一组盆腔脱垂诊断标记及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体涉及一组盆腔脱垂诊断标记及其应用，更具体的 涉及CPXM1，SALL1，KIAA1644, RPRM，PCP4, LINC00890基因及其表达产物在盆腔脱垂诊治中 的应用。
【背景技术】
[0002] 盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse，POP)是由于盆底支持结构的缺陷、损伤 或功能障碍造成的，是影响中老年女性生活质量的常见疾病，主要是由盆底支持结构缺陷 或者退化、损伤及功能障碍所导致。临床表现为子宫、阴道、膀胱、尿道、结直肠、小肠等器官 的脱垂，常伴发尿失禁、排尿排便障碍、性功能障碍等症状。流行病学研究显示高达50%的 成年妇女受该疾病困扰，无论是原发性POP还是复发性POP的发病率都在逐年升高，己成为 非常值得关注的公共卫生问题。POP严重影响了成年女性的生活与社会活动，有研究指出， POP患者出现抑郁症状的可能性是普通人群的5倍。然而，由于其发病机制尚不明确，目前 的治疗大多数只是对其症状进行治疗，而无法从病因上根治疾病。
[0003] 发明人对9例盆腔脱垂病例样本及3例对照进行高通量测序，结合生物信息学方 法进行基因筛选，挑选出6个候选基因：CPXM1，SALL1，KIAA1644, RPRM，PCP4, LINC00890。 进一步，本发明进行了分子细胞生物学方法证实了上述6个候选基因均与盆腔脱垂具有很 好的相关性，候选基因在盆腔脱垂患者组织中明显高表达，可用于制备盆腔脱垂辅助诊疗 制剂，具有重要的临床应用价值。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，KIAA1644， RPRM，PCP4, LINC00890。
[0005] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，KIAA1644, RPRM， PCP4, LINC00890。
[0006] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，KIAA1644， PCP4, LINC00890。
[0007] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，KIAA1644， RPRM，LINC00890。
[0008] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，KIAA1644， RPRM，PCP4。
[0009] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：SALL1，KIAA1644, RPRM， PCP4, LINC00890。
[0010] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分子 标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，RPRM，PCP4， LINC00890。
[0011] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：SALL1，KIAA1644, RPRM， LINC00890。
[0012] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，KIAA1644, PCP4， LINC00890。
[0013] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1，KIAA1644， LINC00890。
[0014] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分 子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，KIAA1644, RPRM， LINC00890。
[0015] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述 分子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，KIAA1644， LINC00890。
[0016] 本发明的目的在于提供分子标志物在制备盆腔脱垂诊断制剂中的应用，所述分子 标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，KIAA1644。
[0017] 为实现上述目的，本发明首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基 因：CPXM1，SALL1，KIAA1644, RPRM，PCP4, LINC00890。进而通过分子细胞生物学方法验证了 上述6个后续基因与盆腔脱垂的关系：候选基因与盆腔脱垂具有很好的相关性，可用于制 备盆腔脱垂辅助诊断制剂，具有重要的临床应用价值。
[0018] 进一步的，所述的分子标志物在盆腔脱垂组织中高表达。CPXM1基因在盆腔脱垂组 织中的表达水平高于对照组织3倍多，SALL1基因在盆腔脱垂组织中的表达水平高于对照 组织6倍多，KIAA1644基因在盆腔脱垂组织中的表达水平高于对照组织3倍多，RPRM基因 在盆腔脱垂组织中的表达水平高于对照组织4倍多，PCP4基因在盆腔脱垂组织中的表达水 平高于对照组织3倍多，LINC00890基因在盆腔脱垂组织中的表达水平高于对照组织3倍 多。
[0019] 进一步，所述的盆腔脱垂的诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片检测盆 腔脱垂组织中上述候选基因任意一个或几个的表达，优选的，所述的荧光定量PCR试剂盒 中含有一对特异性扩增上述候选基因任意一个或几个基因的引物；所述的基因芯片中包括 与上述候选基因任意一个或几个基因的核酸序列杂交的探针。更优选的，所述特异性扩增 CPXM1，SALL1，KIAA1644，RPRM，PCP4，LINC00890 基因的引物见序列表 SEQ ID N0. 15 至 SEQ ID NO. 26 〇
[0020] 进一步，所述的盆腔脱垂的诊断制剂采用免疫方法检测盆腔脱垂组织中上述候选 基因任意一个或几个基因的表达产物，优选的，所述免疫方法为ELISA检测和/胶体金检 测 。
[0021] 进一步，所述检测上述候选基因任意一个或几个基因表达的蛋白的ELISA法为使 用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的上述候选基因任意一个或几个基 因的单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被上述候选基因任意一个或几个基因的单 克隆抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反 应终止液等。
[0022] 进一步，所述检测上述候选基因任意一个或几个基因表达的蛋白的胶体金法为使 用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的上述候选基因任意一个或几个基因的单克隆抗 体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步， 所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区（T)喷点有抗上述候选基因任意一个 或几个基因单克隆抗体、质控区（C)喷点有免疫球蛋白IgG。
[0023] 本发明的目的还在于提供一种分子标志物在制备盆腔脱垂治疗制剂中的应用， 所述分子标志物选自下述任意一种或多种基因和/或基因的表达产物：CPXM1，SALL1， KIAA1644, RPRM，PCP4, LINC00890。
[0024] 进一步，所述盆腔脱垂治疗制剂抑制分子标志物的转录和/或表达。
[0025] 抑制基因及其表达产物的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：通过 激活上述候选基因任意一个或几个基因的抑制基因、激活抑制上述候选基因任意一个或几 个基因表达的蛋白、导入抑制上述候选基因任意一个或几个基因表达的siRNA、激活促进上 述候选基因任意一个或几个基因mRNA降解的microRNA、导入促进上述候选基因任意一个 或几个基因表达的蛋白降解的分子、抑制促进上述候选基因任意一个或几个基因表达的因 子及蛋白的表达。
[0026] 进一步，所述抑制上述候选基因任意一个或几个基因转录或表达的siRNA序列选 自序列表中SEQ ID NO. 1到SEQ ID N0. 12的任意一种和/或几种。
[0027] RNA干扰（RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的 mRNA特异性降解，导致转录后基因沉默的现象，是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断 体内某种特定基因的表达，促使mRNA降解，使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。siRNA 设计完成后可以采用直接合成法或者构建siRNA表达载体，制备好的siRNA可以通过磷酸 ?丐共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子 脂质体试剂法等途径转染细胞。
[0028] 本发明的目的在于提供一种盆腔脱垂抑制剂，所述盆腔脱垂抑制剂抑制上述候选 基因任意一个或几个基因的转录或表达，优选的，盆腔脱垂抑制剂中含有抑制上述候选基 因任意一个或几个基因的转