从狭叶金粟兰中分离纯化的一对苯基不饱和三元醇异构体化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种从狭叶金粟兰中分离纯化的一对苯基不饱和=元醇旋光异构体 化合物，同时还设及该两种化合物的制备方法，W及其在抑制单纯瘤疹病毒2型化SV-2)中 的应用。
【背景技术】
[0002] 金粟兰科植物在我国分布有3个属16个种，10种为我国特有植物，其中狭叶金粟 兰（化Ioranthus angustifolius)即为该科植物金粟兰属（化Ioranthus)我国特有种。该 科植物大部分均可做药用，多具有抗菌消炎，散疲活血的功效。现代药理活性研究表明该 科植物多具有抗肿瘤、抗菌、增强免疫、抗病毒、抗溃瘍、镇痛、抗血小板集聚、收缩子宫等活 性。目前从金粟兰科植物中共分离得到化合物约200个，类型包括祗类及聚合物、黄酬及黄 酬巧、香豆素、酷胺、有机酸、酱体及酱体皂巧等。然而，已有所设抗病毒研究均集中于对该 科植物中特征性成分（倍半祗聚合物）的抗HIV病毒、乙肝病毒和流感病毒的研究。
[0003] 瘤疹病毒主要侵犯外胚层来源的组织，包括皮肤、粘膜和神经组织。感染部位和 引起的疾病多种多样，并有潜伏感染的趋向，严重威胁人类健康。其中单纯瘤疹病毒2型 (服V-2)是生殖器瘤疹的主要病原，一旦感染，患者将终身携带运种病毒并周期性地出现生 殖器瘤疹性损伤，HSV-2感染还会增加HIV-I传播的风险，且目前没有针对服V-2的有效疫 苗问世。在抗瘤疹病毒药物治疗中，阿昔洛韦（ACV)是目前公认的首选药物，同时许多中医 药汤剂、町剂也有治疗作用。最近研究表明：中成药金粟兰搔剂和金粟兰町剂外敷配合红外 线照射治疗带状瘤疹，能减轻疼痛，促进瘤疹吸收，缩短病程（中国中医急症2014,23(7): 1335-1336;湖北科技学院学报（医学版）2015,29 (2) :128-129)。然而，金粟兰中起抗瘤疹 病毒的活性成分基础国内外尚无研究报道。
[0004] 本发明在对我国特有植物狭叶金粟兰进行化学成分分离鉴定及活性筛选研究中 发现，该植物所含的一对苯基不饱和=元醇的旋光异构体具有良好的抗HSV-2病毒活性。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种一对苯基不 饱和=元醇的旋光异构体，同时提供从狭叶金粟兰中分离纯化的该对苯基不饱和=元醇的 旋光异构体的方法，W及该两种化合物在抗单纯瘤疹病毒2型化SV-2)中的应用。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：具有下述式（1)和式似所 示的一对旋光异构体化合物，
[0007]
W08] 其中，式（I) :(-)5-对甲氧基苯基-4巧)-締-1,2, 3-立径基戊烧的旋光值为负； 式（2) : (+) 5-对甲氧基苯基-4巧)-締-1，2, 3- S径基戊烧的旋光值为正。
[0009] 本发明同时提供上述异构体化合物的制备方法，步骤如下：
[0010] A.取狭叶金粟兰地上部分洗净、风干、粉碎，按Ig狭叶金粟兰粉加5-10ml95%体 积浓度的乙醇的比例，于狭叶金粟兰粉中加入乙醇在室溫下浸提3次，每次浸提3-7天， 过滤，合并滤液，减压浓缩回收乙醇后，得到膏状乙醇浸提物；其中，狭叶金粟兰粉的粒度 《20目。
[0011] B.按Ig乙醇浸提物加40-80ml水的比例，将乙醇浸提物加水分散后，常溫下，先 用等体积的石油酸萃取3次W去除色素，每次萃取3-5小时，再用等体积的乙酸乙醋萃取3 次，每次萃取3-5小时，合并乙酸乙醋萃取层，减压回收乙酸乙醋，干燥，得乙酸乙醋浸膏； 其中，石油酸和乙酸乙醋皆为分析纯；
[0012] C.将乙酸乙醋浸膏用小孔吸附树脂去除色素，并将收集到的洗脱液浓缩，得浓缩 物；
[0013] 其中，将乙酸乙醋浸膏用小孔吸附树脂除去色素是将乙酸乙醋浸膏用甲醇溶解为 饱和溶液后经小孔吸附树脂吸附至饱和，先用水洗脱至无色，再用85%体积浓度的甲醇洗 脱4-8个柱体积，收集洗脱液；其中，甲醇为分析纯。
[0014] 上述小孔吸附树脂只要是能用于去除乙酸乙醋膏色素的皆可，如MCI GEL CHP 20P 37-75um 或 SMB MCI GEL 50-70um 等。
