一种产脲酶菌株的固定化及其应用
【专利摘要】本发明涉及一种产脲酶菌株的固定化及其应用，固定生产脲酶的根瘤菌属细菌，并将其应用于清除食品尿素中。本发明研究了细胞固定化的最适条件以及游离细胞和固定化细胞的最适pH、最适温度、温度稳定性和pH稳定性，用响应面方法优化固定化细胞的最优条件为：1.96％琼脂，1.42％细胞和pH 9.0，固定化后，细胞的脲酶活性提高了约1.5倍，最适反应温度由40℃上升到50℃。最后还研究了固定化细胞在清除尿素中的应用，尿素清除实验显示固定化细胞对部分酒类和牛奶具有良好的效果。将固定化的菌株细胞加入到5种市售的产品中，在35℃保温24小时，结果显示，10％?92.8％的尿素可以被清除，具有良好的应用价值。
【专利说明】
一种产脲酶菌株的固定化及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及到一种产脲酶菌株的固定化及其应用于食品中尿素清除技术领域，具 体涉及一种根癌农杆菌细胞固定化，游离细胞与固定化细胞的脲酶特性及其在尿素清除中 的应用。
【背景技术】
[0002] 氨基甲酸乙酯(EC)是一种致癌物质，广泛存在于发酵食品中，如酱油，面包，奶酪 以及酒精饮料。在酒精制品的发酵和存储过程中，尿素被认为是EC的主要前体物质，它可以 同乙醇反应而转化成EC。因此，控制酒精制品中的尿素含量是减少EC含量的关键步骤。根据 相关报道以及实际的应用情况，通过添加脲酶来分解尿素是降解食品中尿素含量的有效方 法。本专利中，从麦田土壤筛选获得一种产脲酶的菌株，16S rDNA鉴定为Agrobacterium tumefaciens，是一种安全微生物。
【发明内容】
[0003] 本发明弥补了现有技术中的不足，提出以固定脲酶菌株的方式代替直接固定脲 酶，并将固定化脲酶菌株细胞应用于食物中的尿素清除。
[0004] 本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
[0005] -种产脲酶菌株固定化的方法，按照下述步骤进行：
[0006] 步骤一，筛选培养产脲酶的根瘤菌属细菌，挑取单克隆菌株接种到液体培养基中， 形成具有产脲酶菌株游离细胞的种子液；
[0007] 步骤二，调整种子液pH值为4-11，20_50°C发酵形成发酵液，检测发酵液中脲酶酶 活力；
[0008] 步骤三，收集发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将 悬浮细胞液加入到细胞固定化载体中，混匀后放入4°C冷却硬化形成固定化脲酶菌株细胞；
[0009] 步骤四，将固定化脲酶菌株细胞分割成小体积并检测脲酶酶活力。
[0010] 所述步骤二中，产脲酶菌株游离细胞脲酶活性的最适pH值为7.0-10.0，优选9.0。
[0011] 所述步骤二中，产脲酶菌株游离细胞脲酶活性的最适温度为30-50°C，优选40°C。
[0012] 所述步骤三中，细胞固定化载体为琼脂，以琼脂为载体的细胞固定化过程按照下 述步骤进行：
[0013] 步骤(1)，收集发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将 悬浮细胞液加入到融化并在40°C保温的琼脂胶中，混匀后倒入90mm直径的平板中，放入4°C 冷却硬化形成琼脂固定化产脲酶菌株细胞；
[0014] 步骤(2)，将琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，块状胶体大小为2mm X 2_ X 1mm，检测脲酶酶活力。
[0015] 所述步骤(1)中，细胞琼脂固定化最适条件为琼脂浓度为1.96 %，脲酶菌株细胞含 量为1.42%，pH值为9.0。
[0016]所述步骤(2)中，琼脂固定化产脲酶菌株细胞脲酶活性的最适pH值为7.0-10.0,优 选 9.0〇
[0017]所述步骤(2)中，琼脂固定化产脲酶菌株细胞脲酶活性的最适温度为40-60°C，优 选 50°C。
[0018] 琼脂固定化产脲酶菌株细胞在食品尿素清除中的应用。
[0019] 本发明的有益效果为：固定化后，细胞的脲酶活性提高了约1.5倍，最适反应温度 由40°C上升到50°C。固定化细胞在清除尿素中的应用显示，固定化细胞对部分酒类和牛奶 中的尿素清除具有良好的效果。向5种市售的产品中加入固定化细胞，在35°C保温24小时， 结果显示，清酒(韩国）的尿素清除率达到53.11%，黄酒的尿素清除率在39.81%到63.74% 不等（分别为：干型黄酒39.81%，半干型黄酒52.64%，半甜型黄酒63.74%)。值得一提的 是，该固定化细胞对牛奶中尿素的清除率达到了 92.81%。结果表明，本发明具有良好的应 用价值。
【附图说明】
[0020] 图1是根癌农杆菌细胞生长曲线和产酶曲线。1是细胞生长曲线，2是细胞产酶曲 线。
