一种提高肝素钠纯度的方法
【技术领域】
[0001]本法说明涉及一种提取提纯制备原料药的方法，属于化学领域，具体是一种制备尚纯度精品肝素纳。
【背景技术】
[0002]肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在。医学上，肝素钠在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。临床上具有抗凝血、降血脂、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度和抗炎等作用。
[0003]2008年2月11日，美国因注射肝素钠出现4例死亡，350多例不良反应，成为轰动世界的“肝素钠事件”。经过专家论证，上述死亡和不良反应是由于肝素钠中含有多硫酸软骨素所致。多硫酸软骨素是类肝素的一种，其性质与肝素钠基本相似，经过检测与肝素钠的区别是:1、肝素钠是右旋结构;而多硫酸软骨素是左旋结构；2、所含阴离子强度有差异。3、多硫酸软骨素经检测比肝素钠的分子量大。
[0004]国际肝素钠供应商对此相当重视，因此我公司一直致力于此项研究中，收获多多。
【发明内容】
[0005]本发明提供了一种萃取法分离肝素钠中的多硫酸软骨素的方法，是为了攻克国内外专家关于肝素钠中的多硫酸软骨素不能分离的定论，利用多硫酸软骨素的性质，用离子交换树脂交换和乙醇沉淀，从而实现用萃取法将肝素钠与多硫酸软骨素彻底分离。
[0006]本发明的技术方案为:一种制备高纯度肝素钠的工艺，其步骤如下:
1、粗品肝素钠溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解；
2、将步骤I中溶解液，用盐酸溶液调PH至7.0-8.0，然后升温至50-55°C之间时加入5-15g/亿单位胃蛋白酶，再加入5-25g/亿单位胰酶，保温2-4小时；
3、将步骤2中酶解液在30?40分钟内升温至85-90°C，静止10-30分钟，搅拌，然后等降温至50-55°C时，用l_3mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，静止20-30小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
4、待步骤3中上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.3-0.4g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍。
[0007]5、取步骤4中洗脱液，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入3_5%双氧水，氧化10-12小时；
6、将步骤5中溶液用70-75%乙醇沉淀，再加入20-30g/L氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用70-75%乙醇溶解，静置24-30小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空栗通抽干；
7、将步骤6中产品放在真空干燥箱中，烘干70-80小时，得产品。
[0008]有益效果:
(I)本发明结合升温氧化结合多种物理提取方法并纯化得到效价高于180U/mg，收率高于80%的高纯度肝素钠。
[0009](2)通过升温补加双氧水可以有效的控制肝素钠氧化失活，并且实现了氧化与脱色同步进行。
[0010](3)依据肝素钠及其结构类似物的极性差异，在氯化钠溶液中用离子交换树脂，再用乙醇沉淀洗脱，最后得到肝素钠产品。工艺采用的方法，使得多硫酸软骨素杂质被萃取，而肝素钠产品留在了低盐溶液中，用乙醇沉淀，极大地提高了收率，最终得到的肝素钠产品达到中国药典标准，并且经测不含多硫酸软骨素成分。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
(1)将50g粗品肝素钠溶入饮用水中，搅拌5小时，将其全部溶解；
(2)将溶解液用盐酸溶液调PH至7.0，然后升温至50°C之间时加入5g/亿单位胃蛋白酶，再加入5g/亿单位胰酶，保温2小时；
(3)将酶解液在30分钟内升温至85°C，静止10分钟，搅拌，然后等降温至50°C时，用Imo I/L氢氧化钠溶液调PH至1.0，静止20小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
(4)待上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.3g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍；
(5)取洗脱液用2mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0，然后加入3%双氧水，氧化10小时；
(6)将溶液用70%乙醇沉淀，再加入20g/L氯化钠溶液，静止沉淀10小时，取沉淀物，用70%乙醇溶解，静置24小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空栗通抽干；
(7)将产品放在真空干燥箱中，烘干70小时，得产品。得到的产品经检测其效价为182U/mg，回收率为80.6%硫酸软骨素为0.01mg/mL硫酸皮肤素为0.01mg/mL，各项指标均均符合中国药典要求。
[0012]实施例2
(1)将50g粗品肝素钠溶入饮用水中，搅拌7小时，将其全部溶解；