[0015] D、将浓缩物用C-180DS反相色谱柱进行层析分离，W体积比为3:7 - 7:3的甲醇 与水的混合液进行梯度洗脱，收集甲醇与水的体积比为4:6时的洗脱液，经薄层色谱检测， 合并在UV 254nm下的紫外显色组分；其中，甲醇为分析纯。
[0016] E.将该组分用葡聚糖凝胶柱（S巧hadex LH-20)柱层析进行分离纯化，经薄层色 谱检测，合并主点馈分并减压浓缩，得淡黄色膏状物；其中，采用葡聚糖凝胶柱柱层析分离 纯化时的洗脱剂为甲醇，该甲醇为分析纯。
[0017] F.将该膏状物用甲醇溶解后经半制备液相色谱分离，得到单体化合物1和单体化 合物2。 阳0化]上述采用半制备液相色谱分离时，所用色谱柱为YMC-Pack ODS-A COlmnn (250mmX IOmm I.D. ;S-5ym，12nm)，洗脱剂为 36 % 体积浓度的 MeOH-HzO,流速为 3血/min,检测波长为254nm ;在保留时间tK= 18. Omin收集到单体化合物1，在保留时间t R =28. Omin收集到单体化合物2。
[0019] 经高分辨质谱（HRESIMS)、旋光（[a])、紫外光谱0JV)、红外光谱（IR)和核磁共 振波谱（iH-NMR、"C-NMR、服QC、HMBC和化Ih-COSY)的数据对化合物进行结构鉴定，确证所 得单体化合物I为（-)5-对甲氧基苯基-4巧)-締-1，2, 3- S径基戊烧，单体化合物2为 (+) 5-对甲氧基苯基-4巧)-締-1，2, 3- S径基戊烧。
[0020] 本发明采用MT法结合Reed-Muench法分别测定、计算上述二种化合物对单纯瘤 疹病毒1型化SV-1)和单纯瘤疹病毒2型化SV-2)的半数抑制浓度（IC J和选择指数SI。 发现该二种化合物对单纯瘤疹病毒2型化SV-2)有较好的抑制活性。因此，本发明还提供 上述二种单体化合物在抑制单纯瘤疹病毒2型化SV-2)中的应用，W及在制备抗瘤疹病毒 药物中的应用，该瘤疹病毒为单纯瘤疹病毒2型。
[0021] 如此，本发明从狭叶金粟兰中得到两个能抑制单纯瘤疹病毒2型化SV-2)的活 性成分，使得利用狭叶金粟兰中活性成分比利用中成药金粟兰植物町剂、擦剂治疗瘤疹更 加高效、可控；本方法操作简便，且使用的填料小孔吸附树脂、C-180DS、葡聚糖凝胶等都可 W重复使用，成本低，污染小。且本发明的二种化合物结构新颖，具有良好瘤疹病毒2型 (服V-2)抑制活性，能应用于制备抗瘤疹病毒药物或活性先导物。
【附图说明】
[0022] 图1是本发明单体化合物1和2等量混合后的HPLC检测图。
[0023] 其中，1表示单体化合物1，2表示单体化合物2。
【具体实施方式】 阳〇24] 实施例1 阳0巧]1.化合物的制备 阳0%] 取5kg风干粉碎过的狭叶金粟兰地上部分，用40L 95%体积浓度的乙醇于室溫下 浸提3次，每次5天，过滤，合并滤液，减压浓缩回收乙醇后，得到膏状乙醇浸提物500g ;将 乙醇浸膏用3化水分散后，室溫下先用等体积的石油酸萃取3次（每次4小时）W去除色 素，再用等体积的乙酸乙醋萃取3次，每次萃取地，合并乙酸乙醋萃取层，减压回收溶剂， 得乙酸乙醋浸膏120g ;将乙酸乙醋浸膏用甲醇溶解为饱和溶液，上已处理好的小孔吸附树 脂（MCI GEL CHP 20P37-75um)，依次用水、85 %体积浓度的甲醇洗脱，收集洗脱液、浓缩；取 85%甲醇洗脱部分5邑用（：-18005反相柱进行分离，^甲醇/水（3:7 - 7:3，乂八）进行梯 度洗脱，每个浓度收集10瓶，每瓶120mU取在UV 254皿下的紫外显色组分即甲醇：水= 4:6(v/v)洗脱部分第1-3瓶，利用葡聚糖凝胶（SephadexLH-20)柱层析分离纯化（甲醇 洗脱），经薄层色谱检测，合并主点馈分并减压浓缩，得淡黄色膏状物，将该膏状物用甲醇溶 解后经半制备液相色谱分离（洗脱剂为36%体积浓度的MeOH-HzO,流速3mL/min，检测波长 254nm，色谱柱型号为 YMC-Pack ODS-A column (250mmX10mm I.D. ;S-5ym，12nm))，在保留 时间tw= 18. Omin收集到35mg单体化合物1，在保留时间t K= 28. Omin收集到40mg单体 化合物2。经HPLC检测纯度为98% W上，见图1