一种含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡及其制法和应用_2

文档序号:9762190阅读:来源:国知局
25]步骤2)中所述高分子溶液的处理,具体方法为:在搅拌的条件下,向步骤I)的高分子溶液中滴加水或PBS缓冲液,得到W/0复合乳液,透析或继续搅拌,得到含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡;或向步骤I)的高分子溶液中滴加负载物与水或PBS缓冲溶液,得到W/0复合乳液,透析或继续搅拌,得到负载有负载物的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡。
[0026]所述继续搅拌时间都为5?50h、整个反应的搅拌转速为100?700r/min,所述透析时间都为24?96h。
[0027]步骤I)中所述有机溶剂为四氢呋喃(THF)、N,N_二甲基甲酰胺(DMF)、N,N_二甲基乙酰胺(DMAC)、二氯甲烧(DCM)、氯仿(CHCl 3)、醋酸甲酯(methyl acetate)、甲基氰(Acetonitrile)、乙醇(Ethanol )、甲基异丁酮(MIBK)、六氟异丙醇(HFIP)或丙酮(Acetone)中的一种以上。
[0028]步骤I)中所述搅拌时间为15?60min,转速为100?700r/min;
[0029]步骤I)中所述两亲性嵌段共聚物和聚集诱导发光(AIE)分子的用量为有机溶剂重量的I?20wt%,所述两亲性嵌段共聚物与聚集诱导发光(AIE)分子的重量比为1000: (I?100)。
[0030]步骤2)所述高分子溶液中两亲性嵌段共聚物与聚集诱导发光分子的总质量与水或PBS缓冲液的体积比为50mg: (5?10)mL。
[0031]步骤2)中所述负载物与步骤2)所述高分子溶液中两亲性嵌段共聚物的重量比为(5?100):1000。
[0032]上述含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡在细胞成像领域的应用,优选在监测细胞中药物释放过程中的应用;
[0033]上述含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡在肿瘤影像领域的应用;
[0034]上述含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡在高分子囊泡结构表征、形成过程和释药过程观测中的应用,优选在高分子囊泡自组装过程研究以及在电穿孔法囊泡载药过程研究中的应用。
[0035]与现有技术相比,本发明具有如下优点及有益效果:
[0036](I)本发明选用聚集诱导发光分子为荧光染料,克服了传统ACQ荧光分子在浓度过大时发生聚集诱导荧光猝灭的缺点;
[0037](2)高分子囊泡中双亲性嵌段共聚物所构成的封闭的空腔可用于包裹药物或基因等,避免了体内循环中免疫系统辨识和吞噬,具有保护遗传物质的功能,因此高分子囊泡可作为一种新型药物载体;
[0038](3)本发明的制备过程工艺简单可行,生产效率高、重复性好,AIE分子种类繁多、发光颜色基本覆盖可见光各波长范围,可适合于不同荧光染色需求的高分子囊泡制备;
[0039](4)本发明的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡可用于光学生物成像、生物检测及临床影像、高分子囊泡结构、形成机理、载药释药过程研究等相关领域。
【附图说明】
[0040]图1为实施例1制备的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡的荧光显微镜照片(4000倍);
[0041]图2为实施例2制备的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡的荧光显微镜照片(4000倍);
[0042]图3为实施例4制备的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡的透射电镜照片(20000倍);
