一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法
【专利摘要】本发明属于农产品精深加工领域，公开了一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法；提取步骤依次是：洋葱预处理、氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸、氮气保护减压蒸馏浓缩提取液、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖、重结晶得到异蒜氨酸；本发明的特点是不破碎洋葱，不高温或微波加热，不灭活洋葱中的酶，在氮气保护下，将乙醇压入洋葱细胞中置换出细胞质中的异蒜氨酸，但不提取液泡中的酶，不发生异蒜氨酸的酶解反应，能得到纯品异蒜氨酸，而不是酶解产物蒜素（洋葱精油）。异蒜氨酸提取率可达到0.426 mg/g，是理论提取率的70%；经过重结晶得到纯度为99%的异蒜氨酸。
【专利说明】
一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法
技术领域
[0001]本发明属于农产品精深加工技术，是一种从洋葱中提取活性成份的方法，具体涉及一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法。
【背景技术】
[0002]洋葱，属于多年生草本植物，是百合科葱属植物的一种，具有药食两用的功能。现代医学研究表明，洋葱具有杀菌、调血脂、抑制血小板聚集、降血压、防治动脉粥样硬化、降血糖、抗癌等功效，尤其是具有预防心血管疾病和抗癌等方面的生物活性。
[0003]洋葱中的主要活性成份是异蒜氨酸，即反式S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜，S-allyl-L-cysteine sulfoxide,即allium cepa。它对多种病原菌有抑杀作用，是天然的植物杀菌素，对不少细菌性、真菌性和原虫性感染，均有治疗和预防价值，在生物医药研究开发方面具有很大的作用，被世界医学界称为“二十一世纪在天然药物领域中的最伟大神奇发现之一”。近几年来这一极性单体一一(异)蒜氨酸引起了各国学者的高度重视。
[0004]本领域的技术人员周知:异蒜氨酸在洋葱细胞的细胞质中，蒜氨酸酶和催泪因子酶在细胞的液泡中，完整的细胞中，两者是隔离开的，只有细胞破碎后，液泡中的酶释放出来，蒜氨酸酶酶解异蒜氨酸，生成少量含硫化合物，称为蒜素(硫代亚磺酸酯，TS)和催泪因子酶酶解异蒜氨酸生成大量挥发性催泪因子(LF)，是洋葱自我保护的一种措施。因此，要提取异蒜氨酸，就不能和酶接触。
[0005]纯品异蒜氨酸的提取条件非常苛刻，技术难度很大，其化学性质极不稳定，在捣碎破损的情况下极易和洋葱中的蒜氨酸酶和催泪因子酶反应转化成蒜素和气体物质，在空气和高温中极易氧化变质。这使得高纯度异蒜氨酸的国际市场价格非常昂贵，异蒜氨酸标样的价格为1200元/5 mg。因此，高纯异蒜氨酸制品和高纯药用异蒜氨酸具有极高的商业价值。
[0006]目前洋葱精油的提取方法主要有水蒸汽蒸馏法、溶剂浸提法、超临界CO2萃取法和酶灭活法。
[0007]水蒸汽蒸馏法:常压水蒸汽蒸馏法得到的洋葱精油呈熟洋葱气味，主要成份是丙基、丙稀基二硫化合物，不是异蒜氨酸。减压法能制得含新鲜洋葱风味的精油蒜素(TS),但得率仅达到0.113%0。
[0008]溶剂浸提法:用乙醚、乙醇溶剂浸提时，获得的是含有甲基、丙基二硫化合物，不是异蒜氨酸，以二氯甲烷为溶剂浸提时获得了甲基、丙烯基蒜素(TS)，得率约为水蒸气蒸馏法的3.5倍。
[0009]超临界CO2萃取法:九十年代以来，该法广泛用于洋葱精油的提取，获得了具有新鲜洋葱风味的精油蒜素(TS)，精油得率为0.23%。?0.38%o。
[0010]酶灭活法:在洋葱打浆前先用沸水灭活蒜氨酸酶和催泪因子合成酶，再用二氯乙烷提取异蒜氨酸，然后用外源酶一一蒜酶分解异蒜氨酸，制备蒜素，避免变成催泪因子挥发掉，报道的精油得率是0.921%。，其中蒜素(TS)含量为71.3%。
[0011]新疆埃乐欣药业有限公司提交的发明专利申请(申请号为201410622904.8、公开号为CN104498351A、发明名称为低温隔绝空气大蒜辣素生产装置及其使用方法)所公开的技术方案是通过蒜酶催化蒜氨酸裂合生物合成大蒜辣素，微滤和超滤纯化大蒜辣素，循环萃取和分子蒸馏液液分离，物理除菌和充氩预装，隔绝空气，降低合成温度，避免分解。
