用于递送mrna编码的抗体的方法和组合物的制作方法

用于递送mrna编码的抗体的方法和组合物的制作方法
【专利说明】用于递送MRNA编码的抗体的方法和组合物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年3月14日提交的美国临时专利申请序列No.61/784, 903和 2013年12月23日提交的美国临时专利申请序列No. 61/920, 165的优先权，其内容在此通 过引用整体并入。
[0003] 背景
[0004] 已知抗体具有强大的治疗效果，并且目前用于治疗一系列疾病，包括癌症、自身免 疫性疾病、心血管疾病和移植排斥。传统上，治疗性抗体是通过重组技术进行生产，配制，然 后向需要抗体治疗的患者施用。然而，抗体生产和配制非常昂贵。此外，许多抗体仅具有非 常短的体内半衰期，因此在被降解之前可能达不到它们的靶抗原或靶组织。为了达到期望 的功效，抗体治疗通常需要高剂量和频繁的施用。
[0005] 基因疗法和基因疫苗接种（也称为DNA疫苗接种）提供用于体内递送大量抗体的 替代方法。但是，DNA作为基因治疗和基因疫苗接种中的药物的用途可能造成一些安全问 题。例如，DNA在血流中被缓慢地降解。可能发生抗-DNA抗体的形成（GiIkeson等，J. Clin. Invest. 1995, 95:1398-1402)。因此（异源）DNA在生物体中的可能持续存在可导致免疫系 统的超活化（hyperactivation)，已知在小鼠中导致脾大（Montheith等，Anticancer Drug Res. 1997, 12(5) :421-432)。此外，DNA整合可以通过断裂完整基因造成宿主基因组中的突 变。
[0006] 发明概述
[0007] 本发明提供一种基于信使RNA(mRNA)递送技术用于体内更安全并且更有效地递 送抗体的改进的方法。本发明部分地基于该意外发现：通过递送编码抗体的重链和轻链的 外源性mRNA，即使在该重链和轻链是通过独立的mRNA递送时，也可以在体内完成完全组装 的多链抗体的产生。如以下在实施例部分中所述的非限制性实施例所示，当将包囊在脂质 体中的编码重链和轻链的mRNA构建体静脉内注入小鼠时，在注射后6小时内，在小鼠血清 中，可以检测到显著量的期望的mRNA编码的抗体，且在72或96小时后出现峰值。甚至在 注射后的三周后抗体的全身性表达持续存在。因此，本发明人已成功地证明多链治疗性抗 体可以通过mRNA递送并由患者身体自身产生，这使得消除非常昂贵的重组抗体生产工艺 成为可能。此外，与mRNA的短暂且易损的性质相反，由mRNA产生的抗体意外地持久并且可 以有效地实现全身性分布。mRNA的短暂性质还可以使通常与异源核酸相关联的安全问题降 至最低。因此，本发明提供一种用于治疗用途的更安全、更便宜且更有效的抗体递送方法。
[0008] 在一个方面，本发明提供一种通过向有此需要的受试者施用一种或多种编码抗体 的重链和轻链的mRNA进行体内递送抗体的方法，并且其中该抗体在该受试者中进行全身 性表达。在一些实施方案中，一种或多种mRNA包括编码重链的第一 MRNA和编码抗体的轻链 的第二mRNA。在一些实施方案中，一种或多种mRNA包括编码抗体的重链和轻链的单mRNA。
[0009] 在一些实施方案中，编码重链和轻链的mRNA包括编码信号肽的序列。在一些实施 方案中，编码重链和轻链的mRNA包括编码人生长激素（hGH)信号肽的序列（例如，SEQ ID NO:9或SEQ ID NO: 10)。在一些实施方案中，编码信号肽序列的序列（例如SEQ ID NO:9 或SEQ ID NO: 10)与编码重链或轻链的mRNA序列在N-末端直接或间接地相连。
[0010] 在一些实施方案中，编码重链的第一 mRNA和编码轻链的第二mRNA以范围介于大 约 10:1 至 1:10(例如，介于约 9:1 至 1:9、8:1 至 1:8、7:1 至 1:7、6:1 至 1:6、5:1 至 1:5、 4:1至1:4、3:1至1:3或者2:1至1:2)之间的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的 第一 mRNA和编码轻链的第二mRNA以范围介于大约4:1至1:4之间的比例存在。在一些实 施方案中，编码重链的第一 mRNA和编码轻链的第二mRNA以大约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、 5:1、4:1、3:1、2:1或1:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一 mRNA和编码轻 链的第二mRNA以大约4:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一 mRNA和编码 轻链的第二mRNA以大约1:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一 mRNA和编 码轻链的第二mRNA以大于1 (例如，范围介于大约10:1至1:1、9:1至1:1、8:1至1:1、7:1 至至至至至1:1或者2:1至1:1)的比例存在。
