。
[0027] 2.化合物的结构鉴定
[0028] 单体化合物1，片状晶体，易溶于甲醇，旋光值[G'] 2〇5-化08(C0.6, MeOH);紫外 吸收 UV(MeOH) A max QogO 240化7)皿；红外吸收 IR 化 Br) Umax 3285 化 r)，2930, 1605, 15 10, 1439, 1245, 1076cm-i;高分辨质谱化RESIM巧m/z:247. 0932[M+Na] + 结合古和"C NMR 谱数据（表1)确定分子式为Ci2Hi6〇4;红外光谱中3285cm 1吸收值，表明结构中有径基，而 1605cm I和1510cm I值则有芳香环存在。进一步分析化合物的氨谱和碳谱，表明结构中含 有1个甲氧基，3个径基取代饱和碳，和一个反式双键。另外，一对邻位偶合且积分各自为 2H的芳轻质子组的出现，表明结构中含有1个特征性对位取代的苯环。上述片段信息进一 步结合二维谱的分析，首先通过服QC归属碳氨对应关系，H-H COSY谱图中H-I与H-2、H-4 和H-5有明显相关，结合HMBC谱图中H-I与C-2和C-3、H-5与C-3和C-4相关，表明结构 中具有一个巧)1，2, 3- S径基-4-戊締基片段。进一步的HMBC谱图分析发现上述片段的 反式双键端与苯环碳相连，结合已知苯环为对取代，如此，剩余的甲氧基必然连接在苯环 的对位。据此，该化合物结构最终鉴定为：（-)5-对甲氧基苯基-4巧)-締-1，2,3-S径 基戊烧。
[0029] 单体化合物2,白色粉末，易溶于甲醇，旋光值[>]f + .0.17(C0.9, MeOH);紫 外吸收 UV (MeOH) Amax(log O 240 (3. 6) nm ;红外吸收 IR 化Br) Umax33286 化r)，2929, 1605 ，1510, 1440, 1243, 1075cm-1;高分辨质谱 HRESIMS m/z :247. 0932 [M+Na] 古和"C NMR 数 据见表1。通过对比化合物1和2的上述理化性质和光谱数据，发现二者仅在存在状态 (化合物1为片状晶体、化合物2为白色粉末）、旋光值（化合物1为负值、化合物2为正 值）和液相色谱保留时间上明显不同，其余测试数据基本一致。因此根据旋光值的为一正 一负，确定化合物1和2为一对旋光异构体。化合物2的结构鉴定为：(+)5-对甲氧基苯 基-4巧)-締-1，2, 3- S径基戊烧。
[0030] 表1单体化合物1和2的电、1化NMR数据（MeOD, 400MHz)
[0032] 注：括号外数值代表化学位移，括号中字母t (M、S、m代表质子禪合类型，J代表 禪合常数。
[0033] 上述单体化合物1和2的结构式分别如下：
[0034]
[0036] 实施例2
[0037] 巧m项目：化合物I和2抗单纯瘤疹病毒2型腿V-。活性筛选。
[0038] 测试原理：W Vero(非洲绿猴肾）细胞为病毒宿主，测定样品抑制单纯瘤疹病毒2 型引起Vero细胞病变程度。
[0039] 测试材料和方法：
[0040] 1、病毒株：HSV-2 (SAV)，购自ATCC。 阳0川 2、样品处理：样品临用前用DMSO配成母液，检测时用培养液稀释成500 y g/mL后 再作3倍稀释，共8个稀释度。 阳0创 3、阳性对照药：无环鸟巧（ACV)，由湖北科益制药厂生产。
[0043] 4、测试方法：Vero细胞种96孔培养板，24小时后感染瘤疹病毒2型10 4,吸附 2小时，弃病毒液，加入含有不同稀释度样品及阳性对照药的维持液，同时设细胞对照孔 和病毒对照孔，待病毒对照组病变程度（CP巧达4+时观察各组细胞病变程度（CP巧，用 Reed-Muench法分别计算样品对单纯瘤疹病毒2型化SV-2)的半数抑制浓度（IC 5。）。实验 表明，化合物1对单纯瘤疹病毒2型化SV-2) ICw值为0. 744mM，选择指数SI为3. 0,化合物 2对单纯瘤疹病毒2型化SV-2) ICso值为0. 248mM，选择指数SI为7. 0,化合物1和2显示 了良好的抑制瘤疹病毒的活性。可见，本发明所述的一对苯基不饱和=元醇的旋光异构体 可用于开发抗单纯瘤疹病毒2型的药物或作为活性先导物。
【主权项】
