一种从金针菇或金针菇菇根中提取纯化金针菇多糖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种从金针茹或金针茹茹根中提取纯化金针茹多糖的方法，属于食品
技术领域。
【背景技术】
[0002] 金针茹（Flammulinavelutiper)别名毛柄金钱茹、树茹、冬茹、朴茹、构菌等，是一 种药食两用的食用菌，不仅口感爽滑，味道鲜美，是人们餐桌上的一道常见佳肴，也因含有 多种生理活性成分，具有良好的保健作用而具有较高的药用价值。
[0003] 金针茹主要的功能成分是金针茹多糖，具有抗肿瘤、免疫调节、降低胆固醇、降血 压、改善记忆功能、抗炎症、抗病毒、抑菌W及抗氧化等多种功能活性。研究表明，金针茹多 糖对小鼠肉瘤S~180有明显的抑制作用，显著的免疫增强活性，并能显著降低CC14所致 的小鼠血浆ALT(丙氨酸转氨酶）和AST(天口冬氨酸转氨酶）活性，明显升高肝脏SOD的 活性，显著降低脂质过氧化产物MDA的含量。
[0004]我国已实现工厂化生产金针茹，2013年总产量为272. 9万吨，金针茹作为初级农 产品直接销售，市场已出现明显的饱和滞销，茹农增产不增收情况严重，迫切需要进行金针 茹深加工与新产品开发，增加产品附加值，为金针茹鲜品销售出路提供一个更广阔市场。 阳〇化]目前金针茹多糖的提纯多延袭经典步骤，主要包括采用醇沉得到粗多糖，Sevage 试剂（正下醇氯甲烧=1 :4)沉淀蛋白，活性炭吸附去除色素，透析去除小分子物质，再 次醇沉得到提取多糖等繁多步骤，且设及使用大量的有机溶剂和纯化介质，操作复杂，生产 成本高，不利于大量生产。
[0006] 中国专利文献CN103788223A公开了 一种采用复合酶解-联合超声提取金针茹 多糖，中国专利文献CN102702378A公开了一种采用超声提取金针茹多糖，中国专利文献 CN104045731A公开了一种采用热水加酶解提取金针茹多糖，后期提纯多糖时均进行了 Sevage法脱除蛋白、活性炭脱色素、透析等步骤，整个过程设及多种有机溶剂的使用和去 除，操作步骤繁琐，效率低、耗时较长，且增加了生产成本，不利于金针茹多糖的工业化生 产。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种操作简便、绿色环保、处理过程耗时少的高效纯化金 针茹多糖的方法，方便快捷进行工业化生产。
[0008]本发明的技术方案如下：
[0009] 一种从金针茹或金针茹茹根中提取纯化金针茹多糖的方法，包括步骤如下：
[0010] 1)将金针茹或金针茹茹根进行干燥处理，然后进行粉碎，得金针茹粉；
[0011] 2)提取：金针茹粉用新煮沸并放凉的蒸馈水浸泡并置于-15°c~-20°c下冷冻 3~7小时，取出后置于微波炉中处理20~40分钟，每隔4分钟停止一次，4~8分钟/次， 然后过滤，残渣再用新煮沸并放凉的蒸馈水浸泡，重复冷冻和微波处理过程2~5次，合并 滤液即为金针茹粗多糖提取液；
[0012] 3)金针茹粗多糖提取液离屯、得到的上清液进行减压浓缩，得到粗多糖浓缩液；
[0013] 4)所述粗多糖浓缩液W100~300血/min的流速过大孔树脂，反复循环，直到洗脱 液在450nm的吸光值不发生变化；然后用3~5倍柱床体积的纯水清洗树脂柱，W置换树脂 柱中的多糖提取液，得到多糖洗脱液；
[0014] 5)将多糖洗脱液经去杂、截留后，冷冻干燥至恒重后，得到粉末即为纯化后金针茹 多糖。
[0015] 本发明优选的，金针茹或金针茹茹根的干燥处理为溫压差膨化干燥：将金针茹或 金针茹茹根平铺后置于变溫压差膨化罐中，将变溫压差膨化罐内溫度升至80-100°C，压强 升至高于罐外大气压0. 1-0. 3MPa，在此溫度和压强下保溫5-15min，然后将罐内压强瞬间 降至真空状态，并在此真空状态下降溫至60-80°C，保持所述真空状态2-3小时，使所述金 针茹或金针茹茹根含水量< 10%，最后将罐内溫度降至20-35°C，解除罐内真空状态，得到 干燥的金针茹或金针茹茹根。
[0016] 本发明优选的，所述的过滤为采用板框过滤机进行过滤，微波功率为400~620W。
[0017] 本发明优选的，干燥后的金针茹或金针茹茹根与新煮沸并放凉的蒸馈水的体积比 为1:2~1:7,残渣与新煮沸并放凉的蒸馈水的体积比为1:1~1:4。
