从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物 的方法。
【背景技术】
[0002] 马钱子碱氮氧化物是中药马钱子中的一种化合物，结构式如下所示：
[0004] 现今对马钱子碱氮氧化物的分离提取受传统中药非机械化的操作方式所限制，步 骤繁琐，耗时，耗力，得到的化合物量少且批次间差异大，难以进行临床研究。
[0005] 另外对于马钱子碱氮氧化物而言，由于植物中含量少，它的应用也很少有人研究， 因此其潜在作用有待开发。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种从中药马钱子中 提取马钱子碱氮氧化物的方法，该方法采用高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重 复性高，制备量大，操作简单省时。
[0007] 本发明所采用的技术方案为：
[0008] -种从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，该方法包括以下步骤：
[0009] (1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙醇浸泡或者回流提取，过滤，所得 滤液进行旋转蒸发至干，用甲醇体积分数为50-70 %的甲醇-水二元混合溶剂溶解，得到固 含量50-200mg/mL的提取液；
[0010] (2)对得到的提取液进行一维液相色谱分离:采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相 为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为50-200mL/针；流动相流速为100-1000mL/min;检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm;洗脱方式为B相浓度25 %等度洗脱 10min、B相浓度35%等度洗脱20min、B相浓度100%等度洗脱lOmin;根据紫外吸收光谱收集 13.5-15.5min洗脱液，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；
[0011] (3)用甲醇体积分数为50-70 %的甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解 至固含量为50-100mg/mL;
[0012] (4)进行二维液相色谱分离:采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相， 其中A相为水、B相为甲醇;进样量为500-2000yL/针;流动相流速为10-30mL/min;检测器为 紫外检测器，检测波长200-260nm;洗脱方式为B相浓度30 %等度洗脱20-40min;根据紫外吸 收光谱收集17.5-20min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得本发明马钱子碱氮氧化物。
[0013] 所述步骤(1)中回流提取可重复进行1-3次，每次1-2h。
[0014] 所述步骤(1)、（3)中甲醇-水二元混合溶剂含0.1% (质量百分比）乙酸。
[0015]所述步骤(2)、（4)中二元混合液相的A相含0.1% (质量百分比）乙酸。
[0016] 所述步骤（2)中C18色谱柱具体为反相C18轴向加压色谱柱（150 X250mm，10ym， 100 Λ)，使用时柱温为室温或25-40°C。
[0017] 所述步骤（4)中(：18色谱柱具体为华谱(：18色谱柱（20\250臟，5以111，丨00 4)，使用时 柱温为室温或25-40°C。
[0018] 本发明选用二维高效液相色谱技术从天然产物马钱子子实体中提取马钱子氮氧 化物，通过合理选择色谱柱、溶解液、流动相等，结合对流速、洗脱方式、收集区段等工艺条 件的摸索，使得整个分离纯化方法切实可行，操作简便，制备周期短，仪器自动化程度高，试 剂耗费量小，常温常压下就可进行，制备量大，重复性高，得到的马钱子氮氧化物纯度可达 99%，且提取批次之间一致性高，可操作性好，可控度高，可直接运用于工业生产，为马钱子 碱氮氧化物的潜在作用开发提供来源保障。
【附图说明】
[0019] 图1所示的是本发明从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法的一维色谱分离 图；
[0020] 图2所示的是本发明从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法的二维色谱分离 图；
[0021 ]图3所示的是本发明得到的目的产物的HPLC验纯图；
[0022] 图4所示的是本发明得到的目的产物的tfNMR核磁图；
[0023] 图5所示的是本发明得到的目的产物的C13NMR核磁图。
【具体实施方式】
[0024]以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示 性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语 具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
[0025] 1、原料、材料：
[0026] 原料马钱子子实体采摘自河北并经过鉴定。
[0027] 2、试剂：
[0028]色谱级甲醇、乙酸、乙醇购自天津市康科德科技有限公司。
[0029] 3、仪器设备：
[0030]超微粉碎机购自山东三清不锈钢设备有限公司；台式冷冻离心机购自Thermo公 司；旋转蒸发仪购自上海亚容生化仪器厂；反相C18轴向加压色谱柱（150 X 250mm，ΙΟμπι， 100 A)购自江苏汉邦科技有限公司；华谱C18色谱柱（20 X 250mm，5μπι，100 A)购自上海华 谱技术服务中心;制备型高效液相色谱仪购自江苏汉邦科技有限公司。
[0031] 实施例1:
[0032]以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙醇回流提取1.5h，过滤，取沉淀重复提 取2次，合并所得滤液，旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取10g，溶于100mL 55%的甲醇-水 (0.1 %乙酸)溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为100mg/mL，过0.45μπι微孔滤膜，进行一维 液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel C18 150X250mm，10ym，丨〇〇Α,流动相采用的为 二元液相的混合，其中二元液相Α相是水(含0.1 %乙酸）、Β相是甲醇，洗脱方式:Β相浓度 25%等度10min、B相浓度35%等度20min、B相浓度100%等度lOmin。采用紫外检测器，选择 210nm吸收波长，制备温度为室温，进样量为150mL/针，流动相流速为600mL/min，收集13.5-15.5分钟（图1中3号峰）的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备粗品。用50%的甲醇-水(0.1 %乙酸)溶液溶解一维制备粗品，浓度为50mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色 谱制备，色谱柱为华谱C18 20X250mm，5ym，丨〇〇 A,流动相采用的为二元液相的混合，其中 二元液相A相是水(0.1 %乙酸）、B相是甲醇，采用30%B相等度洗脱30分钟。采用紫外检测 器，选择210nm吸收波长，制备温度为室温，进样量为2000yL/针，流动相流速为16mL/min，收 集17.5-20分钟（图2中M-Et-3-3峰)的馏分，旋转蒸发至干，得到目的M-Et-3-3组分。
[0033] 对得到的M-Et-3-3组分进行HPLC纯度分析，经高效液相检测纯度达到99%，为单 一化合物，HPLC谱图见图3。
[0034] 对得到的组分进行NMR氢谱、匪R碳谱等鉴定，结果如图4、5所示，显示该M-Et-3-3 组分为