[0021 ]图2是细胞固定化优化响应面三维图。（a):琼脂浓度和细胞含量，（b):琼脂浓度和 pH，（c):细胞含量和pH。
[0022] 图3是琼脂固定化产脲酶菌株细胞及产脲酶菌株游离细胞的酶学性质。3a:pH对产 脲酶菌株游离细胞尿素活性的影响;3b: pH对琼脂固定化产脲酶菌株细胞尿素活性的影响； 3c:温度对产脲酶菌株游离细胞尿素活性的影响;3d:温度对琼脂固定化产脲酶菌株细胞尿 素活性的影响；1是产脲酶菌株游离细胞最适pH曲线；2是产脲酶菌株游离细胞pH稳定性曲 线；3是产脲酶菌株游离细胞最适温度曲线;4是产脲酶菌株游离细胞热稳定性曲线；5是琼 脂固定化产脲酶菌株细胞最适pH曲线;6是琼脂固定化产脲酶菌株细胞pH稳定性曲线；7是 琼脂固定化产脲酶菌株细胞最适温度曲线;8是琼脂固定化产脲酶菌株细胞热稳定性曲线。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。
[0024] 本发明所涉及的菌株包括根瘤菌属，例如豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌和百脉根瘤菌， 还包括根癌农杆菌，另外还涉及一种从青岛即墨麦田土壤筛选得到的脲酶菌株，菌株经过 16S rDNA分析鉴定该菌为脲酶菌株Agrobacterium tumefaciens，是一种安全微生物。 [0025]对于本发明其具体步骤如下：
[0026] (1)脲酶菌株的筛选及培养
[0027]筛选培养产脲酶的脲酶菌株，涂布到S1平板放在37°C环境下培养24h，挑选具有红 色显色圈的菌株，再将挑选到的菌株接种到S2培养基中，挑选培养基变红的菌株，将其在S1 平板上划线，37°C培养后挑选具有红色显色圈的单克隆，接种到S3培养基37°C培养24h形成 种子液，取lmL种子液接种至lj40/250mL S4培养基中，37°C发酵产酶16h，并测酶活力。
[0028]其中，各类培养基成分如下：
[0029] S1 培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸和15g/L琼脂；
[0030] S2培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸。
[0031] S3培养基：即LB培养基，10 · Og/L蛋白胨，5g/L酵母粉，10 · Og/L NaCl。S4发酵培养 基：5g/L 葡萄糖，5g/L 蛋白胨，0.5g/L KH2P〇4,0.5g/L Na2HP〇4,0.05g/L MnS〇4.4H20， 0.05g/L Ni2S〇4 · 6H20,0.05g/L MgS〇4 · 7H20。
[0032] (2)脲酶菌株生长曲线和产酶特性
[0033] 在21个三角瓶中平行培养菌株0AH-01 (筛选后获得菌株），每隔4h取出三瓶测菌体 浓度和酶活性。以确定最佳发酵时间。菌株的生长曲线和产酶曲线见图1。由图可知，发酵时 间为16h时脲酶产量达到最大。
[0034] (3)产脲酶菌株游离细胞pH及温度特性
[0035]本发明探究了在20-60°C和pH 4.0-11.0下产脲酶菌株游离细胞特性。产脲酶菌株 游离细胞最适pH为pH 9.0，在pH 5.0时保留60%以上的酶活力，在pH4.0时，脲酶活性降低 76%，但在pH 4.5时酶活保留与pH 5.0相似。产脲酶菌株游离细胞在pH 4.0到pH 11.0都很 稳定，在pH6.0时稳定性最好。
[0036]产脲酶菌株游离细胞的最适反应温度为40°C，在20-50°C之间，酶活力保持在60% 以上。在40°C以内，酶活十分稳定，但50°C保温lh几乎丧失所有酶活力。
[0037] (4)脲酶菌株细胞固定化过程
[0038]本发明采用全细胞固定的方法，将发酵液离心并收集菌体，复溶至Tris-HCl缓冲 液中（20mM，pH 7.0)形成悬浮细胞液，将悬浮细胞液加入到细胞固定化载体中，混匀后放入 4°C冷却硬化形成固定化产脲酶菌株细胞。
[0039] (5)细胞固定化载体的选择
[0040] 本发明对细胞固定化载体进行筛选，分别测试了琼脂（3%，w/v)，明胶（10%，w/ v)，海藻酸钙(3 %，w/v)，卡拉胶(3 %，w/v)和壳聚糖(2.5 %，w/v)固定化细胞的效果。
[0041] 在这5种固定化材料中，琼脂、明胶和卡拉胶均制成胶状并切成小的方块，海藻酸 钙和壳聚糖则用注射器制成小的球状颗粒。挑选酶活力保留最高的材料作为固定化细胞的 载体。
[0042] 所有5种材料均熔化后在适当温度下与菌体混合，之后，检测各种材料包埋下菌体 的脲酶活性。结果显示，琼脂包埋细胞具有最高的酶活性，其他的材料均不尽理想，海藻酸 钙，卡拉胶和壳聚糖包埋的细胞均不表现酶活，而明胶机械强度不够且在反应过程中易溶 解(数据未列出）。因此，选择琼脂作为最佳的固定化载体。