1. 具有下述式（1)和式（2)所示的一对旋光异构体化合物，其中，式（1) :(-)5-对甲氧基苯基-4(E)-烯-1，2, 3-三羟基戊烷的旋光值为负；式 (2) : (+) 5-对甲氧基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基戊烷的旋光值为正。2. 制备权利要求1所述异构体化合物的方法，其特征在于，所述方法步骤如下： A. 取狭叶金粟兰地上部分洗净、风干、粉碎，按lg狭叶金粟兰粉加5-10ml95%体积浓 度的乙醇的比例，于狭叶金粟兰粉中加入乙醇在室温下浸提3次，每次浸提3-7天，过滤，合 并滤液，减压浓缩回收乙醇后，得到膏状乙醇浸提物； B. 按lg乙醇浸提物加40-80ml水的比例，将乙醇浸提物加水分散，常温下，先用等体积 的石油醚萃取3次以去除色素，再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，每次萃取3-5小时，合并 乙酸乙酯萃取层，减压回收乙酸乙酯，干燥，得乙酸乙酯浸膏；其中，石油醚和乙酸乙酯皆为 分析纯； C. 将乙酸乙酯浸膏用小孔吸附树脂去除色素，并将收集到的洗脱液浓缩，得浓缩物； D. 将浓缩物用C-18ODS反相色谱柱进行层析分离，以体积比为3:7 - 7:3的甲醇与水 的混合液进行梯度洗脱，收集甲醇与水的体积比为4:6时的洗脱液，经薄层色谱检测，合并 在UV254nm下的紫外显色组分； E. 将该组分用葡聚糖凝胶柱柱层析分离纯化，经薄层色谱检测，合并主点馏分并减压 浓缩，得淡黄色膏状物； F. 将该膏状物用甲醇溶解后经半制备液相色谱分离，得到单体化合物（-)5-对甲氧 基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基戊烷和（+) 5-对甲氧基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基戊 烷。3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤A中狭叶金粟兰粉碎后的粒度 彡20目。4. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤C中将乙酸乙酯浸膏用小孔吸附树 脂除去色素是将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解为饱和溶液后经小孔吸附树脂吸附至饱和，先用 水洗脱至无色，再用85 %体积浓度的甲醇洗脱4-8个柱体积，收集洗脱液。5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述小孔吸附树脂为MCIGELCHP20P 37-75um或SMBMCIGEL50-70um。6. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤E中采用葡聚糖凝胶柱柱层析分离 纯化时的洗脱剂为甲醇。7. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤F中采用半制备液相色谱分离时的 色谱柱为YMC-PackODS-Acolumn，洗脱剂为36%体积浓度的Me0H-H20,流速为3mL/min， 检测波长为254nm。8. 如权利要求1所述的单体化合物（-)5-对甲氧基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基戊 烷和（+) 5-对甲氧基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基戊烷在抑制单纯疱疹病毒2型中的应 用。9. 如权利要求1所述的单体化合物（（-)5-对甲氧基苯基-4 (E)-烯-1，2, 3-三羟基 戊烷和（+)5-对甲氧基苯基-4(E)-烯-1，2, 3-三羟基戊烷在制备抗单纯疱疹病毒2型药 物中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种从药用植物狭叶金粟兰(Chloranthus？angustifolius)中分离纯化的一对苯基不饱和三元醇光学异构体化合物，该二种化合物是先用乙醇浸提狭叶金粟兰，经石油醚、乙酸乙酯萃取后，乙酸乙酯层再经小孔吸附树脂、C-18？ODS反相色谱柱层析分离、葡聚糖凝胶柱层析分离纯化，最后经半制备液相分离得到高纯度的化合物(–)5-对甲氧基苯基-4(E)-烯-1,2,3-三羟基戊烷和(+)5-对甲氧基苯基-4(E)-烯-1,2,3-三羟基戊烷。所得化合物纯度高，纯化过程中所使用的小孔吸附树脂、C-18？ODS、葡聚糖凝胶都可以重复利用；并且经抗病毒活性筛选实验证实，该二种化合物具有良好的抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)活性，可应用于制备抗疱疹病毒药物或活性先导物。
【IPC分类】A61K31/085, C07C41/34, C07C41/36, A61P31/22, C07C43/23
【公开号】CN105294410
【申请号】CN201510824370
【发明人】丁文兵, 李冠华, 贺华良, 李有志
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月24日