子按1000万/ml的浓度与本发明精子体外培养液混匀，置于37 °C温箱90?120分钟。
[0030]6、取精子镜检，记录精子活力。
[0031]最终结果(图1):本发明精子培养体系培养前平均前向运动精子比例为54.1%,培养后平均前向运动精子比例为72.9%, (p〈0.01)
[0032]实施例2:
[0033]样本来源:三份弱精子症患者精子标本(标准按WHO五版)
[0034]精子处理:
[0035]1、预热10mL含体积分数为10% SSS的mHTF(作为培养前对照组)，2mL Isolate精子分离液和10mL本发明体外培养液。
[0036]2、将收集有精液的取精杯置于37°C水浴，待液化后取出。
[0037]3、将预热的含体积分数为10 % SSS的mHTF与液化后精液混匀，缓缓加入到Isolate分离液上，300g离心10分钟。
[0038]4、离心后弃上清，取下层分离后精子镜检，记录精子活力，作为培养前对照组。
[0039]5、将步骤4剩余精子按1000万/ml的浓度与本发明精子培养体系混匀，置于37°C温箱90?120分钟。
[0040]6、取精子镜检，记录精子活力。
[0041]最终结果(图2):本发明精子培养体系培养前平均前向运动精子比例为32.1%，培养后平均前向运动精子比例为43.9% (ρ〈0.01)
[0042]实施例1-2中使用的mHTF为Irvine Scientific，购买自美国，货号:90126150402 ；serum substitute supplement (血清替代物，简称 SSS)购自美国，货号:99193150201.
[0043]实施例1-2中使用的本发明精子体外培养液制备如下:9mL mHTF, lmL SSS, 25 μ 1Hexadecanoic Acid、25yl Trans-13-0ctadecenoic Acid、20yl 9, 12-0ctadecenoicAcid、30yl Arachidonic Acid、50yl Docosahexaenoate Acid 置于 37°C 下混合平衡 1 ?3小时，得到10.15ml精子体外培养液。此外，本发明还发现，当上述脂肪酸添加种类减少(比如只添加三种或四种)，对精子活力的改善效果会大大降低。
[0044]虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1.一种改善人精子活力的体外培养液，其特征在于，所述培养液中含有脂肪酸Hexadecanoic Acid、Trans-13—Octadecenoic Acid、9，12—Octadecenoic、ArachidonicAcid 和 Docosahexaenoate Acido2.根据权利要求1所述的体外培养液，其特征在于，所述培养液中脂肪酸Hexadecanoic Acid、Trans-13—Octadecenoic Acid、9，12—Octadecenoic、ArachidonicAcid 和 Docosahexaenoate Acid 的体积为 5:5:4:6:10。3.根据权利要求1所述的体外培养液，其特征在于，所述培养液中还含有ModifiedHuman Tubal Fluid、serum substitute supplemento4.根据权利要求1所述的体外培养液，其特征在于，所述培养液，每10.15ml中含有 9mL 的 Modified Human Tubal Fluid、lmL 的 serum substitute supplement、25 μ 1Hexadecanoic Acid、25ul Trans-13—Octadecenoic Acid、20ul 9，12—OctadecenoicAcid>30 μ 1 Arachidonic Acid>50 μ 1 Docosahexaenoate Acido5.权利要求1-4任一所述体外培养液在提高离体之后的人精子的活力方面的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用是将离体之后用精子分裂液分离出来的精子，用所述体外培养液重悬、轻轻混匀，置于37°C放置1?3小时。7.一种提高人精子活力的体外培养体系试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有试剂 Hexadecanoic Acid、Trans-13-0ctadecenoic Acid、9, 12-0ctadecenoic、ArachidonicAcid、Docosahexaenoate Acido8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中HexadecanoicAcid、Trans-13—Octadecenoic Acid、9， 12_0ctadecenoic、Arachidonic Acid>DocosahexaenoateAcid的体积比为5:5:4:6:10ο9.权利要求7-8任一所述试剂盒在提高离体之后的人精子的活力方面的应用方法。10.根据权利要求9所述的应用方法，其特征在于，所述应用方法是取9mL的Modified Human Tubal Fluid、lmL 的 serum substitute supplement，然后添加试剂盒中的 Hexadecanoic Acid 25 μ 1、Trans-13-Octadecenoic Acid 25 μ1、9，12-OctadecenoicAcid 20 μ 1、Arachidonic Acid 30 μ 1、Docosahexaenoate Acid 50 μ 1 制成 10.15ml 的培养液，用该培养液重悬离体之后用精子分裂液分离出来的精子，轻轻混匀，置于37°C放置1?3小时。
【专利摘要】本发明公开了一种提高人精子活力的体外培养体系试剂盒及其应用，属于XX技术领域。本发明的试剂盒包括9mL？mHTF、25μl？Hexadecanoic？Acid、25μl？Trans-13-Octadecenoic？Acid、20μl？9,12-Octadecenoic、30μl？Arachidonic？Acid、50μl？Docosahexaenoate？Acid。将试剂盒中各试剂置于37℃下混合平衡2～3小时，得到10.15ml精子培养体系；将用精子分裂液分离出来的精子按1000万/mL的浓度用上述精子培养体系重悬后，轻轻混匀，置于37℃恒温箱中放置90～120分钟，即可达到提高精子活力的效果。利用本发明试剂盒可以显著提高精子前向运动活力，在人工授精和体外受精技术中使用，可以改善妊娠结局，提高受精率；同时对严重弱精子症患者的治疗又提供了新方法。
【IPC分类】C12N5/076
【公开号】CN105238744
【申请号】CN201510705882
【发明人】王英男, 杨勇, 吴亦波, 毛健
【申请人】江南大学
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年10月27日