[0043]琼脂载体:为了使琼脂保持液体状态并保持酶的活性，将悬浮细胞加入到融化并 在40°C保温的琼脂胶中，混匀后倒入90mm直径的平板中，放入4°C冷却硬化形成琼脂固定化 产脲酶菌株细胞。硬化后将琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，大小为2mmX 2mm X 1mm，检测固定化脲酶活力。
[0044] (6)固定化条件优化
[0045]固定化条件的优化分为两步:单因素实验和响应面实验。实验挑选了三个重要的 影响因素进行试验研究。单因素实验中，分别选择琼脂浓度l%(w/v)-3%(W/v)，细胞含量 0.5 % (g/v) -1.25 % (g/v)和pH5.0-pH9.0探究单因素条件下的最优值。
[0046]单因素实验结束后，确定了响应面实验的中心点。基于此，设计3因素5水平的CCD 响应面实验，共20组，见表1。这20组实验包含23个因子实验，6组中心点和6组轴向点。根据 旋转设计理论，a = F1 /4，F = 2k，k表示实验的因素数，取a = 1.68。
[0047]响应面实验设计共20组实验，最后得到二次多项回归方程如下：Y =-532.53+ 137.27Χι+34.27X2+91.94X3-25.55Χι2-46.36X 22-5.04X32+16.14ΧιΧ2-6.72ΧιΧ 3+8.44X2X3[0048]其中Y表示预测的酶活力，Xi、X2、X3分别表示琼脂浓度、细胞添加量和pH值。
[0049]如图2所示，根据三维响应面综合考虑HX3三因素之间的交互影响并得出最优 的固定化条件，模型获得的最优固定化条件为琼脂浓度为1.96%(w/v)，细胞含量为1.42% (g/v)和pH 9.0,在预测的最优条件下酶活为47.26U/g，实验验证也同预测值相吻合。
[0050] 表1响应面实验设计及响应值
[0051]
(7)琼脂固定化产脲酶菌株细胞pH及温度特性
[0053]如图3所示，本发明探究了在不同温度和pH条件下琼脂固定化产脲酶菌株细胞特 性，琼脂固定化产脲酶菌株细胞反应的最适pH为7.0-10.0，优选9.0，最适温度为40-60°C， 优选50°C，在高温时，相比于产脲酶菌株游离细胞具有更高的热稳定性，琼脂固定化产脲酶 菌株细胞的脲酶活性要比产脲酶菌株游离细胞高出约1.5倍。对琼脂固定化产脲酶菌株细 胞进行重复利用，在40°C，pH4.5条件下反应八次后，琼脂固定化产脲酶菌株细胞可以保留 51.3%的酶活力。
[0054] (8)本发明琼脂固定化产脲酶菌株细胞用于食品中尿素的清除
[0055]本发明探究了琼脂固定化产脲酶菌株细胞在模拟酒和市售商品中对尿素的清除 效果。实验结果见表2。脲酶活性添加量为0.46U/mL。在pH4.5和pH5.0的模拟酒中，35°C反应 24h，尿素清除率分别达到了98 %和100 %。对于市售的酒精商品，尿素清除率在10.0 %到 63.7%，不同产品去除率各有不同。鲜奶中含有最高的尿素含量，经过琼脂固定化产脲酶菌 株细胞处理，92.8 %的尿素得到清除。
[0056] 表2琼脂固定化产脲酶菌株细胞应用于食品中尿素的清除
[0057]
[0058] 实施例1:
[0059] -脲酶菌株筛选及固定化：
[0060] 1提取并筛选麦田土壤中的所述脲酶菌株Agrobacterium tumefaciens(CICC NO. 10914的保藏单位为中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏地址是北京市朝阳区酒仙 桥中路24号院6号楼，邮编100101，保藏时间：2014年8月17日，保藏编号:CICC N0.10914)。 [0061 ] 取lg青岛即墨麦田土壤至无菌管中，加入10mL无菌生理盐水，37°C震荡2h，再用无 菌生理盐水稀释成不同的梯度（10-2-10-7)。分别取每个梯度生理盐水200yL涂布到S1平板 上。将涂好的S1平板放在37°C环境下培养24h，挑选具有红色显色圈的菌株，再将挑选到的 菌株接种到S2培养基中，挑选培养基变红的菌株，将其在S1平板上划线，37°C培养后挑选具 有红色显色圈的单克隆，接种到S3培养基37 °C培养24h形成种子液。
[0062]其中，各类培养基成分如下：
[0063] S1 培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸和15g/L琼脂；
[0064] S2培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸。
[0065] S3培养基：即LB培养基，10.0g/L蛋白胨，5g/L酵母粉，10.0g/L NaCl。