[0043]图4为实施例4制备的负载有DOX的含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡被细胞吞噬后的共聚焦显微镜照片(630倍);其中(I)为掺杂六苯基噻咯的囊泡的激光共聚焦显微镜照片,(2)为DOX的激光共聚焦显微镜照片,(3)为细胞核染色的激光共聚焦显微镜照片,(4)为(I)?(3)这三者的合并图。
【具体实施方式】
[0044]以下结合实施例对本发明作进一步的详细地描述,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
[0045]实施例1
[0046](I)将PEG-4000、己内酯(PEG与己内酯的摩尔比1:8)和辛酸亚锡(辛酸亚锡的用量为己内酯质量的0.1%)共混加入甲苯中,氮气保护下于160°C恒温搅拌反应8h(转速为800r/min ),过量冰乙醚沉淀抽滤,即得PCL-PEG-PCL三嵌段共聚物(S卩PCL2QQ()-mPEG4ooo-PCL2000);
[0047](2)称取0.05g三嵌段共聚物PCL2Q(X)-mPEG4_-PCL2()(X)和0.005g六苯基噻咯一同加入到2g的THF中,机械搅拌15min(搅拌的转速为100r/min),得到高分子溶液(嵌段共聚物和六苯基噻咯的用量为有机溶剂的2.75wt% );
[0048](3)去除高分子溶液中的有机溶剂(于35°C真空干燥6h,使有机溶剂完全挥发),制得嵌段共聚物与AIE分子复合膜;取1mL去离子水加入复合膜中,机械搅拌6h(搅拌的转速为lOOr/min),制得含有聚集诱导发光分子的高分子囊泡。此外,在制备过程中,不断少量取样并在荧光显微镜下观察,研究高分子囊泡的形成过程和结构,其荧光显微镜照片如图1所示,可以看到由于含有AIE分子,囊泡可以呈现出荧光(绿色)并显现其形貌。
[0049]实施例2
[0050](I)将PEG-2000、己内酯(PEG与己内酯的摩尔比1:4)和辛酸亚锡(辛酸亚锡的用量为己内酯质量的0.1%)共混加入甲苯中,氮气保护下于110°C恒温搅拌反应48h(转速为300r/min),过量冰乙醚沉淀抽滤,即得PEG-PCL二嵌段共聚物(即PCL2_-PEG2_);
[0051 ] (2)称取0.05g二嵌段共聚物PCL2Q(x)-PEG2(xx^P0.001g四苯基乙烯加入到Ig的丙酮/DMAC(体积比2:1)复合溶剂中,机械搅拌50min(搅拌的转速为lOOr/min),制得高分子溶液(嵌段共聚物和四苯基乙烯的用量为有机溶剂的5.lwt%);
[0052](3)在搅拌的条件下(搅拌的转速为lOOr/min),取1mL的去离子水缓慢逐滴加入高分子溶液中,制得W/0复合乳液;将复合乳液置入透析袋中透析36小时充分除去有机溶剂,制得含有聚集诱导发光(AIE)分子的高分子囊泡。制备过程中,不断少量取样并在荧光显微镜下观察,研究高分子囊泡的形成过程和结构,其荧光显微镜照片如图2所示,可以看到由于含有AIE分子,囊泡可以呈现出荧光(蓝色)并显现其形貌。
[0053]实施例3
[0054](I)取PEG-5000、丙交酯(PEG与丙交酯的摩尔比1: 0.2)和辛酸亚锡(辛酸亚锡的用量为丙交酯质量的0.05%)加入甲苯溶剂中,氮气氛下150°(3恒温搅拌1811(转速为35(^/min),然后过量冷乙醚中沉析,抽滤即得PEG-PLA嵌段共聚物(S卩PLA5qqq-PEG5qoo);
[0055](2)称取0.05g 二嵌段共聚物PLA5(xx)-PEG5_和0.001g四苯基-l,4-丁二烯加入到lg的THF中,机械搅拌5min(搅拌的转速为700r/min),得到高分子溶液(嵌段共聚物的和四苯基-1,4_丁二烯用量为有机溶剂的5.1wt% );
[0056](3)在搅拌(搅拌的转速为lOOr/min)的条件下,将1mL的去离子水缓慢逐滴加入到高分子溶液中,制得W/0乳液,再持续机械搅拌50h(搅拌的转速为300r/min)使有机溶剂自然挥发后,制得含有聚集诱导发光(AIE)分子的高分子囊泡。
[0057]实施例4
[0058](I)取PEG-5000、丙交酯(PEG与丙交酯的摩尔比1: 0.2)和辛酸亚锡(辛酸亚锡的用量为丙交酯质量的0.05%)加入甲苯溶剂中,氮气氛下150°(3恒温搅拌1811(转速为35(^/min),然后过量冷乙醚中沉析,抽滤即得PEG-PLA嵌段共聚物(S卩PLA
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