主链含双抗癌药两亲性高分子、制备方法及其纳米胶束的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学合成药物技术领域，具体设及一种主链含双抗癌药两亲性高分 子、制备方法及其纳米胶束。
【背景技术】
[000引 自1965年Rosenberg意外地发现了顺销抗癌活性W来，顺销、卡销及奥沙利销等 二价销药作为癌症化疗药物用W治疗一半W上的癌症，如睾丸癌、膀脫癌、肺癌等。然而J顿 销等销药几乎缺乏选择性，对正常组织和器官造成了极大的毒副作用，降低了病人对药物 的耐受度。更为严重的是，很多癌症对顺销等销药表现出先天耐药性，或者在多次化疗后产 生后天获得耐药性，都进一步限制了销药的化疗效用并增加了后期治疗的难度。
[0003] 二价销药的"四价化"改性近年来受到了研究者们的重视。八面体结构的四价销 药相比二价销药，其惰性程度较高，在血液循环中不易水解失活，毒副作用较低，而进入肿 瘤细胞后却可W在细胞内还原环境下还原成更具抗癌活性的二价销药发挥作用，故又称为 "四价销前药"。
[0004] 然而，就癌症治疗而言单一化疗药物的效果往往是有限的，尤其是针对上述多种 机制并存的顺销耐药性，仅靠销药自身往往无法获得良好的综合效果。近年来研究与临床 结果表明，将两种或两种W上化疗药物同时或先后应用进行联合化疗是一种非常有吸引力 的化疗手段，和单独药物化疗相比，联合化疗能够作用于肿瘤细胞不同的分子祀点，最大化 不同药物的化疗效果甚至逆转耐药性。然而无论上述哪种四价销前药形式的联合化疗，依 然存在体内分布广，易被代谢，生物利用率低，有时毒副作用还更大等问题。
[0005] 纳米药物控制释放体系尤其是高分子纳米控制释放体系，能够延长药物血液循环 时间，改善药代动力学；增加药物溶解性，控制释放降低药物的毒副作用和免疫原性；通过 "EPR效应"在肿瘤部位被动祀向蓄积药物，主动祀向修饰进一步增加肿瘤细胞主动摄取药 物。
[0006] 因此，将四价销前药，联合化疗W及高分子纳米控制释放体系相结合，设计简单、 确定、可控、有效的高分子纳米联合药物输送体系并解决顺销毒性和耐药性等问题依然有 非常大的探索和研究空间。基于此，在本专利申请人选用两亲性嵌段配位高分子纳米体系 进行联合药物输送：即针对肿瘤细胞产生顺销耐药性的细胞内销药摄取蓄积减少机制、增 强的损伤DNA修复机制和解毒机制，选用能够抑制蛋白憐酸酶（PP2A)活性阻断损伤DNA修 复的化疗药物去甲基斑莖素（demethylcantharidin，DMC)与销药联用，设计主链含双抗癌 药高分子胶束体系。该两亲性嵌段配位高分子纳米联合药物输送体系与其它结合四价销 前药的高分子纳米联合药物输送体系有很大的不同：一是通过一步缩聚反应就可W合成主 链含有上述两种化疗药物的两亲性嵌段配位高分子并自组装成纳米胶束，制备简单、结构 明确；二是含有两种药物的四价销前药作为单体直接参与聚合，药物间比例精确确定的同 时减少了其它辅料提高了药物在体系中的负载比例；Ξ是该体系药物是在主链上的，可W 避免突释；而进入细胞后四价销药在细胞内还原环境下或者光照条件下会还原释放二价销 药，使得胶束主链结构迅速崩解；随后通过溶酶体酸性环境酸解释放去甲基斑莖素，因此该 体系具有非常可控的细胞内祀向药物释放能力；四是该体系同时针对肿瘤细胞产生顺销耐 药性的多种耐药机制即四价销前药缓和的解毒机制，去甲基斑莖素阻断的DNA修复机制W 及纳米胶束增加的细胞摄取机制，多种机制共同作用下W期彻底逆转顺销耐药性。本专利 研究为解决高分子纳米联合输送体系中的问题提供了全新的设计思路，同时为有效逆转顺 销耐药性和重新认识癌症顺销耐药性机制等关键科学问题奠定实验研究基础。本专利成果 的运用一方面有望在临床上克服目前常用的抗癌药物存在的毒副作用大的缺点，另一方面 可通过两亲性嵌段配位高分子纳米联合药物输送体系逆转顺销耐药性的策略，开辟一条具 有实际应用价值的简单、确定、可控、有效的抗癌新路径，具有相当大的社会效益和经济效 益。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为了提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子、制备方法及其纳米 胶束，该高分子具有较高的抗肿瘤活性和较低的细胞毒性。
[0008] 本发明首先提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子，具有式（I)所示结构：
[0009]
(I)
[0010] 其中，表示聚乙二醇mPEG-NHz或mPEG-OH;
[0011] ，，…，，隶示四价销斑莖素配合物或四价销去甲斑基莖素配合物；
[001引 胃一表示二胺。
[0013] 优选的是，所述的二胺为乙二胺、下二胺或赃嗦。
[0014] 本发明还提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子的制备方法，包括如下：
[001引步骤一：将销（Π)化合物与双氧水反应，得到销（IV)化合物；