[0066] 2调整所述种子液pH值为7.0,取lmL种子液接种到40/250mL S4培养基中，30°C发 酵16h形成发酵液，测其酶活力；
[0067]其中，培养基成分如下：
[0068] S4发酵培养基：5g/L葡萄糖，5g/L蛋白胨，0.5g/L KH2P〇4,0.5g/L Na2HP〇4,0.05g/ L MnS〇4 · 4H20,0.05g/L Ni2S〇4 · 6H20,0.05g/L MgS〇4 · 7H20。
[0069] 3收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将所 述悬浮细胞液加入到融化并在40°C保温的琼脂胶中，琼脂浓度为1.96%，所述脲酶菌株细 胞含量为1.42%，pH值为9.0，混匀后倒入90mm直径的平板中，放入4°C冷却硬化形成琼脂固 定化产脲酶菌株细胞；
[0070] 4将所述琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，所述块状胶体大小为2mm X 2_ X 1mm，检测脲酶酶活力。
[0071] 二琼脂固定化产脲酶菌株细胞用于食品中尿素的清除：
[0072]用于模拟酒的尿素清除，模拟酒的脲酶活性添加量为0.461]/1^，？!14.5，将琼脂固 定化产脲酶菌株细胞块状胶体混合入模拟酒中，调pH 7.0，40°C反应24h，最终计算尿素清 除率达到98 %。
[0073] 实施例2:
[0074] 一脲酶菌株筛选及固定化：
[0075] 1筛选培养产脲酶的根癌农杆菌，涂布到S1平板放在37°C环境下培养24h，挑选具 有红色显色圈的菌株，再将挑选到的菌株接种到S2培养基中，挑选培养基变红的菌株，将其 在S1平板上划线，37°C培养后挑选具有红色显色圈的单克隆，接种到S3培养基37°C培养24h 形成种子液。
[0076]其中，各类培养基成分如下：
[0077] S1 培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸和15g/L琼脂；
[0078] S2培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸。
[0079] S3培养基：即LB培养基，10.0g/L蛋白胨，5g/L酵母粉，10.0g/L NaCl。
[0080] 2调整所述种子液pH值为10.0,取lmL种子液接种到40/250mL S4培养基中，50°C发 酵16h形成发酵液，测其酶活力；
[0081] 其中，培养基成分如下：
[0082] S4发酵培养基：5g/L葡萄糖，5g/L蛋白胨，0.5g/L KH2P〇4,0.5g/L Na2HP〇4,0.05g/ L MnS〇4 · 4H20,0.05g/L Ni2S〇4 · 6H20,0.05g/L MgS〇4 · 7H20。
[0083] 3收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将所 述悬浮细胞液加入到融化并在40°C保温的琼脂胶中，琼脂浓度为1.96%，所述脲酶菌株细 胞含量为1.42%，pH值为9.0，混匀后倒入90mm直径的平板中，放入4°C冷却硬化形成琼脂固 定化产脲酶菌株细胞；
[0084] 4将所述琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，所述块状胶体大小为2mm X 2_ X 1mm，检测脲酶酶活力。
[0085] 二琼脂固定化产脲酶菌株细胞用于食品中尿素的清除：
[0086] 用于鲜牛奶的尿素清除，将琼脂固定化产脲酶菌株细胞块状胶体混合入鲜牛奶 中，调pH 10.0，60°C反应24h，最终计算尿素清除率达到92.81 %。
[0087] 实施例3:
[0088] 一脲酶菌株筛选及固定化：
[0089] 1筛选培养产脲酶的豌豆根瘤菌，涂布在S1平板放在37°C环境下培养24h，挑选具 有红色显色圈的菌株，再将挑选到的菌株接种到S2培养基中，挑选培养基变红的菌株，将其 在S1平板上划线，37°C培养后挑选具有红色显色圈的单克隆，接种到S3培养基37°C培养24h 形成种子液。
[0090]其中，各类培养基成分如下：
[0091] S1 培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸和15g/L琼脂；
[0092] S2培养基d.Og/l蛋白胨，5.0g/L NaCl，0.1g//L葡萄糖，2.0g/L KH2P〇4,2.0g/L尿 素，12mg/L苯酸。
[0093] S3培养基：即LB培养基，10.0g/L蛋白胨，5g/L酵母粉，10.0g/L NaCl。
[0094] 2调整所述种子液pH值为9.0,取lmL种子液接种到40/250mL S4培养基中，40°C发 酵16h形成发酵液，测其酶活力；
