一种灵芝实体小分子肽的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提取方法，具体涉及一种灵芝实体小分子肽的提取方法。
【背景技术】
[0002]小分子肽是多肽的一种分类，分子量段一般在1000道尔顿以下，也称作小肽、低聚肽或小分子活性肽，一般由2-6个氨基酸组成，其具有不需要消化、直接吸收，吸收时不需要消耗人体能量、不会增加人体胃肠功能负担且能在人体吸收功能丧失时迫使人体吸收的优点，此外其还具有载体的功能，能将人食的其它营养载在其本体上，输送到人体的细胞、组织，将各种微量元素运输到人体的各个部位。
[0003]但是目前天然存在的肽是很少的，现在小分子肽的生产主要是由蛋白水解而得到的，蛋白水解的方法主要有酸法、碱法和酶法，其中酸、碱法都有成本高、工艺复杂、水解程度不易控制、对环境污染严重等缺点，而且在高碱或高酸的情况下，蛋白与糖和油脂等杂质发生反应，产生褐色物质甚至产生有害物质，他们都会影响小分子肽的品质。酶的水解比较温和，无不良副反应发生，但酶作用的单一性使得通过一种酶很难达到理想的水解效果，而且蛋白提取率低。
[0004]近年来，小分子肽的应用价值越来越受到人们的重视，其相关研究也多有报道，如中国专利CN 103409491A公开了一种大米蛋白小分子肽的制备方法，其包括以下步骤:原料预处理、粉碎、调桨、洗涤、调浆、反应、浓缩、脱水等步骤。而关于灵芝实体小分子肽的提取还鲜有报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种灵芝实体小分子肽的提取方法。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
[0007]—种灵芝实体小分子肽的提取方法，包括以下步骤，
[0008](I)取灵芝进行干燥，再将干燥后的灵芝粉碎成灵芝粉末；
[0009](2)将灵芝粉末与水搅拌混合均匀成混合液，加热混合液至95-100°C后，保温一段时间，再冷却；
[0010](3)往冷却后的混合液中加入碱性蛋白酶，并调节pH至9-11，然后加热混合液到50-55 0C，保温一段时间，得碱性溶液；
[0011](4)往碱性溶液中加入中性蛋白酶，并调节pH至6.5-7，然后加热至50-55°C，保温一段时间，得中性溶液；
[0012](5)往中性溶液中加入胃蛋白酶，并调节pH至3.6-3.8，然后加热至50-55°C，保温一段时间，得酸性溶液；
[0013](6)将酸性溶液加热至90-100°C，保温一段时间，过滤得滤液；
[0014](7)对滤液进行脱色处理得澄清液体，浓缩澄清液体并干燥得灵芝实体小分子肽粉末。
[0015]进一步地，步骤(I)中所述干燥为将灵芝在45_55°C的温度下干燥10_15h。
[0016]进一步地，步骤(I)中所述灵芝粉末的细度为100-150目。
[0017]进一步地，步骤(2)中灵芝和水的重量比为1:15，将灵芝和水在搅拌速度为50-60r/min的条件下混合搅拌均勾;所述加热温度升高的速率为15-25 °C/min;所述保温的时间为15-20min;所述冷却为冷却至50-55°C。
[0018]进一步地，步骤(3)中碱性蛋白酶的活力为50万u/g，所述碱性蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1:100;步骤(3)中使用质量分数为12%的氢氧化钠水溶液调节pH;步骤
(3)中所述的保温时间为3-4h。碱性蛋白酶指在碱性条件下能够水解蛋白质肽键的酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，碱性蛋白酶适合的PH范围为8-11，适宜的温度范围为50-55 0C，反应的时间大概在3-4小时，所以在加入碱性蛋白酶之后要调节pH并加热，使其达到适合碱性蛋白酶的PH及温度，并在适合碱性蛋白酶存活的温度及pH条件反应3-4h。
[0019]进一步地，步骤(4)中性蛋白酶的活力为15万u/g，所述中性蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1:100;步骤(4)中使用质量分数为12%的盐酸水溶液调节pH;步骤(4)中所述的保温时间为3-4h。中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理，适宜的温度范围为50-55 0C、适宜的pH范围为6.5-7。它可把动植物的大分子蛋白质水解成小分子肽或氨基酸，以利于蛋白质的有效吸收和利用，水解度高、风味佳。
