检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品领域，具体地，本发明涉及一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的 方法。
【背景技术】
[0002] 应用GB4789. 15-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母菌计数》 规定的方法检测胶类或果酱类原料中霉菌和酵母菌的含量，检测过程中样品会聚集成块， 无法检测到样品中的霉菌和酵母菌的含量。
【发明内容】
[0003] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提 出了一种能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，能够提高样品中霉 菌和酵母菌的检出率。
[0004] 在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法。 根据本发明的实施例，所述方法包括：
[0005] (1)将25g待测样品置于225ml生理盐水中，所述生理盐水预先盛装在第一无菌 均质袋中，并将所述待测样品在转速为lOOOOr/min的条件下进行第一均质处理1分钟；（2) 将取步骤（1)所得第一均质处理后样品IOg置于第二无菌均质袋中，并向第二无菌均质袋 中加入15ml孟加拉红培养基，并对所述第一均质处理后样品在转速为8000r/min的条件下 进行第二均质处理1分钟；以及（3)将步骤（2)所得的第二均质处理后样品进行刮涂处理， 并在27~29摄氏度下培养5天，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定，其 中，所述样品为胶类或果酱类物质。根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含 量的方法中，利用均质袋实现了培养基与样品的均匀混合，扩大了培养面积有利于菌落观 察与计数。通过上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法，能够检测到溶解后集结成块的 样品中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了样品中霉菌和酵母菌的检出率，提高了检测结 果的准确性降低了质量安全风险。
[0006] 在本发明的第二方面，本发明提出了一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法。 根据本发明的实施例，所述方法包括：（1)将待测样品置于生理盐水中，所述生理盐水预先 盛装在第一无菌均质袋中，并将所述待测样品进行第一均质处理；（2)将步骤（1)所得第一 均质处理后样品置于第二无菌均质袋中，并向第二无菌均质袋中加入孟加拉红培养基，并 对所述第一均质处理后样品进行第二均质处理；以及（3)将步骤（2)所得的第二均质处理 后样品进行刮涂处理和培养，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定。根据 本发明的实施例，在步骤（3)中的刮涂处理是指利用载玻片将样品刮匀并使样品均匀充满 整个均质袋。根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法中，利用均质 袋实现了培养基与样品的均匀混合，扩大了培养面积有利于菌落观察与计数；同时上述方 法能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了样品中霉菌和 酵母菌的检出率提高了检测结果的准确性降低了质量安全风险。
[0007] 根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法还可以进一步包 括如下附加技术特征之一：
[0008] 根据本发明的实施例，所述样品为胶类或果酱类物质。根据本发明的实施例，上述 方法能够检测到溶解后集结成块的胶类或果酱类物质中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高 了胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的检出率。
[0009] 根据本发明的实施例，在步骤（1)中，所述第一均质处理是在转速为lOOOr/min的 条件下进行1~2min，所述待测样品在所述生理盐水中的含量为10重量％;在步骤（2)中， 所述第二均质处理是在转速为8000r/min的条件下进行lmin，所述步骤（1)所得第一均质 处理后样品与所述孟加拉红培养基的用量比是l〇g: 15ml。在上述均质处理、用量的条件下， 胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的检出率进一步提高。
[0010] 根据本发明的实施例，步骤（3)包括：将刮涂处理后的样品在27~29摄氏度下 培养5天，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定。根据本发明的实施例，在 27摄氏度下培养5天后，单菌落形态变大，形态分明，以方便本领域技术人员对菌落进行计 数。在步骤（2)中，本领域技术人员可将步骤（1)中所得的第二均质处理后样品，取相同量 的样品至于2个均质袋中，继而在步骤（3)中，对菌落进行计数则可计算2个均质袋中菌落 的平均数，计数结果更加接近实际值，准确度更高。
[0011] 需要说明的是，本发明的技术方案是发明人通过大量的筛选试验而获得的，发明 人曾经尝试过其他的检测方案，并未获得有效的检测结果。例如，发明人采用过下列检测步 骤：（1)将待测胶类或果酱类物质用生理盐水梯度稀释100倍，得到稀释液；(2)取稀释液 与培养基在均质袋中混合，并静置培养，通过计数菌落数以确定待测胶类或果酱类物质中 霉菌和酵母菌的含量。将待测胶类或果酱类物质稀释100倍得到的稀释液与培养基混合静 置时，由于胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量较少，容易导致每次吸取的稀释液中 菌数不同，造成误差。另外，还将使检测限升高。
【具体实施方式】
[0012] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0013] 实施例1
[0014] 检测胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量的仪器、材料和操作方法如下所 述：
[0015] 1、实验仪器
[0016] 恒温培养箱：28 °C ± I °C ;
[0017] 冰箱：2°C ~5°C;
[0018] 天平：感量为0· lg;
[0019] 均质器。
[0020] 2、实验试剂与材料
[0021] 无菌吸管：ImL (具0.0 lmL刻度）、IOmL (具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头；
[0022] 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL ;
[0023] 无菌均质：直径90mm pH计或pH比色管或精密pH试纸；
[0024] 无菌均质袋：32cm*24cm ;
[0025] 载玻片。
[0026] 3、培养基的配制
[0027] 称取孟加拉红培养基36. 6g于1000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121°C高压 灭菌15分钟备用。
[0028] 4、操作过程
[0029] (1)称取25g样品置盛有225mL无菌水的无菌均质袋中，10000r/min均质Imin制 成1:10的均匀样品（稀释液）；
[0030] (2)称取IOg上述1:10的均匀样品（稀释液）置于无菌均质袋中，加入15ml孟 加拉红培养基，在均质机上8000r/min均质lmin，然后用载玻片将其刮匀并充满整个均质 袋中；
[0031] (3)将步骤⑵所得到的含有培养基的无菌均质袋置于28°C ±1°C培养5d。
[0032] 对比例I
[0033] 检测胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量的仪器、材料和操作方法如下所 述：
[0034] 1、实验仪器
[0035] 恒温培养箱：28 °C ± I °C