马钱子碱氮氧化物。
[0035] 实施例2:
[0036]以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙醇回流提取2h，过滤，取沉淀重复提取 2次，合并所得滤液，旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取15g，溶于100mL 50%的甲醇-水 (0.1 %乙酸)溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为150mg/mL，过0.45μπι微孔滤膜，进行一维 液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel C18 150X250m，10ym，1〇〇 Α，流动相采用的为 二元液相的混合，其中二元液相A相是水(0.1 %乙酸）、B相是甲醇，洗脱方式:B相浓度25% 等度10min、B相浓度35%等度20min、B相浓度100%等度10min。采用紫外检测器210nm选择 吸收波长，制备温度为室温，进样量为180mL/针，流动相流速为600mL/min，收集13.5-15.5 分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备马钱子碱粗品。用55%的甲醇-水(0.1% 乙酸)溶液溶解马钱子碱粗品，浓度为80mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备， 色谱柱为华谱C18 20X250mm，5ym，丨〇〇 A，流动相采用的为二元液相的混合，其中二元液相 A相是水(0.1%乙酸）、8相是甲醇，采用30%8相等度30分钟洗脱。采用紫外检测器21011111选 择吸收波长，制备温度为室温，进样量为lOOOyL/针，流动相流速为16mL/min，收集17.5-20 分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到目的组分。
[0037]对得到的组分进行HPLC纯度分析，经高效液相检测纯度达到99%，为单一化合物。 [0038]对得到的组分进行匪R氢谱、NMR碳谱等鉴定，结果显示该组分为马钱子碱氮氧化 物。
[0039] 实施例3:
[0040]以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙醇浸泡2h，过滤，取沉淀重复2次，合并 所得滤液，旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取5g，溶于100mL 60%的甲醇-水(0.1%乙酸） 溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为50mg/mL，过0.45μπι微孔滤膜，进行一维液相色谱制 备。一维液相色谱采用Innovel C18 150X250mm，10ym，1.00.A，流动相采用的为二元液相的 混合，其中二元液相A相是水(0.1%乙酸）、8相是甲醇，洗脱方式:8相浓度25%等度1〇!^11、8 相浓度35%等度20min、B相浓度100%等度lOmin。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制 备温度为室温，进样量为l〇〇mL/针，流动相流速为600mL/min，收集13.5-15.5分钟的馏分， 进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备马钱子碱粗品。用60%的甲醇-水(0.1%乙酸）溶液溶 解马钱子碱粗品，浓度为l〇〇mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为华 谱C18 20 X 250mm，5μηι，100 A,流动相采用的为二元液相的混合，其中二元液相A相是水 (0.1%乙酸）、B相是甲醇，采用30%B相等度30分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波 长，制备温度为室温，进样量为50(^17针，流动相流速为16111171^11，收集17.5-20分钟的馏 分，旋转蒸发至干，得到目的组分。
[0041 ]对得到的组分进行HPLC纯度分析，经高效液相检测纯度达到99%，为单一化合物。 [0042]对得到的组分进行匪R氢谱、NMR碳谱等鉴定，结果显示该组分为马钱子碱氮氧化 物。
[0043] 本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为符合中药提取 的普通市售产品。
[0044] 以上所述，仅为本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明的核心技术的前提下，还可以做出改进和润饰，这些改进和润饰也应 属于本发明的专利保护范围。与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都 应认为是包括在权利要求书的范围内。
【主权项】
1. 一种从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙醇浸泡或者回流提取，过滤，所得滤液 进行旋转蒸发至干，用甲醇体积分数为50-70%的甲醇-水二元混合溶剂溶解，得到固含量 50-200mg/mL的提取液； (2) 对得到的提取液进行一维液相色谱分离:采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二 元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇;进样量为50-200mL/针;流动相流速为100-1000mL/ min;检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm;洗脱方式为B相浓度25 %等度洗脱lOmin、B 相浓度35%等度洗脱20min、B相浓度100%等度洗脱lOmin;根据紫外吸收光谱收集13.5-15.5min洗脱液，旋转蒸发至干，得到一维液相组分； (3) 用甲醇体积分数为50-70 %的甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至固 含量为 50-100mg/mL; (4) 进行二维液相色谱分离:采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中 A相为水、B相为甲醇;进样量为500-2000μL7针;流动相流速为10-30mL/min;检测器为紫外 检测器，检测波长200-260nm;洗脱方式为B相浓度30 %等度洗脱20-40min;根据紫外吸收光 谱收集17.5-20min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得本发明马钱子碱氮氧化物。2. 根据权利要求1所述的从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，其特征在于:所述 步骤(1 )、（ 3)中甲醇-水二元混合溶剂含0.1 %乙酸。3. 根据权利要求1所述的从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，其特征在于:所述 步骤(2)、（ 4)中二元混合液相的A相含0.1 %乙酸。4. 根据权利要求1所述的从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，其特征在于:所述 步骤(2)中C18色谱柱具体为反相C18轴向加压色谱柱，使用时柱温为室温或25-40°C。5. 根据权利要求1所述的从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，其特征在于:所述 步骤(4)中C18色谱柱具体为华谱C18色谱柱，使用时柱温为室温或25-40°C。
【专利摘要】本发明提供一种从马钱子中提取马钱子碱氮氧化物的方法，包括以下步骤：马钱子磨粉状后用乙醇浸泡或回流提取，滤液蒸干用甲醇-水溶液溶解；进行一维液相分离，采用C18色谱柱，A相水、B相甲醇二元液相，洗脱方式为B相25％等度洗脱10min、B相35％等度洗脱20min、B相100％等度洗脱10min，收集13.5-15.5min洗脱液，蒸干再用甲醇-水溶液溶解；二维液相分离，采用C18色谱柱，A相水、B相甲醇二元液相，洗脱方式为B相30％等度洗脱，收集17.5-20min洗脱液，蒸干得纯度达99％的马钱子碱氮氧化物。该方法可直接运用于工业生产，为马钱子碱氮氧化物的潜在作用开发提供来源保障。
【IPC分类】C07D491/22
【公开号】CN105524073
【申请号】CN201510915496
【发明人】张耀洲, 李上文
【申请人】正源堂（天津）生物科技有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2015年12月9日