[0020]进一步地，步骤(5)中胃蛋白酶的活力为5万u/g，所述胃蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1: 100;步骤(5)中使用质量分数为12 %的盐酸水溶液调节pH;步骤(5)中所述的保温时间为3-4h。胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃黏膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。
[0021]进一步地，步骤(6)中所述保温的时间为20-25min;所述过滤为用400-450目的过滤装置进行过滤。在90-100°C的条件下保温20-25min为了对酶进行灭活处理，对酶进行灭活处理后用400-450目的粗纱布或滤纸进行过滤，得到滤液。
[0022 ]进一步地，步骤(7)中往滤液中加入占所述滤液重量2 % -4 %的活性炭，在60-70 V的温度下搅拌脱色20-30min，然后过滤得澄清液体;浓缩澄清液体至其原有重量的10%-15%，再进行干燥得灵芝实体小分子肽粉末。活性炭是一种黑色多孔的固体炭质，主要成分为碳、并含少量氧、氢、硫、氮氯等元素，具有很强的吸附性能，为用途极广的一种工业吸附剂。浓缩时将澄清液体加热到60 °C左右采用真空浓缩，干燥时采用喷雾干燥或冷冻干燥。
[0023]本发明的有益效果为:本发明所述的灵芝实体小分子肽的提取方法利用复合生物酶酶解技术，并通过调节酶解参数，最大程度的发挥了各种酶制剂的作用，从而大大降低了酶制剂的用量，节约了生产成本，而且所得产品的分子量主要分布在100-700D之间，所得的小分子肽多为二肽、三肽、四肽等极易被人体吸收利用的小分子结构，分子量分布于100-700的小分子肽占蛋白总量的90 %以上；
[0024]经常食用本发明所述的灵芝实体提取的小分子肽具有抗肿瘤、提高免疫力、降血糖、抗氧化、降血脂与抗衰老的功效，而且没有任何已知副作用，过多的摄入会迅速随尿液和胆汁排出，因此可以广泛的应用于医药原料和保健食品中。
【具体实施方式】
[0025]实施例一
[0026]—种灵芝实体小分子肽的提取方法，包括以下步骤:
[0027](I)将灵芝在45°C的温度下干燥1h，将干燥后的灵芝粉碎成颗粒细度为100目的灵芝粉末;将灵芝进行粉碎，有利于灵芝和水的充分混合，便于灵芝中有效成分的析出；
[0028](2)将重量比为1:15的灵芝和水在搅拌速度为50r/min的条件下混合搅拌均匀成混合液，然后将其加热至95°C，并保温15min后再冷却至50°C，在加热时保持温度升高的速率为15 °C /min，因当温度加热到95 °C时有利于灵芝中有效成分的析出；
[0029 ] (3)往冷却后的混合液中加入活力为50万u/g碱性蛋白酶，所加碱性蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1:100，因碱性蛋白酶适合的pH范围为8-11，所以在加入碱性蛋白酶之后，需调节PH至9，然后加热混合液到50°C，保温3h得碱性溶液;作为一种优选的方案，调节PH时使用质量分数为12%的氢氧化钠水溶液进行调节；
[0030](4)往碱性溶液中加入活力为15万u/g的中性蛋白酶，所加的中性蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1:100，因中性蛋白酶适宜的pH范围为6.5-7.0，所以在加入中性蛋白酶之后需要调节PH至6.5，然后加热至50°C，保温3h，得中性溶液;作为一种优选的方案，调节PH时使用质量分数为12%的盐酸水溶液进行调节；
[0031](5)往中性溶液中加入活力为5万u/g的胃蛋白酶，所加的胃蛋白酶的重量与灵芝粉末的重量比为1:100，然后调节pH至3.6，并加热至50°C，保温3h，得酸性溶液;作为一种优选的方案，使用质量分数为12%的盐酸水溶液调节pH;
[0032](6)将酸性溶液加热至90°C，保温20min对酶进行灭活处理，然后用400目的滤纸进行过滤得滤液；
[0033](7)对滤液进行脱色处理得澄清液体，浓缩澄清液体并干燥得灵芝实体小分子肽粉末。往滤液中加入占所述滤液重量2%的活性炭，在60°C的温度下搅拌脱色20min，然后过滤得澄清液体；将澄清液体加热到60°C采用真空浓缩，将澄清液体浓缩至其原有重量的10%，再采用喷雾干燥得灵芝实体小分子肽粉末。
[0034]实施例二
[0035]—种灵芝实体小