[0012]云南农业大学提交的申请号为201410354130.5的发明专利申请，公布了一种同时制备大蒜多糖和蒜氨酸的方法，采取的技术方案是应用微波灭活蒜氨酸酶，膜分离、离子交换和结晶，同时制得大蒜多糖和蒜氨酸。
[0013]齐鲁工业大学提交的申请号为201410296457.1的发明专利申请，公布了一种超声辅助双水相提取蒜氨酸的方法，采取的技术方案是将大蒜粉加入双水相中，用无机盐的缓冲溶液和小分子有机溶剂制得双水相，调节双水相PH值为2.0-4.0，超声提取，离心分离，静置分层，双相中都有蒜氨酸。
[0014]深圳劲创生物技术有限公司提交的申请号为201410101556.X的发明专利申请提出了一种制备蒜氨酸微乳液的方法，因蒜氨酸难溶于有机溶剂而影响使用，提出用水、油和表面活性剂制备微乳液，稳定且能防止空气氧化。
[0015]江苏大学的专利号为201210322853.8发明专利，公开了一种脉冲超声辅助提取大蒜中蒜氨酸的方法。米取的技术方案是将大蒜用水浴加热灭酶，打碎，脉冲超声提取，超滤膜分离，得到蒜氨酸。
[0016]近年来，还提出了一些新的方法，如离子液体在洋葱精油制取中的应用研究，洋葱精油的多次精馆if禹合提取，超临界流体萃取技术在洋葱精油尚效提取中的应用。所制备的洋葱精油中主要物质为含硫化合物，即硫代亚磺酸酯TS，而不是异蒜氨酸纯品。
[0017]综上所述，洋葱精油的提取米用两类方法:酶解法制备蒜素和灭酶法制备异蒜氨酸。酶解法的缺点是生成大量挥发性催泪因子，严重浪费昂贵的异蒜氨酸;灭酶法的缺点是高温导致部分异蒜氨酸变质。
【发明内容】
[0018]本发明的目的是提供一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法，该方法在室温下氮气保护制备纯品异蒜氨酸，不破坏细胞结构，不发生酶解，氮气保护，隔绝空气，室温提取，避免高温，防止氧化变质。
[0019]为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下:一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法，提取步骤依次是:洋葱预处理、氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸、氮气保护减压蒸馏浓缩提取液、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖、重结晶得到异蒜氨酸;具体方法如下:
(I)洋葱预处理
将洋葱去掉外皮，切头去尾，一切两半，立即用去离子水洗净切口，避免切口酶残留，分成瓣;按照洋葱质量份/无水乙醇体积份为I /3的比例，将洋葱称重后，放入不锈钢提取罐。
[0020](2)氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸
向不锈钢提取罐加入无水乙醇，密封，用氮气保护；用氮气钢瓶的减压阀调节氮气压力至0.1?0.7 MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.1?0.7 MPa的氮气通入提取罐中，使提取罐压力达到设定压力即0.I?0.7 MPa，保压时间0.5?2.5h，打开提取罐上部放气阀，泄压至0.1MPa后，将提取液从下部取样阀中全部放出，迅速转移至旋转蒸发仪中，用氮气保护。[0021 ] (3)氮气保护减压蒸馏浓缩提取液
用旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩提取液，真空度0.08MPa，温度50°C，旋转蒸发仪中通入氮气隔绝空气，防止异蒜氨酸高温氧化，至乙醇溶剂回收约95%后，停止浓缩，得到粘稠状黄色液体。
[0022](4)氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖
将粘稠状黄色液体20g加200mL超纯水溶解后抽滤，去除纤维等大部分不溶性物质得淡黄色清液;量取200mL处理好的732树脂装柱，用超纯水冲洗至流出液无色;再将淡黄色清液用HCl调节至pH为2，在氮气氛围下以0.5BV/h的流速上样；之后用pH为3?4的盐酸溶液以lBV/h的流速冲洗至墨式试剂检测呈阴性，盐酸溶液冲洗期间要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有氨基酸泄露;再改用清水清洗柱子至PH为7，清水清洗期间仍然要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有氨基酸泄露，流出液是多糖溶液;之后用0.5 mol/L氨水溶液将异蒜氨酸洗脱。