[0018] 本发明优选的，步骤3)金针茹粗多糖提取液离屯、条件为：转速4000rpm/min，离屯、 时间20~30min。
[0019]本发明优选的，步骤如减压浓缩溫度为70~80°C，减压浓缩至原体积的20%~ 30%。
[0020] 本发明优选的，所述的大孔树脂为大孔树脂D900、大孔树脂LS-4抓、大孔树脂 AB-8、大孔树脂X-5非极性大孔吸附树脂。
[0021] 本发明优选的，步骤5)多糖洗脱液去杂为多糖洗脱液经孔径为50~200nm的陶 瓷膜除去颗粒状杂质。
[0022] 本发明优选的，步骤5)中截留先经截留分子量为100000的超滤有机膜截留，再经 截留分子量为1000~10000的超滤有机膜截留，当渗透侧不再有透过液流出时，加50~ 20化纯水使循环继续，得到截留液。
[0023] 本发明的提取方法结合大孔吸附树脂纯化金针茹多糖的制备方法，可简便、快速、 有效去掉金针茹提取液中的蛋白、色素和脂质等杂质，用来纯化的介质可再生利用，具有制 备工艺简单、操作时间短、处理量大等优点，能有效降低企业生产成本，便于规模化生产。纯 度为 57. 2%~58. 3%。
[0024] 本发明的有益效果在于：
[0025] 1、本发明的提取方法先将待提取物质冷冻至-15°C到-20。然后进行融化，细胞 中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可W使细胞破裂。微波加热使细胞内水分子吸收 微波能后溫度迅速上升并汽化，产生的压力使细胞壁破碎，进一步促进了细胞壁的破碎效 果，细胞壁破裂，细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，使金针茹多糖更易倾出，大大提 高了多糖的提取效率。可实现金针茹多糖大批量连续性提取，适于工业化生产。
[00%] 2、本发明的提取方法结合可再生使用、处理量大的大孔吸附树脂纯化工艺，分离 介质去除蛋白、色素和其它的小分子化合物，操作简单，重复性好，产物纯度高，且纯化、 除杂效果更好，使多糖的利用率及纯度均得到提高，提取纯度从22.I%提高到57. 2%~ 60%。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例对本方明做进一步的说明，但不局限于此： 阳0測 实施例1
[0029] 一种从金针茹或金针茹茹根中提取纯化金针茹多糖的方法，步骤如下：
[0030] 1)将金针茹或金针茹茹根进行干燥处理，干燥处理具体步骤如下：将金针茹或金 针茹茹根平铺后置于变溫压差膨化罐中，将变溫压差膨化罐内溫度升至95°C，压强升至高 于罐外大气压0.2MPa，在此溫度和压强下保溫lOmin，然后将罐内压强瞬间降至真空状态， 并在此真空状态下降溫至75°C，保持所述真空状态2小时，使所述金针茹或金针茹茹根含 水量< 10%，最后将罐内溫度降至25°C，解除罐内真空状态，得到干燥的金针茹或金针茹 茹根，干燥后的金针茹或金针茹茹根然后进行粉碎，过120目筛，得金针茹粉；
[0031] 2)提取：金针茹粉用2倍重量的新煮沸并放凉的蒸馈水浸泡并置于-15°c的冰箱 中冷冻7小时，取出后置于微波炉中处理30分钟（每隔4分钟停止一次，5分钟/次）后， 采用板框过滤机进行过滤，残渣再用4倍重量的新煮沸并放凉的蒸馈水浸泡，重复冷冻和 微波处理过程3次，微波功率为500W，合并滤液即为金针茹粗多糖提取液；
[0032] 3)W4000巧m/min的转速离屯、处理金针茹粗多糖提取液25min，得到的上清液在 78°C下采用旋转蒸发仪将上清液减压浓缩至原体积的25%，得到粗多糖浓缩液；
[003引4)所述粗多糖浓缩液W250mL/min的流速过大孔树脂，大孔树脂为大孔树脂D900,反复循环，直到洗脱液在450nm的吸光值不发生变化；然后用5倍柱床体积的纯水清 洗树脂柱，W置换树脂柱中的多糖提取液，得到多糖洗脱液；大孔吸附树脂处理：取大孔吸 附用适量乙醇浸泡24hW上，去离子水洗至无醇味，2%~5%盐酸浸泡3~化，水洗至中 性，2%~5%化OH浸泡3~5h，水洗至中性。
[0034] 处理树脂进行湿法装柱（〇40mmX457mm)，树脂自由沉降形成平整柱床层，去离子 水淋洗柱床3BV~4BV，待用。
[0035] 5)将多糖洗脱液经经孔径为IOOnm的陶瓷膜除去颗粒状杂质去杂，然后进行截 留，截留先经截留分子量