[0011] 在一些实施方案中，一种或多种编码抗体的重链和轻链的mRNA通过聚合物和/或 基于脂质的递送媒介物进行递送。在一些实施方案中，将一种或多种编码抗体的重链和轻 链的mRNA包囊在一种或多种脂质体内。在一些实施方案中，将编码重链的第一 mRNA和编 码轻链的第二mRNA包囊在单独的脂质体中。在一些实施方案中，将编码重链的第一 mRNA 和编码轻链的第二mRNA包囊在相同的脂质体中。在一些实施方案中，一种或多种脂质体包 括阳离子脂质、中性脂质、基于胆固醇的脂质和PEG-改性的脂质中的一种或多种。在一些 实施方案中，一种或多种脂质体包括阳离子脂质、中性脂质、基于胆固醇的脂质和PEG-改 性的脂质。
[0012] 在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有不大于约250nm(例如，不大于约 225nm、200nm、175nm、150nm、125nm、100nm、75nm 或者 50nm)的尺寸。在一些实施方案中，一 种或多种脂质体具有不大于约150nm的尺寸。在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有 不大于约IOOnm的尺寸。在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有不大于约75nm的尺寸。 在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有不大于约50nm的尺寸。
[0013] 在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有范围从约250 - IOnm(例如，范围从约 225 - 10nm、200 - 10nm、175 - 10nm、150 - 10nm、125 - 10nm、100 - 10nm、75 - IOnm 或者 50 - IOnm)的尺寸。在一些实施方案中，一种或多种脂质体具有范围从约250 - IOOnm(例如，范 围从约 225 - 100nm、200 - 100nm、175 - 100nm、150 - IOOnm)的尺寸。在一些实施方案中，一 种或多种脂质体具有范围从约100 _ IOnm(例如，范围从约90 - 10nm、80 - 10nm、70 - 10nm、 60 - IOnm 或者 50 - IOnm)的尺寸。
[0014] 在一些实施方案中，对一种或多种mRNA经修饰以增强稳定性。在一些实施方案 中，对一种或多种mRNA经修饰以包含经修饰的核苷酸、经修饰的糖骨架、帽子结构、多聚腺 苷酸尾、5'和/或3'非翻译区。在一些实施方案中，一种或多种mRNA是未经修饰的。
[0015] 在一些实施方案中，将一种或多种mRNA静脉内施用。在一些实施方案中，将一种 或多种mRNA腹膜内施用。在一些实施方案中，将一种或多种mRNA皮下施用。在一些实施 方案中，将一种或多种mRNA通过肺施用进行施用。
[0016] 在一些实施方案中，在施用后（例如，单次施用后）至少约6小时、12小时、24小 时、36小时、48小时、60小时、72小时、96小时、120小时、144小时、156小时、168小时或者 180小时，抗体的全身性表达是可检测到的。在一些实施方案中，在施用后（例如，单次施 用后）至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14 天、15天、20天、22天、25天或者30天，抗体的全身性表达是可检测到的。在一些实施方案 中，在施用后（例如，单次施用后）至少约0. 5周、1周、1. 5周、2周、2. 5周、3周、3. 5周、4 周、4. 5周、5周、5. 5周、6周、6. 5周、7周、7. 5周或者8周，抗体的全身性表达是可检测到 的。在一些实施方案中，在施用后（例如，单次施用后）至少约1个月、2个月、3个月或者 4个月，抗体的全身性表达是可检测到的。