[0016] 步骤二：将步骤一得到的销（IV)化合物和斑莖素反应，或者将步骤一得到的销 (IV)化合物和去甲基斑莖素反应，得到销（IV)斑莖素配合物或销（IV)去甲基斑莖素配合 物；
[0017] 步骤Ξ:将步骤二得到的销（IV)斑莖素配合物或销（IV)去甲基斑莖素配合物和 二胺、聚乙二醇反应，得到主链含双抗癌药两亲性高分子。
[0018] 优选的是，所述的销（II)化合物为顺销、奥沙利销、卡销或二价销双叠氮配合物。
[0019] 优选的是，所述的二价销双叠氮配合物的结构如下：
[0020]
[0021] 优选的是，所述的步骤二的反应溫度为65-70°C，反应时间为12-2地。
[0022]优选的是，所述的销（IV)化合物和斑莖素的摩尔比为1 :(2-6)，销（IV)化合物和 去甲斑莖素的摩尔比为1:(2-6)。
[0023] 优选的是，所述的将步骤二得到的销（IV)斑莖素配合物或销（IV)去甲基斑莖素 配合物和二胺、聚乙二醇反应，具体步骤为：
[0024] ①将1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亚胺和N-径基班巧酷亚胺加入到销（IV)斑 莖素配合物或销（IV)去甲基斑莖素配合物中，加入二胺反应，得到反应溶液；
[0025] ②将聚乙二醇加入上述反应溶液中反应，得到主链含双抗癌药两亲性高分子。
[0026] 优选的是，所述的销（IV)斑莖素配合物、二胺和聚乙二醇摩尔比为1: (0.9-0.95) :(0.2-0.4);销（IV)去甲基斑莖素配合物、二胺和聚乙二醇摩尔比为1 : (0. 9-0. 95) : (0. 2-0. 4)。
[0027] 优选的是，所述的①的反应溫度为室溫，反应时间为24-7化。
[0028] 优选的是，所述的②的反应溫度为室溫，反应时间为12-2地。
[0029] 本发明还提供上述主链含双抗癌药两亲性高分子制备得到的纳米胶束。
[0030] 本发明的有益效果
[0031] 本发明首先提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子，结构式如式（I)所示，该两 亲性高分子将四价销斑莖素配合物或四价销去甲斑莖素配合物引入高分子主链中，四价销 斑莖素或四价销去甲斑莖素配合物为主体，通过酷胺键连接作为疏水段，聚乙二醇链为亲 水段，得到的高分子具有较高的抗肿瘤活性和较低的细胞毒性。
[0032] 本发明还提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子的制备方法，该方法是将四价销 与斑莖素或去甲基斑莖素配合使用，再经酷胺化缩聚生成两亲性嵌段配位直链高分子，该 制备方法简单、原料易得。
[0033] 本发明还提供上述主链含双抗癌药两亲性高分子制备得到的纳米胶束，对制备的 纳米胶束进行细胞毒性测试，细胞毒性实验结果表明，本发明提供的纳米胶束对癌细胞如 人肺腺癌A549细胞有很强的杀伤效果，提高销类药物的抗癌效果。
【附图说明】
[0034] 图1为本发明实施例4得到的顺销去甲基斑莖素配合物的核磁谱图；
[0035] 图2为本发明实施例4得到的顺销去甲基斑莖素配合物的质谱谱图；
[0036] 图3为本发明实施例4制备得到的顺销去甲基斑莖素配合物和本发明实施例4制 备得到主链含双抗癌药两亲性高分子mPEGzk-Pt-mPEGzk的红外光谱图；
[0037] 图4为本发明实施例4制备得到的主链含双抗癌药两亲性高分子 mPEGzk-Pt-mPEGzk的GPC谱图；
[0038] 图5为本发明实施例11制备得到的主链含双抗癌药两亲性高分子药物 mPEGzk-Pt-mPEGzk纳米胶束的DLS图；
[0039] 图6为本发明实施例11制备得到的主链为双抗癌药两亲性高分子药物 mPEGzk-Pt-mPEGzk纳米胶束的扫描电镜照片；
[0040] 图7为顺销、去甲基斑莖素、本发明实施例4中顺销去甲基斑莖素配合物W及本发 明实施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk纳米胶束分别处理L929细胞2地，4化和72h的细胞毒性 曲线图；
[00川图8为顺销、去甲基斑莖素、本发明实施例4中顺销去甲基斑莖素配合物W及本发 明实施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk纳米胶束分别处理化La细胞2地，4化和72h的细胞毒性 曲线图；
[004引图9为顺销、去甲基斑莖素、本发明实施例4中顺销去甲基斑莖素配合物W及本发 明实施例11中mPEGzk-Pt-mPEGzk纳米胶束分别处理A549细胞2地，4化和72h的细胞毒性 曲线图。
【具体实施方式】
[0043] 本发明首先提供一种主链含双抗癌药两亲性高分子，具有式（I)所示结构：
[0044]
(I)
[004引其中，細WWW:表示聚乙二醇mPEG-NHz或mPEG-OH，所述的聚乙二醇的数据分子量 优选为 1000-5000 ;
[0046].....，隶示四价销斑莖素配合物或四价销去甲基斑莖素配合物；
[0