[0023](5)重结晶得到异蒜氨酸
将氨水洗脱液在氮气保护下减压蒸馏，真空度0.0SMPa，温度50°C，得到浓缩液，用超纯水溶解浓缩液，再次过滤上柱，用氨水洗脱，再次减压蒸馏，加无水乙醇，重结晶得到纯品异蒜氨酸。
[0024]步骤(I):洋葱预处理时，其实质性特点是不破碎洋葱，不加热，不灭酶;步骤(2)其实质性特点是:在氮气压力下，乙醇通过细胞壁进入细胞中，将细胞质置换出来，异蒜氨酸随之扩散到细胞外的乙醇中，溶于乙醇水溶液中，由于致密的液泡膜的阻碍，乙醇进不到液泡中，酶不会扩散出来;步骤(3)中旋转蒸发仪中通入氮气隔绝空气，防止异蒜氨酸高温氧化;步骤(4)其实质性特点是:将蒸馏液溶于适量超纯水中，过滤后用处理过的732阳离子交换树脂吸附分离多糖和异蒜氨酸，流出液是多糖，异蒜氨酸吸附在树脂上，用氨水洗脱收集。
[0025]本发明用氮气加压无水乙醇置换提取法单独提取异蒜氨酸，是在室温下氮气保护制备纯品异蒜氨酸，不破坏细胞结构，不发生酶解，氮气保护，隔绝空气，室温提取，防止氧化变质。特点是不破碎洋葱，不高温或微波加热，不灭活洋葱中的酶，在氮气保护下，将乙醇压入洋葱细胞中置换出细胞质中的异蒜氨酸，但不提取液泡中的酶，不发生异蒜氨酸的酶解反应，能得到纯品异蒜氨酸，而不是酶解广物蒜素(洋葱精油)O异蒜氨酸提取率可达到
0.426 mg/g，是理论提取率的70%;经过重结晶得到纯度为99%的异蒜氨酸。
【附图说明】
[0026]图1是异蒜氨酸标准品工作曲线图；
图2是异蒜氨酸标准品尚效液相色谱图，其中峰4是蒜氨酸:
图3是提取压力0.6MPa，提取时间1.5的提取液的高效液相色谱图，其中峰5是异蒜氨酸；
图4是不同压力下，提取液中异蒜氨酸含量C与提取时间T的关系曲线图；
图5是提取液中异蒜氨酸含量C、压力P与提取时间T的变化曲线图。
【具体实施方式】
[0027]本部分提供的是本发明的35个对比试验例，主要对比试验数据是步骤2的提取时间与提取压力，其中提取时间选择:0.5 h、l h,l.5 h、2 11与2.5 h五个时间值;提取压力选择:0.1 MPa、0.2 MPa、0.3 MPa、0.4 MPa、0.5 MPa、0.6 MPa与 0.7MPa七个压力值；35个试验中，每个试验使用一个洋葱试样即经过预处理的200g洋葱；在0.1 MPa的压力之下，分别作了0.5 h、l h,l.5 h、2 11与2.5 h五个时间值的试验例，在0.2 MPa的压力之下，又分别作了0.5 h、l h,l.5 h、2 11与2.5 h五个时间值的试验例，以此类推，完成35个试验例。
[0028]试验例I;
1、洋葱预处理
将洋葱去掉外皮，切头去尾，一剖两半，分成散瓣，先用清水冲洗3遍，再用去离子水洗涤3次，洗净切口汁液，避免切口残留酶而发生酶解反应。
[0029]2、提取异蒜氨酸
选用无水乙醇作溶剂，氮气加压，将200 g洋葱瓣放入装有600 mL乙醇的不锈钢提取罐中，用氮气保护、加压密闭提取。用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.1MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.1MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.1MPa，保压时间
0.5h;而后打开提取罐放气阀泄压，而后将提取液从提取罐取样阀口全部放出，迅速转移至旋转蒸发仪中，用氮气保护。
[0030]3、提取液的处理
3.1从提取液中取出2 mL，在10000 rad/min下离心15 min，将离心后的液体_10°C保存，用于高效液相色谱分析；
3.2将提取液在氮气保护的条件下，在温度50°C真空度0.08 MPa的工艺条件下，用旋转蒸发仪减压蒸馏，去除95%的乙醇溶剂，得到黄色粘稠状液体。旋转蒸发仪中通入的氮气隔绝空气，防止异蒜氨酸高温氧化。
[0031]4、氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖
4.1将旋蒸得到的黄色粘稠状液体20 g加200 mL超纯水溶解后抽滤，去除纤维等大部分不溶性物质得淡黄色清液。量取200 mL处理好的732树脂装柱，用超纯水冲洗至流出液无色，再将上述淡黄色清液用HCl调节至pH=2，在氮气氛围下以0.5 BV/h的流速上样，之后用PH3.5的盐酸溶液以I BV/h的流速冲洗至墨式试剂检测呈阴性(期间要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有氨基酸泄露)，改用清水清洗柱子(期间仍然要检测氨基酸是否泄露)至pH=7，流出液是多糖溶液。之后用0.5 mol/L氨水溶液将异蒜氨酸洗脱，洗脱过程中用TLC检测，将相同的流分富集。
