一种核酸分离净化溶液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物学应用领域，更具体地说涉及一种核酸分离净化溶液。
【背景技术】
[0002] 在现有技术中已知用于分离核酸如DNA和RNA的大量方法，这些方法允许从各种来 源的样品材料中分离。这些包括天然来源的样品材料，例如能够从人、动物、植物和环境中 得到的复杂样品，以及来自实验室培养的样品材料，如微生物和细胞培养材料。
[0003]在经典的方法中，通常首先向样品材料加入含有离液剂的水性缓冲液用于各细胞 的裂解、样品的消化，所述缓冲液通常含有胍盐。这之后通常是污染蛋白质的变性和通过与 有机提取剂混合来提取核酸，该提取剂通常含有苯酚和/或氯仿。在分离含有核酸的水相与 有机相之后，进行例如醇沉淀以从水溶性污染物和苯酚/氯仿组分中纯化核酸。
[0004]这些方法有重大的缺点：第一，它用有机物质、化学物来提取核酸，对许多酶而言， 这些物质通常是强烈的抑制剂;第二，它需要用有机溶剂多次提取，使核酸从其他生物成分 例如蛋白、油脂、细胞的细胞器等中分离;第三，这些使用的有机溶剂是有毒的，例如苯酚、 氯仿，并且苯酚是一种强氧化剂，它能氧化核酸从而导致核酸被破坏。另一方面，传统的核 酸净化溶液会含有一些高离液盐的试剂，成本比较高，纯化效率比较低。
【发明内容】
[0005]为了弥补现有技术的不足，本发明目的是提供一种核酸分离净化溶液，该溶液主 要是使用含有钠盐和/或钾盐的有机水溶液，对核酸进行可逆结合，再使用磁珠吸附核酸， 最后洗脱液洗脱得到核酸。
[0006]本发明解决技术问题所采用的技术方案是:一种核酸分离净化溶液，所述溶液主 要包括钠盐和/或钾盐、水溶性有机溶剂和水;所述溶液的PH值范围为2.0~5.0;所述钠盐 和/或钾盐中的钠离子和/或钾离子的浓度为1.0M~3.0M;所述核酸分离净化溶液与核酸之 间进行可逆结合，从而对核酸进行分离沉淀，磁珠吸附。
[0007]进一步地，所述的钠盐为任何形式的钠离子盐，包括醋酸钠、氯化钠、柠檬酸钠及 磷酸钠;所述的钾盐为任何形式的钾离子盐，包括醋酸钾、氯化钾、柠檬酸钾及磷酸钾。
[0008] 进一步地，所述的水溶性有机溶剂为乙醇，所述乙醇的浓度为20%~30%。
[0009]进一步地，所述溶液的PH值范围为4.0~4.8;所述钠离子和/或钾离子的浓度为 2.0M~2.5M。
[0010] 进一步地，所述的核酸分离净化溶液可用于结合不同的核酸样本，包括质粒DNA、 RNA或混合DNA和RNA分子。
[0011] 更进一步地，所述核酸样本的来源包括动物或人类的体液、组织、器官、细胞、细胞 培养及PCR产品。
[0012] 本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明提供的核酸分离净化溶液不含离 液盐，也不添加任何有毒的试剂，成本较低，分离效率高;本发明的核酸分离溶液中也无变 性剂，很环保，甚至在野外操作时，废液不需经过任何特殊处理，可直接排放;最后通过磁珠 吸附，可以得到更多量的核酸。通过本发明的溶液纯化得到的核酸，纯度高，对下游的实验 酶切、PCR和测序等毫无影响;可广泛应用基因治疗、基因疫苗接种、酶反应限制消化、标签、 测序等。
【附图说明】
[0013] 图1为不同浓度的NaAc对核酸绑定的影响结果的电泳图片。
[0014] 图2为不同PH值的S1溶液对核酸绑定的影响结果的电泳图片。
[0015] 图3为结合液S1与无水乙醇的混合液对绑定核酸的影响结果的电泳图片。
[0016] 图4为质粒DNA分离纯化使用缓冲溶液N1和20%-30%(V/V)无水乙醇的电泳结果。
【具体实施方式】
[0017]下面结合附图和【具体实施方式】，进一步阐明本发明，应理解下述【具体实施方式】仅 用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0018] -种核酸分离净化溶液，所述溶液主要包括钠盐和/或钾盐、水溶性有机溶剂和 水。所述溶液的PH值范围为2.0~5.0;所述钠盐和/或钾盐中的钠离子和/或钾离子的浓度 为1.0M~3.0M;所述溶液的PH值范围优选为4.0~4.8;所述钠离子和/或钾离子的浓度优选 为2.0M~2.5M。所述核酸分离净化溶液与核酸之间进行可逆结合，从而对核酸进行分离沉 淀。
[0019] 所述的钠盐为任何形式的钠离子盐，包括醋酸钠、氯化钠、柠檬酸钠及磷酸钠;所 述的钾盐为任何形式的钾离子盐，包括醋酸钾、氯化钾、柠檬酸钾及磷酸钾。
[0020] 所述的水溶性有机溶剂优选为乙醇，所述乙醇的浓度为20%~30%。
[0021] 所述的核酸分离净化溶液可用于结合不同的核酸样本，包括质粒DNA、RNA或混合 DNA和RNA分子。所述核酸样本的来源包括动物或人类的体液(全血、血清、尿、粪便、精子、唾 液）、组织、器官、细胞、细胞培养及PCR产品。
[0022] 通过上述溶液纯化得到的核酸，纯度高，对下游的实验酶切、PCR和测序等毫无影 响;且可广泛应用基因治疗、基因疫苗接种、酶反应限制消化、标签、测序等。
[0023] 表1:不同浓度的NaAc对核酸绑定的影响
核酸分离净化溶液S1的组成包括:浓度为2.0M~2.5M的醋酸钠(PH约为4.0~4.8)，浓 度为20%~30%的乙醇，水。上表1中，PBT具有绑定DNA作用，包含有高离液盐，TE是缓冲溶液， 具有稀释溶解DNA的作用。