[0095]其中，培养基成分如下：
[0096] S4发酵培养基：5g/L葡萄糖，5g/L蛋白胨，0.5g/L KH2P〇4,0.5g/L Na2HP〇4,0.05g/ L MnS〇4 · 4H20,0.05g/L Ni2S〇4 · 6H20,0.05g/L MgS〇4 · 7H20。
[0097] 3收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将所 述悬浮细胞液加入到融化并在40°C保温的琼脂胶中，琼脂浓度为1.96%，所述脲酶菌株细 胞含量为1.42%，pH值为9.0，混匀后倒入90mm直径的平板中，放入4°C冷却硬化形成琼脂固 定化产脲酶菌株细胞；
[0098] 4将所述琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，所述块状胶体大小为2mm X 2_ X 1mm，检测脲酶酶活力。
[0099] 二琼脂固定化产脲酶菌株细胞用于食品中尿素的清除：
[0100] 用于黄酒(半甜型）的尿素清除，将琼脂固定化产脲酶菌株细胞块状胶体混合入黄 酒(半甜型）中，调pH 9.0，50°C反应24h，最终计算尿素清除率达到63.74%。
[0101] 以上对本发明的几个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施 例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进 等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
【主权项】
1. 一种产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:按照下述步骤进行： 步骤一，筛选培养产脲酶的根瘤菌属细菌，挑取单克隆菌株接种到液体培养基中，形成 具有产脲酶菌株游离细胞的种子液； 步骤二，调整所述种子液pH值为4-11，20-50°C发酵形成发酵液，检测所述发酵液中脲 酶酶活力； 步骤三，收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0 )，将 所述悬浮细胞液加入到细胞固定化载体中，混匀后放入4°C冷却硬化形成固定化脲酶菌株 细胞； 步骤四，将所述固定化脲酶菌株细胞分割成小体积并检测脲酶酶活力。2. 根据权利要求1所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述产脲酶菌株游离 细胞脲酶活性的最适pH值为7.0-10.0，优选pH 9.0。3. 根据权利要求1所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述产脲酶菌株游离 细胞脲酶活性的最适温度为30-50°C，优选40°C。4. 根据权利要求1-3中任一所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述细胞固 定化载体为琼脂，以琼脂为载体的细胞固定化过程按照下述步骤进行： 步骤(1)，收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将 所述悬浮细胞液加入到融化并在40°C保温的琼脂胶中，混匀后倒入90mm直径的平板中，放 入4°C冷却硬化形成琼脂固定化产脲酶菌株细胞； 步骤(2)，将所述琼脂固定化产脲酶菌株细胞切成小的块状胶体，所述块状胶体大小为 2mm X 2mm X 1mm，检测脲酶酶活力。5. 根据权利要求4所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述细胞琼脂固定化 最适条件为琼脂浓度为1.96 %，所述脲酶菌株细胞含量为1.42 %，pH值为9.0。6. 根据权利要求5所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述琼脂固定化产脲 酶菌株细胞脲酶活性的最适pH值为7.0-10.0，优选9.0。7. 根据权利要求5所述的产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于:所述琼脂固定化产脲 酶菌株细胞脲酶活性的最适温度为40°C-60°C，优选50°C。8. 利用权利要求5-7中任一所述的产脲酶菌株固定化的方法制备的所述琼脂固定化产 脲酶菌株细胞在食品尿素清除中的应用。
【文档编号】C12N11/10GK105838702SQ201610293206
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】毛相朝, 侯恩玲, 孙建安
【申请人】中国海洋大学