[0032]4.2异蒜氨酸的检测(TLC):用玻璃毛细管在薄层色谱板上点样后吹干，用正丁醇:冰乙酸:水=4:1:1作为展开液展开，至前沿约Icm时取出，吹干，蘸取茚三酮溶液，吹干后烘箱中75 °C烘干10 min，观察斑点及斑点的显色情况。
[0033]4.3异蒜氨酸含量的HPLC测定:采用反相高效液相色谱对提取物中异蒜氨酸的含量进行检测。色谱柱为ODS C18 (250mmX4.6mm,5ym)，二极管点阵检测器，检测波长210nm，流动相的体积比为甲醇:水体系=3:7，流速为0.8 mL/min，柱温为25°C，进样量20yL。
[0034]本实验考察不同流动相配比对异蒜氨酸分离度的影响，采用甲醇:水=1: 99?99: I(体积比)范围内。结果表示甲醇:水体系=3:7时分离效果最好。
[0035]5、重结晶得到异蒜氨酸
将氨水洗脱液在氮气保护下减压蒸馏，真空度0.08 MPa，温度50°C，得到浓缩液，用超纯水溶解浓缩液，再次过滤上柱，用氨水洗脱，再次减压蒸馏，加无水乙醇，重结晶得到纯品异蒜氨酸。
[0036]试验例2;
1、洋葱预处理:同试验例I;
2、提取异蒜氨酸:保压时间1.0h;余同试验例I;
3、提取液的处理:同试验例I；
4、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖:同试验例I;
5、重结晶得到异蒜氨酸；同试验例I。
[0037]试验例3;
1、洋葱预处理:同试验例I;
2、提取异蒜氨酸:保压时间1.5h;余同试验例I;
3、提取液的处理:同试验例I；
4、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖:同试验例I;
5、重结晶得到异蒜氨酸；同试验例I。
[0038]试验例4;
1、洋葱预处理:同试验例I;
2、提取异蒜氨酸:保压时间2.0h;余同试验例I ；
3、提取液的处理:同试验例I；
4、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖:同试验例I;
5、重结晶得到异蒜氨酸；同试验例I。
[0039]试验例5;
1、洋葱预处理:同试验例I;
2、提取异蒜氨酸:保压时间2.5h;余同试验例I ；
3、提取液的处理:同试验例I；
4、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖:同试验例I;
5、重结晶得到异蒜氨酸；同试验例I。
[0040]试验例6;
1、洋葱预处理:同试验例I;
2、提取异蒜氨酸:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.2MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.2MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.2MPa，保压时间0.5h;余同试验例I;
3、提取液的处理:同试验例I；
4、阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖:同试验例I;
5、重结晶得到异蒜氨酸；同试验例I。
[0041 ]试验例7;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例6ο其它步骤同试验例I。
[0042]试验例8;步骤2中，保压时间1.5h，余同试验例6。其它步骤同试验例I。
[0043]试验例9;步骤2中，保压时间2.0h，余同试验例6。其它步骤同试验例I。
[0044]试验例10;步骤2中，保压时间2.5h，余同试验例6。其它步骤同试验例I。
[0045]试验例11;步骤2中:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.3MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.3MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.3MPa，保压时间0.5h;余同试验例I ο其它步骤同试验例I。
