一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及总胆固醇检测技术领域，特别涉及一种准确度高、抗干扰能力强的总 胆固醇检测试剂。
【背景技术】
[0002] 总胆固醇是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。人群总胆固醇水平主要取决 于遗传因素和生活方式。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要 器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原 料，也是构成细胞膜的主要成分，胆固醇（CHO)和胆固醇酯（ChE)为类脂质，是脂肪在血液 中存在的一种形式。胆固醇在体内有许多重要功能，其主要功能有：胆固醇是所有细胞膜和 亚细胞器膜上的重要组成成分；是胆汁酸的唯一前体；是所有类固醇激素，包括性腺和肾 上腺激素的前体等。人体血清胆固醇增多常见于高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综 合征、甲状腺功能减退、胆总管阻塞、高血压(部分）等疾病。胆固醇含量减少常见于低脂蛋 白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝病、严重感染、营养不良、肺结核和晚期癌症等疾 病。胆固醇作为血脂类常规检查项目，在临床中有着很重要的应用。因此，研发一种准确度 高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂是很有必要的。
[0003] 测定总胆固醇的方法有多种，常规方法包括化学法和酶法。化学法需要有机溶剂 提取胆固醇，涉及强酸反应，特异性差，干扰因素多，准确度差，操作步骤复杂，不适用于临 床操作。因此，临床一般采用酶法。酶法的原理是血清中的胆固醇被胆固醇脂水解酶（CHE) 水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶（CHO )氧化成胆留烯酮和过氧化氢，再经过过氧化 物酶（POD)催化4-氨基安替比林与酚生成红色醌亚胺色素，它的颜色深浅与胆固醇的浓度 成正比。该方法具有较好的精度和准确性，灵敏度高，但是易受多种干扰因素的干扰，例如 血清中的物质如血红蛋白，胆红素，抗坏血酸等也会干扰测定结果，因此，在酶法的基础上 发明了一种准确度好，抗干扰能力更强的总胆固醇检测试剂。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂。
[0005] 本发明基本原理： 血清中的胆固醇被胆固醇脂水解酶（CHE)水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶 (CHO)氧化成胆留烯酮和过氧化氢，再经过过氧化物酶（POD)催化4-氨基安替比林与酚生 成红色醌亚胺色素，醌亚胺的最大吸收峰在505nm附近，吸光度与样本中的总胆固醇含量 成正比。
[0006]
本发明是通过以下步骤得到的： 一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，包括试剂R，所述试剂R的组成如 下： 试剂R中含有： CAPS 缓冲液（ρΗ7· 0) 50mmol/L 4-氨基安替比林 1.0 mmol/L 胆固醇酯酶（CHE) 2000U/L 胆固醇氧化酶（CHO) 2000U/L 过氧化物酶（POD) 2500U/L 3, 5-二氯-2-羟基苯磺酸钠（DHBS) 3. 5mmol/L 氯化镁 2. 5mmol/L 海藻糖 20g/L 甘露醇 20g/L 羟基乙叉二膦酸 2ml/L 十八烷基三甲基溴化铵. 0. 3g/L EMULGEN-707 0. 35ml/L 抗坏血酸氧化酶 2. 5KU/L， 胆红素氧化酶. 2KU/L 防腐剂. 0.5ml/L。
[0007] 所述的总胆固醇检测试剂，试剂R中缓冲液为25°C，pH为7的CAPS (3 -（环己氨 基）一 1 一丙磺酸）缓冲液缓冲液。
[0008] 所述的总胆固醇检测试剂，所述防腐剂为PC-300。
[0009] 所述的总胆固醇检测试剂来检测总胆固醇的检测方法，使用全自动生化分析仪利 用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
[0010] 所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于所述抗干 扰剂为抗坏血酸氧化酶和胆红素氧化酶。
[0011] 所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于所述金属 离子螯合剂为羟基乙叉二膦酸。
[0012] 本发明的创新处： 1) 在试剂R中使用了 CAPS(3 -（环己氨基）一 1 一丙磺酸）缓冲液，在试剂中使用的 CAPS(3 -（环己氨基）一 1 一丙磺酸）缓冲液是生物缓冲液，对在保证缓冲能力的同时，不 会对反应体系产生负面影响； 2) 在试剂的R中加入了十八烷基三甲基溴化铵和EMULGEN-707两种表面活性剂，这两 种表面活性剂能有较好的提高试剂的乳化作用，从而提高试剂的准确度和特异性； 3) 在试剂R中加入了羟基乙叉二膦酸，能够有效的螯合重金属离子，并且能够较好的 提尚试剂的准确性； 4) 在试剂中加入海藻糖、甘露醇作为稳定剂，能有效的改善试剂的稳定性，且不影响试 剂的准确度； 5) 本发明还在试剂中加入了抗坏血酸氧化酶和胆红素氧化酶，能够有效的去除抗坏血 酸和胆红素的干扰。
【附图说明】
