斜面、摇瓶培养，得到种 子液。IOL发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至29°C，将酿酒酵母种子液接 种至发酵罐，接种比例为6. 5%，通气比为I. 2VAV分钟），29°C培养45小时，用过滤式离心 机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0031] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底 物对乙基苯乙酮，使浓度为88g/L，麦芽浸膏22g，蔗糖酯8. 5g/L，蔗糖27g/L、麦芽糖14g/ U异丙醇9. 5%V/V(体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至30°C时，加入湿酵母细胞使 浓度为83g/L，通气比为0. 15V/(V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为73小时；反应结 束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-对乙基苯乙醇，反 应转化率99 %，产品收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
【主权项】
1. 一种酿酒酵母细胞生物催化制备（S)-对乙基苯乙醇的方法，其特征在于反应罐 中加入磷酸盐缓冲液，pH为7. 0,加入底物对乙基苯乙酮，使底物对乙基苯乙酮添加量为 80-90 g/L，麦芽浸膏22-26 g，蔗糖酯7-9g/L，蔗糖25-28g/L、麦芽糖12-15g/L、异丙醇 8-10%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至29-30°C时，加入湿酵母细胞使浓度为80-84g/L， 通气比为0. 15-0. 16VAV分钟)，进行生物催化反应，反应时间为70-75小时；反应结束后， 滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-对乙基苯乙醇，反应转 化率98-99 %，产品收率96-97 %，对映体过量率98. 5-99 %。2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：酿酒酵母ATCC 204508D-5,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30 分钟，冷却至29-30°C，将酿酒酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6. 5 %，通气比为 1-1. 2V/ (V分钟)，29-30°C培养44-48小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作 生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：蛋白胨1. 5-2 g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡 萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0? 2-0. 25g/L，硫酸镁0? 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 1. 8-2. 3g/L ; pH6. 8。
【专利摘要】一种酿酒酵母细胞生物催化制备(S)-对乙基苯乙醇的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用酿酒酵母细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12R1/865, C12P7/22
【公开号】CN105087674
【申请号】CN201510561316
【发明人】张媛媛, 郑振坤, 刘均洪
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年9月7日