[0017] 在一些实施方案中，抗体是完整免疫球蛋白、（Fab)2、$&13'） 2、？&13、？&13'或者80卩￥。 在一些实施方案中，抗体是IgG。在一些实施方案中，抗体选自由抗-CCL2、抗-赖氨酰氧 化酶样-2 (L0XL2)、抗-Flt-U 抗-TNF-α、抗-白细胞介素-2Ra 受体（O^S)Jjt-TGFf0抗-B-细胞活化因子、抗-a -4整联蛋白、抗-BAGE、抗-β -连环蛋白/m、抗-Bcr-abl、 抗-C5、抗-CA 125、抗-CAMEL、抗-CAP-1、抗-CASP-8、抗-CD4、抗-CD 19、抗-CD20、抗-CD22、 抗-CD25、抗-CDC27/m、抗-CD 30、抗-CD33、抗-CD52、抗-CD56、抗-CD80、抗-CDK4/m、 抗-CEA、抗-CT、抗-CTL4、抗-Cyp-B、抗-DAM、抗-EGFR、抗-ErbB3、抗-ELF2M、抗-EMMPRIN、 抗-EpCam、抗-ETV6-AML1、抗-HER2、抗-G250、抗-GAGE、抗-GnT-V、抗-GplOO、抗-HAGE、 抗-HER-2/neu、抗-HLA-A*0201-R170I、抗-IGF-1R、抗-IL-2R、抗-IL-5、抗-MC1R、抗-肌 球蛋白 /m、抗-MUCl、抗-MUM-I、抗-MUM-2、抗-MUM-3、抗-蛋白酶-3、抗-P190 小 bcr-abl、 抗-Pml/RAR α、抗-PRAMS、抗-PSA、抗-PSM、抗-PSMA、抗-RAGE、抗-RANKL、抗-RUl 或 RU2、 抗-SAGE、抗-SART-I 或抗-SART-3、抗-存活蛋白（survivin)、抗-TEL/AML1、抗-TPI/m、 抗-TRP-1、抗-TRP-2、抗-TRP-2/INT2,以及抗-VEGF或抗-VEGF受体组成的组。
[0018] 在另一个方面，本发明提供一种通过向细胞施用编码重链的第一 mRNA和编码抗 体的轻链的第二mRNA产生抗体的方法，并且其中该抗体由该细胞产生。在一些实施方案 中，该细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，该细胞是人类细胞。在一些实施方案中， 该细胞是培养细胞。在一些实施方案中，该细胞是在活生物体内的细胞。在一些实施方案 中，该抗体在细胞内进行表达。在一些实施方案中，该抗体由细胞分泌。
[0019] 在又一方面中，本发明提供包含编码重链的第一 mRNA和编码抗体的轻链的第二 mRNA的组合物，其中将该第一 mRNA和该第二mRNA包囊在一种或多种脂质体中。
[0020] 在其它方面中，本发明还提供编码特定抗体例如抗-CCL2抗体的重链和轻链的示 例性mRNA，以及包含所述mRNA的组合物。在某些实施方案中，本发明提供一种编码抗-CCL2 抗体的重链的mRNA，其具有与本文所述的SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2至少50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99% 同一的序列。在某些 具体的实施方案中，本发明提供一种编码抗-CCL2抗体的重链的mRNA，其具有如本文所述 的SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2的序列。在某些实施方案中，本发明提供一种编码抗-CCL2 抗体的轻链的mRNA，其具有与本文所述的SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO:4至少50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99% 同一的序列。在某些 具体的实施方案中，本发明提供一种编码抗-CCL2抗体的轻链的mRNA，其具有如本文所述 的 SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 的序列。
[0021] 在本申请中使用的术语"约"和"大约"作为等效项使用。本申请中使用的任何数 值，在有或无约/大约的情况下，意指涵盖相关领域中的普通技术人员理解的任何正常变 动。
[0022] 在随后的详细描述中，本发明的其它特征、目的和优点是显而易见。然而，应理解， 详细描述虽然表明本发明的实施方案，但仅以示例说明而非限制的方式提供。基于详细描 述，在本发明范围内的各种变化和修改对本领域技术人员而言将变得显而易见。
[0023] 附图简述
[0024] 以下图仅是出于示例说明目的而非限制。
[0025] 图1显示在利用提供的方法用mRNA处理HCLl细胞后观察到的通过ELISA测定 IgG蛋白水平的示例性条形图。
