br>[0037] 在本发明的上下文中，SAV1基因表达产物包括SAV1蛋白W及SAV1蛋白的部分肤。 所述SAV1蛋白的部分肤含有与子宫肌瘤相关的功能域。
[0038] "SAV1蛋白"包括SAV1蛋白W及SAV1蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括 SAV1蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱 导突变体、在高或低的严紧条件下能与SAV1的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。
[0039] 优选地，SAV1蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：
[0040] (1)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0041] (2)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺 失和/或添加且与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID NO.2所示的氨 基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地1-30 个，更佳地1-20个，最佳地1-10个。
[0042] (3)与SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性(又称为序列同一性）， 更优选地，与SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列至少约90%至95%的同源性，常为96%、97%、 98 %、99 %同源性的氨基酸序列构成的多肤。
[0043] 在本发明的具体实施方案中，所述SAV1蛋白是具有SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序 列的蛋白质。
[0044] 通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。 本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、 缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相 似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
[0045] 通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是SAV1蛋白的融合 蛋白。对于与SAV1蛋白融合的肤或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留SAV1蛋白 的生物学活性即可。
[0046] 本发明的SAV1蛋白也包括对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只要 经过修饰的蛋白质仍然能够保留SAV1蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的 氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。
[0047] 在本发明的上下文中，"诊断子宫肌瘤"既包括判断受试者是否已经患有子宫肌 瘤、也包括判断受试者是否存在患有子宫肌瘤的风险。
[0048] 在本发明的上下文中，"治疗子宫肌瘤"从疾病的状态变化来分，可W包括疾病的 缓解、疾病的完全治愈。
[0049] 本发明的优点和有益效果：
[0050] 本发明首次发现了 SAV1基因表达与子宫肌瘤相关，通过检测受试者子宫组织中 SAV1的表达，可W判断受试者是否患有子宫肌瘤、或者判断受试者是否存在患有子宫肌瘤 的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
[0051] 本发明发现了一种新的分子标记物-SAV1基因，相比传统的检测手段，基因诊断更 及时、更特异、更灵敏，能够实现子宫肌瘤的早期诊断。
【附图说明】
[0052] 图1显示利用QPCR检测SAV1基因在子宫组织中的表达情况；
[0化3] 图2显示利用Western blot检测SAV1蛋白在子宫组织中的表达情况；
[0054]图3显示利用QPCR在转录水平上检测SAV1基因的过表达情况；
[0化5] 图4显示利用Western blot检测SAV1蛋白的过表达情况；
[0056] 图5显示利用MTT实验检测SAV1基因表达对子宫肌瘤细胞增殖的影响。
[0057] 具体的实施方式
[0058] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。W下实施例仅用于说明本 发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring化rborLaboratoiy Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0化9] 实施例1正常肌层组织和子宫肌瘤组织中SAV1基因的表达差异
[0060] 1、实验材料；
[0061] 无菌取因子宫肌瘤行全子宫切除术者的子宫肌瘤组织和邻近的正常肌层组织，患 者在术前3个月内未接受过激素治疗，术后均经病理确诊为子宫肌瘤，本实验材料取自40例 子宫肌瘤患者，患者年龄在25-45岁间。
[0062] 2、在转录水平上检测SAV1基因的差异表达
[0063] 2.1组织RNA的提取(利用No巧en RNA提取试剂盒）
[0064] 1)在较少RNase干扰的清洁区，使用含适量液氮的研鉢称取离体组织样本约20mg， 用巧棒研磨至粉末状；
[0065] 2)将样本转移到一个不含RNA酶的2mL的离屯、管中；
[0066] 3)加入300μΙ Lysis solution,置于匀浆器内，充分研磨l-5min;
[0067] 4) 12000g，4°C，离屯、lOmin，转移上清至新的1.5mL的离屯、管中；
[006引 5)加入600μ1 RNase-Free Water,用縱满器混匀；
[0069] 6)加入20μ1蛋白酶K，在55°C溫浴15min，不断满旋混匀；
[0070] 7)14000g，室溫，离屯、Imin，使细胞碎片沉淀于离屯、管底部，取上清转移到另外一 个不含RNA酶1.5mL的离屯、管中；
[0071] 8)加入45化1的95%乙醇，满旋混匀；
[0072] RNA吸附：
[0073] 9)取65化1含乙醇的裂解液加到离屯、柱中，14000g离屯、Imin;
[0074] 10)弃下层，重置收集管于柱上；
[0075] 11)依照裂解液的容量，重复9)~10)步；
[0076] 12)加入400μ1 Wash solution, 14000g离屯、2min;
[0077] 13)弃下层，将柱置于一新的收集管上；
[007引 DNase 处理：
[00巧]14)加入100μΙ Enzyme Incubation Buffer和15μ1 DNase I，14000g离屯、Imin; [0080] 15)将收集管中的溶液重新移入柱中；
[0081 ] 16)室溫放置 15min;
[0082] RNA 洗涂：
[0083] 17)加入400μ1 Wash solution, 14000g离屯、Imin，弃下层，重置收集管于柱上；
[0084] 18)加入400μ1 Wash solution, 14000g离屯、2min，弃收集管；
[00财 RNA洗脱：
[00化]19)把柱子放入1.7mL Elution管中；
[0087] 20)加入30μ1 Elution Buffer;
[0088] 21)200g离屯、2min，使溶液充分与柱结合，然后14000g离屯、Imin。
[0089] 2.2逆转录
[0090] 利用TAKARA公司的逆转录试剂盒进行RNA的逆转录。
[0091] 2.3QPCR
[0092] (1)引物设计
[0093] 根据Genbank中SAV1基因和GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由上海生工 生物工程技术服务有限公司合成。具体引物序列如下：
[0094] SAV1 基因：
[0095] 正向引物为5'-TGGTTCTTCTCAGTCATT-3'（沈Q ID N0.3);
[0096] 反向引物为5'-ATTCATAATATCTGTAGTCTTCAT-3'（SEQ ID N0.4),
[0097] GAro蜡因：
[009引 正向引物为5'-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3'（SEQ ID N0.5);
[0099] 反向引物为5'-GGTGGAATCATATTGGAACA-3'（沈Q ID N0.6)。
[0100] (2)按照表1配审化CR反应体系：
[0101 ] 其中，SYBR Green聚合酶链式反应体系购自Invitrogen公司。
[0102] 表1 PCR反应体系
[0103]
[0104] (3)PCR反应条件：95°C10min，（95°C15s，60°C40s)*45个循环。WSYBR Green作为 巧光标记物，在Li曲t切cler巧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确 定目的条带，Δ Δ CT法进行相对定量。
[0105] 2.4统计学方法
[0106] 实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是W平均值±标准差的方式来表示， 采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，不同组之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时 具有统计学意义。
[0107] 2.5 结果
[0108] 结果如图1所示，与正常肌层组织相比，子宫肌瘤组织中SAV1基因的mRNA水平显著 降低，差异具有统计学意义(P<〇. 05)。
[0109] 3、在蛋白