[0024] 上述表1试验了不同浓度的NaAc对核酸绑定的影响，用洗脱下来的1yLDNA加1yL 的ΙΟχ上样溶液，8yL的超纯水混合，点样到1%的琼脂糖凝胶中，通过紫外线照射溴化乙锭染 色，呈现图片。图1中的泳道1~6对应上表1中的数据。上述试验结果说明NaAc的浓度优选为 2.0M~2.5M之间，此时DNA的回收率可达90%左右。
[0025]表2:不同PH值的S1溶液对核酸绑定的影响
上述表2试验了不同PH值的S1溶液对核酸绑定的影响，用洗脱下来的lyLDNA加lyL的l〇x上样溶液，8yL的超纯水混合，点样到1%的琼脂糖凝胶中，通过紫外线照射溴化乙锭染 色，呈现图片。图2中的泳道1~6分别对应表2中的数据。上述试验结果说明上述溶液S1的PH 值的优选范围为4.8以下，此时DNA的得率在88%~98%之间。
[0026] 表3:溶液S1与无水乙醇的混合液对核酸绑定的影响
上述表3试验了结合液S1与无水乙醇的混合液对核酸的绑定情况，结合液S1与无水乙 醇等体积混合后，显著增加了绑定核酸的能力。用洗脱下来的lyLDNA加lyL的10x上样溶 液，8yL的超纯水混合，点样到1%的琼脂糖凝胶中，通过紫外线照射溴化乙锭染色，呈现图 片。图3中的泳道1~6分别对应表3中的数据。上述试验结果说明结合液选择用一定量溶液 S1或者等体积的溶液S1和无水乙醇混合绑定核酸的效率比用盐酸胍和Qiagen的PBT溶液的 都尚。
[0027]表4:比较结合溶液C1和N1对质粒DNA的分离、纯化效果
上述表4为使用缓冲溶液N1和20%~30%(V/V)无水乙醇对质粒DNA的分离、纯化结果。用 洗脱下来的lyLDNA加lyL的ΙΟχ上样溶液，8yL的超纯水混合，点样到1%的琼脂糖凝胶中，通 过紫外线照射溴化乙锭染色，呈现图片。图4中的泳道1~6分别对应表4中的数据。上述试验 结果说明了PH值为4.8的N1溶液与一定量的无水乙醇混合后可以更有效的绑定DNA。
[0028]以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，有关技术领域的普通 技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型，因此所有 等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
【主权项】
1. 一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述溶液主要包括钠盐和/或钾盐、水溶性有 机溶剂和水;所述溶液的PH值范围为2.0~5.0;所述钠盐和/或钾盐中的钠离子和/或钾离 子的浓度为1.0M~3.0M;所述核酸分离净化溶液与核酸之间进行可逆结合，之后再使用磁 珠吸附核酸，最后用洗脱液从磁珠上将核酸洗脱下来，从而对核酸进行分离。2. 根据权利要求1所述的一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述的钠盐为任何形式 的钠离子盐，包括醋酸钠、氯化钠、柠檬酸钠及磷酸钠;所述的钾盐为任何形式的钾离子盐， 包括醋酸钾、氯化钾、柠檬酸钾及磷酸钾。3. 根据权利要求1所述的一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述的水溶性有机溶剂 为乙醇，所述乙醇的浓度为20%~30%。4. 根据权利要求1或2所述的一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述溶液的PH值范 围为4.0~4.8;所述钠离子和/或钾离子的浓度为2.0M~2.5M。5. 根据权利要求1所述的一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述的核酸分离净化溶 液可用于结合不同的核酸样本，包括质粒DNA、RNA或混合DNA和RNA分子。6. 根据权利要求5所述的一种核酸分离净化溶液，其特征在于:所述核酸样本的来源包 括动物或人类的体液、组织、器官、细胞、细胞培养及PCR产品。
【专利摘要】本发明公开了一种核酸分离净化溶液，所述溶液主要包括钠盐和/或钾盐、水溶性有机溶剂和水；所述溶液的PH值范围为2.0～5.0；所述钠盐和/或钾盐中的钠离子和/或钾离子的浓度为1.0M～3.0M；所述核酸分离净化溶液与核酸之间进行可逆结合，从而对核酸进行分离沉淀。本发明提供的核酸分离净化溶液不含离液盐，也不添加任何有毒的试剂，成本较低，分离效率高；本发明的核酸分离溶液中也无变性剂，很环保，甚至在野外操作时，废液不需经过任何特殊处理，可直接排放；通过本发明的溶液纯化得到的核酸，纯度高，对下游的实验酶切、PCR和测序等毫无影响；可广泛应用基因治疗、基因疫苗接种、酶反应限制消化、标签、测序等。
【IPC分类】C12N15/10
【公开号】CN105462959
【申请号】CN201510875201
【发明人】史镜宇, 史维多利亚, 刘艳红, 言国英, 马小伟
【申请人】史镜宇
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月3日