[0026] 图2显示在利用提供的方法用mRNA处理细胞后观察到的通过ELISA测定IgG蛋 白水平的示例性条形图。
[0027] 图3描绘蛋白印迹法检测由在根据提供的方法将mRNA引入HCLl细胞中24和48 小时后所得的蛋白质水平的结果。
[0028] 图4显示在根据提供的方法暴露于mRNA的小鼠的血清中在6、24、48或72小时通 过ELISA测定的CCL2抗体水平的示例性条形图。
[0029] 图5显示在单次给药a -VEGF mRNA后通过ELISA测定在小鼠的血清中a -VEGF 抗体水平的示例性条形图。
[0030] 图6显示在单次给药a -VEGF mRNA后通过ELISA测定在分别标识的小鼠的血清 中a-VEGF抗体水平的示例性条形图。
[0031] 图7显示在用加载a -VEGF mRNA的cKK-E 12脂质纳米颗粒（LNP)给药后24小时 在野生型小鼠中体内产生抗-人VEGF抗体的示例性条形图。小鼠通过尾静脉注射或皮下 (SC)注射进行给药。
[0032] 定义
[0033] 为了使本发明更易于理解，首先定义某些术语如下。对以下术语及其它术语的其 它定义在整个说明书中进行阐述。
[0034] 氨基酸：如本文所用的，术语"氨基酸"广义上是指可以被包括在多肽链中的任何 化合物和/或物质。在一些实施方案中，氨基酸具有H2N - C(H) (R) - COOH的一般结构。在 一些实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸是合成氨基酸； 在一些实施方案中，氨基酸是d-氨基酸；在一些实施方案中，氨基酸是1-氨基酸。"标准氨 基酸"是指天然存在的肽中常见的二十种标准1-氨基酸中的任一种。"非标准氨基酸"是 指除了标准氨基酸之外的任何氨基酸，无论它是经合成制得或者从天然来源获得。如本文 所用的，"合成氨基酸"涵盖化学修饰的氨基酸，包括但不限于盐、氨基酸衍生物（如，酰胺） 和/或取代物。对氨基酸，包括肽中的羧基-末端和/或氨基-末端的氨基酸，可以通过甲 基化、酰胺化、乙酰化、保护基，和/或用可改变该肽的循环半衰期而不负面影响它们的活 性的其它化学基团取代进行修饰。氨基酸可以参与二硫键中。氨基酸可以包括一种修饰或 者翻译后修饰，如，与一种或多种化学实体（例如，甲基、乙酸酯基、乙酰基、磷酸基、甲酰基 部分、类异戊二烯基团、硫酸酯基、聚乙二醇部分、脂质部分、糖部分、生物素部分等）结合。 术语"氨基酸"与"氨基酸残基"可互换地使用，并且可以指游离的氨基酸和/或肽的氨基 酸残基。从该术语所用于的上下文中可显而易见它是指游离的氨基酸还是指肽的残基。
[0035] 动物：如本文所用的，术语"动物"是指动物界的任何成员。在一些实施方案中， "动物"是指处于任何发育阶段的人类。在一些实施方案中，"动物"是指处于任何发育阶段 的非人类动物。在某些实施方案中，非人类动物是哺乳动物（例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、 兔、猴、狗、猫、羊、牛、灵长类动物和/或猪）。在一些实施方案中，动物包括但不限于，哺乳 动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼、昆虫和/或蠕虫。在一些实施方案中，动物可以是转基 因动物、基因工程动物和/或克隆。
[0036] 抗体：如本文所用的，术语"抗体"涵盖完整抗体和抗体片段。通常完整"抗体"是 与特定的抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括人 类别的任一种：IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。如本领域中理解的典型的免疫球蛋白（抗体）结 构单元已知包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条"轻"链（大 约25kD)和一条"重"链（大约50-70kD)。每条链的N-末端限定主要负责抗原识别的具有 约100至110或更多个氨基酸的可变区。术语"可变轻链"（VL)和"可变重链"（VH)分别 是指这些轻链和重链。每个可变区进一步细分为高变区（HV)和框架区（FR)。高变区包括 由形成β片层结构并用作骨架以使HV区保持在位置的四个框架区（FR1、FR2、FR2和FR4) 分隔的称为互补决定区（⑶R IXDR 2和⑶R 3)的高变性序列的三个区域。每条重链和轻 链的C-末端限定由轻链的一个域（CL)和重链的三个域（CH1、CH2和CH3)组成的恒定区。 