[0046]试验例12;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例11。其它步骤同试验例I。
[0047]试验例13;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例11。其它步骤同试验例I。
[0048]试验例14;步骤2中:保压时间2.0h，余同试验例11。其它步骤同试验例I。
[0049]试验例15;步骤2中:保压时间2.5h，余同试验例11。其它步骤同试验例I。
[0050]试验例16;步骤2中:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.4MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.4MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.4MPa，保压时间0.5h;余同试验例I ο其它步骤同试验例I。
[0051]试验例17;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例16。其它步骤同试验例I。
[0052]试验例18;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例16。其它步骤同试验例I。
[0053]试验例19;步骤2中:保压时间2.0h，余同试验例16。其它步骤同试验例I。
[0054]试验例20;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例16。其它步骤同试验例I。
[0055]试验例21;步骤2中:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.5MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.5MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.5MPa，保压时间0.5h;余同试验例I ο其它步骤同试验例I。
[0056]试验例22;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例21。其它步骤同试验例I。
[0057]试验例23;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例21。其它步骤同试验例I。
[0058]试验例24;步骤2中:保压时间2.0h，余同试验例21。其它步骤同试验例I。
[0059]试验例25;步骤2中:保压时间2.5h，余同试验例21。其它步骤同试验例I。
[0060]试验例26;步骤2中:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.6MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.6MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.6MPa，保压时间0.5h;余同试验例I ο其它步骤同试验例I。
[0061]试验例27;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例26。其它步骤同试验例I。
[0062]试验例28;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例26。其它步骤同试验例I。
[0063]试验例29;步骤2中:保压时间2.0h，余同试验例26。其它步骤同试验例I。试验例30;步骤2中:保压时间2.5h，余同试验例26。其它步骤同试验例I。试验例31;步骤2中:用减压阀将氮气钢瓶的氮气压力调节至0.7MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.7MPa的氮气通入提取罐中，保持提取罐压力为0.7MPa，保压时间0.5h;余同试验例I。其它步骤同试验例I。
[0064]试验例32;步骤2中:保压时间1.0h，余同试验例31。其它步骤同试验例I。
[0065]试验例33;步骤2中:保压时间1.5h，余同试验例31。其它步骤同试验例I。试验例34 ；步骤2中:保压时间2.0h，余同试验例31 ο其它步骤同试验例I。
