发酵罐培养工艺的优化，确定了能挖潜菌种生产能力的培养工艺，采取变温培养，通气流量采取分阶段控制，发酵单位不低于21231mg/L。
[0033](3)采用有机溶剂法、树脂分离、乙醇和水混合沉淀提取分离得到那西肽粗品，并进一步采用离子交换层析法分离纯化得到那西肽精品，整个提取工艺中那西肽的提取率不低于85.1%,生物效价不低于750U/mg。
[0034]本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0035]图1为本发明的利用活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法的流程示意图。
【具体实施方式】
[0036]下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0037]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0038]实施例1
[0039]一种活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16，其分类命名为活跃链霉菌Streptomyces actuosus，所述活跃链霉菌LB-16被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为:CGMCC N0.11732,保藏时间为:2015年11月25日，保藏单位地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。
[0040]实施例2
[0041 ] 一种产生所述的活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16的方法，包括如下步骤:
[0042]步骤一、将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯于距离所述单孢子液35cm处照射20?30s，并稀释培养6?7天后，选取长势较好的单个菌落，接种于斜面培养基，获得突变的活跃链霉菌CNl O。
[0043]步骤二、将步骤一得到的突变的活跃链霉菌CNlO用pH6.0的Tr i S_Hc I溶液处理，得到第二孢子悬浮液，将亚硝基胍溶于PH6.0的Tris-Hcl溶液，得到亚硝基胍的原液，然后将第二孢子悬浮液和亚硝基胍的原液以体积比为1:1混合，使亚硝基胍的浓度为300?500yg/mL，然后在26?30°C下诱变120?130min，诱变反应终止后，立即用冷的生理盐水稀释混合液100倍，然后再稀释相应梯度涂平板，培养6?7天后，筛选得到活跃链霉菌LB-16。
[0044]所述斜面培养基包括以重量百分比计的下述成分:可溶性淀粉1.0?2.0%、豆饼粉0.5?1.0%、ΚΝ03 0.1 ?0.2%、NaCl 0.05?0.01 %、MgS(k.7H20 0.05?0.01 %和琼脂2.0%-3.0%ο
[0045]实施例3
[0046]如图1所示，一种利用所述的活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16制备那西肽的方法，包括如下步骤:
[0047]A、从母种试管中挑取新鲜的高产活跃链霉菌LB-16，接入80mL种子培养基中，并将种子培养基装于500mL的三角瓶中，于温度为22°C，转速为120rpm下，振荡培养72h，作为一级种子。
[0048]B、在200mL种子培养基上接入上述一级种子50mL，并将种子培养基装于100mL的三角瓶中，于温度为22°C，转速为120rpm下，振荡培养60h后，作为二级种子。
[0049]C、将上述二级种子接入装有发酵培养基的100L全自动发酵罐中，于装液量60L，温度为22°C，转速为150rpm，通气量以体积比为1:0.4，压力为0.6即&下，发酵培养12011。在发酵培养时用质量浓度为10 %的氨水进行补料，控制发酵罐中的pH为6.0，并通过调整转速控制发酵罐中的溶氧值为60%，在还原糖含量低于1.0%以下放罐。
[0050]D、将步骤C得到的那西肽发酵液200mL浓缩至1/3，加入发酵液体积6倍的异丙醇中，于温度为60°C下提取3h，得到那西肽粗提液。
[0051]E、将上述那西肽粗提液真空减压浓缩到原来体积的1/5，然后加入5倍体积的水，用质量浓度为1 %的氢氧化钠溶液调节pH为6，搅拌2h，期间析出大量固体，将析出的固体离心分离、水洗、干燥后得到那西肽粗品。
[0052]F、将上述那西肽粗品装填在树脂层析柱中，树脂型号为XAD-7，先用浓度为0.2mol/L的磷酸氢二钠缓冲液平衡所述树脂层析柱，然后用浓度为0.lmol/L的氢氧化钠溶液梯度洗脱，得到那西肽洗脱液，洗脱液干燥后溶于其3倍体积的乙醇中，加热到80°C完全溶解，然后加入乙醇体积7倍的清水，室温下搅拌3h，抽滤出固体，固体用I倍体积的水淋洗，50°C下真空干燥后，得到那西肽精品，收率为85.62%，平均生物效价为7781]/!!^。
[0053]所述种子培养基包括以重量百分比计的下述成分:豆饼粉2.0%、葡萄糖3.0%、玉米浆 2.0%、MgS04.7H20 0.05%, (NH4)2SO4.7H20 0.3%和轻质碳酸钙0.5%，所述发酵培养基包括以重量百分比计的下述成分:淀粉6.0 %、蛋白胨0.5 %、黄豆粉8.0 % ,NaCl0.3%,(NH4)2SO4.7H20 0.2%和轻质碳酸钙0.1%。
[0054]实施例4
[0055]如图1所示，一种利用所述的活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16制备那西肽的方法，包括如下步骤:
[0056]A、从母种试管中挑取新鲜的高产活跃链霉菌LB-16，接入80mL种子培养基中，并将种子培养基装于500mL的三角瓶中，于温度为26°C，转速为120rpm下，振荡培养80h，作为一级种子。
[0057]B、在200mL种子培养基上接入上述一级种子50mL，并将种子培养基装于100mL的三角瓶中，于温度为26°C，转速为120rpm下，振荡培养60h后，作为二级种子。
[0058]C、将上述二级种子接入装有发酵培养基的100L全自动发酵罐中，于装液量60L，温度为26°C，转速为150rpm，通气量以体积比为1:0.6，压力为0.6即&下，发酵培养15011。在发酵培养时用质量浓度为10 %的氨水进行补料，控制发酵罐中的pH为6.0，并通过调整转速控制发酵罐中的溶氧值为60%，在还原糖含量低于1.0%以下放罐。
[0059]D、将步骤C得到的那西肽发酵液200mL浓缩至1/3，加入发酵液体积8倍的二氯甲烷中，于温度为80°C下提取3h，得到那西肽粗提液。
[0060]E、将上述那西肽粗提液真空减压浓缩到原来体积的1/5，然后加入5倍体积的水，用质量浓度为10 %的氢氧化钠溶液调节pH为8，搅拌2h，期间析出大量固体，将析出的固体离心分离、水洗、干燥后得到那西肽粗品。
[0061]F、将上述那西肽粗品装填在树脂层析柱中，树脂型号为XAD-7，先用浓度为
0.2mol/L的磷酸氢二钠缓冲液平衡所述树脂层析柱，然后用浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液梯度洗脱，得到那西肽洗脱液，洗脱液干燥后溶于其3倍体积的乙醇中，加热到80°C完全溶解，然后加入乙醇体积10倍的清水，室温下搅拌3h，抽滤出固体，固体用I倍体积的水淋洗，50°C下真空干燥后，得到那西肽精品，收率为86.21%，平均生物效价为7851]/!!^。
[0062]所述种子培养基包括以重量百分比计的下述成分:豆饼粉3.0%、葡萄糖4.0%、玉米浆3.0%、MgS04.7H20 0.1%,(NH4)2SO4.7H20 0.5%和轻质碳酸钙0.5%，所述发酵培养基包括以重量百分比计的下述成分:淀粉7.0 %、蛋白胨0.3 %、黄豆粉7.0 %、NaCl 0.3%,(NH4)2SO4.7H20 0.2%和轻质碳酸钙0.2%。
[0063]实施例5
[0064]如图1所示，一种利用所述的活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16制备那西肽的方法，包括如下步骤:
[0065]A、从母种试管中挑取新鲜的高产活跃链霉菌LB-16，接入