在一些实施方案中，在提及抗体使用的术语"完整抗体"或"完全组装的抗体"意指它包括 两条重链和两条轻链，该两条重链和两条轻链任选地通过二硫键相连，正如天然产生的抗 体发生的。在一些实施方案中，根据本发明的抗体是抗体片段。如本文所用的，"抗体片段" 包括完整抗体的部分，如，例如，抗体的抗原结合区或者可变区。抗体片段的实例包括Fab、 Fab'、F(ab'）2和Fv片段；三链抗体（triabody);四链抗体（tetrabody);线形抗体；单链 抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。例如，抗体片段包括分离的片段、由重链 和轻链的可变区组成的"Fv"片段、其中轻链和重链可变区通过肽接头相连的重组单链多肽 分子（"ScFv蛋白"），以及由模拟高变区的氨基酸残基组成的最短识别单元。在许多实施 方案中，抗体片段包含母体抗体的足够的序列以便它与母体抗体所结合的相同抗原结合， 该抗体片段是该母体抗体的片段；在一些实施方案中，片段以与母体抗体相当的亲和力与 抗原结合和/或为了与抗原结合而与母体抗体竞争。抗体的结合抗原的片段的实例包括但 不限于Fab片段、Fab'片段、F(ab'）2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv双链抗体（diabody)、 dAb片段、Fd'片段、Fd片段，以及分离的互补决定区（⑶R)区。
[0037] 大约或约：如本文所用的，术语"大约"或"约"在应用于一个或多个相关的值时 是指与所指的值相似的值。在某些实施方案中，除非另有说明或者从上下文显而易见有所 不同（除了此类数值将超过可能值的100%的情况之外），术语"大约"或"约"是指以任一 方向在（大于或小于）所述参考值的25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、 12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小的范围内的值。
[0038] 生物利用度：如本文所用的，术语"生物利用度"通常是指到达受试者的血流的施 用剂量的百分比。
[0039] 生物活性：如本文所用的，短语"生物活性"是指在生物体系中，特别是在生物体中 具有活性的任何药物的特征。例如，在向生物体施用时对该生物体具有生物学效应的药物 被视为具有生物活性。
[0040] 表达：如本文所用的，核酸序列的"表达"是指将mRNA翻译成多肽（例如，抗体的 重链或轻链）、将多个多肽（例如，抗体的重链或轻链）组装成完整蛋白（例如，抗体）和 /或将多肽或完全组装的蛋白（例如，抗体）翻译后修饰。在本申请中，术语"表达"和"产 生"以及语法等效项可互换使用。
[0041] 功能性：如本文所用的，"功能性"生物分子是处于其呈现出它特征性的性质和/ 或活性的形式的生物分子。
[0042] GC含量：如本文所用的，"GC含量"是在核酸序列中鸟嘌呤残基、胞嘧啶残基或它 们的类似物占总核碱基残基的分数或百分比。例如，包含确切30个胞嘧啶、确切30个鸟嘌 呤、确切1个胞嘧啶类似物以及确切1个鸟嘌呤类似物的IOOnt序列具有62%的GC丰富 度。
[0043] 半衰期：如本文所用的，术语"半衰期"是数量如蛋白浓度或活性降至在时间段起 点测得它的值的一半所需的时间。
[0044] 改进、增高或降低：如本文所用的，术语"改进"、"增高"或"降低"或者语法等效 项表明相对于基线测量值如在开始本文所述的治疗之前在相同个体中的测量值或者在没 有本文所述的治疗下在对照受试者（或多个对照受试者）中的测量值的值。"对照受试者" 是罹患与接受治疗的受试者相同的疾病形式的受试者，其与该接受治疗的受试者的年龄大 约相同。
[0045] 体外：如本文所用的，术语"体外"是指发生在人工环境中，例如，在试管或反应容 器中，在细胞培养物等中而不是在多细胞生物体内的事件。
[0046] 体内：如本文所用的，术语"体内"是指发生在多细胞生物体如人和非人类动物内 的事件。在基于细胞的系统的上下文中，该术语可以用来指发生在活细胞（与例如体外系 统相对）内的事件。
