一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其工艺步骤为：(1)神经炎细胞的提取与培养；(2)乳化；(3)动物免疫：运用DNA重组技术，将荧光蛋白基因重组到免疫细胞分泌抗体的基因序列中，得到重组细胞，纯化培养，取10?8重组细胞悬液备用；(4)抽取血清；(5)缓冲液的配制；(5)纯化，本发明的一种抗神经炎细胞抗体能用于制备检测或诊断多发性神经炎疾病，能同时针对神经炎细胞表面的多个抗原，增强了临床神经炎患者的治疗效果，制取周期短，稳定性高，适于推广应用。
【专利说明】
一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺
技术领域
[0001]本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺。
【背景技术】
[0002]抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为抗体。除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。当抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应，有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。这种抗体可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应，制备时间短，成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面，申请号为CN200410018771.X公开了一种抗人促血液血管生长因子(HAPO)的抗体、抗体及其应用，用于制备抗体的免疫原为人促血液血管生长因子，制备的抗体可以用来识别和定量分析人促血液血管生长因子、中和其生物学活性，由此组装的试剂盒可检测不同细胞、组织中人促血液血管生长因子的定位及表达，检测血、尿、培养上清、细胞、组织等不同样品中人促血液血管生长因子的含量，但是该抗体不能制备检测或诊断多发性疾病，不能同时针对细胞表面的多个抗原，临床患者的治疗效果不好。
【发明内容】
[0003]为克服现有技术上的不足，本发明目的是提供一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺。
[0004]为实现本发明的目的，本发明的技术方案如下:
[0005]一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其工艺步骤如下:
[0006](I)神经炎细胞的提取与培养:从BALA/C纯种小白鼠体内提取神经炎细胞，体外培养，取对数生长神经炎细胞离心，用无血清培养液洗3次，计数，取得10-7细胞备用；
[0007](2)乳化:计数取神经炎细胞10-5，与油佐剂混合，制得免疫混合物，所述油佐剂包括白油、硬脂酸铝和司本80，所述白油、硬脂酸铝和司本80的用量分别为80ml、3g和5ml ；
[0008](3)动物免疫:向动物体内注射免疫混合物，然后每隔一周向动物体内注射，每次注射之前测量血液抗体滴度，当抗体滴度达到1: 1000-2500，终止免疫；
[0009](4)抽取血清:终止免疫后取动物血液，静置l_2h后离心，取上清液，得到含神经炎抗体的血清；
[0010](5)缓冲液的配制:取磷酸二氢钠20ml和NaCll.5ml，制得缓冲液，控制其pH为7.2-9.0 ；
[0011](5)纯化:将步骤(4)得到的血清填柱处理，用步骤(5)制取的缓冲液洗柱子，收集洗脱液，透析，收集透析之后的液体，冻干之后即得神经炎细胞抗体。
[0012]优选的，所述步骤(2)中，所述白油、硬脂酸钠和司本80加热融化得油佐剂。
[0013]优选的，所述步骤(4)中，所述血液从动物脾脏内抽取。
[0014]有益效果:本发明通过神经炎细胞的提取与培养、乳化、动物免疫、抽取血清、缓冲液配制、纯化六大步骤完成抗神经炎细胞抗体的制取工艺，用于制备检测或诊断多发性神经炎疾病，能同时针对神经炎细胞表面的多个抗原，增强了临床神经炎患者的治疗效果，制取周期短，稳定性高，纯种小白鼠神经炎细胞活性强，由此产生的抗体具有很强的活性，使该抗体具有广泛的适用性，乳化过程中选用的油佐剂，可提高抗体的稳定性能，缓冲液冲洗纯化，得到高纯度的抗体，临床的治疗效果更加优异。
