一种稳定、抗干扰能力强的腺苷脱氨酶试剂及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及腺苷检测技术领域，特别涉及一种腺苷脱氨酶检测试剂，还涉及使用 此检测试剂的检测方法。
【背景技术】
[0002] 腺苷脱氨酶（ADA)是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的嘌呤核苷酸分解代谢酶 类，20世纪50年代末，ADA活性测定引入酶学领域，目前已用于各类疾病的诊断。ADA可特 异性催化腺苷产生不可逆的脱氨反应。ADA活性降低将影响核苷合成，使淋巴祖细胞转化为 淋巴母细胞及浆细胞的能力降低，从而导致免疫活性细胞减少，功能减退。体液中ADA活性 己成为恶性肿瘤、结核、中枢神经系统疾病、肝病及伤寒等疾病的诊断与鉴别诊断、疗效观 察和病情追随的一个重要临床指标。血清ADA活性升高，常见于肝炎、肝硬化、血色素沉着 症、肿瘤引起的阻塞性黄疸、前列腺和膀胱癌、溶血性贫血、伤寒、痛风、结核和心衰等。测定 血液、体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及免疫功能的研究 越来越受到临床的重视。
[0003] 目前，文献报道的ADA活性的测定方法有氨气敏电极法、荧光法、化学发光法、同 位素法、高效液相色谱法等。这些方法仪器设备要求高，分析成本高，难于全面推广应用。目 前体液中测定常用方法为氨试剂比色法。该法操作简单，易于推广，但不能用于批量样品的 测定。
[0004] 鉴于此，本发明在ADA催化腺苷水解生成氨和次黄嘌呤核苷反应的基础上，再依 次偶联三个酶促反应，建立了一种既能用于手工操作，又能用于自动生化分析仪的四酶偶 联测定ADA活性的新方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种用于检测腺苷脱氨酶(ADA)的试剂及使用该试剂检测ADA含 量的方法。该试剂盒采用四酶偶联法，可以有效检测ADA的含量，抗干扰能力强，稳定性好 等优点。
[0006] 基本原理：腺苷在ADA作用下，生成次黄嘌呤核苷和氨，
次黄嘌呤核苷在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP)催化下，与磷反应生成次黄嘌呤和核糖1-磷 酸
次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（X0D)催化氧化生成尿酸和H202:
通过测定红色醌化合物在546nm处吸光度的变化速率（ΔΑ/min)可测得ADA活性。
[0007] 本发明是通过以下步骤得到的： 一种ADA检酸测试剂，包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1和试剂R2的组成如下： 试剂R1中含有 缓冲'液..................................................100mmol/L 4-AA....................................................4mmol/L PNP.....................................................0. 3U/mL XOD.....................................................0. 4U/mL POD.....................................................0.lU/mL 防腐剂..................................................〇· 5g/L; 试剂R2的组分为： 缓冲液..................................................100mmol/L I/lif....................................................llmmol/L EHSPT...................................................4mmol/L 以上试剂均用pH7. 4的磷酸盐缓冲溶液。
[0008] 以上ADA检测试剂，所述防腐剂为NaN3。
[0009] 所述的ADA检测试剂来检测ADA的检测方法，使用全自动生化分析仪利用速率法 进行测定，检测主波长为546nm。
[0010] 所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为2:1。
[0011] 本发明的有益效果： 1) 采用新的缓冲体系和稳定剂，显著改善了试剂的稳定性； 2) 采用四酶偶联法，不仅显著改善测定的性能，而且增强了抗干扰能力，适宜批量试样 全自动分析； 3) 试剂的准确度和稳定性良好，使用方便，完全可以满足临床需要。
【附图说明】
[0012] 图1为两种试剂的相关性曲线图， 图2为两种试剂效期稳定性曲线图。 图3为实施例1试剂检测方法， 图4为实施例试剂抗干扰性能比较， 图5为实施例1试剂与市场常见并得到认可的腺苷脱氧酶测定试剂盒对比检测结果。【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明： 实施例1 腺苷脱氨酶的检测试剂，包试剂R1和试剂R2 : 1) 其R1的组成为： 缓冲液..................................................100mmol/L 4-AA....................................................4mmol/L PNP.....................................................0. 3U/mL XOD.....................................................0. 4U/mL POD.....................................................0.lU/mL BSA.....................................................lg/L， 蔗糖....................................................5g/L， 海藻糖..................................................2g/L, 过氧化物酶...............................................12KU/L， 抗坏血酸氧化酶...........................................5KU/L， 胆红素氧化酶.............................................8KU/L， 防腐剂NaN3...............................................〇. 5g/L； 2) 试剂R2的组分为： 缓冲液..................................................100mmol/L I/lif....................................................llmmol/L EHSPT..................................................4mmol/L BSA....................................