[0047] 分离的：如本文所用的，术语"分离的"是指物质和/或实体，其已经（1)与在最初 产生（无论在自然界中和/或在试验环境中）时与它结合的组分中的至少一些分离，和/或 (2)通过人工进行生产、制备和/或制造。分离的物质和/或实体可以从与它们最初结合的 其它组分的约10%、约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、 约91 %、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或者大于约 99%分离。在一些实施方案中，分离的药物是约80%、约85%、约90%、约91%、约92%、 约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或者大于约99%纯度。在本文 中使用时，若物质基本上不含有其它组分，则它是"纯的"。在本文中使用时，分离的物质和 /或实体的百分比纯度的计算不应该包括赋形剂（例如，缓冲剂、溶剂、水等）。
[0048] 接头：如本文所用的，术语"接头"是指，在融合蛋白中，并非出现在天然蛋白中的 特定位置处并且通常设计为柔性或者将结构如α-螺旋插入在两个蛋白部分之间的氨基 酸序列。接头也称为间隔物。接头或间隔物通常本身不具有生物功能。
[0049] 局部分布或递送：如本文所用的，术语"局部分布"、"局部递送"或者语法等效项是 指组织特异性的递送或分布。通常，局部分布或递送要求由mRNA编码的蛋白（例如，抗体） 在细胞内进行翻译和表达或者具有避免进入患者的循环系统的有限的分泌。
[0050] 信使RNA(mRNA):如本文所用的，术语"信使RNA(mRNA) "是指编码至少一种多肽的 多核苷酸。如本文所用的，mRNA涵盖经修饰的和未经修饰的RNA。mRNA可以包括一个或多 个编码区和非编码区。
[0051] 核酸：如本文所用的，术语"核酸"广义上是指是多核苷酸链或者可以被包括在多 核苷酸链中的任何化合物和/或物质。在一些实施方案中，核酸是多核苷酸链或者可以通 过磷酸二酯键被包括在多核苷酸链中的化合物和/或物质。在一些实施方案中，"核酸"是 指单个的核酸残基（例如，核苷酸和/或核苷）。在一些实施方案中，"核酸"是指包含单 个的核酸残基的多核苷酸链。在一些实施方案中，"核酸"涵盖RNA以及单链和/或双链的 DNA和/或cDNA。此外，术语"核酸"、"DNA"、"RNA"和/或类似的术语包括核酸类似物，即， 具有除磷酸二酯骨架之外的类似物。例如，所谓的"肽核酸"是本领域已知的，并且在骨架 中具有肽键而不是磷酸二酯键，被视为在本发明的范围内。术语"编码氨基酸序列的核苷 酸序列"包括彼此的简并形式和/或编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白和 /或RNA的核苷酸序列可以包括内含子。核酸可以从天然来源进行纯化，利用重组表达系 统产生，并任选地进行纯化，化学合成等。在适当的情况中，例如，在化学合成的分子的情况 下，核酸可以包括核苷类似物如具有经化学修饰的碱基或糖的类似物，骨架修饰等。除非另 外指明，核酸序列以5'至3'方向表示。在一些实施方案中，核酸是或者包括天然核苷（例 如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷）；核苷类似物 (例如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔 基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔 基-尿昔、C5-丙炔基-胞昔、C5-甲基胞昔、2_氛基腺昔、7_去氣杂腺昔、7_去氣杂鸟昔、 8_氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O (6)-甲基鸟苷和2-硫代胞苷）；化学修饰的碱基；生物修饰的 碱基（例如甲基化的碱基）；嵌入碱基；经修饰的糖（例如，2' -氟核糖、核糖、2' -脱氧核 糖、阿拉伯糖和己糖）；和/或经修饰的磷酸基（例如，硫代磷酸酯和5' -N-亚磷酰胺键）。 在一些实施方案中，本发明具体地涉及"未经修饰的核酸"，意指尚未为了促进或实现递送 而进行化学修饰的核酸（例如，多核苷酸和残基，包括核苷酸和/或核苷）。
[0052] 患者：如本文所用的，术语"患者"或"受试者"是指为了例如试验、诊断、预防、美 容和/或治疗目的可以向其施用提供的组合物的任何生物体。通常患者包括动物（例如， 哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和/或人）。在一些实施方案中，患者是人。人 包括产前和产后的形式。
[0053] 药学上可接受的：如本文所用的，术语"药学上可接受的"是指物质在合理的医学 判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、变态反应或其 它问题或并发症，与合理的利益/风险比相匹配。
[0054] 全身性分布或递送：如本文所用的，术语"全身性分