[0013] 图1为两种试剂的相关性曲线图。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明： 实施例1 1) 一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，所述试剂R的组成如下： 试剂R中含有： CAPS 缓冲液（ρΗ7· 0) 50mmol/L 4-氨基安替比林 1.0 mmol/L 胆固醇酯酶（CHE) 2000U/L 胆固醇氧化酶（CHO) 2000U/L 过氧化物酶（POD) 2500U/L 3, 5-二氯-2-羟基苯磺酸钠（DHBS) 3. 5mmol/L 氯化镁 2. 5mmol/L 海藻糖 20g/L 甘露醇 20g/L 羟基乙叉二膦酸 2ml/L 十八烷基三甲基溴化铵. 0. 3g/L EMULGEN-707 0. 35ml/L 抗坏血酸氧化酶 2. 5KU/L， 胆红素氧化酶 2KU/L 防腐剂 0· 5ml/L 2) 检测使用方法： 本实施例描述的总胆固醇检测试剂，在使用时采用全自动生化分析仪，如日立7180全 自动分析仪等，利用终点法进行测定。将实施例1的试剂放置到对应的试剂位上，在样品盘 的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1 : 表1实施例1试剂检测方法
计算：样本CHO浓度=样本ΔΑ/标准ΔAX标准浓度。
[0015] 实施例2 相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认 可的某公司的总胆固醇试剂盒进行对照检测，同时检测了 20个临床血清样本，检测结果如 表2所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示)。
[0016] 表2实施例1试剂与市场常见并得到认可的总胆固醇测定试剂盒对比检测结果
通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为〇. 9997,说明了两者有极大的相关性， 实施例1的试剂中添加的稳定剂和抗干扰剂没有影响试剂的准确度。表明实施例1的试剂 具有良好的准确度。
[0017] 实施例3 干扰性试验：取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干 扰物质，使其在血清中的浓度达到表3的要求。然后分别用实施例1和对照试剂（同实施例 2)，同时对比测定血清中总胆固醇的含量，加入不同干扰物质后各组的测定结果见表3。相 对偏差（%) =(干扰样本的测定均值一无干扰物质的样本的测定均值）/无干扰物质的测定 均值X 100%。
[0018] 表3实施例试剂抗干扰性能比较
由表3可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸< 2000以111〇1/1、胆红素< 986以111〇1/1、血 红蛋白<10.5 g/L对测试结果没有明显干扰。并且相较于对照试剂，实施例1试剂具有更 好的抗干扰能力。
【主权项】
1. 一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于包括试剂R，所述试 剂R的组成如下： CAPS缓冲液（ρΗ7· 0) 50mmol/L 4-氨基安替比林 1.Ommol/L 胆固醇酯酶（CHE) 2000U/L 胆固醇氧化酶（CHO) 2000U/L 过氧化物酶（POD) 2500U/L 3, 5-二氯-2-羟基苯磺酸钠（DHBS) 3. 5mmol/L 氯化镁 2. 5mmol/L 海藻糖 20g/L 甘露醇 20g/L 羟基乙叉二膦酸 2ml/L 十八烷基三甲基溴化铵. 0. 3g/L EMULGEN-707 0. 35ml/L 抗坏血酸氧化酶 2. 5KU/L， 胆红素氧化酶. 2KU/L 防腐剂. 0.5ml/L。2. 根据权利要求1所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征 在于试剂R中缓冲液为25°C，pH为7的CAPS(3 -（环己氨基）一 1 一丙磺酸）缓冲液缓冲 液。3. 根据权利要求1和权利要求2所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测 试剂，其特征在于所述防腐剂为PC-300。4. 根据权利要求1和权利要求2所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测 试剂，其特征在于所述抗干扰剂为抗坏血酸氧化酶和胆红素氧化酶。5. 根据权利要求1和权利要求2所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测 试剂，其特征在于所述金属离子螯合剂为羟基乙叉二膦酸。6. -种使用权利要求1-5中任一项所述的总胆固醇检测试剂来检测总胆固醇的检测 方法，其特征在于使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
【专利摘要】本发明一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，涉及总胆固醇检测技术领域，本发明在试剂R使用了生物缓冲液CAPS(3－（环己氨基）－1－丙磺酸)缓冲液，保证缓冲能力；在试剂的R中加入十八烷基三甲基溴化铵和EMULGEN-707两种表面活性剂，较好的提高试剂的乳化作用，提高试剂的准确度和特异性；在试剂R中加入了海藻糖、甘露醇等稳定剂，能够有效地改善试剂的稳定性；在试剂R中加入了羟基乙叉二膦酸，能够有效的螯合重金属离子，提高试剂的准确性；本发明还在试剂中加入了抗化学酸氧化酶和胆红素氧化酶，能够有效的去除抗坏血酸和胆红素的干扰，产品配置简单，价格低廉，非常适合大面积的临床推广。
【IPC分类】C12Q1/26, C12Q1/44, C12Q1/28, C12Q1/60
【公开号】CN105385751
【申请号】CN201510988460
【发明人】李静, 高雪萍, 谭柏清
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月24日