(2)将溶解液用盐酸溶液调PH至6.0，然后升温至53°C之间时加入13g/亿单位胃蛋白酶，再加入16g/亿单位胰酶，保温3小时；
(3)将酶解液在36分钟内升温至87°C，静止20分钟，搅拌，然后等降温至53°C时，用2mol/L氢氧化钠溶液调PH至11.0，静止26小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
(4)待上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.36g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍；
(5 )取洗脱液用4mo I/L氢氧化钠溶液调PH至11.0，然后加入4%双氧水，氧化11小时；
(6 )将溶液用73%乙醇沉淀，再加入26g/L氯化钠溶液，静止沉淀11小时，取沉淀物，用73%乙醇溶解，静置27小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空栗通抽干；
(7)将产品放在真空干燥箱中，烘干75小时，得产品。得到的产品经检测其效价为210U/mg，回收率为86.1%硫酸软骨素为0.0Olmg/mL硫酸皮肤素为0.001mg/mL，各项指标均均符合中国药典要求。
[0013] 实施例3
(1)将50g粗品肝素钠溶入饮用水中，搅拌10小时，将其全部溶解；
(2)将溶解液用盐酸溶液调PH至8.0，然后升温至55°C之间时加入15g/亿单位胃蛋白酶，再加入25g/亿单位胰酶，保温4小时；
(3)将酶解液在40分钟内升温至85-90°C，静止30分钟，搅拌，然后等降温至55°C时，用l-3mol/L氢氧化钠溶液调PH至12.0，静止30小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
(4)待上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.4g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍；
(5)取洗脱液用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH至12.0，然后加入5%双氧水，氧化12小时；
(6)将溶液用75%乙醇沉淀，再加入30g/L氯化钠溶液，静止沉淀12小时，取沉淀物，用70-75%乙醇溶解，静置30小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空栗通抽干；
(7)将产品放在真空干燥箱中，烘干80小时，得产品。得到的产品经检测其效价为185U/mg,回收率为83%硫酸软骨素为0.005mg/mL硫酸皮肤素为0.0lmg/mL，各项指标均均符合中国药典要求。
【主权项】
1.一种提高肝素钠纯度的的方法，其特征在于:用离子交换树脂的方法以及乙醇提纯去除肝素钠中的多硫酸软骨素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于其工艺的具体步骤如下: (1)将粗品肝素钠溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解； (2)将步骤(I)中溶解液，用盐酸溶液调PH至7.0-8.0，然后升温至50-55°C之间时加入5-15g/亿单位胃蛋白酶，再加入5-25g/亿单位胰酶，保温2-4小时； (3)将步骤(2)中酶解液在30?40分钟内升温至85-90°C，静止10-30分钟，搅拌，然后等降温至50-55°C时，用l_3mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，静止20-30小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液； (4)待步骤(3)中上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.3-0.4g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍； (5)取步骤(4)中洗脱液，用2-6moVL氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入3_5%双氧水，氧化10-12小时； (6)将步骤(5)中溶液用70-75%乙醇沉淀，再加入20-30g/L氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用70-75%乙醇溶解，静置24-30小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空栗通抽干； (7)将步骤(6)中产品放在真空干燥箱中，烘干70-80小时，得产品。
【专利摘要】本发明公开了一种提高肝素钠的方法，这种方法属于化学领域。主要包括用用离子交换树脂交换，乙醇提纯等解决了目前肝素钠生产过程中混有多硫酸软骨素的问题。工艺简单，易操作，节约了成本，提高了肝素钠的纯度，适合工业化生产。
【IPC分类】C08B37/10
【公开号】CN105440164
【申请号】CN201511002682
【发明人】刘乃山, 周晓娜, 迟培升, 夏衬来
【申请人】青岛九龙生物医药有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2013年11月24日
【公告号】CN103804522A