[0066]试验例35;步骤2中:保压时间2.5h，余同试验例31。其它步骤同试验例I。
[0067]试验结果分析如下:
1、提取中加入提取罐的纯乙醇为600 mL，得到的提取液为640?650 mL，说明提取过程中有部分水分从洋葱细胞中浸出到乙醇溶液中，部分乙醇进入细胞中置换出了水分。
[0068]2、异蒜氨酸标准工作曲线
将异蒜氨酸标准品分别配制成浓度为25yg/mL，37.5yg/ mL，50yg/mL，62.5yg/mL，7 5yg/mL，100yg/mL，125yg/mL，150yg/mL的水溶液，采用高效液相色谱分别测量其积分面积，以浓度为横坐标，积分面积为纵坐标做出工作曲线如图1所示。
[0069]3、异蒜氨酸标准品和提取样品高效液相色谱图
异蒜氨酸标准品高效液相色谱图如图2所示，峰4是异蒜氨酸；图3所示是提取压力0.6MPa，提取时间1.5h的提取液高效液相色谱图，峰5是异蒜氨酸。
[0070]4、提取液中异蒜氨酸含量和提取压力及提取时间的关系
不同压力下提取液中异蒜氨酸含量随提取时间变化关系如图4所示，1.5 h以后提取率不再上升，异蒜氨酸浓度在洋葱细胞内外的乙醇溶液中达到平衡。压力对提取率的影响如图5所示，压力0.6 MPa时，提取率最高，当压力达到0.7 MPa时，提取率反而下降，原因是细胞中的液泡破裂，酶释放出来，将部分异蒜氨酸酶解，提取率比0.6MP下降明显。
【主权项】
1.一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法，其特征在于提取步骤依次是:洋葱预处理、氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸、氮气保护减压蒸馏浓缩提取液、氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖、重结晶得到异蒜氨酸;具体方法如下: (1)洋葱预处理 将洋葱去掉外皮，切头去尾，一切两半，立即用去离子水洗净切口，避免切口酶残留，分成瓣;按照洋葱质量份/无水乙醇体积份为I /3的比例，将洋葱称重后，放入不锈钢提取罐； (2)氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸 向不锈钢提取罐加入无水乙醇，密封，用氮气保护；用氮气钢瓶的减压阀调节氮气压力至0.1?0.7 MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.1?0.7 MPa的氮气通入提取罐中，使提取罐压力达到0.1?0.7 MPa，保压时间0.5?2.5h，打开提取罐上部放气阀，泄压至0.1MPa后，将提取液从下部取样阀中全部放出，迅速转移至旋转蒸发仪中，用氮气保护； (3)氮气保护减压蒸馏浓缩提取液 用旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩提取液，真空度0.08MPa，温度50°C，旋转蒸发仪中通入氮气隔绝空气，至乙醇溶剂回收约95%后，停止浓缩，得到粘稠状黄色液体； (4)氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖 将粘稠状黄色液体20g加200mL超纯水溶解后抽滤，去除纤维等大部分不溶性物质得淡黄色清液;量取200mL处理好的732树脂装柱，用超纯水冲洗至流出液无色;再将淡黄色清液用HCl调节至pH为2，在氮气氛围下以0.5BV/h的流速上样；之后用pH为3?4的盐酸溶液以lBV/h的流速冲洗至墨式试剂检测呈阴性，盐酸溶液冲洗期间要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有氨基酸泄露;再改用清水清洗柱子至PH为7，清水清洗期间仍然要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有异蒜氨酸泄露;之后用0.5 mol/L氨水溶液将异蒜氨酸洗脱； (5)重结晶得到异蒜氨酸 将氨水洗脱液在氮气保护下减压蒸馏，真空度0.0SMPa，温度50°C，得到浓缩液，用超纯水溶解浓缩液，再次过滤上柱，用氨水洗脱，再次减压蒸馏，加无水乙醇，重结晶得到纯品异蒜氨酸。
【文档编号】C07C317/48GK105820097SQ201610336758
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】常彦龙, 于桂琴, 余楚舒, 常曦元, 吕静
【申请人】兰州大学