一种对硫化氢快速响应的荧光探针及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于合成与技术领域，具体设及一种对硫化氨快速响应的巧光探针及其制 备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 硫化氨气体作为一种毒性分子已被熟知，但近来研究发现其可作为抗氧化、缺血 再灌注损伤、抗菌消炎、细胞调亡等生命活动的信号分子，因此发展一种快速、准确的硫化 氨的传感器极为重要。尽管现在已经有多种硫化氨的检测手段，但是大多基于电化学、气相 色谱等原理，不能快速、原位、可视化的检测硫化氨。
[0003] 巧光成像技术已经发展成为动态监控活细胞及活体中生物分子事件的最重要手 段。新型巧光成像传感器的发展极大地促进了细胞生物学W及医学诊断成像等的进步。但 大多染料都容易被光漂白，不能进行长时间多次扫描成像，因此在长期观察细胞生命活动 时，巧光染料探针的抗光漂白性极为重要。
【发明内容】
[0004] 本发明目的在于解决现有技术中的存在的技术问题，提供一种对硫化氨快速响应 的巧光探针及其制备方法与应用。该巧光探针是一种抗光漂白性好、聚集诱导发光的巧光 探针灯PE-NP)，它对硫化氨极其敏感，随硫化氨浓度增加，巧光发射及吸收强度增大。将其 成功应用于活细胞及线虫活体染色，不用洗出探针解育液，便可直接进行共聚焦成像，基本 无背景巧光，效果良好。
[0005] 为了解决W上技术问题，本发明采取的技术方案为：
[0006] 一种对硫化氨快速响应的巧光探针，所述巧光探针的结构式为：
[0007]
[0008] 上述巧光探针的制备方法，包括如下步骤：
[0009] 径基四苯乙締与2, 4-二硝基漠苯反应，生成所述巧光探针，命名为TPE-NP。
[0010] 优选的，径基四苯乙締和2, 4-二硝基漠苯的物质的量之比为1:2-1:4。 W11] 优选的，所述反应使用的催化剂为活化的碳酸钟。活化的碳酸钟的催化活性高，可W大大提高反应的速率。
[0012] 进一步优选的，所述碳酸钟的活化方法为在140-180°C烘干4-5小时，研磨，过200 目筛，取细粉于100-120°c烘干1-3小时。
[0013] 优选的，所述反应是在惰性气体保护下进行的。保护反应过程中2, 4-二硝基漠苯 的稳定性，防止2, 4-二硝基漠苯被氧化。
[0014] 优选的，所述反应的溫度为85-95°C，反应时间为4-化。
[0015] 优选的，将所述反应得到的反应液倒入冰水混合物中，有利于产物快速析出，对析 出产物进行萃取、干燥、分离，得到纯净的产物。
[0016] 优选的，所述萃取的萃取剂为乙酸乙醋。乙酸乙醋对产物的溶解性好，且易与冰水 混合物分层，可W较好地将产物进行萃取。
[0017] 优选的，所述干燥的干燥剂为无水硫酸儀。
[0018] 优选的，所述分离为过柱分离，洗脱剂为石油酸和二氯甲烧的混合溶液。
[0019] 进一步优选的，所述石油酸和二氯甲烧的体积之比为5:1。该配比的洗脱剂的极性 与产物的极性最接近，可W经产物与反应液中的各种物质均分离彻底，保证了产物的纯度。
[0020] 所述巧光探针的在作为硫化氨气体的巧光探针中的应用。
[0021] 所述巧光探针在动态监控活细胞及活体中的应用。
[0022] 一种对活细胞或活体进行解育染色的染色溶液，至少包括缓冲溶液和溶解在缓冲 溶液中的上述巧光探针。
[0023] 优选的，所述巧光探针动态监控活细胞及活体的方法，包括如下步骤：
[0024]1)将所述巧光探针溶解在生理盐水或水溶性有机溶剂中，然后加入缓冲溶液；或 直接将所述巧光探针溶解在缓冲液中，得到染色溶液；
[0025] 2)将培养好的细胞或活体放于所述染色溶液中进行解育，解育设定时间后，直接 进行激光共聚成像。
[00%] 解育一定的时间后无须去除解育液，基本无背景巧光，可直接进行激光共聚焦成 像，节省了操作步骤。
[0027] 优选的，步骤1)中，所述染色溶液的抑值为7. 0-7. 8。
[0028] 本发明的巧光探针的合成方程式，如下所示：
[0029]
音
[0030] 本发明的有益效果是：
[0031] 1、本发明的探针分子具有较大的斯托克斯位移，有效地较低了自吸收，提高了成 像准确度。并且对硫化氨超级敏感，在硫氨化钢的浓度由0升至探针浓度的10当量过程中， 巧光增强40倍。具有较高的摩尔消光系数（除水外，都大于60000M1 ·CM1)。
[0032] 2、本发明的探针分子对活细胞和线虫的染色效果良好，染色时间较短（15min)，染 色效率较高。活细胞和线虫染色完成后无须进行W往其它探针必经的洗涂过程，直接进行 共聚焦成像即可，大大简便了成像操作过程。
[0033] 3、本发明的探针分子的合成步骤相对简单、产率较高、容易纯化，且抗光漂白性能 极好，连续光照扫描80min光强无明显变化。
【附图说明】
[0034] 图1是本发明的巧光探针在不同浓度硫化氨条件下的紫外吸收谱图；横坐标为波 长（nm)，纵坐标为紫外吸收强度；
[0035] 图2是本发明的巧光探针在不同浓度硫化氨条件下的巧光发射谱图；横坐标为波 长（nm)，纵坐标为巧光发射强度；
[0036] 图3是本发明的巧光探针在不同浓度硫化氨条件下的比色图；
[0037] 图4是本发明的巧光探针在海拉细胞中的抗光漂白巧光成像图；
[0038] 图5是本发明的巧光探针在线虫活体中的巧光成像图。
【具体实施方式】
[0039] 下面结合实施例进一步说明本发明。
[0040] 巧光探针的合成 柳41] 实施例1 W42] 在25ml的两口瓶中，加入径基四苯乙締化364g，Immol),2, 4-二硝基漠苯 (0. 738g，3mmol)，活化的碳酸钟化414g，3mmol)，抽真空通氮气Ξ次，加入除水DMF，升 溫至90°C，反应4小时。溶液变为黄色。反应结束后，将反应液倒入冰水混合物中，产物迅 速析出，混合液呈乳状，用大量乙酸乙醋萃取，乙酸乙醋相为黄色液体。加入无水硫酸儀干 燥。滤除硫酸儀，旋干，过柱。洗脱剂为石油酸比二氯甲烧为5比l，Rf值约为0.25。过柱 后旋干得到淡黄色固体（0. 341g，0. 49mmol)，产率为49%。 阳0创实施例2 W44] 在25ml的两口瓶中，加入径基四苯乙締（lmm〇U，2,4-二硝基漠苯（2mmol)，活化 的碳酸钟化414g，3mmol)，抽真空一通氮气Ξ次，加入除水DMF，升溫至85°C，反应5小 时。溶液变为黄色。反应结束后，将反应液倒入冰水混合物中，产物迅速析出，混合液呈乳 状，用大量乙酸乙醋萃取，乙酸乙醋相为黄色液体。加入无水硫酸儀干