【具体实施方式】
[0015]为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合【具体实施方式】，进一步阐述本发明。
[0016]实施例1:
[0017]本实施例的一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其工艺步骤如下:
[0018](I)神经炎细胞的提取与培养:从BALA/C纯种小白鼠体内提取神经炎细胞，体外培养，取对数生长神经炎细胞离心，用无血清培养液洗3次，计数，取得10-7细胞备用；
[0019](2)乳化:计数取神经炎细胞10-5，与油佐剂混合，制得免疫混合物，所述油佐剂包括白油、硬脂酸铝和司本80，所述白油、硬脂酸铝和司本80的用量分别为80ml、3g和5ml，所述白油、硬脂酸钠和司本80加热融化得油佐剂；
[0020](3)动物免疫:向动物体内注射免疫混合物，然后每隔一周向动物体内注射，每次注射之前测量血液抗体滴度，当抗体滴度达到1: 1000-2500，终止免疫；
[0021](4)抽取血清:终止免疫后取动物血液，静置l_2h后离心，取上清液，得到含神经炎抗体的血清,所述血液从动物脾脏内抽取；
[0022](5)缓冲液的配制:取磷酸二氢钠20ml和NaCl 1.5ml,制得缓冲液，控制其pH为7.2-9.0 ；
[0023](5)纯化:将步骤(4)得到的血清填柱处理，用步骤(5)制取的缓冲液洗柱子，收集洗脱液，透析，收集透析之后的液体，冻干之后即得神经炎细胞抗体。
[0024]实施例2:其余与所述实施例1相同，不同之处在于，步骤⑵将油佐剂改为脂质体，本实施例中，成本较低，但是作用效果相对较低。
[0025]实施例3:其余与所述实施例1相同，不同之处在于，步骤(5)配制的缓冲液为
0.1M的柠檬酸钠，pH为3.0，本实施例中，成本低，但效果差。
[0026]经实际应用中可知，通过神经炎细胞的提取与培养、乳化、动物免疫、抽取血清、缓冲液配制、纯化六大步骤完成抗神经炎细胞抗体的制取工艺，用于制备检测或诊断多发性神经炎疾病，能同时针对神经炎细胞表面的多个抗原，增强了临床神经炎患者的治疗效果，制取周期短，稳定性高，纯种小白鼠神经炎细胞活性强，由此产生的抗体具有很强的活性，使该抗体具有广泛的适用性，乳化过程中选用的油佐剂，可提高抗体的稳定性能，缓冲液冲洗纯化，得到高纯度的抗体，临床的治疗效果更加优异。
[0027]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其特征在于，其工艺步骤如下: (1)神经炎细胞的提取与培养:从BALA/C纯种小白鼠体内提取神经炎细胞，体外培养，取对数生长神经炎细胞离心，用无血清培养液洗3次，计数，取得10-7细胞备用； (2)乳化:计数取神经炎细胞10-5，与油佐剂混合，制得免疫混合物，所述油佐剂包括白油、硬脂酸铝和司本80，所述白油、硬脂酸铝和司本80的用量分别为80ml、3g和5ml ; (3)动物免疫:向动物体内注射免疫混合物,然后每隔一周向动物体内注射,每次注射之前测量血液抗体滴度，当抗体滴度达到1: 1000-2500，终止免疫； (4)抽取血清:终止免疫后取动物血液，静置l_2h后离心，取上清液，得到含神经炎抗体的血清； (5)缓冲液的配制:取磷酸二氢钠20ml和NaCl1.5ml，制得缓冲液，控制其pH为7.2-9.0 ； (5)纯化:将步骤(4)得到的血清填柱处理，用步骤(5)制取的缓冲液洗柱子，收集洗脱液，透析，收集透析之后的液体，冻干之后即得神经炎细胞抗体。2.根据权利要求1所述的抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其特征在于，所述步骤(2)中，所述白油、硬脂酸钠和司本80加热融化得油佐剂。3.根据权利要求1所述的抗神经炎细胞抗体的制取工艺，其特征在于，所述步骤(4)中,所述血液从动物脾脏内抽取。
【文档编号】C07K16/28GK105884894SQ201410741466
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2014年12月9日
【发明人】晏健强
【申请人】晏健强